專利名稱:蘋果汁或脫色蘋果汁中摻入梨汁的鑒別和測定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種梨中特有而蘋果中沒有的多酚類有機物質(zhì)—熊果苷的鑒別和測定方法，用于鑒定果汁是純正蘋果汁還是混有梨汁的混合蘋果汁。
背景技術(shù)：
蘋果汁含有豐富的鉀、有機酸和果糖，受到普遍歡迎。中國是世界上最大的蘋果種植和果汁加工的國家，蘋果汁貿(mào)易量占世界貿(mào)易的60％以上，2005年出口濃縮蘋果汁64.8萬噸，中國的蘋果汁對世界蘋果汁貿(mào)易價格和質(zhì)量有著重要的影響，其加工能力世界第一，并且不斷有新的蘋果汁生產(chǎn)廠家和加工生產(chǎn)線出現(xiàn)，榨汁用蘋果原料有出現(xiàn)短缺的跡象，隨著自然災(zāi)害的影響和蘋果收獲周期性的大小年出現(xiàn)，蘋果原料制約著蘋果汁的生產(chǎn)。梨與蘋果一樣，是我國北方主要水果之一，梨汁與蘋果汁的酸度、糖度等差別不大，在缺乏蘋果原料的時候，有將梨與蘋果一同加工生產(chǎn)果汁的可能，所以鑒定果汁是純正蘋果汁還是混有梨汁的混合蘋果汁非常重要，涉及整個產(chǎn)業(yè)的安全和國際貿(mào)易的順利進行。有用酸度、糖度、色澤(透光率)等指標來綜合判定蘋果汁與梨汁方法，該法存在著無特征指標、影響因素多、判定困難等缺點。蘋果汁中是否混有梨汁沒有一種有效的鑒定方法。
研究表明，蘋果和梨都富含多酚類物質(zhì)，熊果苷是梨中含有而蘋果中沒有的特征多酚類有機物。熊果苷(Arbutin)化學(xué)名4-羥基苯--D-吡喃葡萄糖苷；分子式C12H16O7，分子量272.25，白色略帶淡黃色粉末，易溶于水和乙醇，溶解后無沉淀。
在梨的葉、花、幼果、成品果中均含有熊果苷，在幼果中熊果苷最高可達1％，隨著梨的成熟，熊果苷含量快速降低，達到0.02％，梨中不同部分其熊果苷含量不同，梨皮中含量最高，是梨核的4倍左右，是梨果肉的10～50倍。熊果苷含量隨梨的種植區(qū)域及品種的變化而不同，但都含有熊果苷。測試表明，梨經(jīng)篩選、清洗、破碎、榨汁、酶解、超濾、吸附等工序后所生產(chǎn)的果汁或脫色果汁(果糖)，不能完全除去多酚類物質(zhì)熊果苷，用高效液相色譜法測定熊果苷判定蘋果汁或脫色蘋果汁(果糖)中是否混有梨汁非常有效。

發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種用高效液相色譜法測定熊果苷來判斷蘋果汁或脫色蘋果汁(蘋果果糖)中是否摻入梨汁，用高效液相色譜法測定熊果苷具有很好的專一性和較高的靈敏度，用其判定蘋果汁或脫色蘋果汁(蘋果果糖)中是否混有梨汁準確、簡單、可操作性強。
蘋果汁或脫色蘋果汁(蘋果果糖)中摻入梨汁的鑒定方法，它是高效液相色譜法，其特征是高效液相色譜的條件為1)用紫外檢測器或二極管陣列檢測器，波長270～290nm2)色譜柱采用C18柱，5μm，(4.6×250mm)3)柱溫20～40℃4)用0.01mol/L的甲醇和體積濃度為95％的乙酸鈉溶液作為流動相，其中甲醇的含量不超過20％5)流動相流速0.8～1.0mL/min6)用冰乙酸調(diào)節(jié)流動相PH值為4～5.57)進樣量20μL～100μL圖1是熊果苷標準液相色譜圖。
圖2是熊果苷標準物質(zhì)紫外吸收光譜。
圖3是蘋果汁溶液液相色譜圖。
圖4是梨汁溶液液相色譜圖。
圖5是梨汁加蘋果汁液相色譜圖。
具體實施例儀器和試劑Agilent 1200高效液相色譜儀，配備G1315 B型DAD檢測器，在線真空脫氣機，四元梯度泵，自動進樣器。
熊果苷標準品(Sigma公司)；甲醇(色譜純，F(xiàn)isher公司)；乙酸鈉(分析純，西安化學(xué)試劑廠)；冰乙酸(分析純，西安化學(xué)試劑廠)；超純水(自制，電阻18.2MΩ)。
高效液相色譜條件色譜柱ACE-5-C18(5μm，4.6×250mm)；柱溫30℃；流動相甲醇-0.01mol/L乙酸鈉溶液(5+95)，冰乙酸調(diào)pH5.0；流速1.0mL/min；檢測波長282nm，檢測時收集200～400nm范圍內(nèi)的紫外掃描圖譜；進樣量10～100μL。
實施例1熊果苷標準溶液的測定待高效液相色譜系統(tǒng)達到基線平衡后，用自動進樣器將100.0μg/mL的熊果苷標準溶液20μL注入色譜系統(tǒng)，在保留時間9.5min.處有一個峰1，為熊果苷標準物質(zhì)的色譜峰，如圖1所示。檢測時進行紫外全掃描，在200～400nm范圍內(nèi)峰1的最大紫外吸收在225nm處，在282nm處也有較大紫外吸收，如圖2所示，考慮到225nm時樣品干擾太大，無法測定，選擇282nm為檢測波長。
該色譜條件下熊果苷標準物質(zhì)的最低檢出量為2ng。
實施例2蘋果汁樣品的測定稱取蘋果汁5.00g(精確至0.01g)于50mL容量瓶中，先用少量高純水稀釋，再用高純水定容至50.00mL，搖勻，過0.45μm微孔濾膜，進高效液相色譜儀測定，進樣量20μL，在保留時間9.5min.處無熊果苷的峰，且9.5min左右基本無干擾，如圖3所示。
測試10種蘋果汁及6種脫色蘋果汁(蘋果果糖)，色譜圖基本相似，均無熊果苷檢出。進樣量20μL時最低檢出限為1.0mg/kg。
實施例3梨汁樣品的測定稱取梨汁5.00g(精確至0.01g)于50mL容量瓶中，先用少量高純水稀釋，再用高純水定容至50.00mL，搖勻，過0.45μm微孔濾膜，進高效液相色譜儀測定，進樣量20μL，在保留時間9.5min.處有一非常明顯的熊果苷的特征峰，如圖4所示。
測試8種梨汁及5種脫色梨汁(梨果糖)，色譜圖基本相似，均有較大的熊果苷色譜峰檢出。檢測的梨汁及脫色梨汁(梨果糖)中熊果苷含量最高的可達0.1％，最低的為0.03％，在均高效液相色譜圖中均具有較高的響應(yīng)值。
實施例4蘋果汁與梨汁混合樣品的測定稱取梨汁與蘋果汁按1∶1混合的樣品5.00g(精確至0.01g)于50mL容量瓶中，先用少量高純水稀釋，再用高純水定容至50.00mL，搖勻，過0.45μm微孔濾膜，進高效液相色譜儀測定，進樣量20μL，在保留時間9.5min.處有一明顯的熊果苷的特征峰，如圖5所示，可判定該樣品含梨汁成分。
該色譜條件下熊果苷的最低檢出量為2ng，以稱樣5.00g定容50.00mL計，進樣20μL時，熊果苷最低檢出限1.0mg/kg；進樣量100μL，熊果苷最低檢出限0.2mg/kg。
在該方法下，以所檢測的幾種梨汁及脫色梨汁(梨果糖)中熊果苷最低含量0.03％計，進樣量20μL時梨汁∶蘋果汁為1∶50時可檢出其中所含的熊果苷，進樣量100μL時，梨汁∶蘋果汁為1∶250時可檢出其中所含的熊果苷。
權(quán)利要求
1.蘋果汁或脫色蘋果汁中摻入梨汁的鑒別和測定方法，它是利用高效液相色譜法測定熊果苷，其高效液相色譜的條件為1)用紫外檢測器或二極管陣列檢測器，檢測波長270～290nm；2)色譜柱采用C18柱，5μm，(4.6×250mm)；3)柱溫20～40℃；4)用0.01mol/L的甲醇和體積濃度為95％的乙酸鈉溶液作為流動相，其中甲醇含量不超過20％；5)流動相流速0.8～1.0mL/min；6)用冰乙酸調(diào)節(jié)流動相PH值為4～5.5；7)進樣量20μL～100μL。
專利摘要
本發(fā)明涉及一種梨中特有而蘋果中沒有的多酚類物質(zhì)—熊果苷的鑒別和測定方法。用高效液相色譜法測定熊果苷，作為蘋果汁或脫色蘋果汁(蘋果果糖)中摻入梨汁的鑒定方法。此法可確定蘋果汁或脫色蘋果汁(蘋果果糖)是純正單一品種，還是蘋果與梨加工的混合果汁或果糖。用高效液相色譜法測定熊果苷具有很好的專一性和較高的靈敏度，用其判定蘋果汁或脫色蘋果汁(蘋果果糖)中是否混有梨汁準確、簡單、可操作性強。
文檔編號G01N30/00GK1996007SQ200610104982
公開日2007年7月11日 申請日期2006年11月28日
發(fā)明者樂愛山, 李建華, 孔祥虹, 何強 申請人:中華人民共和國陜西出入境檢驗檢疫局導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan