本發(fā)明屬于藥物分析方法領(lǐng)域，具體是一種腎上腺皮質(zhì)激素氟米龍含量及有關(guān)物質(zhì)的分析方法。

背景技術(shù)：

目前，液相色譜是現(xiàn)代色譜技術(shù)中應(yīng)用最廣泛的分析方法之一，在化工、環(huán)境、生化、食品、農(nóng)業(yè)、藥物等多個領(lǐng)域的應(yīng)用較為普遍。

氟米龍是一種治療對糖皮質(zhì)激素敏感的眼瞼球結(jié)膜、角膜及其它眼前段組織的炎癥的特效藥；氟米龍的抗炎作用是氫化可的松的40倍，局部外用有抗炎、血管收縮及止癢作用。其結(jié)構(gòu)是如下：

目前關(guān)于氟米龍分析方法各藥典都有報道，其中美國藥典USP37、BP2011收錄了氟米龍含量和有關(guān)物質(zhì)的測定方法，都是采用高效液相色譜分析方法，以十八烷基硅烷鍵合硅膠柱為分離色譜柱，紫外檢測器檢測，檢測波長為254nm，

在USP37、BP2011收錄的氟米龍原料測定方法中：氟米龍含量和有關(guān)物質(zhì)采用相同流動相和色譜體系，流動相由甲醇和水組成，甲醇和水體積比為6:4，檢測波長：254nm，色譜柱：250mm×4.6mm，5μ，流速：2.0ml/min。該方法檢測的有關(guān)物質(zhì)為：

雜質(zhì)A：環(huán)氧物，結(jié)構(gòu)如下:

雜質(zhì)B：脫水物，結(jié)構(gòu)如下：

雜質(zhì)C：：溴羥物，結(jié)構(gòu)如下：

目前，對于氟米龍我們開發(fā)了新的工藝路線以及提純方式，我們在研究中發(fā)現(xiàn)藥典中現(xiàn)有的分析方法不適合我們新的合成工藝。用USP37、BP2011收錄的氟米龍含量和有關(guān)物質(zhì)的測定方法進(jìn)行檢測，存在很多問題，例如有些雜質(zhì)檢測不出；部分色譜峰之間的分離度達(dá)不到藥典要求，有些色譜峰峰型不好，流速比較大，柱壓偏高，易耗損色譜柱。

為了確?；驹纤庂|(zhì)量和公眾用藥安全，以及加快與國際標(biāo)準(zhǔn)接軌的步伐，提高我國藥品的國際競爭力，自2009年起，國家藥監(jiān)局加快推進(jìn)提高國家藥品標(biāo)準(zhǔn)行動計劃的實施，例如，2010版《中國藥典》大幅度提高了藥品的標(biāo) 準(zhǔn)，除在附錄中加強安全性檢查總體要求外，新版藥典在品種正文標(biāo)準(zhǔn)中也大幅度增加或完善安全性檢查項目，提高對高風(fēng)險品種的標(biāo)準(zhǔn)要求，加強對重金屬或有害元素，雜質(zhì)，溶劑殘留等方面的控制；2012年國家藥監(jiān)局頒布《藥品包裝材料與藥物相容性試驗指導(dǎo)原則》，對藥品包裝材料與藥物相容性考察做出了嚴(yán)格規(guī)定。

因此，迫切需要建立一種新的分析方法，不僅可以檢測舊的氟米龍合成工藝，同時也滿足新開發(fā)的合成工藝的含量及有關(guān)物質(zhì)得測定。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

為解決上述背景技術(shù)中提出的問題，本發(fā)明提出了一種腎上腺皮質(zhì)激素氟米龍含量及有關(guān)物質(zhì)的分析方法，操作簡單，雜質(zhì)分析準(zhǔn)確。

為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

一種腎上腺皮質(zhì)激素氟米龍含量及有關(guān)物質(zhì)的分析方法，具體方法如下：

(1)該方法采用的色譜條件：使用高效液相色譜儀，采用ZORBAX SB-C18色譜柱；紫外檢測器檢測；檢測波長為235nm-254nm；流速為1.0ml/min-2.0ml/min；流動相由A相和B相組成，流動相A是水，流動相B是乙腈或甲醇，照下表進(jìn)行梯度洗脫：

(2)氟米龍含量的測定方法如下：

先配制對照品溶液，精密稱取對照品5mg,置10ml容量瓶中，用乙腈-水(體積比例為80:20)稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液；

再配置供試品溶液，精密稱取對照品5mg,置10ml容量瓶中，用乙腈-水(體積比例為80:20)稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液；

最后，精密稱取對照品溶液和供試品溶液各10μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按照外標(biāo)法以峰面積計算，即得含量。

(2)有關(guān)物質(zhì)方法測定：

先配制供試品溶液，供試品溶液的配制同含量測定；

再配置1％自身對照溶液，精密量取供試品溶液1ml，置100ml容量瓶中，用乙腈-水(體積比例為80:20)稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液；

精密稱取對照品溶液和供試品溶液各10μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖。按照自生對照法計算各雜質(zhì)。

所述方法中的流動相B是甲醇或乙腈體系，優(yōu)選乙腈體系；

所述方法中的檢測時溫度為25-35℃，更優(yōu)選30℃；

所述方法中的測試對照品為對應(yīng)測試樣品精制得到的含量為99.5％以上的標(biāo)準(zhǔn)品或工作對照品；

所述方法中的流動相流速設(shè)定的范圍一般為1.0ml/min-2.0mi/min，優(yōu)選 1.0ml/min。

本發(fā)明具有如下的優(yōu)點如下：

(1)按照國家食品藥品監(jiān)督管理局頒布的“化學(xué)藥物質(zhì)量控制分析方法驗證技術(shù)指導(dǎo)原則”(【H】GPH5-1)對上述分析條件進(jìn)行方法學(xué)驗證，證明本發(fā)明提供的分析方法實用可靠，穩(wěn)定性較好，能滿足氟米龍含量和有關(guān)物質(zhì)的檢測。

(2)適用性好，可以同時測定氟米龍的含量和有關(guān)物質(zhì)，有關(guān)物質(zhì)涵蓋了從原料到產(chǎn)品過程中所有的中間體及合成雜質(zhì)的分離。

(3)本發(fā)明的流動相選用的兩個介質(zhì)普通易得，可行性高。

(4)本發(fā)明的操作過程簡單方便，檢測結(jié)果準(zhǔn)確，重復(fù)性好。

附圖說明：

圖1是本發(fā)明的實施例1的液相譜圖。

具體實施方式

下面將通過實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步的描述，這些描述并不是對本發(fā)明內(nèi)容作進(jìn)一步限定。本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)理解，對本發(fā)明的技術(shù)特征所做的等同替換或相應(yīng)的改進(jìn)，仍屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。

實施例1：

1、色譜條件：

高效液相色譜儀：Agilent 1260HPLC

色譜柱：ZORBAX SB-C18，250*4.6mm，5μm

檢測器：紫外檢測器 檢測波長：235nm

進(jìn)樣量：10μl 柱溫：35℃

流速：1.0ml/min

分析天平：萬分之一

流動相：A：水 B：乙腈

2、梯度條件如下表：

3、檢驗結(jié)果：如下表1所示。

表1

氟米龍與前后雜質(zhì)的分離度大于2.0，其他各峰間的分離度均大于1.5；

圖1為本發(fā)明實施例1的液相譜圖。

實施例2:

1、色譜條件：

高效液相色譜儀：Agilent 1260HPLC

色譜柱：ZORBAX SB-C18，250*4.6mm，5μm

檢測器：紫外檢測器 檢測波長：254nm

進(jìn)樣量：10μl 柱溫：30℃

流速：1.2ml/min

分析天平：萬分之一

流動相：A：水 B：乙腈

2、梯度條件同實施例1中的梯度條件。

3、檢驗結(jié)果：如下表2所示。

表2

氟米龍與主峰后雜質(zhì)的分離度小于2.0，其他各峰間的分離度均大于1.5。

實施例3:

1、色譜條件：

高效液相色譜儀：Agilent 1260HPLC

色譜柱：ZORBAX SB-C18，250*4.6mm，5μm

檢測器：紫外檢測器 檢測波長：254nm

進(jìn)樣量：10μl 柱溫：25℃

流速：2.0ml/min

分析天平：萬分之一

流動相：A：水 B：乙腈

2、梯度條件同實施例1中的梯度條件。

3、檢驗結(jié)果：有關(guān)數(shù)據(jù)列于下表3。

表3

氟米龍與主峰后雜質(zhì)的分離度小于2.0，其他各峰間的分離度均大于1.5。

以上所述，僅為本發(fā)明的較佳實施例，并不用以限制本發(fā)明，凡是依據(jù)本發(fā)明的技術(shù)實質(zhì)對以上實施例所作的任何細(xì)微修改、等同替換和改進(jìn)，均應(yīng)包含在本發(fā)明技術(shù)方案的保護(hù)范圍之內(nèi)。