高危hpv特異性蛋白標(biāo)志物免疫組化質(zhì)控片和試劑盒的制作方法
【專利摘要】本實(shí)用新型提供了高危HPV特異性蛋白標(biāo)志物免疫組化質(zhì)控片和試劑盒。具體地，本實(shí)用新型質(zhì)控片包括：(i)用于免疫組化檢測(cè)HPV16特異性蛋白標(biāo)志物的第一質(zhì)控片，所述第一質(zhì)控片包括第一載玻片，以及位于所述第一載玻片的一個(gè)主表面上的第一陽(yáng)性質(zhì)控區(qū)和第一陰性質(zhì)控區(qū)，和/或(ii)用于免疫組化檢測(cè)HPV18特異性蛋白標(biāo)志物的第二質(zhì)控片，所述第二質(zhì)控片包括第二載玻片，以及位于所述第二載玻片的一個(gè)主表面上的第二陽(yáng)性質(zhì)控區(qū)和第二陰性質(zhì)控區(qū)。本實(shí)用新型的質(zhì)控片的質(zhì)控穩(wěn)定、能夠有效提高宮頸癌免疫組化準(zhǔn)確性。
【專利說(shuō)明】
高危HPV特異性蛋白標(biāo)志物免疫組化質(zhì)控片和試劑盒
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本實(shí)用新型屬于生物醫(yī)療技術(shù)領(lǐng)域，特別設(shè)及高危HPV特異性蛋白標(biāo)志物免疫組 化質(zhì)控片和試劑盒。
【背景技術(shù)】
[0002] 子宮頸癌是我國(guó)第二大女性惡性腫瘤，也是唯一病因明確的腫瘤。大量研究證明， 高危型人乳頭瘤病毒化Uman papi Iloma virus,HPV)是導(dǎo)致宮頸癌的元兇，99.7%的宮頸 癌樣本中都可檢出高危HPV DNA。宮頸癌的致癌病毒主要是高危HPV16和HPV18。
[0003] 宮頸病變進(jìn)展為宮頸癌是高危HPV持續(xù)感染的結(jié)果，大約需要10年左右的時(shí)間，病 變過(guò)程包括高危HPV持續(xù)感染、宮頸上皮內(nèi)瘤變（cervical intraepitheIiumneoplasia, CIN)、原位癌、浸潤(rùn)癌。子宮頸癌中鱗狀細(xì)胞癌（squamous cells carcinoma, see)占95%， 臨床治愈率I期可達(dá)80-90%，II期60-70%，III期40-50%，IV期僅為10%，因此子宮頸癌前 病變包括宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)的早期診斷和防治，對(duì)控制子宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后具 有重要意義。
[0004] 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部2011年7月發(fā)布《子宮頸癌診斷》中指出診斷應(yīng)采用階 梯"程序，即：宮頸脫落細(xì)胞檢測(cè)、陰道鏡檢查、病理診斷，并W病理診斷作為臨床金標(biāo)準(zhǔn)。但 由于形態(tài)學(xué)判讀的病理檢測(cè)具有很強(qiáng)的主觀性，即使是在病理醫(yī)生嚴(yán)格受訓(xùn)的美國(guó)，對(duì)宮 頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)的判讀也往往存在不一致。而對(duì)CIN進(jìn)行準(zhǔn)確的分級(jí)，對(duì)于臨床診療決 策至關(guān)重要，因此臨床實(shí)際應(yīng)用中越來(lái)越重視W蛋白標(biāo)志物為祀標(biāo)的檢測(cè)手段，即免疫組 織化學(xué)染色方法。
[0005] 在進(jìn)行免疫組化染色時(shí)，必須要保證是抗原與相應(yīng)抗體的特異性反應(yīng)，保證操作 過(guò)程準(zhǔn)確無(wú)誤，因此一般建議每次試驗(yàn)過(guò)程中都要設(shè)置對(duì)照試驗(yàn)組，對(duì)染色結(jié)果的解讀也 要建立在對(duì)照試驗(yàn)結(jié)果成立的基礎(chǔ)上。常用的對(duì)照試驗(yàn)包括陽(yáng)性對(duì)照(含有待測(cè)抗原）、陰 性對(duì)照(不含待測(cè)抗原）、空白對(duì)照（用緩沖液替代一抗)等，但實(shí)際操作中往往由于無(wú)恰當(dāng) 的對(duì)照樣本，或?qū)φ諛颖救鄙俣÷粤藢?duì)照試驗(yàn)。
[0006] 因此，本領(lǐng)域迫切需要開(kāi)發(fā)質(zhì)控穩(wěn)定、能夠有效提高宮頸癌免疫組化準(zhǔn)確性、針對(duì) 高危HPV(尤其是HPV16/18)特異性蛋白標(biāo)志物免疫組化質(zhì)控片。 【實(shí)用新型內(nèi)容】
[0007] 本實(shí)用新型的目的就是提供一種質(zhì)控穩(wěn)定、能夠有效提高宮頸癌免疫組化準(zhǔn)確 性、針對(duì)高危HPV(尤其是HPV16/18)特異性蛋白標(biāo)志物免疫組化質(zhì)控片。
[000引在本實(shí)用新型的第一方面，提供了一種高危HPV特異性蛋白標(biāo)志物免疫組化質(zhì)控 片，所述質(zhì)控片包括：
[0009] (i)用于免疫組化檢測(cè)HPV16特異性蛋白標(biāo)志物的第一質(zhì)控片，所述第一質(zhì)控片包 括第一載玻片，W及位于所述第一載玻片的一個(gè)主表面上的第一陽(yáng)性質(zhì)控區(qū)和第一陰性質(zhì) 控區(qū)，其中，所述第一陽(yáng)性質(zhì)控區(qū)包括HPV16蛋白陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞石蠟切片，W及所述第一陰 性質(zhì)控區(qū)包括HPV16蛋白陰性腫瘤細(xì)胞石蠟切片;和/或
[0010] (ii)用于免疫組化檢測(cè)HPV18特異性蛋白標(biāo)志物的第二質(zhì)控片，所述第二質(zhì)控片 包括第二載玻片，W及位于所述第二載玻片的一個(gè)主表面上的第二陽(yáng)性質(zhì)控區(qū)和第二陰性 質(zhì)控區(qū)，其中，所述第二陽(yáng)性質(zhì)控區(qū)包括HPV18蛋白陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞石蠟切片，W及所述第二 陰性質(zhì)控區(qū)包括HPV18蛋白陰性腫瘤細(xì)胞石蠟切片。
[0011] 在另一優(yōu)選例中，所述第一陽(yáng)性質(zhì)控區(qū)的石蠟切片的厚度化1和所述第一陰性質(zhì) 控區(qū)中的石蠟切片的厚度dnl是相等或基本相等的，
[0012] 在另一優(yōu)選例中，所述第二陽(yáng)性質(zhì)控區(qū)的石蠟切片的厚度化2和所述第二陰性質(zhì) 控區(qū)中的石蠟切片的厚度dn2是相等或基本相等的。
[0013] 在另一優(yōu)選例中，所述第一陽(yáng)性質(zhì)控區(qū)的石蠟切片的厚度化1、所述第一陰性質(zhì)控 區(qū)中的石蠟切片的厚度dnl、所述第二陽(yáng)性質(zhì)控區(qū)的石蠟切片的厚度化2和所述第二陰性質(zhì) 控區(qū)中的石蠟切片的厚度dn2均為3-5微米，
[0014] 較佳地，dpl、dnl、dp巧日血2均為3-4微米。
[0015] 在另一優(yōu)選例中，所述第一陽(yáng)性質(zhì)控區(qū)的石蠟切片的面積SpU所述第一陰性質(zhì)控 區(qū)中的石蠟切片的面積SnU所述第二陽(yáng)性質(zhì)控區(qū)的石蠟切片的面積Sp2和所述第二陰性質(zhì) 控區(qū)中的石蠟切片的面積Sn2均為9-40mm2。
[0016] 較佳地，5口1、5111、5口2和5112均為20-251111112。
[0017] 在另一優(yōu)選例中，所述第一載玻片的具有第一磨砂區(qū)和第一光滑玻璃區(qū)，并且所 述第二載玻片的具有第二磨砂區(qū)和第二光滑玻璃區(qū)。
[0018] 在另一優(yōu)選例中，所述第一載玻片和所述第二載玻片均為光滑玻璃片。
[0019] 在另一優(yōu)選例中，所述第一磨砂區(qū)和所述第二磨砂區(qū)設(shè)有不同的多種顏色，用W 區(qū)別兩種質(zhì)控片。
[0020] 在另一優(yōu)選例中，在所述HPV16蛋白陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞石蠟切片中，包括針對(duì)巧中或巧中 或多種HPV16蛋白陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞的石蠟切片。
[0021 ]在另一優(yōu)選例中，在所述HPV18蛋白陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞石蠟切片中，包括針對(duì)巧中或巧中 或多種HPV18蛋白陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞的石蠟切片。
[0022] 在另一優(yōu)選例中，所述第一陰性質(zhì)控區(qū)和所述第二陰性質(zhì)控區(qū)設(shè)有相同的HPV蛋 白陰性腫瘤細(xì)胞的石蠟切片。
[0023] 在另一優(yōu)選例中，所述第一陰性質(zhì)控區(qū)和所述第二陰性質(zhì)控區(qū)HPV蛋白陰性腫瘤 細(xì)胞，包括1種或巧巾或多種高危HPV蛋白陰性腫瘤細(xì)胞的石蠟切片。
[0024] 在本實(shí)用新型的第二方面，提供了一種用于免疫組化檢測(cè)高危HPV特異性蛋白標(biāo) 志物的試劑盒，所述試劑盒包含：
[002引一容器，W及
[0026] 位于所述容器中的在本實(shí)用新型的第一方面的所述高危HPV特異性蛋白標(biāo)志物免 疫組化質(zhì)控片。
[0027] 在另一優(yōu)選例中，所述容器至少包括所述質(zhì)控片中的一個(gè)。
[00%]在另一優(yōu)選例中，所述的試劑盒還包括:卡位，且每一個(gè)所述卡位容納一個(gè)所述載 玻片并且安裝于所述容器上。
[0029]在另一優(yōu)選例中，所述容器至少包括一個(gè)卡位。
[0030] 應(yīng)理解，在本實(shí)用新型范圍內(nèi)中，本實(shí)用新型的上述各技術(shù)特征和在下文(如實(shí)施 例）中具體描述的各技術(shù)特征之間都可W互相組合，從而構(gòu)成新的或優(yōu)選的技術(shù)方案。限于 篇幅，在此不再一一累述。
【附圖說(shuō)明】

[0031] 圖1顯示了本實(shí)用新型的一個(gè)實(shí)例中的第一質(zhì)控片和第二質(zhì)控片的結(jié)構(gòu)。
[0032] 圖2顯示了含有圖1中的質(zhì)控片的試劑盒。
[0033] 各標(biāo)識(shí)如下：
[0034] 2、第一質(zhì)控片的載玻片；
[0035] 3、第二質(zhì)控片的載玻片；
[0036] 10、盒體；
[0037] 20、HPV16特異性蛋白標(biāo)志物免疫組化質(zhì)控片載玻片；
[003引 21、第一陽(yáng)性質(zhì)控區(qū)；
[0039] 22、第一陰性質(zhì)控區(qū)；
[0040] 23、第一磨砂區(qū)；
[0041] 24、第一光滑玻璃區(qū)；
[0042] 30、HPV18特異性蛋白標(biāo)志物免疫組化質(zhì)控片載玻片；
[0043] 31、第二陽(yáng)性質(zhì)控區(qū)；
[0044] 32、第二陰性質(zhì)控區(qū)；
[0045] 33、第二磨砂區(qū)；
[0046] 34、第二光滑玻璃區(qū)。
【具體實(shí)施方式】
[0047] 本發(fā)明人經(jīng)過(guò)廣泛而深入的研究，首次開(kāi)發(fā)了一種用于高危HPV的特異性蛋白標(biāo) 志物免疫組化質(zhì)控片。該質(zhì)控片與實(shí)際進(jìn)行特異性蛋白標(biāo)志物免疫組化檢測(cè)中染色后的免 疫組化樣本具有高度的一致性，故可作為用作免疫組化診斷過(guò)程的質(zhì)控對(duì)照，提高檢測(cè)準(zhǔn) 確性。在此基礎(chǔ)上完成了本實(shí)用新型。
[004引質(zhì)控片
[0049] 本實(shí)用新型提供了用于高危HPV的特異性蛋白標(biāo)志物免疫組化質(zhì)控片。
[0050] 在優(yōu)選例中，本實(shí)用新型的質(zhì)控片包括第一質(zhì)控片和第二質(zhì)控片，其中第一質(zhì)控 片用于HPV16,而第二質(zhì)控片用于HPV18。
[0051] 在本實(shí)用新型中，一種典型的用于HPV16特異性蛋白標(biāo)志物免疫組化的第一質(zhì)控 片包含：
[0052] 第一載玻片，在第一載玻片的一個(gè)表面設(shè)有第一陽(yáng)性質(zhì)控區(qū)和第一陰性質(zhì)控區(qū)；
[0053] 其中，所述第一陽(yáng)性質(zhì)控區(qū)設(shè)有HPV16蛋白陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞石蠟切片；
[0054] 并且，所述第一陰性質(zhì)控區(qū)設(shè)有HPV蛋白陰性腫瘤細(xì)胞石蠟切片。
[0055] 優(yōu)選地，在所述第一陽(yáng)性質(zhì)控區(qū)和第一陰性質(zhì)控區(qū)，各石蠟切片是被蠟封的。
[0056] 在本實(shí)用新型中，一種典型的用于HPV18特異性蛋白標(biāo)志物免疫組化的第二質(zhì)控 片包含：
[0057] 第二載玻片，在第二載玻片的一個(gè)表面設(shè)有第二陽(yáng)性質(zhì)控區(qū)和第二陰性質(zhì)控區(qū)；
[0058] 其中，所述第二陽(yáng)性質(zhì)控區(qū)設(shè)有HPV18蛋白陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞石蠟切片。
[0059] 并且，所述第二陰性質(zhì)控區(qū)設(shè)有HPV蛋白陰性腫瘤細(xì)胞石蠟切片。
[0060] 優(yōu)選地，在所述第二陽(yáng)性質(zhì)控區(qū)和第二陰性質(zhì)控區(qū)，各石蠟切片是被蠟封的。
[0061] 在本實(shí)用新型中，適用的載玻片沒(méi)有特別限制，代表性例子包括(但并不限于）：玻 璃片、塑料片;優(yōu)選的光滑玻璃片。
[0062] 在另一優(yōu)選例中，所述的載玻片表面一側(cè)或兩側(cè)具有磨砂區(qū)。
[0063] 在另一優(yōu)選例中，所述的載玻片的質(zhì)控區(qū)為光滑的和透明的。
[0064] 在另一優(yōu)選例中，第一質(zhì)控片和第二質(zhì)控片均設(shè)有位于載玻片的磨砂區(qū)，并且在 所述磨砂區(qū)設(shè)有不同的多種顏色，用W區(qū)別兩種質(zhì)控片。
[0065] 在另一優(yōu)選例中，在所述的HPV16蛋白陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞石蠟切片中，包括針對(duì)1種或2 種或多種HPV16蛋白陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞的石蠟切片。
[0066] 在另一優(yōu)選例中，在所述的HPV18蛋白陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞石蠟切片中，包括針對(duì)1種或2 種或多種HPV18蛋白陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞的石蠟切片。
[0067] 在另一優(yōu)選例中，所述第一陰性質(zhì)控區(qū)和所述第二陰性質(zhì)控區(qū)的HPV蛋白陰性腫 瘤細(xì)胞包括1種或巧巾或多種高危HPV蛋白陰性腫瘤細(xì)胞的石蠟切片。
[006引在另一優(yōu)選例中，本實(shí)用新型的高危HPV16/18特異性蛋白標(biāo)志物免疫組化診斷宮 頸癌的質(zhì)控片，包括:兩個(gè)載玻片，載玻片表面具有腫瘤細(xì)胞石蠟切片;載玻片為光滑玻璃 片或一邊具有磨砂，磨砂處為多種顏色用W區(qū)別兩種質(zhì)控片，另一邊為光滑的玻璃片;腫瘤 細(xì)胞為表達(dá)HPV16/18特異性蛋白標(biāo)志物的腫瘤細(xì)胞及不表達(dá)HPV蛋白的腫瘤細(xì)胞。
[0069] 本實(shí)用新型的質(zhì)控片解決現(xiàn)存宮頸癌高危HPV 16/18特異性蛋白標(biāo)志物免疫組化 診斷過(guò)程中無(wú)質(zhì)控對(duì)照或質(zhì)控對(duì)照樣本缺乏的問(wèn)題，對(duì)工作人員的操作起到監(jiān)督作用。
[0070] 試劑盒
[0071] 另一方面，本實(shí)用新型還提供了免疫組化檢測(cè)高危HPV特異性蛋白標(biāo)志物的試劑 盒，所述試劑盒包含一個(gè)容器、一個(gè)或多個(gè)(如兩個(gè))載玻片卡位W及位于容器中的上述高 危HPV特異性蛋白標(biāo)志物免疫組化質(zhì)控片。
[0072] 在另一優(yōu)選例中，所述的試劑盒還包括使用說(shuō)明書(shū)。
[0073] 檢測(cè)方法
[0074] 典型地，使用本實(shí)用新型的免疫組化試劑盒質(zhì)控片進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，根據(jù)檢測(cè)HPV型別 化PV16和/或HPV18)，選擇相應(yīng)的質(zhì)控片，配合免疫組織化學(xué)染色試劑第一抗體及配套DAB 顯色試劑盒進(jìn)行檢測(cè)。配套DAB顯色試劑盒由W下幾部分組成：1)試劑1:封閉液;2)試劑2: 酶聯(lián)二抗;3)試劑3: DAB顯色系統(tǒng)包括DAB緩沖液和DAB色原。
[0075] 通常包括W下步驟：
[0076] 1、石蠟切片的脫蠟處理
[0077] 1)切片放在60度溫箱中30分鐘；
[007引2)在二甲苯(1)和(2)中各浸泡10分鐘；
[0079] 3)在無(wú)水乙醇，95 %乙醇，85 %乙醇，75 %乙醇中各浸泡5分鐘；
[0080] 4)在純化水中浸泡5分鐘。
[0081] 2、抗原修復(fù)
[0082] 將樣本放入到巧樣酸熱修復(fù)液中，高壓修復(fù)2分鐘，手動(dòng)放氣連同修復(fù)液一起取 出，室溫冷卻30分鐘。
[0083] 3、免疫組化染色
[0084] 1)樣本用純化水潤(rùn)洗兩遍，浸入到IXPBS中洗涂?jī)纱?，每?分鐘；
[00化]2)加入IOOul 3%肥02,室溫濕盒封閉10分鐘；
[0086] 3)1 XPBS中浸洗S次，每次3分鐘后甩干擦凈，在樣本處滴加3滴試劑1，室溫濕盒 封閉20分鐘；
[0087] 4)甩干擦凈，滴加2滴第一抗體，室溫濕盒解育60分鐘；
[0088] 5)1 XPBS浸洗五次，每次3分鐘后甩干擦凈，滴加2滴試劑2,室溫濕盒解育30分鐘；
[0089] 6) IX PBS浸洗五次，每次3分鐘后甩干擦凈，取出試劑盒中的試劑盒3配制DAB顯色 液，每個(gè)載玻片上樣本處加入IOOul，室溫處理3分鐘;蒸饋水潤(rùn)洗5分鐘；
[0090] 7)蘇木素復(fù)染1-2分鐘，自來(lái)水沖洗干凈后，在自來(lái)水中浸泡10分鐘；
[0091] 8)在75 %乙醇，85 %乙醇，95 %乙醇，無(wú)水乙醇中依次浸泡5分鐘，在二甲苯（1)和 (2)中各浸泡5分鐘；
[0092] 9)中性樹(shù)膠封片，顯微鏡下觀察結(jié)果。
[0093] 染色結(jié)果解釋：當(dāng)陽(yáng)性區(qū)細(xì)胞胞質(zhì)呈現(xiàn)棟色染色，核為藍(lán)紫色，陰性區(qū)細(xì)胞呈現(xiàn)藍(lán) 紫色時(shí)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效，否則實(shí)驗(yàn)無(wú)效。
[0094] 本實(shí)用新型的主要優(yōu)點(diǎn)包括：
[00M] (a)為宮頸癌HPV16/18特異性蛋白標(biāo)志物免疫組化檢測(cè)提供一種質(zhì)控片，且質(zhì)控 片來(lái)源穩(wěn)定，供給充足，并能很好的質(zhì)控，提高了免疫組化的工作效率。
[0096] (b)通過(guò)制備好的不同質(zhì)控片與新制作的切片同時(shí)進(jìn)行免疫組化，可W檢測(cè)出 HPV16/18特異性蛋白標(biāo)志物免疫組化試劑是否有效。
[0097] (C)通過(guò)制備好的質(zhì)控片與新制作的切片同時(shí)進(jìn)行免疫組化，能夠?qū)Σ僮鞑襟E進(jìn) 行監(jiān)督和檢驗(yàn)。
[0098] 下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本實(shí)用新型。應(yīng)理解，運(yùn)些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本 實(shí)用新型而不用于限制本實(shí)用新型的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通 常按照常規(guī)條件，例如Sambrook等人，分子克?。簩?shí)驗(yàn)室手冊(cè)（New York = Cold Spring 化rbor Laboratory Press, 1989)中所述的條件，或按照制造廠商所建議的條件。除非另外 說(shuō)明，否則百分比和份數(shù)是重量百分比和重量份數(shù)。
[0099] 材料
[0100] 實(shí)施例中細(xì)胞株均為市售的細(xì)胞株：
[0101] 宮頸癌腫瘤細(xì)胞模型化SkK人宮頸癌細(xì)胞，含有完整的HPV16[每個(gè)細(xì)胞大約600 個(gè)拷貝]。ATC:C?Number: CRkl550?)為HPV16蛋白陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞、
[0102] C-33A細(xì)胞(人宮頸癌細(xì)胞，HPV DNA、RNA陰性。ATG炒Number:HTB-31?)為HPV陰性 腫瘤細(xì)胞；
[0103] 化Ia細(xì)胞(含有完整的HPVl 8序列，ATC護(hù)Number: CCk2?)為冊(cè)Vl 8蛋白陽(yáng)性腫瘤 細(xì)胞。
[0104] 實(shí)施例1 [010引質(zhì)巧片
[0106] I、細(xì)胞收集與固定
[0107] 分別收集處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的化Ski，化Ia，C-33A細(xì)胞，采用PBS漂洗一遍，200化pm 離屯、10分鐘后，小屯、棄掉上清，沿管壁緩緩加入5倍其體積的10%中性福爾馬林中固定2小 時(shí)，然后再2000rpm離屯、10分鐘，倒掉上清液，沿管壁緩緩加入5倍其體積的95%乙醇固定2 小時(shí)。
[010引 2、包埋與切片
[0109] 用擦鏡紙包好細(xì)胞沉淀，放入包埋盒內(nèi)按照常規(guī)方法進(jìn)行包埋。切片，厚度3-4皿， 分別置于對(duì)應(yīng)的載玻片質(zhì)控區(qū)，低溫干燥條件下保存?zhèn)溆谩?br>[0110] 在一優(yōu)選實(shí)施例中，所述的腫瘤細(xì)胞石蠟切片面積大小為9-40mm2,厚度為3-5WI1。
[0111] 較佳地，所述的腫瘤細(xì)胞石蠟切片面積大小為20-25mm2,厚度為3-4M1.
[0112] 實(shí)施例2 [011引試劑盒
[0114] 參見(jiàn)圖2,盒體10為長(zhǎng)方體塑料盒，盒體10內(nèi)包含兩個(gè)卡位20和30,分別用于容納 圖1所示的第一質(zhì)控片的載玻片2和第二質(zhì)控片的載玻片3。在本實(shí)施例中，采用的載玻片大 小為25 X 75mm。載玻片2和3的一邊為磨砂區(qū)，另一邊為光滑玻璃區(qū)。其中載玻片2的磨砂區(qū) 為白色，載玻片3的磨砂區(qū)為藍(lán)色。
[0115] 載玻片2包含載玻片第一磨砂區(qū)23和第一光滑玻璃區(qū)24。第一光滑玻璃區(qū)24的表 面包含第一陽(yáng)性質(zhì)控區(qū)21和第一陰性質(zhì)控區(qū)22。其中，第一陽(yáng)性質(zhì)控區(qū)21含化Ski腫瘤細(xì) 胞石蠟切片。
[0116] 載波片3包含載玻片第二磨砂區(qū)33和第二光滑玻璃區(qū)34。第二光滑玻璃區(qū)34的表 面包含第二陽(yáng)性質(zhì)控區(qū)31和第二陰性質(zhì)控區(qū)32。其中，第二陽(yáng)性質(zhì)控區(qū)31含化Ia腫瘤細(xì)胞 石蠟切片。
[0117] 第一陰性質(zhì)控區(qū)22和第二陰性質(zhì)控區(qū)32均含C-33A腫瘤細(xì)胞石蠟切片。
[011引實(shí)施例3
[0119]檢測(cè)應(yīng)用
[0120] A.提供一用于福爾馬林固定，石蠟包埋宮頸組織檢測(cè)的免疫組織化學(xué)染色試劑第 一抗體及配套DAB顯色試劑盒，該試劑盒由W下幾部分組成：1)試劑1:封閉液;2)試劑2:酶 聯(lián)二抗;3)試劑3: DAB顯色系統(tǒng)包括DAB緩沖液和DAB色原。
[0121] B.實(shí)施步驟：
[0122] 1、石蠟切片的脫蠟處理；
[0123] 1)切片放在60度溫箱中30分鐘；
[0124] 2)在二甲苯(1)和(2)中各浸泡10分鐘；
[01巧]3)在無(wú)水乙醇，95 %乙醇，85 %乙醇，75 %乙醇中各浸泡5分鐘；
[0126] 4)在純化水中浸泡5分鐘。
[0127] 2、抗原修復(fù)
[0128] 將樣本放入到巧樣酸熱修復(fù)液中，高壓修復(fù)2分鐘，手動(dòng)放氣連同修復(fù)液一起取 出，室溫冷卻30分鐘。
[01巧]3、免疫組化染色
[0130] 1)樣本用純化水潤(rùn)洗兩遍，浸入到IXPBS中洗涂?jī)纱?，每?分鐘；
[0131] 2)加入IOOul 3%肥02,室溫濕盒封閉10分鐘；
[0132] 3)1 XPBS中浸洗S次，每次3分鐘后甩干擦凈，在樣本處滴加3滴試劑1，室溫濕盒 封閉20分鐘；
[0133] 4)甩干擦凈，滴加2滴第一抗體，室溫濕盒解育60分鐘；
[0134] 5) 1 X PBS浸洗五次，每次3分鐘后甩干擦凈，滴加2滴試劑2，室溫濕盒解育30分鐘；
[0135] 6) 1 X PBS浸洗五次，每次3分鐘后甩干擦凈，取出試劑盒中的試劑盒3配制DAB顯色 液，每個(gè)載玻片上樣本處加入IOOul，室溫處理3分鐘;蒸饋水潤(rùn)洗5分鐘；
[0136] 7)蘇木素復(fù)染1-2分鐘，自來(lái)水沖洗干凈后，在自來(lái)水中浸泡10分鐘；
[0137] 8)在75 %乙醇，85 %乙醇，95 %乙醇，無(wú)水乙醇中依次浸泡5分鐘，在二甲苯（1)和 (2)中各浸泡5分鐘；
[0138] 9)中性樹(shù)膠封片，顯微鏡下觀察結(jié)果。
[0139] 染色結(jié)果解釋：當(dāng)陽(yáng)性區(qū)細(xì)胞胞質(zhì)呈現(xiàn)棟色染色，核為藍(lán)紫色，陰性區(qū)細(xì)胞呈現(xiàn)藍(lán) 紫色時(shí)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效，否則實(shí)驗(yàn)無(wú)效。
[0140] 對(duì)50組樣品進(jìn)行檢測(cè)，當(dāng)采用本實(shí)用新型的質(zhì)控片產(chǎn)品作為對(duì)照時(shí)，判斷準(zhǔn)確率 達(dá)到100 %。
[0141] 對(duì)同樣50組進(jìn)行檢測(cè)，當(dāng)不采用本實(shí)用新型的質(zhì)控片產(chǎn)品作為對(duì)照時(shí)，判斷準(zhǔn)確 率達(dá)到90%，誤判率10 %。
[0142] 在本實(shí)用新型提及的所有文獻(xiàn)都在本申請(qǐng)中引用作為參考，就如同每一篇文獻(xiàn)被 單獨(dú)引用作為參考那樣。此外應(yīng)理解，在閱讀了本實(shí)用新型的上述講授內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技 術(shù)人員可W對(duì)本實(shí)用新型作各種改動(dòng)或修改，運(yùn)些等價(jià)形式同樣落于本申請(qǐng)所附權(quán)利要求 書(shū)所限定的范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種高危HPV特異性蛋白標(biāo)志物免疫組化質(zhì)控片，其特征在于，所述質(zhì)控片包括： (i) 用于免疫組化檢測(cè)HPV16特異性蛋白標(biāo)志物的第一質(zhì)控片，所述第一質(zhì)控片包括第 一載玻片，以及位于所述第一載玻片的一個(gè)主表面上的第一陽(yáng)性質(zhì)控區(qū)和第一陰性質(zhì)控 區(qū)，其中，所述第一陽(yáng)性質(zhì)控區(qū)包括HPV16蛋白陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞石蠟切片，以及所述第一陰性 質(zhì)控區(qū)包括HPV16蛋白陰性腫瘤細(xì)胞石蠟切片;和/或 (ii) 用于免疫組化檢測(cè)HPV18特異性蛋白標(biāo)志物的第二質(zhì)控片，所述第二質(zhì)控片包括 第二載玻片，以及位于所述第二載玻片的一個(gè)主表面上的第二陽(yáng)性質(zhì)控區(qū)和第二陰性質(zhì)控 區(qū)，其中，所述第二陽(yáng)性質(zhì)控區(qū)包括HPV18蛋白陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞石蠟切片，以及所述第二陰性 質(zhì)控區(qū)包括HPV18蛋白陰性腫瘤細(xì)胞石蠟切片。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的質(zhì)控片，其特征在于，所述第一陽(yáng)性質(zhì)控區(qū)的石蠟切片的厚度 dpi和所述第一陰性質(zhì)控區(qū)中的石蠟切片的厚度dnl是相等的，和/或所述第二陽(yáng)性質(zhì)控區(qū) 的石蠟切片的厚度dp2和所述第二陰性質(zhì)控區(qū)中的石蠟切片的厚度dn2是相等的。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的質(zhì)控片，其特征在于，所述第一陽(yáng)性質(zhì)控區(qū)的石蠟切片的厚度 dpi、所述第一陰性質(zhì)控區(qū)中的石蠟切片的厚度dnl、所述第二陽(yáng)性質(zhì)控區(qū)的石蠟切片的厚 度dp2和所述第二陰性質(zhì)控區(qū)中的石蠟切片的厚度dn2均為3-5微米，和/或所述第一陽(yáng)性質(zhì) 控區(qū)的石蠟切片的面積Spl、所述第一陰性質(zhì)控區(qū)中的石蠟切片的面積Snl、所述第二陽(yáng)性 質(zhì)控區(qū)的石蠟切片的面積Sp2和所述第二陰性質(zhì)控區(qū)中的石蠟切片的面積Sn2均為9-40mm 2〇4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的質(zhì)控片，其特征在于，所述第一載玻片的具有第一磨砂區(qū)和第 一光滑玻璃區(qū)，并且所述第二載玻片的具有第二磨砂區(qū)和第二光滑玻璃區(qū)。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的質(zhì)控片，其特征在于，所述第一磨砂區(qū)和所述第二磨砂區(qū)設(shè)有 不同的多種顏色。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的質(zhì)控片，其特征在于，在所述HPV16蛋白陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞石蠟切 片中，包括針對(duì)1種或2種或多種HPV16蛋白陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞的石蠟切片。7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的質(zhì)控片，其特征在于，在所述HPV18蛋白陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞石蠟切 片中，包括針對(duì)1種或2種或多種HPV18蛋白陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞的石蠟切片。8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的質(zhì)控片，其特征在于，所述第一陰性質(zhì)控區(qū)和所述第二陰性質(zhì) 控區(qū)設(shè)有相同的HPV蛋白陰性腫瘤細(xì)胞的石蠟切片。9. 一種用于免疫組化檢測(cè)高危HPV特異性蛋白標(biāo)志物的試劑盒，其特征在于，所述試劑 盒包含： 一容器，以及 位于所述容器中的權(quán)利要求1所述高危HPV特異性蛋白標(biāo)志物免疫組化質(zhì)控片。10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒還包括:卡位，且每一個(gè) 所述卡位容納一個(gè)所述載玻片并且安裝于所述容器上。
【文檔編號(hào)】G01N33/68GK205720252SQ201620546139
【公開(kāi)日】2016年11月23日
【申請(qǐng)日】2016年6月7日
【發(fā)明人】常小迦, 韓鳳麗, 劉巖, 施麗君
【申請(qǐng)人】艾托金生物醫(yī)藥（蘇州）有限公司