一種用于肝素結(jié)合蛋白熒光免疫層析法定量檢測試劑盒的檢測板的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本實用新型涉及一種以熒光免疫層析法制備的肝素結(jié)合蛋白定量檢測試劑盒及其檢測板。
【背景技術(shù)】
[0002]肝素結(jié)合蛋白(Heparin Binding Protein，HBP)又稱為37kDa抗微生物陽離子蛋白(CAP37)，是由中性粒細胞合成的37kDa的糖蛋白[1]。HBP屬于絲氨酸蛋白酶大家族的成員，盡管它有45%的序列與人中性白細胞彈性蛋白酶相一致，但它沒有蛋白酶活性。最初研究HBP是為了其抗微生物活性，但研究發(fā)現(xiàn)，HBP與很多炎癥反應(yīng)相關(guān)。活化的中性粒細胞接觸內(nèi)皮后，從分泌小泡中釋放HBP，HBP 一旦釋放，誘導(dǎo)鈣依賴的內(nèi)皮細胞骨架的重排，從而使細胞收縮，并增加內(nèi)皮細胞的滲透性。它也能使內(nèi)皮細胞內(nèi)化以防止細胞調(diào)亡。當(dāng)細胞表面釋放M蛋白，此時M蛋白與纖維蛋白原結(jié)合形成復(fù)合物，并與嗜中性粒細胞表面的?2整聯(lián)蛋白接觸，由分泌小泡分泌HBP。
[0003]在感染灶處，發(fā)生吞噬作用時，嗜苯胺藍顆粒分泌HBP，具有抗微生物生長活性，激活單核細胞和其他炎性介質(zhì)；HBP也可以使單核細胞內(nèi)化，維持生存和刺激生成更多的細胞因子。HBP有助于炎癥反應(yīng)的維持和發(fā)展，檢測HBP有助于鑒別伴有循環(huán)系統(tǒng)衰竭的膿毒癥的危險性。
[0004]目前，檢測HBP的方法主要是酶聯(lián)免疫吸附試驗，該方法操作繁瑣，檢測速度慢，不適用于大批量樣本的操作，且需要專業(yè)人員操作。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本實用新型的目的是提供一種用于肝素結(jié)合蛋白熒光免疫層析法定量檢測試劑盒的檢測板，其操作簡單、準確、快速、靈敏特異。
[0006]為了實現(xiàn)上述目的，本實用新型采取了以下技術(shù)方案:
[0007]—種用于肝素結(jié)合蛋白熒光免疫層析法定量檢測試劑盒的檢測板，其特征在于:
[0008]包括底板(7)，底板(7)的中部設(shè)置硝酸纖維素膜(2)，硝酸纖維素膜(2)上設(shè)置有相互分離且左右依次布置的羊抗兔IgG質(zhì)控線(3)、肝素結(jié)合蛋白(HBP)單克隆抗體-1檢測線(4)和羊抗鼠IgG輔助檢測線(5)，所述羊抗兔IgG質(zhì)控線(3)、CCP抗原檢測線(4)和羊抗鼠IgG質(zhì)控線(5)包被在硝酸纖維素膜上，樣本墊(I)覆蓋在硝酸纖維素膜(2)于羊抗兔IgG質(zhì)控線(3)所處的這一側(cè)上，吸水墊(6)的一側(cè)覆蓋在硝酸纖維素膜(2)的另一側(cè)上。
[0009]進一步地，所述檢測板具有外殼，為塑料材質(zhì)，所述外殼分上蓋(8)和下蓋(9)連接在一起的兩塊，上蓋(8)設(shè)置有加樣孔(10)和檢測窗(11);檢測窗的位置對應(yīng)羊抗兔IgG質(zhì)控線(3)、肝素結(jié)合蛋白(HBP)單克隆抗體-1檢測線(4)和羊抗鼠IgG輔助檢測線(5)所在的位置，使所述羊抗兔IgG質(zhì)控線(3)、肝素結(jié)合蛋白(HBP)單克隆抗體-1檢測線(4)和羊抗鼠IgG輔助檢測線(5)及其左右區(qū)域處在檢測窗中，加樣孔的位置對應(yīng)樣本墊(I)所在的位置，使樣品能滴加到樣本墊上。
[0010]所述檢測板中樣本墊可采用全血墊、玻纖、硝酸纖維素膜、吸水墊以及其他具有相似作用的樣本墊中的一種或幾種。
[0011 ] 所述檢測板中的HBP單克隆抗體-1作為捕獲抗體。
[0012]本實用新型可應(yīng)用于但不限于半自動和全自動POCT免疫分析儀器，測定時間短，結(jié)果準確、靈敏度高。對單個樣本和大量樣本檢測的成本幾乎相同，因此適用于對少量和批量樣本的檢測。
【附圖說明】
[0013]圖1為本實用新型所提供的實施例的示意圖。
[0014]圖2為檢測板的截面示意圖。
【具體實施方式】
[0015]下面通過實施例進一步詳細描述本實用新型，但本實用新型不僅僅局限于以下實施例。
[0016]參照附圖。本實用新型所提供的一種用于肝素結(jié)合蛋白熒光免疫層析法定量檢測試劑盒的檢測板，包括底板7，底板7的中部設(shè)置硝酸纖維素膜2，硝酸纖維素膜2上設(shè)置有相互分離且左右依次布置的羊抗兔IgG質(zhì)控線3、肝素結(jié)合蛋白(HBP)單克隆抗體-1檢測線4和羊抗鼠IgG輔助檢測線5，所述羊抗兔IgG質(zhì)控線3、CCP抗原檢測線4和羊抗鼠IgG質(zhì)控線5包被在硝酸纖維素膜上，樣本墊I覆蓋在硝酸纖維素膜2于羊抗兔IgG質(zhì)控線3所處的這一側(cè)上，吸水墊6的一側(cè)覆蓋在硝酸纖維素膜2的另一側(cè)上。
[0017]所述檢測板具有外殼，為塑料材質(zhì)，所述外殼分上蓋8和下蓋9連接在一起的兩塊，上蓋8設(shè)置有加樣孔10和檢測窗11 ;檢測窗的位置對應(yīng)羊抗兔IgG質(zhì)控線3、肝素結(jié)合蛋白(HBP)單克隆抗體-1檢測線4和羊抗鼠IgG輔助檢測線5所在的位置，使所述羊抗兔IgG質(zhì)控線3、肝素結(jié)合蛋白(HBP)單克隆抗體-1檢測線4和羊抗鼠IgG輔助檢測線5及其左右區(qū)域處在檢測窗中，加樣孔的位置對應(yīng)樣本墊I所在的位置，使樣品能滴加到樣本墊上。
[0018]本實用新型所提供的肝素結(jié)合蛋白熒光免疫層析法定量檢測試劑盒由檢測板、檢測緩沖液、質(zhì)控品和包含了定標曲線的芯片或二維碼構(gòu)成。
[0019]所述檢測緩沖液包括熒光標記的HBP單克隆抗體-2、熒光標記的兔IgG、PBS、表面活性劑、防腐劑。
[0020]所述質(zhì)控品中含有類血清組分和重組人HBP蛋白，防腐劑。
[0021]所述質(zhì)控品是包括但不限于兩個濃度的質(zhì)控品。
[0022]所述定標曲線的芯片或二維碼包括定標曲線的信息、試劑盒的名稱、批號、有效期。
[0023]所述檢測緩沖液中的熒光標記的HBP單克隆抗體-2為能夠與HBP結(jié)合的示蹤抗體。
[0024]所述檢測緩沖液中的PBS為四鹽磷酸緩沖液、三鹽磷酸緩沖液和二鹽磷酸緩沖液的一種，優(yōu)選四鹽磷酸緩沖液，PO4 3濃度為0.01mol/L, pH值為7.2-7.4。
[0025]所述檢測緩沖液中的表面活性劑為吐溫-20，其濃度為0.1%_2%，能降低表面張力，減少非特異性結(jié)合，提高熒光抗體在溶液中的穩(wěn)定性，并能促進跑板均勻。
[0026]所述檢測緩沖液中的防腐劑為疊氮鈉，Proclinl50和Proclin300的一種，優(yōu)選疊氮鈉，其濃度為0.01%-0.1%。
[0027]所述質(zhì)控品中的類血清組分用來模仿人體血液環(huán)境。
[0028]所述質(zhì)控品中的重組HBP蛋白為能分別和HBP單克隆抗體-1及HBP單克隆抗體_2特異性結(jié)合的極簡化蛋白。
【主權(quán)項】
1.一種用于肝素結(jié)合蛋白熒光免疫層析法定量檢測試劑盒的檢測板，其特征在于:包括底板(7)，底板(7)的中部設(shè)置硝酸纖維素膜(2)，硝酸纖維素膜(2)上設(shè)置有相互分離且左右依次布置的羊抗兔IgG質(zhì)控線(3)、肝素結(jié)合蛋白(HBP)單克隆抗體-1檢測線(4)和羊抗鼠IgG輔助檢測線(5)，所述羊抗兔IgG質(zhì)控線(3)、CCP抗原檢測線(4)和羊抗鼠IgG質(zhì)控線(5 )包被在硝酸纖維素膜上，樣本墊(I)覆蓋在硝酸纖維素膜(2 )于羊抗兔IgG質(zhì)控線(3)所處的這一側(cè)上，吸水墊(6)的一側(cè)覆蓋在硝酸纖維素膜(2)的另一側(cè)上。2.如權(quán)利要求1所述的一種用于肝素結(jié)合蛋白熒光免疫層析法定量檢測試劑盒的檢測板，其特征在于:所述檢測板具有外殼，為塑料材質(zhì)，所述外殼分上蓋(8)和下蓋(9)連接在一起的兩塊，上蓋(8)設(shè)置有加樣孔(10)和檢測窗(11);檢測窗的位置對應(yīng)羊抗兔IgG質(zhì)控線(3)、肝素結(jié)合蛋白(HBP)單克隆抗體-1檢測線(4)和羊抗鼠IgG輔助檢測線(5)所在的位置，使所述羊抗兔IgG質(zhì)控線(3)、肝素結(jié)合蛋白(HBP)單克隆抗體-1檢測線(4)和羊抗鼠IgG輔助檢測線(5)及其左右區(qū)域處在檢測窗中，加樣孔的位置對應(yīng)樣本墊(I)所在的位置，使樣品能滴加到樣本墊上。
【專利摘要】本實用新型提供一種用于肝素結(jié)合蛋白熒光免疫層析法定量檢測試劑盒的檢測板，包括底板，底板的中部設(shè)置硝酸纖維素膜，硝酸纖維素膜上設(shè)置有相互分離且左右依次布置的羊抗兔IgG質(zhì)控線、肝素結(jié)合蛋白單克隆抗體-1檢測線和羊抗鼠IgG輔助檢測線，羊抗兔IgG質(zhì)控線、CCP抗原檢測線和羊抗鼠IgG質(zhì)控線包被在硝酸纖維素膜上，樣本墊覆蓋在硝酸纖維素膜于羊抗兔IgG質(zhì)控線所處的這一側(cè)上，吸水墊的一側(cè)覆蓋在硝酸纖維素膜的另一側(cè)上。本實用新型可應(yīng)用于但不限于半自動和全自動POCT免疫分析儀器，測定時間短，結(jié)果準確、靈敏度高。對單個樣本和大量樣本檢測的成本幾乎相同，因此適用于對少量和批量樣本的檢測。
【IPC分類】G01N33/577, G01N33/558, G01N33/68
【公開號】CN204882575
【申請?zhí)枴緾N201520549689
【發(fā)明人】王森, 嚴靜, 李佳佳, 蔡國龍, 洪龍斌, 龔仕金, 龔慶, 羊蘭翠, 虞意華, 田堃, 周旭一
【申請人】杭州中翰盛泰生物技術(shù)有限公司
【公開日】2015年12月16日
【申請日】2015年7月27日