專(zhuān)利名稱(chēng)：檢測(cè)血液中抗體的方法及實(shí)施該方法所用的膜帶和膜片組的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種使用涂有與被測(cè)抗體相應(yīng)的已篩選過(guò)的抗原的膜片的免疫吸印技術(shù)(Western吸印技術(shù))檢測(cè)血液中抗體存在的方法。本發(fā)明還涉及實(shí)施該方法所用的膜帶和膜片組。
檢測(cè)抗體和抗原的許多方法已為人們熟知。例如將抗原用凝膠電泳法分離和檢測(cè)〔例如十二烷基硫酸鈉(SDS)〕用這種方法可能將幾乎任何一種蛋白質(zhì)混合物分解成各個(gè)組分。然而，由于已分離的蛋白質(zhì)組分比較難以達(dá)到所使用凝膠基質(zhì)內(nèi)部，因此對(duì)它們作進(jìn)一步分析受到了限制。
為了克服上述缺點(diǎn)，用一膜片代替凝膠基質(zhì)，使蛋白質(zhì)能固定在膜片上，處在不能移動(dòng)的狀態(tài)。
所謂吸印技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)是在膜片表面不出現(xiàn)處在不能移動(dòng)狀態(tài)的抗原的集中，因此易于對(duì)各個(gè)分離的抗原進(jìn)行進(jìn)一步的鑒定。
以免疫吸印技術(shù)為基礎(chǔ)的分析方法能用于鑒定抗體和抗原二者。用這種方法檢測(cè)抗體的例子包括所有種類(lèi)的接種疫苗，例如HIV-Ⅰ，HIV-Ⅱ、HTLV-Ⅰ和HTLV-Ⅱ。其他的例子為瘧疾、血吸蟲(chóng)病、絲蟲(chóng)病、非洲錐蟲(chóng)病和laishmaniasis。還能檢測(cè)過(guò)敏癥產(chǎn)生的物質(zhì)。
常規(guī)免疫吸印技術(shù)使用的血液試樣是經(jīng)處理后分離出的血清。被分離出的血清與一典型的寬4-5毫米長(zhǎng)120毫米的帶狀膜片接觸，膜片涂有與被測(cè)抗體相應(yīng)的已篩選過(guò)的抗原。在經(jīng)過(guò)適宜的培養(yǎng)時(shí)間后去掉膜片，然后進(jìn)行陽(yáng)性反應(yīng)試驗(yàn)。試驗(yàn)可用任何已知方法，例如著色。
本發(fā)明是對(duì)已有的免疫吸印技術(shù)的進(jìn)一步改進(jìn)和簡(jiǎn)化，從而有效地縮短了分析時(shí)間。此外，分析是用整個(gè)血液來(lái)代替血清，例如是在已經(jīng)轉(zhuǎn)移至載體上且已凝固的血液樣品上進(jìn)行分析。
因此本發(fā)明涉及權(quán)利要求1前序部分描述的一種方法，其特征在于帶有血液樣品的載體即血液樣品在涂敷以后已凝固在載體上，與涂有篩選過(guò)的抗原的帶狀膜片，與洗脫和培養(yǎng)液共同放入容器中，經(jīng)予定的培養(yǎng)時(shí)間以后，去掉膜片，再用本領(lǐng)域已知的方法做試驗(yàn)。
根據(jù)本發(fā)明，已證明用一張濾紙作為載體，將血液樣品吸收在濾紙上是合適的。用濾紙吸收血液樣品是已知的，然而根據(jù)已知方法，第一步必須從血液樣品中洗脫血清，然后在后續(xù)步驟中試驗(yàn)血清中的抗體的含量。
由于用本發(fā)明能夠洗脫和培養(yǎng)在一個(gè)步驟中完成，所以必然有效地簡(jiǎn)化了步驟和縮短分析時(shí)間。使用本發(fā)明的方法使分析時(shí)間縮短的另一個(gè)原因是使用尺寸特別小的帶狀膜片。膜帶的最佳尺寸是寬1.1至1.8毫米和長(zhǎng)10至100毫米。這就大大地降低了過(guò)程的費(fèi)用，也大大地縮短了用于洗脫和將抗體轉(zhuǎn)移到膜片上的時(shí)間，例如從3至4小時(shí)縮短到1至1.5小時(shí)。
實(shí)施本發(fā)明的方法所用的最佳膜帶為聚偏氟乙烯箔，按指出的尺寸切割成膜帶，即其最好的寬度為1.1至1.8毫米和長(zhǎng)度為10至100毫米，例如70至75毫米，其他合適的膜片材料例如為硝化纖維或酰胺。每一膜帶能標(biāo)上識(shí)別碼標(biāo)記，如直接在膜帶上貼上流水號(hào)標(biāo)簽或條型碼。
為了實(shí)施該試驗(yàn)，可使用任何能盛膜片，帶血液樣品的載體以及洗脫和培養(yǎng)液的容器。如果需要同時(shí)進(jìn)行試驗(yàn)的數(shù)量大，可使用帶有許多樣品池的架，在其中能裝入相應(yīng)數(shù)量的膜片和帶血液樣品的載體。
這種帶有許多樣品池的試驗(yàn)架最佳實(shí)施例如圖所示

圖1是本發(fā)明架的透視圖;
圖2是相同架的局部剖面圖;
圖3是架的兩個(gè)蓋之一的透視圖;
圖4是與圖2相似的剖面圖，其中已裝入膜片，帶血液樣品的載體和洗脫及培養(yǎng)液;
圖5是有15個(gè)涂有相同或不同抗體的膜帶的膜片組;
圖6是如圖5所示相同型式的膜片組，但每一膜帶分成三部分。
圖7是圖6膜片組的側(cè)視圖;
圖8是適于裝入如圖7所示膜片組的帶有許多樣品室的試驗(yàn)架的局部剖面的側(cè)視圖;
圖9是圖8所示試驗(yàn)架的頂視圖;
圖10是圖8中沿a-a向的試驗(yàn)架的樣品室剖面圖;
圖11是適于裝入如圖8至10所示試驗(yàn)架樣品室的具有許多片帶有血液樣品的濾紙載體條帶。
試驗(yàn)架由耐高壓蒸煮材料例如聚甲醛制造的板1組成。在板上鉆有許多平行通孔2，在孔中插入兩端伸出板1的通孔管3。在圖示實(shí)施例中板1的厚度為30毫米?？?的直徑為φ10毫米。80毫米長(zhǎng)的管已插入孔中，在板1兩邊伸出25毫米，以使管的開(kāi)口6離開(kāi)板的表面，在每個(gè)管端部設(shè)置有一個(gè)同心硅橡膠密封圈9。開(kāi)口6能用兩個(gè)設(shè)置有與管開(kāi)口相應(yīng)的凹槽7的蓋4和5密閉。
圖4所示已裝入一片帶血液樣品的濾紙8和膜帶10的管的剖面圖。兩管開(kāi)口6a和6b用蓋4、5密閉。
在下面將用檢測(cè)愛(ài)滋病毒抗體來(lái)描述本發(fā)明，但該過(guò)程應(yīng)理解為同樣適合于許多其他抗體或抗原。
例1如圖所示板塊的每一孔中裝入具有加強(qiáng)肋的聚偏氟乙烯膜片，膜片分別用公知的方法涂有篩選過(guò)的HIV抗原。膜帶長(zhǎng)70毫米，寬1.6毫米。使用的膜帶用印刷有流水號(hào)的標(biāo)簽做上標(biāo)記。然后將帶有待試驗(yàn)人的血液樣品濾紙片都切成尺寸為5×5毫米。這些濾紙片分別裝入所示每一個(gè)管中，所有管的三分之二體積中都裝有pH值為7.2的洗脫和培養(yǎng)緩沖劑以及盛有PBS(丁二酸-1)、0.1%非離子活性劑(Twen 20)、1%(w/w)兔子血清、0.05當(dāng)量濃度(N)的NaN3。管的開(kāi)口用蓋4、5密閉，然后將整個(gè)膜片組放入旋轉(zhuǎn)裝置中，于是在每一樣品池中的液體濺潑于帶有篩選過(guò)的抗原的已裝入的膜帶上。洗脫和培養(yǎng)液約在一小時(shí)以后倒出，用蒸餾水清洗，再用HRP(蔊菜根過(guò)氧化物酶的共軛免疫蛋白G)培養(yǎng)3/4小時(shí)，隨后在蒸餾水中清洗，用TMBS/DONS作用物著色，在完全著色后除去膜帶，然后進(jìn)行陽(yáng)性或陰性反應(yīng)檢測(cè)。
例2使用如圖5所示的膜片組，包括許多膜帶3，其連接端4與防水塑料組成的載體帶1上的片狀垂懸物2相連接。膜片帶3涂有相同或不同的與被檢測(cè)抗體相應(yīng)的抗原。
將膜片組裝入一具有相同數(shù)目孔或通孔的架中，膜帶間有相同間隔距離且與如圖1至4所示架中的排相對(duì)應(yīng)。洗脫和培養(yǎng)液以及帶有已干燥的待試驗(yàn)人的血液樣品的濾紙片同時(shí)裝入所述孔或通孔中。
試驗(yàn)做法與例1描述相同。
例3圖6和7所示一膜片組包括帶有若干片狀垂懸物12的支座或肋11，且在這些垂懸物12上配有相應(yīng)數(shù)目的塑料膜帶13，例如聚偏氟乙烯。每個(gè)膜帶分成三部分13a、13b和13c，每一部分涂有與另外兩部分不同的抗原，但應(yīng)與待檢測(cè)抗體相對(duì)應(yīng)。因此每一膜帶可同時(shí)適用于檢測(cè)同一個(gè)人的血液試樣的三種不同抗原。肋11的形狀成管形，以便借助于由一個(gè)能插入該管狀肋中的細(xì)桿所組成的工具(圖中未示出)方便地取出膜片組。
如圖8至10所示使用了適于膜片組的試驗(yàn)架。膜片組包括一個(gè)具有許多兩端為半園形的長(zhǎng)槽樣品室或樣品池22的架21，其頂部是敝開(kāi)的。樣品池22之間距離根據(jù)片狀垂懸物12和帶有抗原的膜帶13之間距離來(lái)設(shè)計(jì)。架21設(shè)有一縱向槽23，適合于容納帶片狀垂懸物12的肋11以及膜片組的膜帶。
此外，架21設(shè)有另一縱向槽24，適于容納供帶血液樣品濾紙用的支座上的肋31，見(jiàn)圖11。
所述支座包括一個(gè)帶有涂有血液樣品的濾紙33的具有許多片狀垂懸物32的肋31。圖10所示已插入供血液樣品31、32、33用的支痛ご 1、12、13用的支座的樣品池22的剖面圖。
將洗脫和培養(yǎng)液14裝入樣品池，再按例1提出的相同條件完成培養(yǎng)和后處理。在清洗和著色后，去掉膜片組，再讀出試驗(yàn)結(jié)果。
當(dāng)然，這些例子僅僅是作為實(shí)施例，普通技術(shù)人員能容易地理解該方法并作出不同的變化。如上所述，該方法不僅可用于檢測(cè)血液中的抗體，而且也可用于檢測(cè)各種液體中的抗原。在后面這種情況下，可用帶有篩選過(guò)的多系抗體或單系抗體的膜帶。
權(quán)利要求
1.用免疫吸收技術(shù)(Western吸印技術(shù))檢測(cè)血液中抗體的方法，使用涂有與被測(cè)抗體相應(yīng)的篩選過(guò)的抗原膜片，其特征在于當(dāng)涂敷在載體上的血液樣品凝固后，將載體與涂有篩選過(guò)的抗原的膜帶及洗脫和培養(yǎng)液一起放入容器中，經(jīng)予定的培養(yǎng)時(shí)間后，去掉膜片，用公知的試驗(yàn)方法進(jìn)行試驗(yàn)。
2.按照權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于使用由吸收過(guò)濾材料組成的載體如一片濾紙。
3.按照權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于使用的膜帶寬1至1.8毫米長(zhǎng)10至100毫米。
4.實(shí)施權(quán)利要求1至3之一所述的方法所用的膜帶，其特征在于涂有與按被測(cè)抗體相應(yīng)分子量篩選的抗原。
5.實(shí)施權(quán)利要求1至3之一所述的方法所用的膜片組，其特征在于由許多與常規(guī)載體帶相連接的膜帶組成，每一膜帶分別涂有一種對(duì)人體檢查用的抗原。
全文摘要
用凝固血液樣品在載體上，檢測(cè)血液中抗體的方法，例在一片濾紙上的血斑，該濾紙與公知的洗脫和培養(yǎng)液及涂有與檢測(cè)所需的抗體類(lèi)型相應(yīng)的抗原的膜帶共同放入容器。培養(yǎng)和著色后進(jìn)行陽(yáng)性或陰性反應(yīng)的檢測(cè)。本發(fā)明也涉及用于該方法的膜帶或膜片組以及洗脫和培養(yǎng)液，還有一種試驗(yàn)工具，包括完成試驗(yàn)時(shí)所必需的裝置。
文檔編號(hào)G01N33/543GK1037036SQ8910211
公開(kāi)日1989年11月8日 申請(qǐng)日期1989年2月11日 優(yōu)先權(quán)日1988年2月11日
發(fā)明者科斯馬·弗朗希斯迪·蘇薩 申請(qǐng)人:安克斯公司