用于區(qū)分肝癌和肺癌的生物標記物的制作方法
【技術(shù)領域】
[0001] 本發(fā)明涉及區(qū)分肝癌和肺癌的新生物標記物，所述生物標記物對不同癌癥中病理 學改變較敏感，特別是在疾病或損傷早期階段。
【背景技術(shù)】
[0002] 代謝組學（metabonomics/metabolomics)是繼基因組學、轉(zhuǎn)錄組學、蛋白質(zhì)組學 之后提出的一門新的學科，是系統(tǒng)生物學中的一個重要組成部分。生物機體在受到外界病 源或環(huán)境改變的刺激時，會產(chǎn)生多層次、多器官和多組織的應答反應，這些應答反應最終將 影響到終端代謝水平的變化正是研究這種機體在受到內(nèi)因、外因的刺激時，機體內(nèi)的終端 小分子代謝物（通常指分子量小于1000 Da)的變化規(guī)律的科學，從整體上動態(tài)地闡述生理 或病理狀態(tài)下機體對外界刺激的應答和動態(tài)系統(tǒng)性的變化過程，為全面理解多因素影響下 的癌癥的發(fā)生機制研究將提供一個新的視角。同時，從整體上考察人體的生理狀態(tài)，能得到 更多的疾病相關(guān)信息，有利于癌癥的早期診斷。另外，代謝組學技術(shù)分析的樣本主要是尿液 和血液，其采集過程對人體無傷害或是有極小的傷害，因此代謝組學的方法將有利于癌癥 的大規(guī)模篩查。
[0003] 癌癥是一大類惡性腫瘤的統(tǒng)稱。癌細胞的特點是無限制、無止境地增生，使患者體 內(nèi)的營養(yǎng)物質(zhì)被大量消耗；癌細胞釋放出多種毒素，使人體產(chǎn)生一系列癥狀；癌細胞還可 轉(zhuǎn)移到全身各處生長繁殖，導致人體消瘦、無力、貧血、食欲不振、發(fā)熱以及嚴重的臟器功能 受損等等，繼而破壞組織、器官的結(jié)構(gòu)和功能，引起壞死出血合并感染，患者最終由于器官 功能衰竭而死亡。
[0004] 肺癌是最常見的肺原發(fā)性惡性腫瘤，無論是在全世界還是國內(nèi)上來看，肺癌均占 腫瘤之首，其發(fā)病率和病死率均迅速上升，死于癌病的男性病人中肺癌已居首位。肺癌的發(fā) 病率和死亡率在逐年上升，世界年患病人數(shù)在90萬左右，我國近10年內(nèi)惡性腫瘤發(fā)病率及 死亡率以肺癌增長最為迅速，肺癌已成為我國第一大癌癥。肺癌是復發(fā)轉(zhuǎn)移率高的腫瘤，即 使進行根治性切除，也多因術(shù)后復發(fā)轉(zhuǎn)移而死亡。肺癌的病發(fā)與不良的生活習慣，環(huán)境因 素與大氣污染等密切相關(guān)。肺癌生長速度緩慢，病程較長的早期診斷與治療可以在很大程 度上給患者帶來治愈的機會，肺癌的診斷中腫瘤標記物的檢測就顯得十分重要。
[0005] 據(jù)統(tǒng)計，全世界每年新發(fā)肝癌患者約六十萬，居惡性腫瘤的第五位。原發(fā)性肝癌按 細胞分型可分為肝細胞型肝癌、膽管細胞型肝癌及混合型肝癌。按腫瘤的形態(tài)可分為結(jié)節(jié) 型、巨塊型和彌漫型。原發(fā)性肝癌在我國屬于高發(fā)病，一般男性多于女性。中國是乙肝大國， 我國的肝癌多在乙肝肝硬化的基礎上發(fā)展而來，丙肝病人也在逐漸增加，乙肝后也會發(fā)展 為肝癌。目前我國發(fā)病人數(shù)約占全球的半數(shù)以上，占全球肝癌病人的55%，已經(jīng)成為嚴重威 脅我國人民健康和生命的一大殺手。因其惡性度高、病情進展快，病人早期一般沒有什么不 適，一旦出現(xiàn)癥狀就診，往往已屬中晚期。故治療難度大、療效差，發(fā)病后生存時間短。在我 國，每年有11萬人死于肝癌，其中男性8萬，女性3萬，占全世界肝癌死亡人數(shù)的45%。作 為最常見的一種惡性腫瘤，肝癌死亡率僅居高，全國每年至少有12萬人被肝癌奪去生命。
[0006] 肝癌起病隱匿，超過60%的肝癌患者在初次就診時已經(jīng)進入中晚期，從而失去根 治性治療的機會，總體5年生存率只有7%左右。目前，臨床上常用的肝癌診斷標記物為甲 胎蛋白，簡稱AFP。然而，甲胎蛋白診斷肝癌的敏感度和特異度并不十分理想，在妊娠婦女、 急慢性肝炎、生殖腺腫瘤和胃腸道腫瘤等人群中也可能升高。而且，臨床上有40%的肝癌患 者甲胎蛋白并不升高，呈現(xiàn)陰性。因此，尋找特異性和敏感性均高的診斷肝癌、特別是早期 肝癌的分子標記物，成為臨床研究的重點和難點。
[0007] 目前臨床上以大分子癌癥標記物的單一或聯(lián)合使用作為癌癥診斷手段的研究較 多，而對于小分子類癌癥標記物缺乏系統(tǒng)深入的研究。現(xiàn)代研究表明，內(nèi)源性小分子物質(zhì)多 胺類化合物與癌癥的發(fā)生密切相關(guān)。國內(nèi)外研究均表明癌癥患者體內(nèi)多胺水平高于正常人 群及非腫瘤患者體內(nèi)多胺水平。多胺在生物體內(nèi)多是水溶性的，通常在體液pH環(huán)境下完全 質(zhì)子化，以多陽離子形式存在，常與RNA，DNA等多陰離子復合體結(jié)合在一起，并處于動態(tài)平 衡之中。多胺能直接參與生物體內(nèi)的多種生理活動，如核酸的復制、轉(zhuǎn)錄、翻譯，蛋白質(zhì)的 合成和膜結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定等，它是生物體生長和細胞代謝所必須的內(nèi)源性微量活性物質(zhì)。一般 在RNA，DNA及蛋白質(zhì)合成增高之前，多胺含量急劇上升，如在癌癥組織中多胺水平明顯升 高，而多胺的過度積累還會導致細胞的凋亡及轉(zhuǎn)變，使癌癥進一步惡化。多胺包括1，3-丙 二胺、腐胺、尸胺、精脒、精胺、酰化精脒、?；返?。多胺包括1，3-丙二胺、腐胺、尸胺、精 脒、精胺、?；?、?；返取Ｄ壳把芯课茨茏C實何種多胺為癌癥的生物標記物，也沒有 發(fā)現(xiàn)區(qū)分不同癌癥的特異性生物標記物，這大大影響了多胺作為癌癥輔助診斷、預后和療 效評價指標等方面的應用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本發(fā)明的目的是提供區(qū)分肝癌和肺癌的特異性多胺生物標記物，該標記物為人尿 液中的?；吲cS-腺苷蛋氨酸，確切地說是酰化精脒與S-腺苷蛋氨酸的濃度的比值。
[0009] 本發(fā)明采用UHPLC-MS/MS法分別檢測肺癌患者與肝癌患者血漿樣本中1，3-丙二 胺（DAP)，腐胺（PUT)，尸胺（CAD)，精脒（SH))，精胺（SPM)，胍丁胺（AGM)，鳥氨酸（ORN)， 賴氨酸（LYS)，精氨酸（ARG)，S-腺苷蛋氨酸（SAM)，?；罚∟PUT)，?；罚∟SPM)，酰 化精脒（NSPD)與Y-氨基丁酸（GABA)等14種與多胺合成與分解代謝密切相關(guān)的物質(zhì)。 (詳見 Determination of polyamine metabolome in plasma and urine by ultrahigh performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry method:Application to identify potential markers for human hepatic cancer. Anal Chim Acta. 2013 ； 791:36-45)對于得到的檢測數(shù)據(jù)，首先對所測得的尿