一種抗干擾單組份酶底物顯色試劑的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種抗干擾單組份酶底物顯色試劑，每1000mL的顯色液包括以下組分：檸檬酸7-10g，磷酸氫二鈉16-20g，過硼酸鈉0.1-0.5g，甘油20-30ml，酶底物5-40mg，10-30mL乙醇，所述抗干擾單組份酶底物顯色試劑的pH值為4.0-6.0。本發(fā)明通過將抗干擾單組份酶底物顯色試劑的pH設(shè)置為4.0-6.0，使抗干擾單組份酶底物顯色試劑用于酶聯(lián)免疫反應(yīng)中的顯色階段時(shí)，具有較好的穩(wěn)定性、且具有較小的顯色背景；且單組份的顯色液避免了酶底物顯色試劑在使用之間需要將A、B液混合的步驟，減少了操作時(shí)間，提高了效率，避免了酶底物顯色試劑的有效顯色成分的濃度發(fā)生改變，進(jìn)而提高了酶底物顯色試劑的靈敏度。
【專利說明】一種抗干擾單組份酶底物顯色試劑

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及酶底物顯色試劑領(lǐng)域，具體地，涉及一種抗干擾單組份酶底物顯色試 劑。

【背景技術(shù)】
[0002] 酶底物即TMB，用于ELISA反應(yīng)。底物產(chǎn)生一種可溶性淡藍(lán)色的末端產(chǎn)物，可在370 或635nm在分光光度計(jì)上讀取。其適用于酶聯(lián)免疫反應(yīng)中的顯色階段的定量和定性分析。 其檢驗(yàn)的原理是：當(dāng)標(biāo)記在抗體或抗原上的酶與顯色液中的酶底物、雙氧水等反應(yīng)，加入終 止液后溶液由無色變成黃色，黃色深淺反應(yīng)ELISA體系中抗原抗體結(jié)合的多少，從而判斷 某種抗原或抗體的多少。在通過酶標(biāo)儀測(cè)度吸光值，判斷免疫反應(yīng)的程度。
[0003] 現(xiàn)有市售的酶聯(lián)免疫試劑盒所采用酶底物顯色劑液大多為雙組份，分A液和B液， 使用之前需要先混勻，在使用上存在缺點(diǎn)一是不夠方便，二是在包裝材料上存在成本提高 和資源浪費(fèi)；三是使用中的混合過程容易造成批間質(zhì)量不均一；四是還存在穩(wěn)定性差、保 存時(shí)間短、顯色背景高、靈敏度低等的缺點(diǎn)。
[0004] 現(xiàn)有技術(shù)的酶底物顯色試劑及其制備方法，由A液和B液等體積混合后得到，所 述A液各組分的摩爾濃度為：檸檬酸0? 01-0. 5mol/L，磷酸氫二鈉0? 01-0. 5mol/L，過氧化氫 0. 01-0. 5mol/L，EDTA0. 1-lmmol/L;所述B液包括酶底物、HC1和聚乙烯吡咯烷酮，所述酶底 物的摩爾濃度為〇.l-lmm〇l/L，所述HC1的摩爾濃度為0. 01-0. 5mol/L，所述聚乙烯吡咯烷 酮的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為〇. 1-10%。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種抗干擾單組份酶底物顯色試劑，以克服現(xiàn) 有顯色液顯色背景高、穩(wěn)定性差、靈敏度低的問題。
[0006] 此外，本發(fā)明還包括上述抗干擾單組份酶底物顯色試劑的應(yīng)用。
[0007] 本發(fā)明解決上述問題所采用的技術(shù)方案是：一種抗干擾單組份酶底物顯色試劑， 每1000mL的顯色液包括以下組分：檸檬酸7-10g，磷酸氫二鈉16-20g，過硼酸鈉0. 1-0. 5g， 甘油20-30ml，酶底物5-40mg，10-30mL乙醇，所述單組份酶底物顯色試劑的PH值為 4. 0_6. 0〇
[0008] 現(xiàn)有的酶底物顯色試劑為雙組份顯色液，在使用前需要將兩種組分混勻后才能進(jìn) 行顯色測(cè)試，該過程不僅浪費(fèi)時(shí)間，操作麻煩，且會(huì)導(dǎo)致在混合兩種組分時(shí)顯色液的有效成 分揮發(fā)，從而導(dǎo)致酶底物顯色試劑的靈敏度降低；且現(xiàn)有的顯色液沒有對(duì)其pH進(jìn)行限定， 使得現(xiàn)有顯色液在顯色過程中顯色背景較高，且穩(wěn)定性差；本發(fā)明將酶底物顯色試劑設(shè)置 為單組份，且將其顯色液的pH值設(shè)置為4. 0-6. 0,此外，本發(fā)明的抗干擾單組份酶底物顯色 試劑中將傳統(tǒng)的過氧化氫過氧化脲替換成過硼酸鈉，其具有更好的氧化性。
[0009] 實(shí)驗(yàn)證明，抗干擾單組份酶底物顯色試劑在pH置為4. 0-6. 0之間具有較好的穩(wěn)定 性，且在顯色過程中具有顯小的顯色背景。
[0010]進(jìn)一步地，PH值為 4. 5-5. 0。
[0011] 實(shí)驗(yàn)證明，酶底物顯色試劑在pH置為4. 5-5. 0為抗干擾單組份酶底物顯色試劑穩(wěn) 定性最好的pH值，且具有最小的顯色背景。
[0012] 進(jìn)一步地，檸檬酸為9-10g，磷酸氫二鈉18-20g。
[0013] 實(shí)驗(yàn)證明，檸檬酸為9-10g，磷酸氫二鈉18_20g的抗干擾單組份酶底物顯色試劑 具有更好的穩(wěn)定性。
[0014] 進(jìn)一步地，酶底物的質(zhì)量設(shè)置為10_30mg。
[0015] 將酶底物的質(zhì)量設(shè)置為10_30mg能有效的提高顯色效果，提高顯色的靈敏度。
[0016] 一種抗干擾單組份酶底物顯色試劑的應(yīng)用，將所述的單組份酶底物顯色試劑應(yīng)用 到酶聯(lián)免疫試劑盒。
[0017] 綜上，本發(fā)明的有益效果是： 1、 通過將本發(fā)明所述范圍內(nèi)的抗干擾單組份酶底物顯色試劑用于酶聯(lián)免疫反應(yīng)中的 顯色階段，避免了酶底物顯色試劑在使用之間需要將A、B液混合的操作步驟，簡(jiǎn)化操作流 程，減少了操作時(shí)間，提高了效率，同時(shí)避免了因A、B液不同批次間的差異導(dǎo)致混合的顯色 劑的顯色效果；避免了酶底物顯色試劑的有效顯色成分的濃度發(fā)生改變，進(jìn)而提高了酶底 物顯色試劑的靈敏度 2、 通過將抗干擾單組份酶底物顯色試劑的pH設(shè)置為4. 0-6. 0,使抗干擾單組份酶底物 顯色試劑用于酶聯(lián)免疫反應(yīng)中的顯色階段時(shí)，具有較好的穩(wěn)定性、且具有較小的顯色背景。

【具體實(shí)施方式】
[0018] 下面結(jié)合實(shí)施例，對(duì)發(fā)明作進(jìn)一步地的詳細(xì)說明，但本發(fā)明的實(shí)施方式不限于此。
[0019] 實(shí)施例1 : 一種抗干擾單組份酶底物顯色試劑，每l〇〇〇mL的顯色液包括以下組分：檸檬酸7g，磷 酸氫二鈉16g，過硼酸鈉0.lg，甘油20ml,酶底物5mg，10mL乙醇，所述單組份酶底物顯色試 劑的PH值為4.0。
[0020] 實(shí)施例2 : 一種抗干擾單組份酶底物顯色試劑，每l〇〇〇mL的顯色液包括以下組分：檸檬酸7g，磷 酸氫二鈉16g，過硼酸鈉0.lg，甘油20ml,酶底物5mg，10mL乙醇，所述單組份酶底物顯色試 劑的PH值為4. 5。
[0021] 實(shí)施例3: 一種抗干擾單組份酶底物顯色試劑，每l〇〇〇mL的顯色液包括以下組分：檸檬酸7g，磷 酸氫二鈉16g，過硼酸鈉0.lg，甘油20ml,酶底物5mg，10mL乙醇，所述單組份酶底物顯色試 劑的PH值為5.0。
[0022] 實(shí)施例4 : 一種抗干擾單組份酶底物顯色試劑，每l〇〇〇mL的顯色液包括以下組分：檸檬酸7g，磷 酸氫二鈉16g，過硼酸鈉0.lg，甘油20ml,酶底物5mg，10mL乙醇，所述單組份酶底物顯色試 劑的PH值為6.0。
[0023] 實(shí)施例5: 一種抗干擾單組份酶底物顯色試劑，每lOOOmL的顯色液包括以下組分：檸檬酸10g，磷 酸氫二鈉20g，過硼酸鈉0. 5g，甘油30ml,酶底物40mg，30mL乙醇，所述單組份酶底物顯色 試劑的PH值為5.0。
[0024] 實(shí)施例6 : 一種抗干擾單組份酶底物顯色試劑，每l〇〇〇mL的顯色液包括以下組分：檸檬酸9g，磷 酸氫二鈉18g，過硼酸鈉0. 2g，甘油25ml,酶底物10mg，20mL乙醇，所述單組份酶底物顯色 試劑的PH值為5.0。
[0025] 實(shí)施例7 : 一種抗干擾單組份酶底物顯色試劑，每l〇〇〇mL的顯色液包括以下組分：檸檬酸9g，磷 酸氫二鈉18g，過硼酸鈉0. 2g，甘油25ml,酶底物30mg，20mL乙醇，所述單組份酶底物顯色 試劑的PH值為5.0。

【權(quán)利要求】
1. 一種抗干擾單組份酶底物顯色試劑，其特征在于，每lOOOmL的顯色液包括以下組 分：檸檬酸7-10g，磷酸氫二鈉16-20g，過硼酸鈉0? 1-0. 5g，甘油20-30ml，酶底物5-40mg， 10-30mL乙醇，所述抗干擾單組份酶底物顯色試劑的PH值為4. 0-6. 0。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種抗干擾單組份酶底物顯色試劑，其特征在于，所述PH值 為 4. 5-5. 0。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種抗干擾單組份酶底物顯色試劑，其特征在于，所述檸 檬酸為9-10g，磷酸氫二鈉18-20g。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種抗干擾單組份酶底物顯色試劑，其特征在于，所述酶 底物的質(zhì)量設(shè)置為10_30mg。
5. -種如權(quán)利要求1或2所述的抗干擾單組份酶底物顯色試劑的應(yīng)用，其特征在于，將 所述的單組份酶底物顯色試劑應(yīng)用到酶聯(lián)免疫試劑盒。
【文檔編號(hào)】G01N33/558GK104459114SQ201410685367
【公開日】2015年3月25日 申請(qǐng)日期:2014年11月25日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月25日
【發(fā)明者】葉正義, 張志新, 何遠(yuǎn)立, 陶家春 申請(qǐng)人:成都威爾諾生物科技有限公司