專利名稱：Abo血型系統(tǒng)單克隆抗體分型試劑及其應用液的配制方法
技術(shù)領域：
本發(fā)明涉及一種鑒定人類血型，特別涉及一種代替人血清，鑒定人類血型的單克隆抗體分型試劑及其應用液的配制方法。
自1900年發(fā)現(xiàn)人類的ABO血型以來，對人類血型進行鑒定的試劑主要用人血清配制。這需要對大量的獻血員進行篩選，不僅耗費大量寶貴的人血，篩選工作頗費工時，成本較高，而且由于獻血員的個體差異，難以實現(xiàn)質(zhì)量控制和標準化。不少學者曾先后對魚類、蝸牛、扁豆等動、植物的組織漿液進行研究，但由于種種技術(shù)原因未能付諸于實際應用。
本發(fā)明的目的就是要克服上述缺陷，設計一種新型試劑以代替人血清用于血型鑒定。
本發(fā)明的技術(shù)方案用血型系統(tǒng)的A型、B型血液中的紅細胞膜分別免疫BALB/C小鼠，與骨髓瘤SP2/O細胞融合，篩選出雜交瘤細胞，用有限稀釋法進行克隆化后，注入同系小鼠腹腔誘生腹水，即得ABO血型系統(tǒng)單克隆抗體分型試劑。
其應用液的配制方法將小鼠腹水投入容器中進行稀釋，稀釋液配比0.1MPH7.4的PBS、5%小牛血清、20%右旋糖苷。
本發(fā)明的效果在于配制出優(yōu)質(zhì)的ABO分型試劑，其單克隆抗體分型試劑的效價、親合力均優(yōu)于人血清分型試劑，而且成本低，其成本僅為人血清分型試劑的一半，原材料取之不盡、用之不竭，能夠進行大批量工業(yè)化生產(chǎn)，能夠?qū)崿F(xiàn)質(zhì)量控制和標準化，可以節(jié)省大量寶貴的人血，具有良好的經(jīng)濟效益和社會效益。
本發(fā)明的效果和優(yōu)點將在下面的說明中得到進一步闡述。
實施例首先，選擇抗原性強的A型獻血員和B型獻血員的血液中的紅細胞膜，然后分別免疫BALB/C小鼠，產(chǎn)生抗A、抗B抗體的小鼠脾細胞，采用淋巴細胞雜交瘤技術(shù)，將小鼠脾細胞與小鼠骨髓瘤SP2/O細胞進行融合，篩選出雜交瘤細胞，采用有限稀釋法對雜交瘤細胞進行克隆化，獲得抗A的49H和抗B的5D雜交瘤細胞系，然后將其保存在-8℃的液氮中。當需要使用時，將雜交瘤細胞從液氮中取出，注入到同系小鼠腹腔中誘生腹水，其腹水中含有所需的高效價抗A、抗B抗體。這樣，就可以進行大批量工業(yè)化生產(chǎn)，勿需大量的人血液。
在常溫常壓下，抗A、抗B的腹水用稀釋液稀釋，稀釋液為0.1MPH7.4的PBS、5%小牛血清、20%右旋糖苷。1ml的腹水稀釋1000倍，相當于2000ml人血液，可見其成本很低。將稀釋后的應用液一滴與待鑒定的人血樣一滴混合后進行反應，如與抗A抗體出現(xiàn)凝集，則血樣為A型;如與抗B抗體出現(xiàn)凝集，則血樣為B型;如與抗A、抗B抗體均出現(xiàn)凝集，則血樣為AB型;如與抗A、抗B抗體均不凝集，則血樣為O型。其鑒定方法與用人血清的方法相同。
配制抗A、抗B分型試劑應用液500ml，鑒定血型1億人次，準確率達100%，可節(jié)省人血1000萬ml。
權(quán)利要求
1.ABO血型系統(tǒng)單克隆抗體分型試劑，其特征在于A型、B型血液中的紅細胞膜分別免疫BALB/C小鼠，產(chǎn)生抗A、抗B抗體的小鼠脾細胞，將此雜交瘤細胞，用有限稀釋法進行克隆化后，注入同系小鼠腹腔，誘生腹水，即得ABO血型系統(tǒng)單克隆抗體分型試劑。
2.ABO血型系統(tǒng)單克隆抗體分型試劑的應用液的配制方法，其特征在于(1)將含ABO血型系統(tǒng)單克隆抗體分型試劑的小鼠腹水投入容器中;(2)進行稀釋，稀釋液配比0.1MPH7.4的PBS、5%小牛血清、20%右旋糖苷。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種鑒定人類血型，特別涉及一種代替人血清來鑒定人類血型的試劑及其應用液的配制方法。本發(fā)明采用雜交瘤技術(shù)，以血型系統(tǒng)的A抗原、B抗原，經(jīng)過融合、篩選、克隆化，獲得抗A、抗B抗體應用液。采用本發(fā)明之應用液一滴與血樣一滴，即可迅速鑒定人血的血型，準確率達100％，其檢測方法與人血清試劑相同。本發(fā)明可以通過大批量、工業(yè)化生產(chǎn)，免去從大量獻血員所獻血中分離人血清的方法，節(jié)約了大量寶貴的人血，具有良好的社會效果，而且本發(fā)明的試劑與人血清試劑相比，成本便宜一半，本發(fā)明之試劑生產(chǎn)的質(zhì)控、標準化易于掌握、控制。
文檔編號G01N33/53GK1092173SQ9311071
公開日1994年9月14日 申請日期1993年3月11日 優(yōu)先權(quán)日1993年3月11日
發(fā)明者唐家琪 申請人:中國人民解放軍南京軍區(qū)后勤部軍事醫(yī)學研究所