腎損傷五合一檢測(cè)卡的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本實(shí)用新型屬于免疫檢測(cè)分析技術(shù)領(lǐng)域，涉及腎功標(biāo)志物腎損傷分子(kim-1)、中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(NAGL)、白介素-18 (IL-18)、尿微量白蛋白(MAU)和胱抑素C(cys C)的膠體金檢測(cè)卡。
【背景技術(shù)】
[0002]AKI發(fā)病率為2100/100萬人群，危重癥患者尤其老年患者的AKI發(fā)生率日益增加，需要接受腎臟替代治療的AKI死亡率高達(dá)50%?80%，全球每年約有200萬人死于AKI。目前，對(duì)于AKI (尤其是急性腎小管壞死)缺乏有效治療方法，因此，早期診斷并及時(shí)干預(yù)是改善AKI患者預(yù)后的關(guān)鍵措施。發(fā)現(xiàn)損傷標(biāo)志物有助于早期診斷AKI。目前臨床對(duì)AKI進(jìn)行診斷和分期主要依據(jù)血清肌酐和尿量，但此二者往往在AKI “損傷”期之前的“危險(xiǎn)”期即已發(fā)生變化，無法對(duì)AKI作早期診斷。
[0003]腎損傷分子I (Kidney injury molecule 1，KIM_1)是腎臟近曲小管上皮細(xì)胞一種跨膜糖蛋白，屬于免疫球蛋白基因超家族。KM-1在正常肝、腎、脾微量表達(dá)，而在受損后再生的近曲小管上皮細(xì)胞中表達(dá)顯著增強(qiáng)。KM-1能迅速、靈敏、特異地反映各種腎臟疾病的損傷及恢復(fù)過程，可成為一種檢測(cè)早期腎損傷的可靠生物學(xué)標(biāo)記物，在臨床上具有廣闊的應(yīng)用前景。
[0004]中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白又稱人脂質(zhì)運(yùn)載蛋白，或噬鐵蛋白是人脂質(zhì)運(yùn)載蛋白家族中的一個(gè)新成員。近年來，NGAL作為一種新的腎損傷標(biāo)志物倍受關(guān)注。早期診斷急性腎功能損傷(AKI)時(shí)血、尿NGAL濃度通常會(huì)迅速升高，2h最為明顯(比臨界值升高幾十至幾百倍)，血清肌酐(sCr)、尿酶等傳統(tǒng)指標(biāo)往往要在24?72h才后明顯升高，因而NGAL可用于AKI的早期診斷。
[0005]白介素18是新近發(fā)現(xiàn)的人細(xì)胞因子，主要誘導(dǎo)產(chǎn)生IFN-γ。IL-18具有增強(qiáng)宿主防御反應(yīng)、抗腫瘤活性和前炎因子活性。因腎損傷必然伴隨著炎癥的反應(yīng)，因此會(huì)造成IL-18在血液和尿液中的升高，配合其它腎損傷標(biāo)志物可以確定腎損傷的早期發(fā)生。
[0006]胱抑素C(cysC)是一種半胱氨酸蛋白酶抑制劑，也被稱為γ -微量蛋白及γ -后球蛋白，廣泛存在于各種組織的有核細(xì)胞和體液中，是一種低分子量、堿性非糖化蛋白質(zhì)，分子量為13.3KD，由122個(gè)氨基酸殘基組成，可由機(jī)體所有有核細(xì)胞產(chǎn)生，產(chǎn)生率恒定。循環(huán)中的胱抑素c僅經(jīng)腎小球?yàn)V過而被清除，是一種反映腎小球?yàn)V過率變化的內(nèi)源性標(biāo)志物，并在近曲小管重吸收，但重吸收后被完全代謝分解，不返回血液，因此，其血中濃度由腎小球?yàn)V過決定，而不依賴任何外來因素，如性別、年齡、飲食的影響，是一種反映腎小球?yàn)V過率變化的理想同源性標(biāo)志物。
[0007]微量白蛋白尿是指在尿中出現(xiàn)微量白蛋白。白蛋白是一種血液中的正常蛋白質(zhì)，但在生理?xiàng)l件下尿液中僅出現(xiàn)極少量白蛋白。微量白蛋白尿反映腎臟異常滲漏蛋白質(zhì)。尿微量白蛋白是評(píng)估腎臟受損程度:當(dāng)發(fā)現(xiàn)尿微量白蛋白在20mg/L-200mg/L范圍內(nèi)，尿常規(guī)尿蛋白的顯示為陰性(_)或(+_)，就屬于微量白蛋白尿，這個(gè)時(shí)候說明腎臟已經(jīng)損傷。而當(dāng)尿中微量白蛋白超過200mg/L時(shí)，尿常規(guī)測(cè)試尿蛋白陽性(+)?(+++)，就應(yīng)該警惕了，此時(shí)證明機(jī)體已有大量白蛋白漏出，可能出現(xiàn)低蛋白血癥，腎病發(fā)展離不可逆期只有一步之遙，如果不及時(shí)進(jìn)行醫(yī)治，就會(huì)進(jìn)入尿毒癥期。
[0008]本實(shí)用新型開發(fā)了一種同時(shí)檢測(cè)五種腎損傷標(biāo)志物的膠體金檢測(cè)卡。膠體金方法具有簡(jiǎn)單快速準(zhǔn)確的特點(diǎn)，本實(shí)用新型利用膠體金方法檢測(cè)人尿液中五種標(biāo)志物，避免了常規(guī)液相色譜法、免疫比濁法、化學(xué)發(fā)光法具有的操作時(shí)間長(zhǎng)，需要專門儀器的缺點(diǎn)，只需一步簡(jiǎn)單操作，即可在10分鐘內(nèi)獲得檢測(cè)結(jié)果。
【實(shí)用新型內(nèi)容】
[0009]本實(shí)用新型提供了一種同時(shí)檢測(cè)腎損傷標(biāo)志物的五合一檢測(cè)卡。用于輔助臨床腎損傷診斷。
[0010]本實(shí)用新型采用以下技術(shù)方案:
[0011]一種同時(shí)檢測(cè)腎損傷標(biāo)志物五合一檢測(cè)卡，由檢測(cè)卡身和卡槽兩部分組成。
[0012]卡身由上卡殼、下卡殼和五種腎損傷標(biāo)志物膠體金檢測(cè)試紙條組成。下卡殼內(nèi)側(cè)有五個(gè)凹槽用于放置膠體金試紙。上卡殼，有五個(gè)長(zhǎng)條形觀察窗，外側(cè)有信息記錄簽，用于標(biāo)明試紙條的名稱、檢測(cè)結(jié)果說明和樣品信息。五種腎損傷標(biāo)志物膠體金檢測(cè)試紙條均由背襯、樣品墊、硝酸纖維素膜和吸水墊四部分組成。吸水墊和樣品墊分別位于背襯的兩段，硝酸纖維素膜在背襯中部一段與吸水墊交疊連接在一起，另一端與樣品墊交疊連接在一起。硝酸纖維素膜上包被有檢測(cè)線和質(zhì)控線。五種腎損傷標(biāo)志物膠體金檢測(cè)試紙條分別放入下卡殼的五個(gè)凹槽中，五種試紙條的樣品墊一部分露出卡殼，硝酸纖維素膜與觀察窗——對(duì)應(yīng)。
[0013]卡槽的槽身有五個(gè)孔，分別對(duì)應(yīng)五種膠體金試紙條，孔的底部含有膠體金標(biāo)記的抗體，分別與五種標(biāo)志物對(duì)應(yīng)。
[0014]本實(shí)用新型所用的膠體金試紙條均采用雙抗體夾心法原理檢測(cè)相應(yīng)的標(biāo)志物，卡槽的膠體金標(biāo)記抗體為鼠源性腎損傷標(biāo)志物單克隆抗體和膠體金復(fù)合物，硝酸纖維素膜上檢測(cè)線包被與結(jié)合墊上抗體配對(duì)的鼠源性腎損傷標(biāo)志物單克隆抗體，質(zhì)控線包被羊抗鼠IgG多克隆抗體。
[0015]檢測(cè)時(shí)，尿液樣本滴加到卡槽的樣品孔中，樣品孔中的膠體金溶解到樣本中，然后將卡身和卡槽蓋緊，在毛細(xì)管作用下尿液向吸水墊方向?qū)游觥Ｈ绻蛞褐泻邢鄳?yīng)的腎損傷標(biāo)志物，樣本中的標(biāo)志物與相應(yīng)的金標(biāo)抗體結(jié)合，然后層析到硝酸纖維素膜上檢測(cè)線時(shí)，與包被的抗體結(jié)合，形成“包被抗體-抗原-金標(biāo)抗體復(fù)合物”的夾心結(jié)構(gòu)，并在檢測(cè)線區(qū)域出現(xiàn)紅色條帶，這樣得到陽性結(jié)果。
[0016]當(dāng)樣本中不含腎損傷標(biāo)志物時(shí)，樣本與金標(biāo)抗體和包被抗體均不能發(fā)生反應(yīng)，當(dāng)層析到硝酸纖維素膜上時(shí)紅色的金顆粒就不能被檢測(cè)線捕捉到，從而不會(huì)在該區(qū)域顯示出紅色條帶，這樣得到陰性結(jié)果。
[0017]無論陰性還是陽性樣本金結(jié)合墊上的金標(biāo)抗體都會(huì)與硝酸纖維素膜上質(zhì)控線的羊抗鼠多抗結(jié)合產(chǎn)生紅色條帶，如果質(zhì)控線不顯示說明檢測(cè)結(jié)果無效。
[0018]采用上述方案的腎損傷標(biāo)志物五合一檢測(cè)卡具有以下有益效果，包括成本低、小巧方便、操作簡(jiǎn)單，無需專業(yè)人員即可檢測(cè)，且可以一步同時(shí)檢測(cè)五種腎損傷標(biāo)志物。
【附圖說明】
[0019]圖1本實(shí)用新型的主視圖
[0020]圖2本實(shí)用新型的剖視圖
[0021]圖3腎損傷標(biāo)志物檢測(cè)試紙條的剖視圖
[0022]圖4卡槽的剖視圖
[0023]1.上卡殼2.下卡殼3.樣品孔4.信息記錄紙5.檢測(cè)說明6.試紙名稱7.結(jié)果顯示窗口 8.試紙條9.背襯10.吸水墊11.硝酸纖維素膜12.膠體金標(biāo)記抗體復(fù)合物13.樣品墊14.檢測(cè)線15.質(zhì)控線16.凹槽21.卡身22.卡槽
【具體實(shí)施方式】
[0024]如圖1和圖2所示，本實(shí)用新型由檢測(cè)卡身21和卡槽22組成。卡身由上卡殼1、下卡殼2和腎損傷標(biāo)志物檢測(cè)試紙條8組成。上卡殼I內(nèi)側(cè)和下卡殼2內(nèi)側(cè)可以緊密的結(jié)合，形成牢固的整體。上卡殼I外側(cè)有信息記錄紙4、檢測(cè)說明5、試紙名稱6、結(jié)果顯示窗口 7。檢測(cè)說明5用于說明判讀方法，試紙名稱6用于說明檢測(cè)試紙的種類，結(jié)果顯示窗口7則與凹槽16中的試紙條8的硝酸纖維素膜11相對(duì)應(yīng)。下卡殼2有5個(gè)凹槽16，用于放置腎損傷標(biāo)志物檢測(cè)試紙條8，試紙條8的擺放順序與試紙名稱6的順序相同。
[0025]如圖3，膠體金試紙由背襯9、吸水墊10、硝酸纖維素膜11、樣品墊13組成，吸水墊10和樣品墊13分別位于背襯9的兩段，硝酸纖維素膜11在背襯9中部一段與吸水墊10交疊連接在一起，另一端與樣品墊13交疊連接在一起。硝酸纖維素膜11上包被有檢測(cè)線14和質(zhì)控線15。五種檢測(cè)試紙的檢測(cè)線分別包被kim-1、NAGL> IL-18、MAU和cys C抗體，質(zhì)控線包被羊抗鼠IgG多抗，金結(jié)合墊分別包被金標(biāo)kim-1、NAGL, IL-18, MAU和cys C單克隆抗體。
[0026]如圖4，卡槽22含有五個(gè)樣品孔3，樣品孔3的底部放有膠體金標(biāo)記的抗體復(fù)合物12，抗體的種類與腎損傷標(biāo)志物檢測(cè)試紙條8--對(duì)應(yīng)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.腎損傷五合一檢測(cè)卡，由檢測(cè)卡身和卡槽兩部分組成，卡身由上卡殼、下卡殼和五種腎損傷標(biāo)志物膠體金檢測(cè)試紙條組成，其特征在于:卡槽的槽身有五個(gè)孔，分別對(duì)應(yīng)五種膠體金試紙條，孔的底部含有膠體金標(biāo)記的抗體，分別與五種標(biāo)志物對(duì)應(yīng)。
2.如權(quán)利要求1所述的腎損傷五合一檢測(cè)卡，其特征在于:卡身的下卡殼內(nèi)側(cè)有五個(gè)凹槽用于放置膠體金試紙，卡身的上卡殼，有五個(gè)長(zhǎng)條形觀察窗，上卡殼外側(cè)有信息記錄簽，用于標(biāo)明試紙條的名稱、檢測(cè)結(jié)果說明和樣品信息；五種腎損傷標(biāo)志物檢測(cè)試紙條均由背襯、樣品墊、硝酸纖維素膜和吸水墊四部分組成；吸水墊和樣品墊分別位于背襯的兩段，硝酸纖維素膜在背襯中部一段與吸水墊交疊連接在一起，另一端與樣品墊交疊連接在一起，硝酸纖維素膜上包被有檢測(cè)線和質(zhì)控線，五種腎損傷標(biāo)志物膠體金檢測(cè)試紙條分別放入下卡殼的五個(gè)凹槽中，五種試紙條的樣品墊一部分露出卡殼，硝酸纖維素膜與觀察窗——對(duì)應(yīng)。
3.如權(quán)利要求1所述的腎損傷五合一檢測(cè)卡，其特征在于五種檢測(cè)試紙的檢測(cè)線分別包被kim-l、NAGL、IL-18、MAU和cys C抗體，質(zhì)控線包被羊抗鼠IgG多抗。
4.如權(quán)利要求1所述的腎損傷五合一檢測(cè)卡，其特征在于樣品孔分別包被金標(biāo)kim-1、NAGL, IL-18、MAU和cys C鼠源單克隆抗體。
【專利摘要】本實(shí)用新型是一種腎損傷五合一檢測(cè)卡，檢測(cè)卡基于膠體金原理檢測(cè)人尿液中腎損傷分子1，中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白，白介素18，胱抑素C和尿微量白蛋白。本實(shí)用新型由檢測(cè)卡殼和膠體金試紙條兩部分組成。檢測(cè)卡殼內(nèi)有五個(gè)凹槽用于放置腎損傷分子1，中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白，白介素18，胱抑素C和尿微量白蛋白檢測(cè)試紙條。本試紙條可以實(shí)現(xiàn)一步定性檢測(cè)人尿液中腎損傷分子1，中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白，白介素18，胱抑素C和尿微量白蛋白的含量，具有成本低，小巧簡(jiǎn)便，操作簡(jiǎn)單，無需專業(yè)操作人員等特點(diǎn)。
【IPC分類】G01N33-558, G01N33-68
【公開號(hào)】CN204422546
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201420844393
【發(fā)明人】李峰, 劉曉雷, 周宇璠, 博格·孫揚(yáng), 趙柏松
【申請(qǐng)人】霍普金斯醫(yī)藥研究院（北京）有限責(zé)任公司, 霍普金斯(北京)醫(yī)學(xué)診斷科技有限公司
【公開日】2015年6月24日
【申請(qǐng)日】2014年12月29日