一種同時(shí)檢測(cè)食品中多種糖及糖醇的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及一種蜂蜜、葡萄酒、白酒等食品中糖和糖醇的檢測(cè)方法，特別設(shè)及一種 同時(shí)檢測(cè)上述食品中山梨糖醇、麥芽糖醇、木糖醇、果糖、葡萄糖、薦糖、乳糖的高效液相色 譜檢測(cè)方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 目前糖類(lèi)檢測(cè)方法的研究中，主要有高效液相色譜化化C)-巧光檢測(cè)法(FLD)， HPLC-示差折光法(RID)，離子色譜法，高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法化PLC-MS/MS)，高效氣相 色譜質(zhì)譜聯(lián)用法(GC-MS/MS)dHPLC-FLD法雖然靈敏度較高，但是具有較強(qiáng)的選擇性;離子 色譜法具有較好的重復(fù)性和準(zhǔn)確性，但是糖類(lèi)能在電極表面還原樣品中某些分子;HPLC-MS/MS法和GC-MS/MS法雖然具有高分離、高選擇、高靈敏的特性，但是其設(shè)備昂貴，操作復(fù) 雜，通用性較差;現(xiàn)行國(guó)標(biāo)中對(duì)單、雙糖、糖醇的檢測(cè)方法主要為化學(xué)還原法和HPLC-示差折 光檢測(cè)法(RID)，但前者費(fèi)時(shí)，操作繁瑣，并且只能對(duì)具有還原性的糖進(jìn)行定量檢測(cè)，無(wú)法準(zhǔn) 確定性;而HPLC-示差折光檢測(cè)法(RID)具有操作簡(jiǎn)便，靈敏度高的優(yōu)點(diǎn)，是常用的方法。
[0003] 在國(guó)標(biāo)及日常糖類(lèi)檢測(cè)的液相色譜柱方面，目前較常使用的色譜柱是氨基柱，雖 然氨基柱在糖類(lèi)分析中有較高的靈敏度和分離度，但是氨基柱連通的HPLC-示差折光檢測(cè) 器(RID)靈敏度高，系統(tǒng)較難平衡。而且氨基容易水解，當(dāng)樣品通過(guò)時(shí)，水解產(chǎn)物可W與樣品 一同進(jìn)入檢測(cè)器檢測(cè)造成干擾。在長(zhǎng)時(shí)間的使用過(guò)程中，流動(dòng)相通過(guò)氨基柱時(shí)氨基基團(tuán)會(huì) 有脫落，存在噪聲；當(dāng)樣品純度不高時(shí)，噪聲也會(huì)很大，氨基柱的柱效下降很快。氨基柱的柱 效下降是由氨基本身特性決定的，使用后的常規(guī)保養(yǎng)是起不到太大作用的，所W導(dǎo)致氨基 柱的使用壽命較短。
[0004] 同時(shí)，目前用于糖類(lèi)檢測(cè)的HPLC常采用反相系統(tǒng)，在流動(dòng)相的選擇上，多選擇乙臘 和水為流動(dòng)相，通過(guò)乙臘與水不同比例的混合達(dá)到分離特定糖類(lèi)的目的。但是在氨基柱-乙 臘水系統(tǒng)的分析中，隨著檢測(cè)糖類(lèi)數(shù)量的增加，氨基柱的柱效下降，部分糖類(lèi)不能有效的分 離。為了增大分離度，就需要不斷調(diào)整乙臘水的比例，但是當(dāng)有機(jī)相乙臘比例增大到一定程 度后，氨基柱有效鍵合就會(huì)被破壞，從而降低柱壽命。
[0005] 鑒于不同國(guó)家對(duì)糖及糖醇的不同要求和食品標(biāo)簽強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)的施行，W及進(jìn)一步 監(jiān)督食品生產(chǎn)，預(yù)防不法商販利用糖類(lèi)添加劑的美味、廉價(jià)等優(yōu)點(diǎn)，達(dá)到某種營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)，對(duì) 食品進(jìn)行非法添加，所W需要對(duì)常用糖及糖醇進(jìn)行檢測(cè)。為了縮短檢測(cè)周期，提高工作效 率，需要建立一種食品中多種糖及糖醇的同時(shí)檢測(cè)方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是提供一種高速、準(zhǔn)確、有效的同時(shí)檢測(cè)食品中多種糖及糖醇的高 效液相色譜分析方法，W大大減輕逐個(gè)檢測(cè)的工作量，提高檢測(cè)效率，保證產(chǎn)品的質(zhì)量。
[0007] 本發(fā)明選擇Waters Xbridge Amide柱作為HPLC色譜柱，Amide柱是酷胺鍵合柱， 相對(duì)于氨基鍵合柱的穩(wěn)定性更高，柱流失減少，與示差折光檢測(cè)器(RID)結(jié)合噪音較小，系 統(tǒng)易平衡，且Amide柱pH耐受性極佳，耐高溫，隨著柱溫的升高，糖及糖類(lèi)分析分離度明顯 增強(qiáng)，在7(TC W上單糖分析效果最強(qiáng)，最高耐受溫度為9(TC，柱效下降慢，且柱子使用壽命 更長(zhǎng)。
[000引本發(fā)明選擇丙酬、水和S乙胺為流動(dòng)相，系統(tǒng)為正相系統(tǒng)，結(jié)合Waters Xbridge Amide柱，耐酸堿性極佳，耐高溫，機(jī)器噪音小，系統(tǒng)易平衡，且對(duì)糖及糖類(lèi)分離度高，靈敏 度高，分析效果好，隨著檢測(cè)樣品數(shù)量的增加，柱效下降慢；當(dāng)大量檢測(cè)后為了防止柱效下 降，主要流動(dòng)相丙酬、水比例不需改變，僅僅調(diào)整=乙胺的加入量即可保持柱效，且=乙胺 加入量很小，對(duì)色譜柱填充物不會(huì)造成影響，色譜柱壽命長(zhǎng)。
[0009] 本發(fā)明采用的具體技術(shù)方案如下： 一種同時(shí)檢測(cè)食品中多種糖及糖醇的方法，所述方法為HPLC-示差折光檢測(cè)法，其特征 在于所述HPLC的色譜條件為:色譜柱采用酷胺鍵合柱，流動(dòng)相為丙酬、水和S乙胺的單流動(dòng) 相，等度洗脫;柱溫為7〇°C，流速為0.8ml/min，進(jìn)樣量為10化。
[0010] 上述酷胺鍵合柱具體型號(hào)為Waters Xbridge Amide。
[0011] 上述流動(dòng)相的組成為：丙酬:水=77:23(V/V)，每1000 ml流動(dòng)相加入0.115-0.345ml =乙胺；當(dāng)目標(biāo)物分離度下降時(shí)，在上述范圍內(nèi)適當(dāng)增加=乙胺的量。
[0012] 本發(fā)明具體的檢測(cè)步驟如下： (1) 糖單標(biāo)溶液的配制：分別準(zhǔn)確稱(chēng)取山梨糖醇、麥芽糖醇、木糖醇、果糖、葡萄糖、薦 糖、乳糖配制成標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，待用； (2) 標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制:分別取上述濃度的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，配制成標(biāo)準(zhǔn)工作溶液； (3) 樣品的制備:取樣品5.00-20.0 Og，加水溶解，再加入水定容至50ml，混勻后，離屯、機(jī) 離屯、6 000 r/min，4°C條件下離屯、5min，取上清液，用0.22皿針頭濾膜過(guò)濾，濾液供檢測(cè)； (4) 樣品檢測(cè):選擇液相外標(biāo)法定量，按照一定濃度配制標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，用標(biāo)準(zhǔn)溶液的 濃度和相應(yīng)單體峰面積信號(hào)做工作曲線，根據(jù)待測(cè)樣品中單體的響應(yīng)峰面積和樣品量，利 用公式1進(jìn)行計(jì)算：
(1) 式中： X -試樣中待測(cè)組分的含量(mg/g)， C -從標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得到待測(cè)組分的濃度(mg/mL)， VI-試樣溶液定容的體積(mL)， m-稱(chēng)取樣品的質(zhì)量(g)。
[0013] 本發(fā)明檢測(cè)方法可適用于蜂蜜、葡萄酒、白酒等食品。檢測(cè)結(jié)果表明：本發(fā)明檢測(cè) 樣品分析譜圖基線平穩(wěn)，保留時(shí)間穩(wěn)定，目標(biāo)物與干擾物可W完全分離，由于W上基質(zhì)涵蓋 了絕大多數(shù)檢測(cè)樣品基質(zhì)的高糖分，高粘度，高色度，高干擾等特點(diǎn)，大量進(jìn)樣后，機(jī)器性能 及譜圖仍然穩(wěn)定，且分離度好，沒(méi)有較大波動(dòng)，W上表明此方法對(duì)樣品檢測(cè)的適用性好，且 抗干擾能力強(qiáng)。
[0014] 本發(fā)明的有益效果:建立了多種糖及糖醇山梨糖醇、麥芽糖醇、木糖醇、果糖、葡萄 糖、薦糖、乳糖同時(shí)檢測(cè)的液相色譜方法，樣品前處理簡(jiǎn)單，方法快捷，靈敏度高，回收率高， 方法的線性范圍寬，相關(guān)系數(shù)好，檢出限低，適用性良好，填補(bǔ)了國(guó)內(nèi)W上糖及糖醇同時(shí)檢 測(cè)的空白，大大提高了工作效率。
【附圖說(shuō)明】
[0015] 圖1屯種糖及糖醇高效液相色譜圖。
[0016] 圖2蜂蜜樣品的高效液相色譜圖。
[0017] 圖3葡萄酒樣品的高效液相色譜圖。
[0018] 圖4白酒樣品的高效液相色譜圖。
[0019] 圖5采用全新氨基柱檢測(cè)的糖類(lèi)高效液相色譜圖。
[0020] 圖6采用氨基柱檢測(cè)100次后糖類(lèi)的高效液相色譜圖。
[0021 ]圖7采用氨基柱檢測(cè)300次后糖類(lèi)的高效液相色譜圖。
[0022] 圖8采用酷胺柱和乙臘-水檢測(cè)糖類(lèi)的高效液相色譜圖。
[0023] 圖9采用酷胺柱和丙酬-水檢測(cè)糖類(lèi)的高效液相色譜圖。
[0024] 圖10采用酷胺柱檢測(cè)500次后糖類(lèi)的高效液相色譜圖。
【具體實(shí)施方式】
[0025] 下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施例，并通過(guò)對(duì)比例來(lái)進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明。
[00%]本發(fā)明設(shè)及的儀器與設(shè)備：1100冊(cè)LC(美國(guó)Agilent公司）配示差折光檢測(cè)器； Waters Xbridge Amide(3.5叫1，4.6*250mm，美國(guó)WaterS公司）；化602-S天平（Mettier-Toledo公司）；CR22G虹離屯、機(jī)（日本HITACHI);移液槍?zhuān)↖O--IOOyL，20-200yL，IOO-1000 yL， SOOOyL，Elppendorf公司）；0.2化111 濾膜(德國(guó)Membrana公司）。
[0027] 本發(fā)明HPLC的流動(dòng)相為丙酬、水和S乙胺的單流動(dòng)相（丙酬：水=77: 23(V/V)，每 1000 ml流動(dòng)相加入0.230mlS乙胺），等度洗脫;柱溫為70°C，流速為0. Sml/min，進(jìn)樣量為10 化。
[0028] 本發(fā)明設(shè)及的試劑與材料:麥芽糖醇、木糖醇、山梨糖醇、薦糖、乳糖、果糖、葡萄 糖，純度均>99%;丙酬(色譜純）;S乙胺(優(yōu)級(jí)純）。
[0029] 實(shí)施例1:蜂蜜樣品中屯種糖及糖醇的檢測(cè) (1)屯種糖單標(biāo)溶液的配制:分別準(zhǔn)確稱(chēng)取山梨糖醇、麥芽糖醇、木糖醇、果糖、葡萄糖、 薦糖、乳糖配制成標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，其中乳糖的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液濃度均為100 mg ? ml/i，木糖醇、果 糖、山梨糖醇、葡萄糖、薦糖的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液濃度均為150 mg -ml/i，麥芽糖醇的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液濃 度為200 mg ? m[i，待用;標(biāo)準(zhǔn)系列濃度見(jiàn)表1。
[0030] 表1屯種糖標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液濃度及標(biāo)準(zhǔn)系列溶液濃度
(2) 標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制:木糖醇標(biāo)準(zhǔn)工作溶液60 mg ? m[:取150 mg ? m[i木糖醇標(biāo) 準(zhǔn)儲(chǔ)備液4. OOmL入IOmL容量瓶中，加水定容至刻度；果糖標(biāo)準(zhǔn)工作溶液60 mg ? mL-:取150 mg ? mL-i果糖標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液4.00血入10血容量瓶中，加水定容至刻度；山梨糖醇標(biāo)準(zhǔn)工作溶液 60 mg ? mL-:取150 mg ? mL-i山梨糖醇標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液4.OOmL入IOmL容量瓶中，加水定容至刻 度;葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)工作溶液60 mg ? mL-:取150 mg ? mL-i葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液4.00血入10血容量 瓶中，加水定容至刻度；薦糖標(biāo)準(zhǔn)工作溶液60 mg ? ml/:取150 mg ? ml/i薦糖標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液 4.OOmL入IOmL容量瓶中，加水定容至刻度;麥芽糖標(biāo)準(zhǔn)工作溶液50 mg ?血取200 mg ? ml ^麥芽糖標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液2.50mL入IOm