利用氧化石墨烯-羅丹明-尿酸酶混合溶液檢測(cè)尿酸的方法及該檢測(cè)體系的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及化學(xué)物質(zhì)定量檢測(cè)領(lǐng)域，具體涉及測(cè)量尿酸含量的方法，特別涉及利用氧化石墨烯-羅丹明-尿酸酶混合溶液檢測(cè)尿酸的方法及該檢測(cè)體系。
【背景技術(shù)】
[0002]目前已報(bào)道的尿酸檢測(cè)方法主要分成兩大類，即色譜分析方法和化學(xué)分析方法。色譜法選擇性高，可靠性好，但不適合常規(guī)檢測(cè)，尤其不適合定期隨時(shí)檢測(cè)?；瘜W(xué)分析方法又分兩種，一是利用尿酸的還原性反應(yīng)進(jìn)行檢測(cè)，其選擇性低而很少使用；另一種是利用尿酸酶高專一性反應(yīng)進(jìn)行檢測(cè)，其選擇性顯著優(yōu)于利用尿酸還原反應(yīng)的方法，尿酸在尿酸酶作用下生成尿囊素、H202和C02。酶法分因此分為直接法和間接法，直接法是直接跟蹤尿酸酶作用下尿酸紫外吸收下降的測(cè)定方法，間接法是測(cè)定尿酸氧化產(chǎn)物h202的含量。
[0003]然而，普通尿酸檢測(cè)方法存在靈敏度較低，測(cè)量過(guò)程復(fù)雜的缺陷，有必要進(jìn)行改性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]有鑒于此，本發(fā)明提供了利用氧化石墨烯-羅丹明-尿酸酶混合溶液檢測(cè)尿酸的方法及該檢測(cè)體系。
[0005]利用氧化石墨烯-羅丹明-尿酸酶混合溶液檢測(cè)尿酸的方法。
[0006]優(yōu)選的，以氧化石墨烯-羅丹明-尿酸酶混合溶液為基液，利用熒光猝滅原理檢測(cè)法檢測(cè)尿酸含量。
[0007]優(yōu)選的，氧化石墨烯、羅丹明、尿酸酶的質(zhì)量比為18?22:0.9?1.1:1.4?1.6。
[0008]優(yōu)選的，將待測(cè)試樣加入氧化石墨烯-羅丹明-尿酸酶混合溶液并放置10分鐘以上，然后利用熒光猝滅原理檢測(cè)法檢測(cè)尿酸含量。
[0009]優(yōu)選的，激發(fā)波長(zhǎng)為480-500nmo
[0010]本發(fā)明還提供尿酸檢測(cè)體系，該體系為含有氧化石墨烯、羅丹明和尿酸酶的混合溶液。
[0011]進(jìn)一步，所述混合溶液中氧化石墨稀、羅丹明、尿酸酶的質(zhì)量比為18?22:0.9?
1.1:1.4 ?1.6。
[0012]特別的，所述混合溶液中氧化石墨烯、羅丹明、尿酸酶的濃度分別為18_22mg/L、
0.9-1.lmg/L、1.4-1.6mg/L0
[0013]本發(fā)明的有益效果在于:
[0014]本發(fā)明檢測(cè)靈敏度高，大幅提高了檢測(cè)的可靠度，另外本發(fā)明檢測(cè)體系較為便宜，有助于降低檢測(cè)成本。氧化石墨烯對(duì)羅丹明123有熒光猝滅作用，在一定范圍內(nèi)，氧化石墨烯濃度增加，羅丹明123的熒光猝滅強(qiáng)度線性下降，但隨著氧化石墨烯濃度增加，猝滅強(qiáng)度趨于不變。分別測(cè)定T = 283、298、310K下，測(cè)定Stern-Volmer曲線。每個(gè)溫度下Stern-Volmer曲線是一條直線，說(shuō)明氧化石墨稀與羅丹明123形成復(fù)合物，其粹滅機(jī)制屬于靜態(tài)猝滅，即氧化石墨烯與羅丹明123形成新的復(fù)合物而導(dǎo)致羅丹明123的熒光猝滅。
【附圖說(shuō)明】
[0015]為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點(diǎn)更加清楚，下面將結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)描述，其中:
[0016]圖1為實(shí)施例1不同濃度尿酸500?600nm波長(zhǎng)下的焚光強(qiáng)度；
[0017]圖2為實(shí)施例1不同濃度尿酸最大發(fā)射的熒光強(qiáng)度；
[0018]圖3為實(shí)施例2光吸收隨時(shí)間變化圖；
[0019]圖4為實(shí)施例3最大發(fā)射峰熒光強(qiáng)度強(qiáng)度隨時(shí)間變化圖。
【具體實(shí)施方式】
[0020]以下將參照附圖，對(duì)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例進(jìn)行詳細(xì)的描述。
[0021]實(shí)施例1:
[0022]本實(shí)施例的尿酸檢測(cè)體系含為含有氧化石墨烯、羅丹明123和尿酸酶的混合溶液，其中氧化石墨烯終濃度為20mg/L，羅丹明123終濃度為3nM，尿酸酶終濃度為1.5mg/L。
[0023]本實(shí)施例檢測(cè)尿酸的方法，首先將尿酸加入混合溶液中(尿酸的中濃度分別為
0.07mM，0.10mM, 0.15mM，0.20mM, 0.24mM)，然后在 500nm 激發(fā)，掃描 500 ?600nm 波長(zhǎng)下的體系的焚光強(qiáng)度。結(jié)果如圖1所不，由圖1可見(jiàn)，最大發(fā)射峰為520nm。以尿酸濃度為橫軸，最大發(fā)射峰520nm波長(zhǎng)下的熒光強(qiáng)度為縱軸得圖2，由圖2可知，隨著體系中尿酸濃度增加，體系的熒光強(qiáng)度線性降低。
[0024]實(shí)施例2:
[0025]本實(shí)施例的尿酸檢測(cè)體系中氧化石墨烯終濃度為20mg/L，羅丹明123終濃度為3nM，尿酸酶終濃度為1.5mg/L0
[0026]檢測(cè)時(shí)，首先向檢測(cè)體系加入尿酸(終濃度為1.5mg/L)，然后在293nm激發(fā)，每間隔2.0min測(cè)定一次光吸收變化得圖3，由圖3可知2?12min內(nèi)的吸光度與時(shí)間為線性相關(guān)。據(jù)此據(jù)算酶活性(每分鐘消耗11111/^]\1尿酸的酶量為1單位)為0.21單位，在15min后，尿酸基本被尿酸酶氧化，因此在熒光體系中加入尿酸后，放置15min后檢測(cè)。采用初速度法測(cè)定酶活性，在25°C用0.075mmol/L尿酸在pH 9.2硼酸鹽緩沖液中在全自動(dòng)酶標(biāo)儀上測(cè)定293nm光吸收變化的初速度表示尿酸酶活性，按其摩爾消光系數(shù)11.5 (mmol/L) 1.cm 1校正尿酸儲(chǔ)備液的濃度尿酸溶液每天配制，使用前在(25±0.5)°C下預(yù)熱20min。尿酸酶反應(yīng)體系共150 μ L，含尿酸溶液50 μ L，加入用50.0mmol/L的硼酸緩沖液(pH 9.2)稀釋的裂解液100 μ L啟動(dòng)反應(yīng)，間隔2.0或5.0min測(cè)定293nm光吸收變化，每份樣品測(cè)定3次。用各突變體酶活性與其總蛋白濃度之比表示比活性。每分鐘消耗1微摩爾尿酸的酶量為1單位。
[0027]實(shí)施例3
[0028]本實(shí)施例的尿酸檢測(cè)體系中氧化石墨烯終濃度為20mg/L，羅丹明123終濃度為3nM，尿酸酶終濃度為1.5mg/L0
[0029]檢測(cè)時(shí)，首先向檢測(cè)體系加入尿酸(終濃度為1.5mg/L)，然后在500nm激發(fā)，掃描500?600nm波長(zhǎng)下的體系的焚光強(qiáng)度，以體系在520nm的焚光強(qiáng)度為縱軸，反應(yīng)時(shí)間為橫軸得圖4，由圖4可知，結(jié)果表明隨著時(shí)間增加，該波長(zhǎng)下的熒光強(qiáng)度逐漸增強(qiáng)，但在15min后，該波長(zhǎng)下的熒光強(qiáng)度變化較小。因此，在氧化石墨烯-羅丹明-尿酸酶檢測(cè)體系中，加入尿酸，放置15min后檢測(cè)。
[0030]由此可見(jiàn)，本發(fā)明檢測(cè)靈敏度高，大幅提高了檢測(cè)的可靠度。
[0031]最后說(shuō)明的是，以上實(shí)施例僅用以說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)方案而非限制，盡管通過(guò)參照本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例已經(jīng)對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了描述，但本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以在形式上和細(xì)節(jié)上對(duì)其作出各種各樣的改變，而不偏離所附權(quán)利要求書(shū)所限定的本發(fā)明的精神和范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.利用氧化石墨烯-羅丹明-尿酸酶混合溶液檢測(cè)尿酸的方法。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述利用氧化石墨烯-羅丹明-尿酸酶混合溶液檢測(cè)尿酸的方法，其特征在于:以氧化石墨烯-羅丹明-尿酸酶混合溶液為基液，利用熒光猝滅原理檢測(cè)法檢測(cè)尿酸含量。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述利用氧化石墨烯-羅丹明-尿酸酶混合溶液檢測(cè)尿酸的方法，其特征在于:氧化石墨稀、羅丹明、尿酸酶的質(zhì)量比為18?22:0.9?1.1:1.4?1.6。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述利用氧化石墨烯-羅丹明-尿酸酶混合溶液檢測(cè)尿酸的方法，其特征在于:將待測(cè)試樣加入氧化石墨烯-羅丹明-尿酸酶混合溶液并放置10分鐘以上，然后利用熒光猝滅原理檢測(cè)法檢測(cè)尿酸含量。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述利用氧化石墨烯-羅丹明-尿酸酶混合溶液檢測(cè)尿酸的方法，其特征在于:激發(fā)波長(zhǎng)為480-500nm。6.氧化石墨烯-羅丹明-尿酸酶尿酸檢測(cè)體系。7.根據(jù)權(quán)利要求6所述氧化石墨烯-羅丹明-尿酸酶尿酸檢測(cè)體系，其特征在于:氧化石墨烯、羅丹明、尿酸酶的質(zhì)量比為18?22:0.9?1.1:1.4?1.6。8.根據(jù)權(quán)利要求6所述氧化石墨烯-羅丹明-尿酸酶尿酸檢測(cè)體系，其特征在于:所述混合溶液中氧化石墨稀、羅丹明、尿酸酶的濃度分別為18-22mg/L、0.9-1.lmg/L、1.4-1.6mg/L。
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了利用氧化石墨烯-羅丹明-尿酸酶混合溶液檢測(cè)尿酸的方法，該方法以氧化石墨烯-羅丹明-尿酸酶混合溶液為基液，利用熒光猝滅原理檢測(cè)法檢測(cè)尿酸含量，其中氧化石墨烯、羅丹明、尿酸酶的質(zhì)量比為20:1:1.5。本發(fā)明檢測(cè)靈敏度高，大幅提高了檢測(cè)的可靠度。
【IPC分類】G01N21/64
【公開(kāi)號(hào)】CN105424659
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510729411
【發(fā)明人】廖娟, 劉北忠
【申請(qǐng)人】重慶醫(yī)科大學(xué)附屬永川醫(yī)院
【公開(kāi)日】2016年3月23日
【申請(qǐng)日】2015年10月30日