一種適合全自動(dòng)生化分析儀的血清總膽固醇檢測(cè)試劑盒的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及血清總膽固醇檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種適合全自動(dòng)生化分析儀的 血清總膽固醇檢測(cè)試劑。
【背景技術(shù)】
[0002] 血清總膽固醇是指血液中所有脂蛋白所含膽固醇之總和?？偰懝檀及ㄓ坞x膽固 醇和膽固醇酯，肝臟是合成和貯存的主要器官。膽固醇是合成腎上腺皮質(zhì)激素、性激素、膽 汁酸及維生素 D等生理活性物質(zhì)的重要原料，也是構(gòu)成細(xì)胞膜的主要成分，其血清濃度可作 為脂代謝的指標(biāo)。
[0003] 臨床上常用的血清總膽固醇檢測(cè)方法有化學(xué)法和酶法。
[0004] 1.化學(xué)法-LB反應(yīng)顯色法 用氫氧化鉀乙醇液使血清蛋白變性及水解血清中的膽固醇酯，加水后用正己烷分溶抽 提，可從堿性乙醇液中定量地提取膽固醇（達(dá)99.7%)，分溶抽提達(dá)到抽提與純化的雙重目 的。提取的膽固醇溶液中除少量其他甾醇（人血清中約占 CH0的1%)以外，基本上不含干擾 物。抽提液揮發(fā)干后，以Li eberman-Bur chard (L-B)試劑與膽固醇顯色，實(shí)際中醋酸與醋酸 酐作為膽固醇的溶劑與脫水劑，所生成的綠色產(chǎn)物主要是五烯膽留醇正離子，最大吸收 620nm。該方法操作復(fù)雜，顯色條件要求高，且不適合全自動(dòng)生化分析儀。
[0005] 2.酶法 血清中的膽固醇酯(CE)被膽固醇酯水解酶(CEH)水解成游離膽固醇(Choi)，后者被膽 固醇氧化酶(CH0D)氧化成膽留烯酮并產(chǎn)生過氧化氫，在經(jīng)過過氧化物酶(P0D)催化4-氨基 安替比林與酚，生成紅色醌亞胺色素。最大吸收在500nm左右，吸光度與標(biāo)本中CH0含量成正 比，
鑒于此，本發(fā)明在酶法的基礎(chǔ)上，設(shè)計(jì)適合與全自動(dòng)生化分析儀配套使用的試劑，優(yōu)化 反應(yīng)體系，添加多種穩(wěn)定劑，顯著改善了試劑的穩(wěn)定性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 針對(duì)于血清總膽固醇檢測(cè)，本發(fā)明提供了一種適合與全自動(dòng)生化分析儀配套使用 的血清總膽固醇檢測(cè)試劑盒，該試劑盒與常規(guī)檢測(cè)方法相比，使用簡(jiǎn)單、方便，具有很好的 準(zhǔn)確度、重復(fù)性及良好的檢測(cè)范圍，有利于試劑在臨床上的推廣應(yīng)用。
[0007] 基本原理 血清中的膽固醇酯(CE)被膽固醇酯水解酶(CEH)水解成游離膽固醇(Choi)，后者被膽 固醇氧化酶(CH0D)氧化成膽留烯酮并產(chǎn)生過氧化氫，在經(jīng)過過氧化物酶(POD)催化4-氨基 安替比林與酚，生成紅色醌亞胺色素。最大吸收在500nm左右，吸光度與標(biāo)本中TC含量成正 比。
本發(fā)明是通過以下步驟得到的： 1. 一種適合全自動(dòng)生化分析儀的血清總膽固醇檢測(cè)試劑盒，由R單試劑組成，R試劑的 組分為： 假單胞菌 2 800U/L 奴卡菌CH0D > 400U/L 辣根 POD > 1000U/L 膽酸鈉 3mmol/L 4-氨基安替比林 0.5mmol/L 酸 3.5mmol/L 聚氧乙烯辛基乙基醚 3ml/L 牛血清白蛋白 3g/L 4-氨基-2，2，6，6-四甲基哌啶-1-氧自由基 4mmol/L 磷酸鹽緩沖液PH7.7 0.4mol/L 2. 試劑R在使用時(shí)的用量為R= 300yL。
[0009]本發(fā)明的有益效果是： 1.本發(fā)明選擇酶法設(shè)計(jì)試劑配方用于檢測(cè)血清總膽固醇，該試劑適用于多種全自動(dòng)生 化分析儀。
[0010] 2.本發(fā)明采用了 4-氨基_2,2,6,6_四甲基哌啶-1-氧自由基去除血清總膽固醇檢 測(cè)中抗壞血酸的干擾。
【附圖說(shuō)明】 [0011] 圖1為兩種試劑的相關(guān)性曲線圖； 圖2為本發(fā)明試劑開瓶穩(wěn)定性。
【具體實(shí)施方式】
[0012]下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步說(shuō)明： 實(shí)施例1 R:假單胞菌 2 800U/L 奴卡菌CHOD > 400U/L 辣根 POD > 1000U/L 膽酸鈉 3mmol/L 4-氨基安替比林 0.5mmol/L 酸 3.5mmol/L 聚氧乙烯辛基乙基醚 3ml/L 牛血清白蛋白 3g/L 4-氨基-2，2，6，6-四甲基哌啶-1-氧自由基 4mmol/L 磷酸鹽緩沖液PH7.7 0.4mol/L 本實(shí)施例試劑的使用方法： 本實(shí)施例描述的血清總膽固醇檢測(cè)試劑，在使用時(shí)采用全自動(dòng)生化分析儀，如日立 7180全自動(dòng)分析儀等，利用一點(diǎn)終點(diǎn)法進(jìn)行測(cè)定。將樣本和試劑R的比例設(shè)定為3:300,在樣 品盤的對(duì)應(yīng)位置放置好蒸餾水、標(biāo)準(zhǔn)品和樣本，操作如表1: 表1實(shí)施例1試劑檢測(cè)方法
血清總膽固醇的含量(mg/dL)=(測(cè)定+標(biāo)準(zhǔn)）X C標(biāo)準(zhǔn)。
[0013] 實(shí)施例2 干擾性試驗(yàn):取新鮮混合血清，分成2等份，然后將每等份再分成5等份，加入不同的干 擾物質(zhì)，使其在血清中的濃度達(dá)到表2的要求。然后分別用實(shí)施例1所得試劑，與市場(chǎng)常見并 認(rèn)可的血清總膽固醇試劑同時(shí)對(duì)比測(cè)定血清總膽固醇的含量，對(duì)照組測(cè)定結(jié)果與加入不同 干擾物質(zhì)后各組的測(cè)定結(jié)果見表2。相對(duì)偏差(％) =(干擾樣本的測(cè)定均值一對(duì)照樣本的測(cè)定 均值)/對(duì)照樣本的測(cè)定均值X 100%。
[0014] 表2實(shí)施例試劑抗干擾性能比較
由表2可以看出，實(shí)施例1試劑在抗壞血酸< 20mmol/L、膽紅素< 100mg/L、血紅蛋白< 200mg/L、甘油三酯<22.6mmol/L對(duì)測(cè)試結(jié)果沒有明顯干擾。與對(duì)照試劑檢測(cè)結(jié)果一致，說(shuō) 明實(shí)施例1的試劑在準(zhǔn)確度和抗干擾能力上達(dá)標(biāo)。
[0015] 實(shí)施例3 相關(guān)性實(shí)驗(yàn):利用實(shí)施例1配方配制試劑，與市場(chǎng)常見的國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局認(rèn)可 的某公司的血清總膽固醇試劑盒進(jìn)行對(duì)照檢測(cè)，同時(shí)檢測(cè)了 20個(gè)臨床血清樣本，檢測(cè)結(jié)果 如表3所示。并獲得了兩種試劑的相關(guān)性曲線(如圖1所示），通過檢測(cè)結(jié)果顯示，兩個(gè)試劑盒 的相關(guān)系數(shù)為〇. 999，說(shuō)明了兩者有極大的相關(guān)性。
[0016]表3實(shí)施例1試劑與市場(chǎng)常見并得到認(rèn)可的血清總膽固醇測(cè)定試劑盒對(duì)比檢測(cè)結(jié) 果
試驗(yàn)所用校準(zhǔn)品和質(zhì)控品分別為： 校準(zhǔn)品:RAND0X938血清總膽固醇的含量為4.10 mmol/L。
[0017 ] 質(zhì)控品：RAND OX 10 0 5血清總膽固醇的靶值為4 · 0 7mmo 1 / L，靶值范圍：3 · 5 4~ 4.60mmol/L〇
[0018] 實(shí)施例4 試劑穩(wěn)定性驗(yàn)證試驗(yàn)的具體操作方法： 將本發(fā)明實(shí)施例卜3中所得檢測(cè)試劑作為試驗(yàn)組，取一種市售血清總膽固醇檢測(cè)試劑 盒作為對(duì)照組，試驗(yàn)組與對(duì)照組試劑每組各自取相同的兩份，一份做15天開瓶穩(wěn)定性試驗(yàn)， 將試劑開瓶放置在儀器的2_8°C冷藏箱中（15天不取出），作為15天開瓶穩(wěn)定性檢測(cè)；另一份 做37°C熱穩(wěn)定性檢測(cè)試驗(yàn)，封閉放置在37°C恒溫水浴鍋中（每天僅在檢測(cè)的時(shí)候取出，檢測(cè) 完畢后，依然封口放回37°C水浴鍋中，連續(xù)7天），作為7天37°C熱穩(wěn)定性驗(yàn)證。將試劑同時(shí)在 日立7180全自動(dòng)生化分析儀器上，按照如下表1方法進(jìn)行檢測(cè)，并在儀器上建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。 取凍干粉質(zhì)控品，溶解均勻后，平均分成15份，_20°C儲(chǔ)存，每天質(zhì)控一個(gè)，并且跟蹤檢測(cè)結(jié) 果，其開瓶跟蹤監(jiān)測(cè)趨勢(shì)如圖2。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種適合全自動(dòng)生化分析儀的血清總膽固醇檢測(cè)試劑盒，由R單試劑組成，其特征在 于，R試劑組分為： 假單胞菌 2 800U/L 奴卡菌CHOD > 400U/L 辣根 POD > 1000U/L 膽酸鈉 3mmol/L 4-氨基安替比林 0.5mmol/L 酸 3.5mmol/L 聚氧乙烯辛基乙基醚 3ml/L 牛血清白蛋白 3g/L 4-氨基-2，2，6，6-四甲基哌啶-1-氧自由基 4mmol/L 磷酸鹽緩沖液PH7.7 0.4mol/L〇2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于:所述試劑R在使用時(shí)的用量為300yL。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于:本發(fā)明選擇酶法設(shè)計(jì)試劑配方用于檢測(cè) 血清總膽固醇，該試劑適用于多種全自動(dòng)生化分析儀。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于:本發(fā)明采用了4-氨基_2,2,6,6_四甲基 哌啶-1-氧自由基去除血清總膽固醇檢測(cè)中抗壞血酸的干擾。
【專利摘要】本發(fā)明涉及血清總膽固醇酶法檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種血清總膽固醇檢測(cè)試劑，試劑R中含有假單胞菌、奴卡菌CHOD、辣根POD、膽酸鈉、4-氨基安替比林、酚、聚氧乙烯辛基乙基醚、牛血清白蛋白、4-氨基-2，2，6，6-四甲基哌啶-1-氧自由基和磷酸鹽緩沖液，該試劑適合與各種全自動(dòng)生化分析儀配套使用。
【IPC分類】G01N35/00
【公開號(hào)】CN105572403
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510915960
【發(fā)明人】甘宜梧, 李家朋, 譚柏清
【申請(qǐng)人】濟(jì)南觀韜醫(yī)療器械有限公司
【公開日】2016年5月11日
【申請(qǐng)日】2015年12月11日