一種荔枝核滴丸質(zhì)量檢測(cè)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于藥物質(zhì)量控制領(lǐng)域，具體涉及一種荔枝核滴丸質(zhì)量檢測(cè)方法，特別是一種測(cè)定荔枝核滴丸中原花青素含量的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]原花青素是植物中廣泛存在的一大類多酚化合物的總稱，主要由不同數(shù)量的兒茶素和表兒茶素的單體、二聚體、三聚體到十聚體組合而成，擁有較強(qiáng)的氧化和清除自由基的能力及改善人體微循環(huán)的功效。現(xiàn)代藥理研究表明，原花青素還具有消炎、抗腫瘤、抗輻射、抗衰老、改善免疫力、改善骨的形成、抗糖尿病、降血脂、降血壓、促進(jìn)傷口愈合和組織修復(fù)活性及抗癌作用(凌志群等，原花青素的藥理學(xué)研究進(jìn)展《中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)》，2002年，18卷，第I期:9-12)。初步發(fā)現(xiàn)荔枝核中也含大量的原花青素(丁麗等，荔枝核化學(xué)成分的研究，《天然產(chǎn)物研究與開發(fā)》，2006年，18卷，第6期:45-47)。
[0003]中國(guó)專利申請(qǐng)CN102836265公開了一種制備荔枝核滴丸制備工藝，工藝為:將荔枝核藥材粉碎,加入8?10倍藥材量的70v/v%乙醇進(jìn)行超聲提取2次，每次I小時(shí)；合并2次的提取液減壓回收乙醇至無醇味后用蒸餾水稀釋以生藥量計(jì)濃度為0.4g/ml，靜置過夜；過濾，濾液通過AB-8大孔樹脂吸附，先用水洗脫，繼用75v/v%Z醇洗脫，收集乙醇洗脫液；回收乙醇，繼續(xù)濃縮至稠膏后真空低溫干燥，即得荔枝核提取物；按1:4量分別稱取荔枝核提取物和基質(zhì)(聚乙二醇4000和聚乙二醇6000配比為1:2混合物)；將所述基質(zhì)加熱至熔融，邊攪拌邊加入荔枝核提取物，混勻，將所得混合液加入滴丸機(jī)貯液罐，保溫75°C，通過滴頭勻速滴入裝有冷卻劑的收集器中，所述冷卻劑的保溫溫度為5°C，滴制完后，取出藥丸，篩選出合格的藥丸，除去表面冷卻劑，真空室溫干燥過夜，即得荔枝核滴丸。為保證藥物的安全、有效、穩(wěn)定，有必要對(duì)滴丸中原花青素含量進(jìn)行監(jiān)控。
[0004]目前，現(xiàn)有文獻(xiàn)對(duì)荔枝核原花青素成分的含量測(cè)定普遍是采用“鐵鹽催化比色法”，原理是利用酚羥基特點(diǎn)，與鐵離子螯合產(chǎn)生顏色而進(jìn)行，因?yàn)檩^多的中藥成分均具有該種酚羥基，因此這種方法專屬性較差。因此，建立一種能準(zhǔn)確檢測(cè)荔枝核滴丸原花青素含量的質(zhì)量檢測(cè)方法具有現(xiàn)實(shí)的意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明的目的在于提供一種專屬性好、有效、穩(wěn)定、能夠迅速、靈敏地測(cè)定荔枝核滴丸中原花青素含量的方法，從而有效檢測(cè)荔枝核滴丸的質(zhì)量。
[0006]因此，本發(fā)明提供了一種荔枝核滴丸質(zhì)量檢測(cè)方法，包括以下步驟:
[0007]I)取原花青素對(duì)照品，加入甲醇溶解、定容、搖勻，制成每毫升含原花青素1.15mg的對(duì)照品溶液；
[0008]2)取荔枝核滴丸，研碎，精密稱定0.5g，加入40mL體積濃度為70%的丙酮進(jìn)行超聲提取30min，濾過，殘?jiān)皿w積濃度為70%的丙酮洗滌，合并濾液進(jìn)行水浴加熱揮干丙酮，殘?jiān)眉状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至25mL量瓶中，并以甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.2 μ m微孔濾膜濾過,將續(xù)濾液作為供試品溶液；
[0009]3)精密吸取步驟I)的對(duì)照品溶液0.5、1、3、5、10、20μ L進(jìn)樣，測(cè)定峰面積；得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程=A = 1012.25C-567.89，R2 = 0.9986 ;精密吸取步驟2)的供試品溶液10 μ L，進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，代入上述標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算得到荔枝核滴丸中的原花青素含量。
[0010]根據(jù)本發(fā)明的方法，優(yōu)選地，所使用的色譜柱為CAPCELL PAK C18UG120S3，規(guī)格為
4.6_X 10mm, 5 μ m ;流動(dòng)相為乙腈-0.1 % 磷酸(10:90),流速為 1.0mL/min,柱溫為 30 °C ；檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm，理論塔板數(shù)按原花青素計(jì)算至少為2000。
[0011]與現(xiàn)有技術(shù)中的傳統(tǒng)檢測(cè)方法相比，本發(fā)明提供了一種新的荔枝核滴丸質(zhì)量檢測(cè)方法，該方法基于高效液相色譜，步驟設(shè)計(jì)合理，通過適當(dāng)?shù)念A(yù)處理，能夠有效去除荔枝核滴丸中的雜質(zhì)，使樣品中的原花青素提取得更完全，同時(shí)采用了全新的固定相和流動(dòng)相，結(jié)合合理的流速、柱溫、波長(zhǎng)，使得整個(gè)方法的專屬性更好、更有效、更穩(wěn)定、能夠更迅速、靈敏地測(cè)定荔枝核滴丸中的原花青素含量，從而有效地檢測(cè)荔枝核滴丸的質(zhì)量，保證用藥安全。
【具體實(shí)施方式】
[0012]下面根據(jù)具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的方法作進(jìn)一步的詳述，但本發(fā)明并不限于以下實(shí)施例。值得注意的是，本發(fā)明方法中的荔枝核滴丸按照中國(guó)發(fā)明專利申請(qǐng)CN102836265記載的方法制得；原花青素對(duì)照品等材料可經(jīng)由商業(yè)渠道獲得(例如本實(shí)施例來自上海同田生物技術(shù)股份有限公司)，所用到的乙腈、磷酸和甲醇等均為色譜純。
[0013]實(shí)施例1
[0014]本發(fā)明的方法所采用的色譜柱為CAPCELL PAK C18UG120S3,規(guī)格為:4.6mmX 10mm, 5 μ m ;流動(dòng)相為乙腈-0.1 %磷酸(體積比為10:90),流速為1.0mL/min,柱溫為30°C ;檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm。理論塔板數(shù)按原花青素計(jì)算至少為2000。其中，0.1%磷酸指的是磷酸的水溶液濃度為0.1% (體積百分比)。
[0015]按照以下步驟對(duì)荔枝核滴丸進(jìn)行質(zhì)量檢測(cè):
[0016]1.精密稱取原花青素對(duì)照品，置于容量瓶，加入甲醇溶解，定容，搖勻，制成每毫升含原花青素1.15mg的對(duì)照品溶液。
[0017]2.取荔枝核滴丸(約20粒)，研碎，精密稱定0.5g，加入40mL體積濃度為70%的丙酮超聲提取30min，濾過，殘?jiān)眠m量體積濃度為70%的丙酮洗滌，合并濾液進(jìn)行水浴加熱揮干丙酮，殘?jiān)眉状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至25mL量瓶中，并以適量甲醇稀釋至刻度，搖勻，以
0.2 μ m微孔濾膜濾過，將續(xù)濾液作為供試品溶液；
[0018]3.分別精密吸取原花青素對(duì)照品溶液0.5、1、3、5、1、2O μ L進(jìn)樣，測(cè)定峰面積。以不同的進(jìn)樣量C的對(duì)數(shù)值和峰面積積分值A(chǔ)的對(duì)數(shù)值進(jìn)行回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程:Α =1012.25C-567.89，R2 = 0.9986。
[0019]精密吸取對(duì)照品溶液10 μ L，注入液相色譜儀中，測(cè)定峰面積，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)得原花青素峰面積RSD為1.69%，表明儀器精密度良好。
[0020]在已知原花青素含量的滴丸供試品溶液中定量加入對(duì)照品溶液，混勻，吸取10 μ L，按以上條件測(cè)定峰面積，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算原花青素對(duì)照品的量，計(jì)算回收率，回收率為99.0%。
[0021]分別在0、1、2、4、8、24小時(shí)精密吸取對(duì)照品溶液10 μ L，注入液相色譜儀中，測(cè)定峰面積，峰面積RSD為2.13%，表明供試品溶液在24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。
[0022]4.精密吸取供試品溶液10 μ L，進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品原花青素含量。經(jīng)計(jì)算，荔枝核滴丸中原花青素含量為0.392g/g。
[0023]對(duì)照例
[0024]采用“鐵鹽催化比色法”對(duì)荔枝核滴丸(按中國(guó)發(fā)明專利申請(qǐng)CN102836265記載的方法制得)中的原花青素含量進(jìn)行檢測(cè)。
[0025]1.制備標(biāo)準(zhǔn)曲線:精密稱取原花青素對(duì)照品10mg，用甲醇溶解并定容，配制成濃度為1.0mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液；再用甲醇稀釋，配制成濃度為0、5、10、20、40、80、160、320 μ g/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列使用液。分別吸取不同濃度標(biāo)準(zhǔn)系列使用液1.0mL于1mL刻度試管中，依次加入6mL正丁醇-鹽酸(V/V = 95:5)及0.2mL硫酸鐵銨鹽酸溶液，搖勻，塞好試管塞，在沸水浴中加熱40min后，立即取出，用40°C水冷卻5min，取出放至室溫后按照《中國(guó)藥典》附錄的紫外一可見光分光光度法在波長(zhǎng)550nm處測(cè)定吸光度A值，以吸光度值A(chǔ)和原花青素濃度作圖，繪制工作曲線，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為:A = 0.0031C+0.0935，R2 = 0.9995。
[0026]2.樣品測(cè)定:取荔枝核滴丸(約20粒)，研碎，精密稱定0.2g，加入適量甲醇，超聲提取30min，濾過，殘?jiān)眉状枷礈?，合并濾液轉(zhuǎn)移至1mL容量瓶，甲醇定容；精密吸取Iml于1ml刻度試管，依次加入6mL正丁醇-鹽酸(V/V = 95:5)及0.2mL硫酸鐵銨鹽酸溶液，搖勻，塞好試管塞，在沸水浴中加熱40min后，立即取出，用40°C水冷卻5min，取出放至室溫后在波長(zhǎng)550nm處測(cè)定吸光度A值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品原花青素含量。結(jié)果顯示用該法所測(cè)定的原花青素含量比實(shí)際值偏高，用“鐵鹽催化比色法”測(cè)得的數(shù)值實(shí)際上包括了其他雜質(zhì)的含量，因此專屬性差，不適合原花青素含量的精確測(cè)定。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種荔枝核滴丸質(zhì)量檢測(cè)方法，包括以下步驟: 1)取原花青素對(duì)照品，加入甲醇溶解、定容、搖勻，制成每毫升含原花青素1.15mg的對(duì)照品溶液； 2)取荔枝核滴丸，研碎，精密稱定0.5g，加入40mL體積濃度為70%的丙酮進(jìn)行超聲提取30min，濾過，殘?jiān)皿w積濃度為70 %的丙酮洗滌，合并濾液進(jìn)行水浴加熱揮干丙酮，殘?jiān)眉状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至25mL量瓶中，并以甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.2 μ m微孔濾膜濾過，將續(xù)濾液作為供試品溶液； 3)精密吸取步驟I)的對(duì)照品溶液0.5、l、3、5、10、20yL進(jìn)樣，測(cè)定峰面積；得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程:A = 1012.25C-567.89，R2 = 0.9986 ;精密吸取步驟2)的供試品溶液10 μ L，進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，代入上述標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算得到荔枝核滴丸中的原花青素含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:所使用的色譜柱為CAPCELLPAKC18UG120S3，規(guī)格為 4.6mmX 100mm, 5 μ m ;流動(dòng)相為乙腈-0.1%磷酸(10:90)，流速為 1.0mL/min，柱溫為30°C ;檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm，理論塔板數(shù)按原花青素計(jì)算至少為2000。
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種荔枝核滴丸質(zhì)量檢測(cè)方法，包括以下步驟：取原花青素對(duì)照品，加入甲醇溶解，制成對(duì)照品溶液；取荔枝核滴丸，研碎，精密稱定0.5g，加入40mL體積濃度為70％的丙酮進(jìn)行超聲提取，濾過，殘?jiān)帽礈?，合并濾液進(jìn)行水浴加熱揮干丙酮，殘?jiān)眉状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至量瓶中，以甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.2μm微孔濾膜濾過，續(xù)濾液作為供試品溶液；精密吸取對(duì)照品溶液進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程；精密吸取供試品溶液進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算得到原花青素含量。本發(fā)明的方法專屬性更好、更有效、更穩(wěn)定、能夠更迅速、靈敏地測(cè)定荔枝核滴丸中的原花青素含量，從而有效地檢測(cè)荔枝核滴丸的質(zhì)量，保證用藥安全。
【IPC分類】G01N30-06, G01N30-02
【公開號(hào)】CN104820026
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201410195930
【發(fā)明人】郭潔文, 鐘世順, 黃志剛
【申請(qǐng)人】廣州市中醫(yī)醫(yī)院
【公開日】2015年8月5日
【申請(qǐng)日】2014年5月9日