快速測(cè)定瓜蚜對(duì)毒死蜱敏感性的診斷試劑盒及使用方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及快速測(cè)定瓜蚜對(duì)毒死蜱敏感性的診斷試劑盒，包括指形管、藥膜和填充物，所述的指形管為一端封閉的玻璃管，所述藥膜為均勻附著在指形管內(nèi)表面的毒死蜱藥膜，所述填充物可拆卸的填充在指形管的開(kāi)口端。本發(fā)明用于田間瓜蚜對(duì)毒死蜱敏感性的快速診斷，縮短了診斷時(shí)間，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，避免在抗性種群使用毒死蜱造成的增加成本、防治無(wú)效、污染環(huán)境等不良后果。
【專利說(shuō)明】
快速測(cè)定瓜蚜對(duì)毒死蜱敏感性的診斷試劑盒及使用方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及害蟲(chóng)敏感性快速檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體地說(shuō)，涉及快速測(cè)定瓜蚜對(duì)毒死 蜱敏感性的診斷試劑盒及使用方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 瓜姐(Aphis gossypii Glover)又叫棉姐，主要為害瓜類蔬菜，以成蟲(chóng)及若蟲(chóng)在葉 背和嫩莖上吸食植物汁液。在我國(guó)除西藏未見(jiàn)報(bào)道外，各地均有發(fā)生。瓜苗嫩葉及生長(zhǎng)點(diǎn)被 害后，葉片卷縮，瓜苗萎蔫，甚至枯死。老葉受害，提前枯落，縮短結(jié)瓜期，造成減產(chǎn)。寄主包 括黃瓜、南瓜、西萌蘆、西瓜、豆類、茄子、菠菜、蔥、洋蔥等蔬菜及棉、煙草、黃秋葵、甜瓜、哈 密瓜、食用仙人掌、菜用番木瓜、甜菜等農(nóng)作物。
[0003] 目前生產(chǎn)上防治瓜蚜主要采用化學(xué)防治，確定瓜蚜對(duì)常用藥劑的敏感性，正確選 擇防治藥劑，才能有效控制瓜蚜為害。傳統(tǒng)的浸葉法、點(diǎn)滴法等生測(cè)方法費(fèi)時(shí)費(fèi)力，不能及 時(shí)快速指導(dǎo)選藥用藥。
[0004] 近年來(lái)，診斷劑量法作為一種簡(jiǎn)便的研究病蟲(chóng)害敏感性的方法逐漸引起研究人員 的關(guān)注。張潤(rùn)祥、范仁俊、封云濤等人采用診斷劑量法開(kāi)發(fā)了快速測(cè)定評(píng)估黃蚜對(duì)聯(lián)苯菊酯 和啶蟲(chóng)脒敏感性的診斷試劑盒，王少麗、張友軍等人開(kāi)發(fā)了快速檢測(cè)殺蟲(chóng)劑對(duì)煙粉虱毒力 的試劑盒，高希武、劉曉嵐等人開(kāi)發(fā)了檢測(cè)中黑盲蝽、綠盲蝽、禾谷縊管蚜、麥長(zhǎng)管蚜抗藥性 的方法。但使用診斷劑量法應(yīng)用于瓜蚜對(duì)農(nóng)藥的敏感性檢測(cè)方法尚未見(jiàn)報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明提供快速測(cè)定瓜蚜對(duì)毒死蜱敏感性的診斷試劑盒及使用方法，所要解決的 技術(shù)問(wèn)題是如何快速測(cè)定瓜蚜對(duì)毒死蜱的敏感性水平，在田間快速判斷瓜蚜是否已經(jīng)對(duì)毒 死蜱產(chǎn)生抗藥性，進(jìn)而決定是否使用毒死蜱進(jìn)行防治。
[0006] 本發(fā)明解決上述技術(shù)問(wèn)題的技術(shù)方案如下:本發(fā)明提供快速測(cè)定瓜蚜對(duì)毒死蜱敏 感性的診斷試劑盒，包括指形管、藥膜和填充物，所述的指形管為一端封閉的玻璃管，所述 藥膜為均勻附著在指形管內(nèi)表面的毒死蜱藥膜，所述填充物可拆卸的填充在指形管的開(kāi)口 端。
[0007] 本發(fā)明的有益效果是:本發(fā)明用于田間瓜蚜對(duì)毒死蜱敏感性的快速診斷，縮短了 診斷時(shí)間，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，避免在抗性種群使用毒死蜱造成的增加成本、防治無(wú)效、污染環(huán) 境等不良后果。
[0008]進(jìn)一步，所述指形管為圓筒形管，所述指形管的長(zhǎng)度為8~10cm，內(nèi)徑為2.5~3cm〇
[0009] 采用上述進(jìn)一步技術(shù)方案的有益效果在于:這一尺寸范圍內(nèi)的指形管既能滿足一 定的瓜蚜在其內(nèi)生存活動(dòng)，從而保證實(shí)驗(yàn)中瓜蚜的死亡是由于藥膜的作用;這一尺寸的大 小與手掌相適應(yīng)，便于手握。
[0010] 進(jìn)一步，所述藥膜通過(guò)將毒死蜱丙酮溶液均勻滾施在指形管內(nèi)壁形成，所述藥膜 中毒死蜱的含量為1 · 04yg/cm2 〇
[0011] 采用上述進(jìn)一步技術(shù)方案的有益效果在于:上述數(shù)據(jù)是發(fā)明人經(jīng)過(guò)大量的實(shí)驗(yàn)得 出的，能夠有效實(shí)現(xiàn)田間瓜蚜對(duì)毒死蜱敏感性的快速診斷的最佳值。
[0012] 進(jìn)一步，所述填充物為棉塞，所述棉塞為消毒處理的脫脂棉球，所述棉塞的大小與 所述指形管的管口大小相匹配。
[0013] 采用上述進(jìn)一步技術(shù)方案的有益效果在于:消毒處理過(guò)的脫脂棉球能夠避免雜菌 或者其他污染對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性的影響，棉塞的大小與所述指形管的管口大小相匹配能夠 保證將瓜蚜放入指形管并塞上棉塞后，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中瓜蚜不會(huì)從棉塞一端爬出。
[0014] 本發(fā)明還涉及快速測(cè)定瓜蚜對(duì)毒死蜱敏感性的診斷試劑盒使用方法，使用步驟如 下：
[0015] SI.將所述的診斷試劑盒帶到待防治瓜蚜的田塊，打開(kāi)填充物，將30頭瓜蚜輕掃入 指形管，塞上填充物，放置3h;
[0016] S2.檢查步驟SI得到的指形管內(nèi)的活蟲(chóng)數(shù)，并根據(jù)瓜蚜的存活率判定該種群對(duì)毒 死蜱的敏感性。
[0017] 進(jìn)一步，所述步驟S2中判定法則為：
[0018] 若指形管內(nèi)的活蟲(chóng)數(shù)為0,表明受試種群對(duì)毒死蜱敏感，應(yīng)使用毒死蜱進(jìn)行防治； 若指形管內(nèi)的活蟲(chóng)數(shù)不為〇,則表明該種群對(duì)毒死蜱產(chǎn)生了抗性，應(yīng)改用其他敏感度高的藥 劑進(jìn)行防治。
【附圖說(shuō)明】
[0019] 圖1為本發(fā)明的快速測(cè)定瓜蚜對(duì)毒死蜱敏感性的診斷試劑盒的結(jié)構(gòu)示意圖。
[0020] 附圖中，各標(biāo)號(hào)所代表的部件列表如下：
[0021] 1、指形管，2、藥膜。
【具體實(shí)施方式】
[0022]以下結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明的原理和特征進(jìn)行描述，所舉實(shí)例只用于解釋本發(fā)明，并 非用于限定本發(fā)明的范圍。
[0023] 實(shí)施例1
[0024] 如圖1所示，本發(fā)明的快速測(cè)定瓜蚜對(duì)毒死蜱敏感性的診斷試劑盒，包括指形管1、 藥膜2和填充物，所述的指形管1為一端封閉的玻璃管，所述藥膜2為均勻附著在指形管1內(nèi) 表面的毒死蜱藥膜，所述填充物可拆卸的填充在指形管1的開(kāi)口端。所述指形管1為圓筒形 管，所述指形管1的長(zhǎng)度為8~10cm，內(nèi)徑為2.5~3cm。所述藥膜2通過(guò)將毒死蜱丙酮溶液均 勻滾施在指形管1內(nèi)壁，所述藥膜2中毒死蜱的含量為1.04yg/cm 2。
[0025] 優(yōu)選的，所述填充物為棉塞，所述棉塞為消毒處理的脫脂棉球，所述棉塞的大小與 所述指形管1的管口大小相匹配。
[0026] 本發(fā)明的快速測(cè)定瓜蚜對(duì)毒死蜱敏感性的診斷試劑盒使用方法，使用步驟如下： SI.將所述的診斷試劑盒帶到待防治瓜蚜的田塊，打開(kāi)填充物，將30頭瓜蚜輕掃入指形管1， 塞上填充物，放置3h; S2.檢查步驟Sl得到的指形管1內(nèi)的活蟲(chóng)數(shù)，并根據(jù)瓜蚜的存活率判定 該種群對(duì)毒死蜱的敏感性。
[0027] 優(yōu)選的，所述步驟S2中判定法則為:若指形管1內(nèi)的活蟲(chóng)數(shù)為0,表明受試種群對(duì)毒 死蜱敏感，應(yīng)使用毒死蜱進(jìn)行防治;若指形管1內(nèi)的活蟲(chóng)數(shù)不為ο，則表明該種群對(duì)毒死蜱產(chǎn) 生了抗性，應(yīng)改用其他敏感度高的藥劑進(jìn)行防治。
[0028] 藥膜濃度是經(jīng)過(guò)以下一系列試驗(yàn)最終確定的。
[0029] 分別從河北省廊坊市有害生物防治重點(diǎn)野外科學(xué)觀測(cè)試驗(yàn)站(LFS)和中國(guó)農(nóng)業(yè)科 學(xué)院植物保護(hù)研究所溫室(ZBS)采集黃瓜瓜蚜，采用葉片藥膜法和指形管藥膜法分別測(cè)定 兩個(gè)種群對(duì)毒死蜱的敏感性，測(cè)定用量如下表所示：
[0030] 表1LFS種群和ZBS種群敏感性測(cè)定
[0033]根據(jù)實(shí)驗(yàn)室初步的毒力測(cè)定結(jié)果，對(duì)LFS種群進(jìn)行了毒死蜱敏感品系選育。用單頭 蚜蟲(chóng)飼養(yǎng)繁殖大量后代，采用葉片藥膜法選用低于初始品系LC5q的毒死蜱濃度作為單頭繁 殖種群的篩選藥劑濃度，維持死亡率60~80%左右，經(jīng)過(guò)篩選后得到SS品系。采用指形管藥 膜法測(cè)定SS品系對(duì)LFS種群的毒死蜱敏感性變異指數(shù)為43.2。
[0034]表2對(duì)毒死蜱敏感品系選育(葉片藥膜法）
[0036] 通過(guò)多次采用指形管藥膜法測(cè)定SS品系對(duì)毒死蜱的敏感性，確定其對(duì)毒死蜱的 LC50 值、LC9q 值和 LC99 值。
[0037] 表4SS種群敏感性測(cè)定(指形管藥膜法，3h)
[0039] 選擇^：9〇、2\^：9()、^：99、2\^： 99作為備選診斷劑量，使用1^種群和33品系進(jìn)行比 較驗(yàn)證，最終確定2 X LC99即95.2mg/L為診斷劑量，根據(jù)所使用的指形管(長(zhǎng)9cm，內(nèi)徑3cm)內(nèi) 表面積(91.8cm 2)計(jì)算，藥膜劑量為1.04yg/cm2。
[0040] 表5配方選藥試劑盒診斷劑量確定
[0042] 將毒死蜱原藥用丙酮溶解，稀釋成95.2mg/L的毒死蜱丙酮溶液，取Iml藥液加入到 長(zhǎng)9cm，內(nèi)徑3cm的指形管中，充分滾動(dòng)，使藥液均勻的附著在指形管內(nèi)壁，形成藥膜，待管中 丙酮全部揮發(fā)，將棉塞塞住管口，快速診斷試劑盒即制作完畢。
[0043] 將制作好的診斷試劑盒分別帶到北京馬連洼和河北廊坊瓜蚜發(fā)生嚴(yán)重的黃瓜田， 在田間摘取蚜蟲(chóng)分布較多的葉片，用小毛筆輕輕將蚜蟲(chóng)掃入診斷試劑盒中，每管30頭，每個(gè) 種群3管，3h后檢查瓜蚜死亡率。診斷結(jié)果為:2個(gè)種群的死亡率均為74.4%，表明北京馬連 洼種群和河北廊坊種群的瓜蚜對(duì)毒死蜱已經(jīng)產(chǎn)生抗性，應(yīng)更換藥劑進(jìn)行防治。
[0044] 表6診斷試劑盒田間應(yīng)用結(jié)果
[0046]以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和 原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 快速測(cè)定瓜蚜對(duì)毒死蜱敏感性的診斷試劑盒，其特征在于，包括指形管（1)、藥膜(2) 和填充物，所述的指形管（1)為一端封閉的玻璃管，所述藥膜(2)為均勻附著在指形管（1)內(nèi) 表面的毒死蜱藥膜，所述填充物可拆卸的填充在指形管（1)的開(kāi)口端。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速測(cè)定瓜蚜對(duì)毒死蜱敏感性的診斷試劑盒，其特征在于，所 述指形管（1)為圓筒形管，所述指形管（1)的長(zhǎng)度為8~10cm，內(nèi)徑為2.5~3cm〇3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速測(cè)定瓜蚜對(duì)毒死蜱敏感性的診斷試劑盒，其特征在于，所 述藥膜(2)通過(guò)將毒死蜱丙酮溶液均勻滾施在指形管（1)內(nèi)壁形成，所述藥膜(2)中毒死蜱 的含量為1.04yg/cm 2〇4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速測(cè)定瓜蚜對(duì)毒死蜱敏感性的診斷試劑盒，其特征在于，所 述填充物為棉塞，所述棉塞為消毒處理的脫脂棉球，所述棉塞的大小與所述指形管（1)的管 口大小相匹配。5. 快速測(cè)定瓜蚜對(duì)毒死蜱敏感性的診斷試劑盒使用方法，其特征在于，使用步驟如下：51. 將權(quán)利要求1至4任一項(xiàng)所述的診斷試劑盒帶到待防治瓜蚜的田塊，打開(kāi)填充物，將 30頭瓜蚜輕掃入指形管（1 )，塞上填充物，放置3h;52. 檢查步驟S1得到的指形管（1)內(nèi)的活蟲(chóng)數(shù)，并根據(jù)瓜蚜的存活率判定該種群對(duì)毒死 蜱的敏感性。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的快速測(cè)定瓜蚜對(duì)毒死蜱敏感性的診斷試劑盒使用方法，其特 征在于，所述步驟S2中判定法則為： 若指形管（1)內(nèi)的活蟲(chóng)數(shù)為〇，表明受試種群對(duì)毒死蜱敏感，應(yīng)使用毒死蜱進(jìn)行防治;若 指形管（1)內(nèi)的活蟲(chóng)數(shù)不為〇,則表明該種群對(duì)毒死蜱產(chǎn)生了抗性，應(yīng)改用其他敏感度高的 藥劑進(jìn)行防治。
【文檔編號(hào)】G01N33/00GK105938138SQ201610444797
【公開(kāi)日】2016年9月14日
【申請(qǐng)日】2016年6月20日
【發(fā)明人】蔣紅云, 張燕寧, 張?zhí)m, 毛連綱, 馮磊
【申請(qǐng)人】中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所