專利名稱:細(xì)菌內(nèi)毒素測定儀的制作方法
本實(shí)用新型是一種細(xì)菌內(nèi)毒素測定儀，屬于醫(yī)藥衛(wèi)生用分析儀技術(shù)領(lǐng)域：
。該儀器廣泛使用于生物體液，注射用藥品，食品飲料，或其它物品中細(xì)菌內(nèi)毒素含量的測定。
細(xì)菌內(nèi)毒素檢查，簡稱BET，正式文首見于美國國家藥典(US廿版)P888～889頁，該方法是用鱟變形細(xì)胞溶解物(LAL，又稱鱟試劑)做為檢測試劑，根據(jù)極微量的內(nèi)毒素便能與LAL試劑顯示出蛋白凝固反應(yīng)(生成乳白色凝膠)的原理，來進(jìn)行檢測，具體方法是在試管中加入一定量的鱟試劑和等體積的供試品緩緩搖至均勻，置于恒溫水浴中，在37±1℃上保溫60±2分鐘后，小心拿出觀察結(jié)果，如形成凝膠且反轉(zhuǎn)180°仍保持完整，則結(jié)果為陽性(＋)，否則為陰性(－)。這種凝膠極易受到不可逆的破壞，當(dāng)要形成凝膠時稍有振動，就可出現(xiàn)不可逆破壞，這樣就出現(xiàn)了假陰性結(jié)果。由于整個生化反應(yīng)過程無法直接觀察，往往需要多次預(yù)試，測試精度和重演性均受到很大影響，測試誤差很大。
本發(fā)明的目的是為了提供一種使用方便，能夠直接觀察生化反應(yīng)全過程的細(xì)菌內(nèi)毒素測定儀，并可根據(jù)觀察到的反應(yīng)時間計算細(xì)菌內(nèi)毒素的含量。
本實(shí)用新型所述的細(xì)菌內(nèi)毒素測定儀是由兩部分組成一部分是溫度自控系統(tǒng)，一部分是觀察系統(tǒng)。溫度自控系統(tǒng)是這樣實(shí)現(xiàn)的將溫度調(diào)節(jié)器〔8〕置于適當(dāng)?shù)奈恢?，控制電加熱管?1〕工作，使得水浴溫度為37±0.5℃，精確溫度可以從浸于水浴中的溫度計〔10〕和表式溫度計〔9〕讀出；觀察系統(tǒng)是這樣實(shí)現(xiàn)的將試管〔2〕放在試管架〔3〕上，置于水浴中，在試管〔2〕前方的水浴中設(shè)置一玻璃管〔4〕，玻璃管〔4〕內(nèi)壁涂上或貼上帶有一條狹縫的反光膜〔5〕，將燈管〔6〕放入玻璃管〔4〕內(nèi)，使其發(fā)出的光線經(jīng)反射膜〔5〕反射后，通過狹縫照射在試管〔2〕底端的反應(yīng)物上，試管〔2〕后方設(shè)置一深色背景〔1〕(顏色可以是藍(lán)色，可以是黑色，也可以是棕色)，儀器的前壁設(shè)有一個透明觀察窗〔7〕(其材質(zhì)可以是玻璃，也可以是透明高分子材料)，檢測人員可以通過透明觀察窗〔7〕在深色背景〔1〕的襯托下清晰地直接觀察到生化反應(yīng)的全過程，反應(yīng)終點(diǎn)時，反應(yīng)液由無色透明液體變?yōu)槿榘咨鞚?，記錄反?yīng)時間，根據(jù)反應(yīng)時間計算出細(xì)菌內(nèi)毒素的含量。(結(jié)構(gòu)如圖)經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，供試品細(xì)菌內(nèi)毒素的含量Ci與鱟試劑形成凝膠所需時間Ti成冪函數(shù)關(guān)系Ci＝aTib……(1)(1)式中參數(shù)a、b對于同一批鱟試劑來說為一常數(shù)，可以用標(biāo)準(zhǔn)曲線法求出。
標(biāo)準(zhǔn)曲線用不含內(nèi)毒素的蒸餾水將鱟試劑溶介，混勻，精密分取0.1mL澄明液于各試管中，再加入各濃度等級(Ci)的標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素稀釋液0.1mL，輕輕旋搖均勻，放入細(xì)菌內(nèi)毒素測定儀中進(jìn)行測定，與標(biāo)準(zhǔn)濁度管(用高分子材料制成，濁度、色度酷似剛形成的鱟試劑一細(xì)菌內(nèi)毒素凝膠，可永久保存)比較，判斷反應(yīng)終點(diǎn)，觀察并記錄各試管形成凝膠的時間Ti。
廈門鱟試劑廠841012－C批號鱟試劑測得的數(shù)據(jù)如下Ci 10 5 2.5 1.25 0.625
Ti 54 73.67 93.5 113.1 151.681 0.699 0.398 0.097 －0.2041.732 1.867 1.971 2.054 2.181根據(jù)上述數(shù)據(jù)繪制Ci－Ti，LgCi——LgTi 曲線。
將(1)式兩邊取對數(shù)得LgCi＝Lga＋bLgTi ……(2)(2)式為一線性方程，用選點(diǎn)法，平均值法、最小二乘法或電子計算機(jī)均可得出方程式的兩個參數(shù)a、b及相關(guān)系數(shù)γ。
用最小二乘法計算的結(jié)果為a＝65200 b＝－2.762 γ＝－0.99704由此得出廈門鱟試劑廠841012－C批號的鱟試劑經(jīng)驗(yàn)公式為Ci＝652000Ti－2.762……(3)根據(jù)(3)式就可以測試各供試品細(xì)菌內(nèi)毒素的含量。
利用該儀器進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素的檢測，比原方法簡單，方便。能直接觀察到反應(yīng)時間并計算出細(xì)菌內(nèi)毒素的含量。該儀器結(jié)構(gòu)設(shè)計合理，制備工藝簡單，造價低廉，便于推廣應(yīng)用。
權(quán)利要求
1.一種帶有溫度自控系統(tǒng)的細(xì)菌內(nèi)毒素測定儀，其特征在于所設(shè)的觀察系統(tǒng)是由玻璃管[4]、燈管[6]、帶有一條狹縫的反光膜[5]、深色背景[1]、透明觀察窗[7]組成。
2.根據(jù)權(quán)利要求
1所述的細(xì)菌內(nèi)毒素測定儀，其特征在于反光膜〔5〕可以是反光涂膜，可以是反光貼膜。
3.根據(jù)權(quán)利要求
1所述的細(xì)菌內(nèi)毒素測定儀，其特征在于深色背景〔1〕的顏色可以是藍(lán)色、可以是黑色、可以是棕色。
4.根據(jù)權(quán)利要求
1所述的細(xì)菌內(nèi)毒素測定儀，其特征在于透明觀察窗〔7〕的材質(zhì)可以是玻璃，也可以是透明高分子材料。
專利摘要
細(xì)菌內(nèi)毒素測定儀屬于生物品測試技術(shù)領(lǐng)域：
。該儀器是由溫度自控系統(tǒng)和觀察系統(tǒng)兩部分組成，能直接觀察到生化反應(yīng)的全過程，并根據(jù)觀察到的反應(yīng)時間計算出細(xì)菌內(nèi)毒素的含量。使用簡單，操作方便，廣泛使用于注射藥品、生物體液、食品飲料或其它物品中細(xì)菌內(nèi)毒素含量的測定。該儀器結(jié)構(gòu)設(shè)計合理、制造工藝簡單、造價低廉。
文檔編號G01N33/48GK86204095SQ86204095
公開日1987年9月16日 申請日期1986年6月18日
發(fā)明者胡冠時 申請人:中國人民解放軍陸軍第一五五醫(yī)院導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan