檢測(cè)agp1、serpina3和cdh1含量的系統(tǒng)在篩查活動(dòng)性結(jié)核病患者中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[00011本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域中檢測(cè)AGP1、SERPINA3和⑶H1含量的系統(tǒng)在篩查活動(dòng)性 結(jié)核病患者中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 結(jié)核病（Tuberculosis，TB)是由結(jié)核分枝桿菌（Mycobacterium tuberculosis， MTB)感染引發(fā)的慢性傳染性疾病，嚴(yán)重威脅人類健康。全國(guó)第五次結(jié)核病流行病學(xué)調(diào)查顯 示我國(guó)現(xiàn)有超過(guò)500萬(wàn)名成人活動(dòng)性肺結(jié)核患者。成人感染結(jié)核分枝桿菌后，部分呈現(xiàn)帶菌 生存狀態(tài)，并不會(huì)發(fā)展為結(jié)核病，稱為結(jié)核潛伏感染者(Latent tuberculosis infection, LTBI);約5-10 %的潛伏感染者會(huì)繼續(xù)發(fā)展為活動(dòng)性結(jié)核病(Active tuberculosis，ATB)。 活動(dòng)性肺結(jié)核是指痰涂片陽(yáng)性者，證明有結(jié)核分枝桿菌排出，病灶屬于活動(dòng)期，胸片上常有 斑片狀陰影或是結(jié)核空洞，或者播散病灶，說(shuō)明結(jié)核分枝桿菌繁殖活躍，毒力強(qiáng)。國(guó)內(nèi)各地 區(qū)流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果顯示，基于γ-干擾素釋放試驗(yàn)（IGRA)得出的結(jié)核分枝桿菌感染率大 約在20%-30%之間，即全國(guó)約有3-4億人為結(jié)核分枝桿菌感染者，數(shù)目龐大的無(wú)臨床癥狀 的結(jié)核潛伏感染者是活動(dòng)性結(jié)核病的重要來(lái)源。此外，由于結(jié)核潛伏感染的預(yù)防性治療方 案與活動(dòng)性結(jié)核病的抗癆治療方案顯著不同。因此，如何實(shí)現(xiàn)結(jié)核分枝桿菌潛伏感染者與 活動(dòng)性結(jié)核病患者的早期鑒別診斷至關(guān)重要。
[0003] 常用的結(jié)核分枝桿菌感染診斷方法包括傳統(tǒng)的結(jié)核菌素實(shí)驗(yàn)(TST)以及γ-干擾 素釋放試驗(yàn)（IGRAs )，TST方法容易受到卡介苗接種和非結(jié)核分枝桿菌的干擾，結(jié)核分枝桿 菌感染診斷不夠明確，更無(wú)法區(qū)別結(jié)核潛伏感染和活動(dòng)性結(jié)核病。新近推行的IGRAs方法， 雖然能夠檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌感染，但無(wú)法區(qū)分結(jié)核桿菌潛伏感染和活動(dòng)性結(jié)核病。目前活 動(dòng)性結(jié)核病的診斷金標(biāo)準(zhǔn)仍然是經(jīng)典的痰涂片染色顯微鏡下查找抗酸桿菌以及結(jié)核桿菌 培養(yǎng)法，已有近百年的歷史。這兩種檢測(cè)方法的敏感性均不高，痰涂片染色法的敏感性約 30%，結(jié)核桿菌培養(yǎng)法的敏感性約60%。痰涂片染色法雖然可以當(dāng)天出結(jié)果，但不能區(qū)分結(jié) 核桿菌和非結(jié)核分枝桿菌，也不能區(qū)分MTB是活菌還是死菌。結(jié)核桿菌培養(yǎng)法的敏感性雖高 一些，但耗時(shí)較長(zhǎng)，即使快速培養(yǎng)也需要1個(gè)月的時(shí)間才能得到結(jié)果。另外，對(duì)于臨床上大量 的肺外結(jié)核和涂陰、菌陰的活動(dòng)性結(jié)核病患者，金標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法的應(yīng)用受到限制，加劇了診 斷的困難，給及時(shí)治療帶來(lái)了阻力。近年來(lái)雖然陸續(xù)出現(xiàn)了一些先進(jìn)的基于核酸擴(kuò)增的分 子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)(如XpertMTB/RIF assay)，但由于受到儀器設(shè)備和診斷費(fèi)用的限制，以 及假陽(yáng)性率偏高等問(wèn)題，還無(wú)法全面推廣。因此，現(xiàn)行的結(jié)核病診斷方法或輔助診斷手段都 無(wú)法實(shí)現(xiàn)快速有效的鑒別診斷結(jié)核分枝桿菌潛伏感染和活動(dòng)性結(jié)核病，使得臨床上面臨嚴(yán) 重的治療延誤以及過(guò)度治療等問(wèn)題?；诖?，尋找新的活動(dòng)性結(jié)核病特異標(biāo)志物，鑒別診斷 結(jié)核分枝桿菌潛伏感染和活動(dòng)性結(jié)核病，已經(jīng)成為活動(dòng)性結(jié)核病臨床診斷中一項(xiàng)亟待解決 的難題。
[0004] 血漿蛋白質(zhì)組組成成分、表達(dá)水平和疾病有密切聯(lián)系，用蛋白質(zhì)組學(xué)方法分析動(dòng) 態(tài)變化的蛋白質(zhì)組，對(duì)鑒別診斷活動(dòng)性結(jié)核病和結(jié)核潛伏感染有重要意義。Labelfree 2D-LC-MSMS是將非同位素標(biāo)記技術(shù)、二維液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)相聯(lián)用，信號(hào)離子表現(xiàn)為不同 質(zhì)荷比的峰，根據(jù)波峰的高度及面積可得到準(zhǔn)確的蛋白質(zhì)定量信息，非常適合對(duì)多樣本的 平行分析。
[0005] Alpha-1-acid glycoprotein 1(AGP1)，al酸性糖蛋白（alAG)，早期稱乳清類粘蛋 白，由肝臟合成，癌細(xì)胞也可合成。AGP1的肽鏈結(jié)構(gòu)與Ig輕鏈可變區(qū)及部分重鏈區(qū)、結(jié)合珠 蛋白a鏈結(jié)構(gòu)類似，說(shuō)明AGP1從Ig家系演變而來(lái)。體液中AGP1含量的變化可按下列病種排列 依次升高，即漏出液、炎癥滲出液、惡性腫瘤滲出液。Alpha-1-antichymotrypsin (SERPINA3)，a_抗胰凝乳蛋白，雖然該蛋白的詳細(xì)生理功能不是很清楚，但是可以抑制中性 粒細(xì)胞和肥大細(xì)胞類糜蛋白酶，兩者都可以激活使血管緊張素。E-cadherin (CDH1)，上皮細(xì) 胞鈣粘蛋白，上皮細(xì)胞鈣粘蛋白是一種鈣離子依賴的細(xì)胞粘附分子，存在于上皮細(xì)胞，參與 細(xì)胞的粘附和信息傳導(dǎo)過(guò)程，并與腫瘤的分級(jí)和預(yù)后均有一定的相關(guān)關(guān)系。上皮細(xì)胞鈣粘 蛋白的細(xì)胞外區(qū)為信號(hào)肽結(jié)構(gòu)，具有鈣離子結(jié)合點(diǎn)，能夠與鈣離子特異性結(jié)合，跨膜區(qū)起著 膜固定作用，是細(xì)胞與細(xì)胞間緊密連接的關(guān)鍵，當(dāng)其表達(dá)下調(diào)或功能障礙時(shí)，將使同種細(xì)胞 失去粘附，意味著腫瘤細(xì)胞容易從原發(fā)病灶脫落分離。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006 ]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是如何篩查活動(dòng)性結(jié)核病患者。
[0007] 為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明首先提供了 Ml在制備篩查或輔助篩查活動(dòng)性結(jié)核病 患者產(chǎn)品中的應(yīng)用;所述Ml包括檢測(cè)AGP1、SERPINA3和⑶H1含量的系統(tǒng)。
[0008] 上述應(yīng)用中，所述檢測(cè)AGP1、SERPINA3和⑶H1含量的系統(tǒng)可由檢測(cè)AGP1含量的系 統(tǒng)、檢測(cè)SERPINA3含量的系統(tǒng)和檢測(cè)CDH1含量的系統(tǒng)組成。
[0009] 上述應(yīng)用中，所述檢測(cè)AGP1含量的系統(tǒng)為通過(guò)酶聯(lián)免疫反應(yīng)檢測(cè)AGP1含量所需的 試劑和/或儀器;所述檢測(cè)SERPINA3含量的系統(tǒng)為通過(guò)酶聯(lián)免疫反應(yīng)檢測(cè)SERPINA3含量所 需的試劑和/或儀器;所述檢測(cè)CDH1含量的系統(tǒng)為通過(guò)酶聯(lián)免疫反應(yīng)檢測(cè)CDH1含量所需的 試劑和/或儀器。
[0010] 上述應(yīng)用中，所述通過(guò)酶聯(lián)免疫反應(yīng)檢測(cè)AGP1含量所需的試劑可為AGP1和/或 AGP1的抗體，也可由所述AGP1、所述AGP1的抗體以及進(jìn)行酶聯(lián)免疫反應(yīng)所需要的其它試劑 組成。所述AGP1可在通過(guò)酶聯(lián)免疫反應(yīng)檢測(cè)AGP1含量中作為蛋白標(biāo)準(zhǔn)品使用。所述AGP1、所 述AGP1的抗體以及所述進(jìn)行酶聯(lián)免疫反應(yīng)所需要的其它試劑均可獨(dú)立包裝。
[0011] 所述AGP1、所述AGP1的抗體以及所述進(jìn)行酶聯(lián)免疫反應(yīng)所需要的其它試劑具體可 為abeam公司貨號(hào)為abcaml08854的試劑盒中試劑。
[0012] 所述AGP1具體可為序列表中序列1所示的蛋白質(zhì)。所述AGP1的抗體可為可識(shí)別所 述AGP1的單克隆抗體或多克隆抗體。
[0013] 所述通過(guò)酶聯(lián)免疫反應(yīng)檢測(cè)SERPINA3含量所需的試劑可為SERPINA3和/或 SERPINA3的抗體，也可由所述SERPINA3、所述SERPINA3的抗體以及進(jìn)行酶聯(lián)免疫反應(yīng)所需 要的其它試劑組成。所述SERPINA3可在通過(guò)酶聯(lián)免疫反應(yīng)檢測(cè)SERPINA3含量中作為蛋白標(biāo) 準(zhǔn)品使用。所述SERPINA3、所述SERPINA3的抗體以及所述進(jìn)行酶聯(lián)免疫反應(yīng)所需要的其它 試劑均可獨(dú)立包裝。
[0014] 所述SERPINA3、所述SERPINA3的抗體以及所述進(jìn)行酶聯(lián)免疫反應(yīng)所需要的其它試 劑具體可為abeam公司貨號(hào)為abcaml 57706的試劑盒中試劑。
[0015] 所述SERPINA3具體可為序列表中序列2所示的蛋白質(zhì)。所述SERPINA3的抗體可為 可識(shí)別所述SERPINA3的單克隆抗體或多克隆抗體。
[0016]所述通過(guò)酶聯(lián)免疫反應(yīng)檢測(cè)⑶H1含量所需的試劑可為⑶H1和/或⑶H1的抗體，也 可由所述CDH1、所述CDH1的抗體以及進(jìn)行酶聯(lián)免疫反應(yīng)所需要的其它試劑組成。所述CDH1 可在通過(guò)酶聯(lián)免疫反應(yīng)檢測(cè)CDH1含量中作為蛋白標(biāo)準(zhǔn)品使用。所述CDH1、所述CDH1的抗體 以及所述進(jìn)行酶聯(lián)免疫反應(yīng)所需要的其它試劑均可獨(dú)立包裝。
[0017] 所述CDH1、所述CDH1的抗體以及所述進(jìn)行酶聯(lián)免疫反應(yīng)所需要的其它試劑具體可 為R&D公司貨號(hào)為DCADE0的試劑盒中試劑。
[0018] 所述CDH1具體可為序列表中序列3所示的蛋白質(zhì)。所述CDH1的抗體可為可識(shí)別所 述CDH1的單克隆抗體或多克隆抗體。
[0019] 上述應(yīng)用中，所述Ml還可包括數(shù)據(jù)處理裝置，所述數(shù)據(jù)處理裝置用于根據(jù)待測(cè)對(duì) 象的AGP1、SERPINA3和CDH1含量確定所述待測(cè)對(duì)象是否為活動(dòng)性結(jié)核病患者。所述Ml可僅 為所述檢測(cè)AGP1、SERPINA3和⑶H1含量的系統(tǒng)，也可由所述檢測(cè)AGP1、SERPINA3和⑶H1含量 的系統(tǒng)與所述數(shù)據(jù)處理裝置組成。所述Ml也可僅為由所述檢測(cè)AGPUSERPINA3和CDH1含量 的系統(tǒng)組成的試劑盒，也可僅為由所述檢測(cè)AGPUSERPINA3和CDH1含量的系統(tǒng)與所述數(shù)據(jù) 處理裝置組成的試劑盒。
[0020] 上述應(yīng)用中，所述數(shù)據(jù)處理裝置可為利用CART算法進(jìn)行數(shù)據(jù)處理的數(shù)據(jù)處理裝 置，如利用CART算法進(jìn)行數(shù)據(jù)處理軟件或模塊。
[0021 ] 上述應(yīng)用中，在待測(cè)對(duì)象血漿樣本中SERPINA3的含量2 227.221yg/mL時(shí)，如所述 待測(cè)對(duì)象血漿樣本中AGP1 2 3693.85yg/mL，所述待測(cè)對(duì)象為或候選為活動(dòng)性結(jié)核病患者， 如所述待測(cè)對(duì)象血漿樣本中AGPl〈3693.85yg/mL，所述待測(cè)對(duì)象為或候選為非活動(dòng)性結(jié)核 病患者;在所述待測(cè)對(duì)象血漿樣本中SERPINA3的含量〈227.221yg/mL時(shí)，如所述待測(cè)對(duì)象血 漿樣本中CDH1〈105.829ng/mL，所述待測(cè)對(duì)象為或候選為活動(dòng)性結(jié)核病患者，如所述待測(cè)對(duì) 象血漿樣本中⑶