本發(fā)明屬于水產(chǎn)養(yǎng)殖，具體涉及一種大口黑鱸堿水環(huán)境下鰓組織損傷標(biāo)志物及其鑒定方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、隨著氣候條件變化，人為因素的影響，土地鹽堿化進(jìn)程不斷加劇。鹽堿水是一種廣泛分布于陸地地區(qū)的非海洋性鹽水資源，占據(jù)著世界上大部分的水資源，僅在我國就覆蓋有4.6×107hm2的低洼鹽堿水，因其具有高碳酸鹽堿度(hco3-和co32-)，高ph值，離子組存復(fù)雜等特點，嚴(yán)重制約了水生生物的生存。堿度作為鹽堿水中重要的環(huán)境脅迫因子，通過影響魚類滲透壓平衡，呼吸代謝和免疫調(diào)節(jié)等系統(tǒng)，對生長發(fā)育，繁殖和存活造成威脅。而鰓作為魚類與水體直接接觸的組織器官，在調(diào)節(jié)氨氮排泄，氣體交換，調(diào)節(jié)滲透壓與維持酸堿平衡過程中發(fā)揮了重要作用。

2、大口黑鱸(micropterus?salmoides)作為一種引進(jìn)種，抗病強(qiáng)、長速快、肉質(zhì)鮮美在我國深受消費者喜愛，養(yǎng)殖產(chǎn)量逐年上升，養(yǎng)殖區(qū)域逐步擴(kuò)大，是我國重要的經(jīng)濟(jì)魚類。目前，有關(guān)大口黑鱸在鹽堿水環(huán)境下的養(yǎng)殖模式僅在寧夏、天津等小部分鹽堿水域進(jìn)行嘗試，還未獲得大范圍推廣示范。而有關(guān)大口黑鱸在堿水環(huán)境下鰓組織的適應(yīng)調(diào)節(jié)機(jī)制還未明確，這無疑阻礙了堿水養(yǎng)殖大口黑鱸的進(jìn)程。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種大口黑鱸堿水環(huán)境下鰓組織損傷標(biāo)志物的鑒定方法，利用rna-seq技術(shù)探究大口黑鱸在高堿水環(huán)境下鰓組織損傷變化情況，為大口黑鱸鰓組織響應(yīng)堿環(huán)境的調(diào)節(jié)機(jī)制提供參考，助力大口黑鱸鹽堿水養(yǎng)殖。

2、本發(fā)明提供了一種大口黑鱸堿水環(huán)境下鰓組織損傷標(biāo)志物的鑒定方法，包括以下步驟：

3、對大口黑鱸進(jìn)行堿脅迫處理，分離大口黑鱸腮組織；

4、將所述大口黑鱸腮組織為材料進(jìn)行總rna提取和轉(zhuǎn)錄組測序，得到轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果；

5、將所述轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果進(jìn)行基因表達(dá)差異分析，篩選差異表達(dá)的基因進(jìn)行功能富集分析，得到大口黑鱸堿水環(huán)境下鰓組織損傷標(biāo)志物。

6、優(yōu)選的，所述堿脅迫處理的方法利用含碳酸鹽的水體養(yǎng)殖大口黑鱸。

7、優(yōu)選的，所述碳酸鹽的濃度為35～50mmol/l。

8、優(yōu)選的，所述碳酸鹽的濃度為45mmol/l。

9、優(yōu)選的，所述含碳酸鹽的水體的養(yǎng)殖時間為90～100h。

10、優(yōu)選的，所述大口黑鱸腮組織還包括病理檢測和/或生化指標(biāo)檢測，根據(jù)檢測結(jié)果，輔助判斷腮組織的結(jié)構(gòu)損傷情況；

11、所述病理檢測包括腮組織tunel染色和/或he染色；

12、所述生化指標(biāo)包括鰓組織過氧化氫酶、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過氧化物酶、總抗氧化能力的活性和丙二醛含量。

13、優(yōu)選的，所述功能富集分析的富集通路包括以下至少一種生物通路：類固醇生物合成、萜類骨架的生物合通路、自噬通路、細(xì)胞因子-細(xì)胞因子受體信號傳導(dǎo)通路、細(xì)胞外基質(zhì)與受體的相互作用通路、焦點粘附通路和纈氨酸、異亮氨酸和亮氨酸的降解通路。

14、本發(fā)明提供了一種所述鑒定方法獲得的大口黑鱸堿水環(huán)境下鰓組織損傷標(biāo)志物，包括以下至少一種基因：hmgcs1、fdps、fdft1、dhcr24、lss、sqlea、loc119907680、msmo1、nsdhl和sc5d、col1a1a、col1a2、col6a1、col2a1b和cav3。

15、本發(fā)明提供了所述大口黑鱸堿水環(huán)境下鰓組織損傷標(biāo)志物作為檢測靶點在以下至少一項中的應(yīng)用：

16、1)試劑在制備診斷大口黑鱸腮損傷或評估大口黑鱸堿水養(yǎng)殖效果的產(chǎn)品中的應(yīng)用，所述試劑能夠特異性檢測樣本中的所述大口黑鱸堿水環(huán)境下鰓組織損傷標(biāo)志物的表達(dá)量；

17、2)試劑盒在制備診斷大口黑鱸腮損傷或評估大口黑鱸堿水養(yǎng)殖效果的產(chǎn)品中的應(yīng)用，所述試劑盒包括能夠特異性檢測樣本中的所述大口黑鱸堿水環(huán)境下鰓組織損傷標(biāo)志物的表達(dá)量的試劑；

18、3)芯片在制備診斷大口黑鱸腮損傷或評估大口黑鱸堿水養(yǎng)殖效果的產(chǎn)品中的應(yīng)用，所述芯片包括能夠特異性檢測樣本中的所述大口黑鱸堿水環(huán)境下鰓組織損傷標(biāo)志物的表達(dá)量的試劑。

19、優(yōu)選的，所述試劑包括通過選自測序方法、核酸雜交方法、核酸擴(kuò)增方法、蛋白免疫方法中至少一種方法檢測所述大口黑鱸堿水環(huán)境下鰓組織損傷標(biāo)志物的表達(dá)量的試劑。

20、本發(fā)明提供了一種大口黑鱸堿水環(huán)境下鰓組織損傷標(biāo)志物的鑒定方法，包括大口黑鱸堿脅迫處理和轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析，通過轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析，鑒定了其在高堿環(huán)境下四條主要富集通路并鑒定出了16個鰓組織損傷的標(biāo)志物，為大口黑鱸在高鹽堿水環(huán)境下的養(yǎng)殖模式提供了技術(shù)支持。

技術(shù)特征：

1.一種大口黑鱸堿水環(huán)境下鰓組織損傷標(biāo)志物的鑒定方法，其特征在于，包括以下步驟：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述鑒定方法，其特征在于，所述堿脅迫處理的方法利用含碳酸鹽的水體養(yǎng)殖大口黑鱸。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述鑒定方法，其特征在于，所述碳酸鹽的濃度為35～50mmol/l。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述鑒定方法，其特征在于，所述碳酸鹽的濃度為45mmol/l。

5.根據(jù)權(quán)利要求2～4中任意一項所述鑒定方法，其特征在于，所述含碳酸鹽的水體養(yǎng)殖的時間為90～100h。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述鑒定方法，其特征在于，所述大口黑鱸腮組織還包括病理檢測和/或生化指標(biāo)檢測，根據(jù)檢測結(jié)果，輔助判斷腮組織的結(jié)構(gòu)損傷情況；

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述鑒定方法，其特征在于，所述功能富集分析的富集通路包括以下至少一種生物通路：類固醇生物合成、萜類骨架的生物合通路、自噬通路、細(xì)胞因子-細(xì)胞因子受體信號傳導(dǎo)通路、細(xì)胞外基質(zhì)與受體的相互作用通路、焦點粘附通路和纈氨酸、異亮氨酸和亮氨酸的降解通路。

8.一種權(quán)利要求1～7中任意一項所述鑒定方法獲得的大口黑鱸堿水環(huán)境下鰓組織損傷標(biāo)志物，其特征在于，包括以下至少一種基因：hmgcs1、fdps、fdft1、dhcr24、lss、sqlea、loc119907680、msmo1、nsdhl和sc5d、col1a1a、col1a2、col6a1、col2a1b和cav3。

9.權(quán)利要求8所述大口黑鱸堿水環(huán)境下鰓組織損傷標(biāo)志物作為檢測靶點在以下至少一項中的應(yīng)用：

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述應(yīng)用，其特征在于，所述試劑包括通過選自測序方法、核酸雜交方法、核酸擴(kuò)增方法、蛋白免疫方法中至少一種方法檢測所述大口黑鱸堿水環(huán)境下鰓組織損傷標(biāo)志物的表達(dá)量的試劑。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明提供了一種大口黑鱸堿水環(huán)境下鰓組織損傷標(biāo)志物及其鑒定方法和應(yīng)用，本發(fā)明屬于水產(chǎn)養(yǎng)殖。本發(fā)明對大口黑鱸進(jìn)行堿脅迫處理，分離大口黑鱸腮組織；將所述大口黑鱸腮組織為材料進(jìn)行總RNA提取和轉(zhuǎn)錄組測序，將轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果進(jìn)行基因表達(dá)差異分析，篩選差異表達(dá)的基因進(jìn)行功能富集分析，得到大口黑鱸堿水環(huán)境下鰓組織損傷標(biāo)志物?；谒鲻w組織損傷標(biāo)志物的表達(dá)量來診斷或評估大口黑鱸堿水環(huán)境下腮組織損傷情況，為大口黑鱸適應(yīng)高堿環(huán)境養(yǎng)殖提供理論支持，助力淡水養(yǎng)殖業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。

技術(shù)研發(fā)人員：華吉祥,強(qiáng)俊,董亞倫,路思琪,陶易凡,姜冰潔
受保護(hù)的技術(shù)使用者：中國水產(chǎn)科學(xué)研究院淡水漁業(yè)研究中心
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/10/28