一種煙蒂中殺菌劑截留量的檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于農(nóng)藥殘留檢測領(lǐng)域，涉及煙蒂中殺菌劑截留量的檢測方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 葉斑病和黑莖病是煙草中最為常見的細(xì)菌性病害，對煙草的產(chǎn)量和治療影響很 大。霜霉威、多菌靈、稻瘟靈、三唑醇和三唑酮都是烤煙生產(chǎn)中常用殺菌劑，能防治煙草葉斑 病和黑脛病，具有高效、低毒等特點。除多菌靈外，其它四個指標(biāo)均被列入《中國煙葉公司 2015年度煙草上推薦使用農(nóng)藥名單》，在各煙區(qū)均有施用，由于其施用廣泛，這幾種殺菌劑 為煙葉高殘留指標(biāo)，經(jīng)常在烤后煙葉中檢出。煙葉中殺菌劑的殘留會對吸煙者產(chǎn)生健康風(fēng) 險，其中多菌靈還被列入國際煙草科學(xué)研究合作中心(C0RESTA)2013年的煙草農(nóng)藥指導(dǎo)性 殘留限量名單，指導(dǎo)限量為2.00mg/kg。
[0003] 煙草中殺菌劑殘留量的分析方法主要有高效液相色譜法(HPLC)、氣相色譜-串聯(lián) 質(zhì)譜法(GC-MS/MS)和液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(LC-MS/MS)，而煙氣及濾嘴中殺菌劑的檢測方 法相對報道較少。由于卷煙煙氣直接進(jìn)入吸煙者體內(nèi)，轉(zhuǎn)移到煙氣中的殺菌劑會對吸煙者 產(chǎn)生較大的健康風(fēng)險，因此，準(zhǔn)確定量分析煙蒂中五種常用殺菌劑并研究煙蒂截留率具有 較為重要的意義。研究截留率主要手段是測定煙蒂對五種殺菌劑的截留量，通過計算即可 得到截留率。前期有研究者較為關(guān)注有機磷、菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥的煙氣及濾嘴中轉(zhuǎn) 移行為，而這些農(nóng)藥大部分為禁用或煙草中不推薦施用農(nóng)藥，在煙草中檢出率較低。另外有 研究者關(guān)注煙用抑芽劑馬來酰肼的煙氣、煙灰和濾嘴轉(zhuǎn)移行為，此研究通過成品卷煙加標(biāo) 的方式研究其轉(zhuǎn)移行為，而部分農(nóng)藥為內(nèi)吸型農(nóng)藥，這可能與實際吸煙過程中農(nóng)藥的轉(zhuǎn)移 過程存在較大的差異。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 鑒于此，本發(fā)明目的在于提供一種準(zhǔn)確定量檢測五種常用殺菌劑的方法，特別是 測定煙蒂中五種常用殺菌劑的方法，這五種常用殺菌劑分別為多菌靈、霜霉威、稻瘟靈、三 唑醇和三唑酮。
[0005] 發(fā)明人通過長期的探索和嘗試，以及多次的實驗和努力，不斷的改革創(chuàng)新，為解決 以上技術(shù)問題，本發(fā)明提供的技術(shù)方案是，提供一種煙蒂中殺菌劑截留量的檢測方法，所述 煙蒂包括濾嘴和殘留煙絲，所述殺菌劑為多菌靈、霜霉威、稻瘟靈、三唑醇和三唑酮中的一 種或多種，包括以下步驟：
[0006] 步驟a)根據(jù)ISO 8243:2006來選取樣品煙支，按照ISO 3402:1999來平衡煙支;采 用ISO標(biāo)準(zhǔn)抽吸模式（ISO 3308:2000)來抽吸5支卷煙，收集抽吸卷煙后的濾嘴；
[0007] 步驟b)將煙蒂中的濾嘴和煙絲進(jìn)行拆分，分別提取；
[0008] 將卷煙煙絲合并放入第一旋蓋離心管中，加入超純水，靜置充分浸潤，向第一離心 管中加入乙腈和內(nèi)標(biāo)，第一渦旋震蕩，完成后冷凍保存；
[0009] 將濾嘴分為多瓣，合并放入第二旋蓋離心管中，向離心管中加入甲醇，振蕩到樣品 被甲醇充分浸潤，靜置，向第二離心管中加入內(nèi)標(biāo)，第二渦漩振蕩，完成后冷凍保存；
[0010] 步驟c)經(jīng)過渦漩振蕩冷凍后的第一旋蓋離心管和第二旋蓋離心管中分別依次加 入無水硫酸鎂、氯化鈉、檸檬酸鈉和檸檬酸二氫鈉，第三次渦旋振蕩后離心，離心完成后冷 凍保存；
[0011] 步驟d)N-丙基乙二胺(PSA)純化：
[0012]在第一旋蓋離心管中移取其上清液于第三旋蓋離心管中，在第二旋蓋離心管中移 取其上清液于第四旋蓋離心管中，分別向第三旋蓋離心管和第四旋蓋離心管中加入無水硫 酸鎂及PSA吸附劑，第四次漩渦振蕩混合，然后高速離心;吸取上清液經(jīng)有機相濾膜過濾，移 取濾液，并用超純水稀釋定容后待測；
[0013]步驟e)配制標(biāo)準(zhǔn)溶液
[0014] 分別準(zhǔn)確稱取殺菌劑標(biāo)準(zhǔn)品，精確至O.OOOlg，用乙腈溶解定容，制得單一標(biāo)準(zhǔn)儲 備液；
[0015] 用乙腈準(zhǔn)確配制混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液，儲存于棕色玻璃瓶中，冷凍保存?zhèn)溆茫?br>[0016] 稀釋混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液得到混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，儲存于棕色玻璃瓶中，冷凍保存?zhèn)溆茫?br>[0017] 準(zhǔn)確配置TPP內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)儲備液，儲存于棕色玻璃瓶中，冷凍保存;取一定量的內(nèi)標(biāo) 標(biāo)準(zhǔn)儲備液，用乙腈稀釋定容，制得內(nèi)標(biāo)工作液；
[0018] 所有的冷凍的儲備液使用前將其恢復(fù)到室溫；
[0019] 步驟f)LC_MS/MS分析測定
[0020] 色譜條件:Atiantis UPLC HSS T3( lOOmmX 2 ? 1mm，1 ? 8_);流動相A:體積分?jǐn)?shù)為 0.1 %的甲酸水溶液，流動相B:體積分?jǐn)?shù)為0.1 %的甲酸甲醇溶液;流速0.4mL/min;柱溫35° C;進(jìn)樣量2此；
[0021] 梯度洗脫條件：〇~2min，90%A ~50%A;2~2.4min，50%A~30%A;2.4~4.0min， 30%A ~20%A;4.0~6.0min，20%A ~5%A;6.0~9.8min，5%A ~5%A;9.8~10.0min，5%A ~90%A;10.0 ~12.0min，90%A ~90%A;
[0022]質(zhì)譜條件：電噴霧離子源(ESI)，噴霧電壓（IS): 2.6kV;離子化溫度350°C ;霧化氣 流量：1000L/Hr;錐孔氣(cone)流量50L/Hr;碰撞氣流量為0.15ml/min;碰撞氣為氬氣，其余 氣體為氮氣;駐留時間為30msec，正離子MRM模式采集。
[0023] 根據(jù)本發(fā)明煙蒂中殺菌劑截留量的檢測方法的一個【具體實施方式】，所述冷凍溫度 為-20。。。
[0024] 根據(jù)本發(fā)明煙蒂中殺菌劑截留量的檢測方法的一個【具體實施方式】，所述單一標(biāo)準(zhǔn) 儲備液的濃度為1. 〇mg/mL;所述混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液中，霜霉威:0.20mg/mL、多菌靈和稻瘟靈： 0 ? 04mg/mL、三唑醇和三唑酮:0 ? 10mg/mL;所述混合標(biāo)準(zhǔn)工作液中，霜霉威:0 ? 020mg/mL;多 菌靈和稻瘟靈:0.004mg/mL;三唑醇和三唑酮:0.010mg/mL。
[0025] 根據(jù)本發(fā)明煙蒂中殺菌劑截留量的檢測方法的一個【具體實施方式】，所述內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn) 儲備液為〇.99mg/mL TPP。
[0026] 根據(jù)本發(fā)明煙蒂中殺菌劑截留量的檢測方法的一個【具體實施方式】，所述第一旋蓋 離心管的容積為50mL;所述第二旋蓋離心管的容積為50mL;所述第三旋蓋離心管的容積為 1.8mL，所述第四旋蓋離心管的容積為1.8mL。
[0027] 根據(jù)本發(fā)明煙蒂中殺菌劑截留量的檢測方法的一個【具體實施方式】，所述第一旋蓋 離心管中加入超純水的體積為lOmL，靜置浸潤的時間為lOmin;加入乙腈和內(nèi)標(biāo)的體積分別 為10mL和lOOiiL;所述第二離心管中加入甲醇和內(nèi)標(biāo)的體積分別為20mL和200此;所述內(nèi)標(biāo) 濃度為10yg/mL。
[0028] 根據(jù)本發(fā)明煙蒂中殺菌劑截留量的檢測方法的一個【具體實施方式】，所述第一渦旋 震蕩速率為2000r/m，時間為2min;所述第二渦旋震蕩速率為2000r/m，時間為5min;所述第 三渦旋震蕩速率為2000r/m，時間為2min;所述第四渦旋震蕩速率為2000r/m，時間為2min。
[0029] 根據(jù)本發(fā)明煙蒂中殺菌劑截留量的檢測方法的一個【具體實施方式】，步驟(c)中，依 次加入的無水硫酸鎂、氯化鈉、檸檬酸鈉和檸檬酸二氫鈉的質(zhì)量分別為4g、lg、lg和0.5g。
[0030] 根據(jù)本發(fā)明煙蒂中殺菌劑截留量的檢測方法的一個【具體實施方式】，步驟(d)中，加 入無水硫酸鎂及PSA吸附劑的質(zhì)量為150mg和25mg。
[0031]根據(jù)本發(fā)明煙蒂中殺菌劑截留量的檢測方法的一個【具體實施方式】，步驟(e)中，移 取濾液體積為200此，加入超純水定容到lmL。
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