利用紫外分光光度法測定草豆蔻主要活性成分含量的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及測定草豆蔻主要活性成分含量的方法，屬于分析化學(xué)領(lǐng)域，特別涉及 紫外光譜法測定草豆蔻主要活性成分含量的相關(guān)技術(shù)。
【背景技術(shù)】
[0002] 草豆寇為姜科（Zingiberaceae)山姜屬植物草豆蔻（Alpiniakatsumadai Hayata)的干燥種子團，為較常用中藥，主產(chǎn)于廣東、廣西和云南等地，具有燥濕，健脾， 溫胃止嘔的功能，主治寒濕內(nèi)阻，骯腹脹滿冷痛，暖氣嘔逆，不思飲食等病癥。草豆蔻是 傣藥品種之一，根莖可治因風(fēng)濕引起的各種酸痛。草豆蔻的提取物具有明顯的抗氧化性作 用。
[0003] 草豆蔻的成分主要含揮發(fā)油與黃酮類成分，山姜素和小豆蔻明是其 的有效成分。山姜素，分子式：C16H1404?；瘜W(xué)名稱：7-羥基-5甲氧基二氫黃酮 (7-hydroxy-5_methoxy-flavanone)，小豆蔻明，分子式：C16H1404?；瘜W(xué)名稱：2'，4' -二輕 基-6' -甲氧基查耳酮（2'，4' -dihydroxy-6'methoxy-chalcone)。而目前常米用于測定 草豆蔻主要成分山姜素和小豆蔻明含量的技術(shù)方法為：高效液相色譜，薄層色譜法和膠束 電動毛細(xì)管色譜法。這幾種方法中，高效液相色譜法操作條件不易控制且較繁瑣，時間過 長。薄層色譜法樣品用量較大，分離手續(xù)麻煩，分離時間較長，并可能有雜質(zhì)干擾。而膠束 電動毛細(xì)管色譜法容易產(chǎn)生氣泡，柱子易斷，檢測靈敏度低，填料種類有限等。為了解決這 些問題，就必須改善現(xiàn)有的技術(shù)，使其具備操作簡單，準(zhǔn)確快速可行的方法。并且在將草豆 蔻制成現(xiàn)代化中藥制劑的生產(chǎn)過程中，快速準(zhǔn)確的測定其濃度是非常重要的一個步驟，所 以本發(fā)明提供的方法就可以快速的完成這個檢測任務(wù)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于針對以上現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種方法簡單、準(zhǔn)確性高，易操 作的紫外光譜法測定草豆蔻主要活性成分山姜素和小豆蔻明的含量測定的方法。
[0005] 本發(fā)明的技術(shù)方案是： 一種利用紫外分光光度法測定草豆蔻主要活性成分含量的方法，包括標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液的 制備，標(biāo)準(zhǔn)曲線線性回歸方程的獲得，待測樣品的制備，紫外檢測及濃度的計算，所述的待 測樣品的制備，紫外檢測及濃度的計算包括如下步驟： a. 待測樣品的制備：將草豆蔻樣品烘干，分別用粉碎機粉碎后過目篩，精確稱取草豆 蔻粉末5g，置于試劑瓶中加95%乙醇定容100mL，超聲溶解，再放置過夜，過濾，取續(xù)濾液過 微孔濾膜，最后的濾液分裝備用； b. 待測樣品的紫外檢測：采用紫外分光光度法測定草豆蔻溶于95%乙醇的樣品提取 液在286nm和346nm處的吸光度； c. 待測樣品濃度的計算：將"b"步驟測得的草豆蔻樣品溶液分別在286nm和346nm處 的吸光度平均值作為山姜素和小豆蔻明含量的測定值，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線線性回歸方程，計算 出待測樣品中山姜素和小豆蔻明的含量。
[0006] 待測樣品溶液用紫外分光光度計測定樣品在286nm和346nm處的吸光度，取平均 值代入山姜素和小豆蔻明的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程求出回歸值，即為樣品溶液山姜素和小豆蔻明的 濃度C，草豆蔻樣品中山姜素和小豆蔻明的含量為（CXV/W)X100%，其中V是草豆蔻粉 末加入95%乙醇定容的體積，W是待測草豆蔻樣品的干重。
[0007] 本發(fā)明方法中所訴的超聲波作為輔助工具超聲溶解即為將定容好的待測樣品放 置于超聲波儀中，超聲消解30~50min。
[0008] 本發(fā)明所述的標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液的制備包括以下步驟：用95%乙醇分別配制1. 0X10 3 mol噸1的山姜素和小豆蔻明標(biāo)準(zhǔn)溶液，再用95%乙醇分別稀釋成多個不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣品 溶液，即山姜素與小豆蔻明的線性范圍分別為1. 61~10. 8lPg.mL1和0. 82~8.llPg.mL、 配制呈濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液。
[0009] 所述的標(biāo)準(zhǔn)曲線線性回歸方程的獲得是將線性范圍內(nèi)的以95%乙醇作溶劑的山 姜素與小豆蔻明的濃度范圍分別為1.61~10.SlPg.mL1和0. 82~8.llPg.mL1。配制的 多個不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液分別采用紫外分光光度法進(jìn)行檢測，檢測波長為山姜素是 286nm，小豆蔻明是346nm，將所得的吸光度值及對應(yīng)的濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并根據(jù)郎伯-比 爾定律A=kcb計算獲得標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程 A:吸光度K:摩爾吸收系數(shù) C:待測物質(zhì)的濃度，單位可為g/L，mol/L B:吸收介質(zhì)的厚度，一般以cm為單位。
[0010] 本發(fā)明所述的待測物為姜科植物草豆蔻，所測的部位可以是莖，葉，根，果實皮和 種子等。所述的待測物優(yōu)選海南白沙草豆蔻和霸王嶺草豆蔻近成熟的干燥種子團，測定其 中的山姜素和小豆蔻明含量。并且根據(jù)紫外光譜的"吸收最大，干擾最小"測定原則，而山 姜素和小豆蔻明的最大紫外吸收波長相差達(dá)60nm，故可同時測定草豆蔻中山姜素和小豆蔻 明成分的含量。
[0011] 山姜素和小豆蔻明屬于黃酮類，具有以下結(jié)構(gòu)式：
山姜素 小豆蔻明。
[0012] 本發(fā)明采用紫外分光光度法建立了一種操作簡單的測定植物中主要成分含量的 方法。該方法不需要用到復(fù)雜的儀器設(shè)備、昂貴和有毒的藥品，只需要常規(guī)的紫外分光光度 計和常規(guī)藥品即可完成。
[0013] 具體地，樣品溶液的溶劑是水、乙醇、甲醇、異丙醇、正丁醇中的至少一種。
[0014] 優(yōu)選地，所述待測樣品和標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液的溶劑是乙醇。
[0015] 優(yōu)選地，所述樣品烘干溫度為50 ~70°C。
[0016] 優(yōu)選地，所述樣品烘干時間為4 ~6h。
[0017] 優(yōu)選地，所述過目篩粒度為40 ~60目。
[0018] 優(yōu)選地，所述樣品超聲溶解時間為30 ~50min。
[0019] 優(yōu)選地，所述微孔濾膜直徑為0· 25~0· 45μm。
[0020] 優(yōu)選地，所述待測樣品溶液原始濃度為5X10 2g/mL，紫外檢測時稀釋按與溶劑比 為 10μL:3mL。
[0021] 優(yōu)選地，所述標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為1· 0X10 3mol/L。
[0022] 優(yōu)選地，所述山姜素標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度梯度為0. 20X10 5mol/L~10. 0X10 5mol/L。
[0023] 優(yōu)選地，所述小豆蔻明標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度梯度為0. 10X10 5mol/L~8. 0X10 5mol/L。
[0024] 優(yōu)選地，所述測定待測物吸光度時紫外波長為286±lnm和346±lnm〇
[0025] 本發(fā)明提供的草豆蔻主要活性成分山姜素和小豆蔻明的含量測定方法的回收率 高，結(jié)果準(zhǔn)確。實驗結(jié)果表明回收率的范圍在84. 28~117.41%。另外，本發(fā)明提供的方法 具有良好的精密度、穩(wěn)定性和重復(fù)性。
[0026] 精密度：準(zhǔn)確移取樣品溶液60μL，按紫外條件重復(fù)測定3次，得到相對標(biāo)準(zhǔn)偏差 RSD值分別為0. 42%、0. 29%，表明儀器的精密度良好。
[0027] 穩(wěn)定性：取同一樣品溶液10μL，按紫外條件在24h內(nèi)測定。白沙草豆蔻以95%乙 醇為溶劑的山姜素與小豆蔻明吸光度的RSD分別為0. 21%，0. 59%。霸王嶺草豆蔻以95%乙 醇為溶劑的山姜素和小豆蔻明吸光度的RSD分別為0. 11%，0. 25%。結(jié)果表明樣品溶液在24h 內(nèi)穩(wěn)定。
[0028] 重現(xiàn)性：白沙草豆蔻以95%乙醇為溶劑的山姜素與小豆蔻明吸光度的RSD分別為 1. 91%，1. 75%。霸王嶺草豆蔻以95%乙醇為溶劑的山姜素和小豆蔻明吸光度的RSD分別為 2. 46%，4. 70%。表明重現(xiàn)性好。
[0029]
【附圖說明】： 圖1為本發(fā)明實施例1山姜素標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度與吸光度的線性關(guān)系圖； 圖2為本發(fā)明實施例2小豆蔻明標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度與吸光度的線性關(guān)系圖； 圖3為本發(fā)明實施例3標(biāo)準(zhǔn)溶液與不同草豆蔻樣品紫外光譜圖；
【具體實施方式】
[0030] 以下通過具體實例進(jìn)一步說明本發(fā)明。但實施例的具體細(xì)節(jié)僅用于解釋本發(fā)明， 不應(yīng)理解為對本發(fā)明總的技術(shù)方案的限定。其中需要特別說明的是草豆蔻分別購于海南白 沙和霸王嶺。
[0031] 為了便于對草豆蔻主要活性成分山姜素和小豆蔻明含量的測定，本發(fā)明優(yōu)選對得 到的草豆蔻樣品進(jìn)行前處理，具體包括以下步驟： 將草豆蔻樣品進(jìn)行烘干、粉碎，得到草豆蔻樣品粉末。所述的烘干溫度優(yōu)選為50~ 70°C，更優(yōu)選為60~65°C，所述的烘干時間優(yōu)選為4~6h，更優(yōu)選為4. 5~5h，所述的過目 篩粒度優(yōu)選為40~60目，更優(yōu)選為50~60目。
[0032] 得到草豆蔻粉末配制成待測樣品溶液，具體包括以下步驟： 將精確稱取5g草豆蔻粉末置于試劑瓶中定容100mL，超聲溶解，微孔過濾，分裝備用。 所述的超聲溶解時間優(yōu)選為30~50min，更優(yōu)選為35~40min，所述的微孔過濾膜優(yōu)選為 0. 25 ~0. 45μmD
[0033] 得到所述草豆蔻待測溶液，按待測樣品與溶劑比為10μL: 3mL進(jìn)行稀釋，檢測待 測樣品，本發(fā)明優(yōu)選采用紫外分光光度法檢測所述待測樣