本發(fā)明涉及煙草及制品檢測(cè)領(lǐng)域，具體的說是一種自動(dòng)定氮儀測(cè)定煙草及制品中蛋白質(zhì)的方法。
背景技術(shù)：
蛋白質(zhì)是存在于細(xì)胞中的一種含氮的生物高分子化合物，在生命現(xiàn)象中起著決定性的作用，煙葉中的氮主要以蛋白質(zhì)的形式存在，并且含量豐富。煙葉中的蛋白質(zhì)在燃燒時(shí)是喹啉、HCN和其它幾種有害物質(zhì)的前體物質(zhì)，并且有燒羽毛的氣味，會(huì)使煙氣苦味增加，對(duì)人體健康和煙葉吸食質(zhì)量都存在不良影響，因而準(zhǔn)確高效檢測(cè)煙草及制品中蛋白質(zhì)含量是煙草質(zhì)量檢測(cè)中的一項(xiàng)重要工作。
蛋白質(zhì)的測(cè)定方法有多種，受煙草質(zhì)量安全評(píng)價(jià)及樣品基質(zhì)等因素的影響，目前煙草中蛋白質(zhì)含量測(cè)定方法主要有克達(dá)爾法（YC/T 166-2003 煙草和煙草制品 總蛋白質(zhì)含量的測(cè)定）和連續(xù)流動(dòng)法（YC /T 249-2008 煙草及煙草制品 蛋白質(zhì)的測(cè)定 連續(xù)流動(dòng)法），其中克達(dá)爾法所需儀器設(shè)備簡(jiǎn)單，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確，但在檢測(cè)中采用手工操作,工作勞動(dòng)強(qiáng)度大，檢測(cè)周期長(zhǎng)，批量分析能力弱，同時(shí)在樣品消化時(shí)采用氧化汞等作為催化劑，對(duì)人體和環(huán)境均存在安全風(fēng)險(xiǎn)。連續(xù)流動(dòng)法相對(duì)克達(dá)爾法工作勞動(dòng)強(qiáng)度有所減少，批量分析能力有所增加，但連續(xù)流動(dòng)儀價(jià)格昂貴，成本和運(yùn)行費(fèi)用高，同時(shí)在消化時(shí)采用氧化汞作等為催化劑，在檢測(cè)時(shí)還需要亞硝基鐵氰化鈉、水楊酸鈉、次氯酸鈉、酒石酸鉀鈉、磷酸氫二鈉等多種試劑，對(duì)人體和環(huán)境也存在安全風(fēng)險(xiǎn)。
自動(dòng)定氮儀依據(jù)凱氏定氮法的原理設(shè)計(jì)，適用于糧食、食品、乳制品、飲料、飼料、土壤、水、藥物、沉淀物和化學(xué)品等中的氨氮、蛋白質(zhì)氮等含量的檢測(cè)。由于自動(dòng)定氮儀實(shí)現(xiàn)了分析過程自動(dòng)化，減少了人為操作，降低了工作勞動(dòng)強(qiáng)度，具有操作簡(jiǎn)便、快速、高效，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確度高，精密度好，以及成本和運(yùn)行費(fèi)用合理，易于推廣應(yīng)用等特點(diǎn)，在糧食、飼料等蛋白質(zhì)測(cè)定方面得到了廣泛應(yīng)用。
針對(duì)目前煙草及制品中蛋白質(zhì)測(cè)定方法中存在的工作勞動(dòng)強(qiáng)度大，檢測(cè)周期長(zhǎng)，對(duì)人體和環(huán)境存在安全風(fēng)險(xiǎn)等問題，通過改變樣品消化時(shí)的催化劑種類，采用凱氏定氮法，使用自動(dòng)定氮儀，實(shí)現(xiàn)準(zhǔn)確、高效、安全測(cè)定煙草及制品中的蛋白質(zhì)含量。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
一種自動(dòng)定氮儀測(cè)定煙草及制品中蛋白質(zhì)的方法。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：
一種自動(dòng)定氮儀測(cè)定煙草及制品中蛋白質(zhì)的方法，包括以下步驟：
1）準(zhǔn)確稱取通過0.45mm篩孔的煙草及制品樣品0.5000g-1.0000g(蛋白質(zhì)含量在30 mg -60mg左右)于300mL錐形瓶?jī)?nèi)，加人75mL0.5%乙酸溶液，加熱保持沸騰 15min；
2）將步驟1）所得溶液迅速用直徑為150mm的定量濾紙?jiān)谡婵粘闉V裝置內(nèi)進(jìn)行抽濾，并用0.5%乙酸溶液沖洗錐形瓶和沉淀物至濾液無色，然后轉(zhuǎn)移濾紙和沉淀于體積為250mL的消化管中，所述真空抽濾裝置包括抽濾瓶，抽濾瓶上部設(shè)有真空泵接口，抽濾瓶下部設(shè)有排廢液口，抽濾瓶頂部設(shè)有活塞連接布氏漏斗，所述布氏漏斗為120mm；
3）向消化管中加入1.5g K2SO4和0.15g CuSO4?5H2O，再加入15mL濃硫酸，將消化管置于消化器上，升溫到420℃后，穩(wěn)溫1小時(shí)，消化結(jié)束；
4）待消化管溫度冷卻至室溫后，使用硫酸或鹽酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液，設(shè)定加水50mL,氫氧化鈉溶液70mL和硼酸吸收溶液30mL，將消化管置于自動(dòng)定氮儀上測(cè)定蛋白質(zhì)含量。
本發(fā)明所具有優(yōu)點(diǎn)：
本發(fā)明依據(jù)煙草質(zhì)量安全評(píng)價(jià)及樣品基質(zhì)特性等因素，在煙草及制品蛋白質(zhì)測(cè)定中，首次采用凱氏定氮法，使用自動(dòng)定氮儀測(cè)定，減少了人為操作，降低了工作勞動(dòng)強(qiáng)度，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確度高，精密度好，易于推廣應(yīng)用，同時(shí)首次在煙草及制品蛋白質(zhì)測(cè)定中在樣品消化時(shí)采用K2SO4和CuSO4?5H2O作為催化劑，以及采用凱氏定氮法，減少了檢測(cè)過程其它試劑種類及用量，降低了檢測(cè)時(shí)的安全風(fēng)險(xiǎn)和環(huán)境污染，不僅僅對(duì)煙草及制品檢測(cè)領(lǐng)域蛋白質(zhì)測(cè)定具有重要意義，同時(shí)對(duì)其他領(lǐng)域和行業(yè)的樣品也具有很強(qiáng)的應(yīng)用價(jià)值。
附圖說明
圖1為本發(fā)明實(shí)施例提供的真空抽濾裝置示意圖
圖中1、抽濾瓶；2、真空泵接口；3、排液廢口；4、活塞；5、120mm布氏漏斗。
具體實(shí)施方式
下述非限制性實(shí)施例可以使本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員更全面地理解本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。
實(shí)施例1
①準(zhǔn)確稱取通過0.45mm篩孔的烤煙樣品0.5000g于300mL錐形瓶?jī)?nèi)，共稱取15份，樣品編號(hào)1-15，在7、8、9號(hào)中加入10.0mg酪蛋白標(biāo)準(zhǔn)樣品, 在10、11、12號(hào)中加入20.0mg酪蛋白標(biāo)準(zhǔn)樣品, 在13、14、15號(hào)中加入30.0mg酪蛋白標(biāo)準(zhǔn)樣品，同時(shí)做空白試驗(yàn)3份；
②每個(gè)錐形瓶加人75mL0.5%乙酸溶液，加熱保持沸騰 15min；
③迅速用直徑為150mm的定量濾紙?jiān)谡婵粘闉V裝置內(nèi)進(jìn)行抽濾，并用0.5%乙酸溶液沖洗錐形瓶和沉淀物至濾液無色，然后轉(zhuǎn)移濾紙和沉淀于體積為250mL的消化管中；
④向消化管中加入1.5g K2SO4和0.15g CuSO4?5H2O，再加入15mL濃硫酸；
⑤將消化管置于消化器上，升溫到420℃后，穩(wěn)溫1小時(shí)，消化結(jié)束；
⑥待消化管溫度冷卻至室溫后，使用硫酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液，設(shè)定加水50mL,氫氧化鈉溶液70mL和硼酸吸收溶液30mL，將消化管置于自動(dòng)定氮儀上測(cè)定蛋白質(zhì)質(zhì)量；
⑦蛋白質(zhì)測(cè)定結(jié)果見表1。
表1 煙草樣品測(cè)試數(shù)據(jù)結(jié)果表
注: 樣品的蛋白質(zhì)含量為6 次測(cè)定的平均值。
由表1中測(cè)試數(shù)據(jù)結(jié)果分析，樣品重復(fù)性相對(duì)相差1.54%,回收率在96.3%-98.4%間，滿足煙草及制品中蛋白質(zhì)定量分析測(cè)試需求，該方法適用于煙草及制品中蛋白質(zhì)的測(cè)定方法，加以實(shí)驗(yàn)適合農(nóng)業(yè)及其他領(lǐng)域內(nèi)類似樣品蛋白質(zhì)的測(cè)定方法。