果蠅生物模型的構(gòu)建和篩選的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種果蠅生物模型的構(gòu)建和篩選，系統(tǒng)篩選方法包括如下步驟：S1、通過觀察果蠅紅眼基因決定的果蠅眼睛顏色的表型變化進(jìn)行第一次篩選；S2、通過檢測果蠅幼蟲的眼盤上表達(dá)的綠色熒光蛋白基因的強(qiáng)弱變化進(jìn)行在第一次篩選的基礎(chǔ)上進(jìn)行第二次篩選。本發(fā)明構(gòu)建了既能觀測染色質(zhì)結(jié)構(gòu)變化，又能觀測核受體介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控水平變化的果蠅生物模型。
【專利說明】果蠅生物模型的構(gòu)建和篩選

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物領(lǐng)域，具體涉及一種果蠅生物模型的構(gòu)建和篩選。

【背景技術(shù)】
[0002]目前有關(guān)生物體內(nèi)染色質(zhì)結(jié)構(gòu)調(diào)控的研究，主要是用酵母或果蠅分子遺傳學(xué)分析系統(tǒng)進(jìn)行的。在這個(gè)研究領(lǐng)域內(nèi)，研究者們利用包含內(nèi)在性染色質(zhì)結(jié)構(gòu)變化的分析系統(tǒng)，對已知因子的新功能及其在染色體上的局部定位進(jìn)行了詳細(xì)的研究，并被世界一流雜志給予高度評價(jià)。近年來，又對組織特異性的組蛋白修飾酶及組蛋白置換機(jī)制有了更深一層的研究。但是，目前這些研究工作由于只能在捕捉內(nèi)在性染色質(zhì)結(jié)構(gòu)變化的基礎(chǔ)上進(jìn)行，因此很難對組蛋白的分子間相互作用在遺傳學(xué)上進(jìn)行深入的分析。從根本上來說，高等真核生物有著復(fù)雜的染色質(zhì)環(huán)境，研究推測多彩的染色質(zhì)環(huán)境變化應(yīng)具有高度的順次性。因此，在生物體內(nèi)構(gòu)建一種既能用肉眼觀察又能在分子水平上進(jìn)行生物化學(xué)研究的分析系統(tǒng)是非常必要的。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]為解決上述問題，本發(fā)明提供了一種果蠅生物模型的構(gòu)建和篩選，本發(fā)明構(gòu)建了既能觀測染色質(zhì)結(jié)構(gòu)變化，又能觀測核受體介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控水平變化的果蠅生物模型。
[0004]本發(fā)明通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn):
[0005]果蠅生物模型的篩選，包括如下步驟:
[0006]S1、通過觀察果蠅紅眼基因(white)決定的果蠅眼睛顏色的表型變化進(jìn)行第一次篩選，具體篩選過程是轉(zhuǎn)有AR報(bào)告基因和AR表達(dá)基因的果蠅與數(shù)千種帶有各種基因突變型的果蠅雜交后，在果蠅子代通過觀測AR介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)錄活性的變化為指標(biāo)來篩選輔調(diào)節(jié)因子；
[0007]S2、通過檢測果蠅幼蟲的眼盤上表達(dá)的綠色熒光蛋白基因(GFP)的強(qiáng)弱變化，在第一次篩選的基礎(chǔ)上進(jìn)行第二次篩選，具體篩選過程是轉(zhuǎn)有AR報(bào)告基因和AR表達(dá)基因的果蠅與數(shù)千種帶有各種基因突變型的果蠅雜交后，在果蠅子代通過觀測AR介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)錄活性的變化為指標(biāo)，即檢測果蠅幼蟲的眼盤上表達(dá)的綠色熒光蛋白基因的強(qiáng)弱變化來進(jìn)一步確認(rèn)輔調(diào)節(jié)因子。
[0008]本發(fā)明構(gòu)建了既能觀測染色質(zhì)結(jié)構(gòu)變化，又能觀測核受體介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控水平變化的果蠅生物模型。

【具體實(shí)施方式】
[0009]為了使本發(fā)明的目的及優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白，以下結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)說明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實(shí)施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。
[0010]本具體實(shí)施提供了一種果蠅生物模型的構(gòu)建和篩選，篩選方法包括如下步驟:
[0011]S1、通過觀察果蠅紅眼基因(white)決定的果蠅眼睛顏色的表型變化進(jìn)行第一次篩選，具體篩選過程是轉(zhuǎn)有AR報(bào)告基因和AR表達(dá)基因的果蠅與數(shù)千種帶有各種基因突變型的果蠅雜交后，在果蠅子代通過觀測AR介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)錄活性的變化為指標(biāo)，即觀察果蠅紅眼基因決定的果蠅眼睛顏色的表型變化來篩選輔調(diào)節(jié)因子；
[0012]S2、通過檢測果蠅幼蟲的眼盤上表達(dá)的綠色熒光蛋白基因(GFP)的強(qiáng)弱變化，在第一次篩選的基礎(chǔ)上進(jìn)行第二次篩選，具體篩選過程是轉(zhuǎn)有AR報(bào)告基因和AR表達(dá)基因的果蠅與數(shù)千種帶有各種基因突變型的果蠅雜交后，在果蠅子代通過觀測AR介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)錄活性的變化為指標(biāo)，即檢測果蠅幼蟲的眼盤上表達(dá)的綠色熒光蛋白基因的強(qiáng)弱變化來進(jìn)一步確認(rèn)輔調(diào)節(jié)因子。
[0013]實(shí)施例1
[0014]以人類的雄激素受體(AR)作為核受體的代表，在果蠅體內(nèi)構(gòu)建了 AR介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄調(diào)控生物系統(tǒng)。因?yàn)槊鞔_染色質(zhì)結(jié)構(gòu)調(diào)節(jié)機(jī)能是研究轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制所必須的，本項(xiàng)目構(gòu)建的AR介導(dǎo)轉(zhuǎn)錄調(diào)控系統(tǒng)是一個(gè)既以染色質(zhì)結(jié)構(gòu)變化又以轉(zhuǎn)錄水平調(diào)節(jié)為指標(biāo)的生物體內(nèi)系統(tǒng)。斑點(diǎn)位置效應(yīng)(PEV)是一種與異染色質(zhì)和常染色質(zhì)的狀態(tài)和轉(zhuǎn)錄頻度相關(guān)的分析系統(tǒng)，常用于分析染色質(zhì)結(jié)構(gòu)調(diào)節(jié)的研究。在果蠅體內(nèi)的特殊條件下，P序列(P element)能夠隨意地插入果蠅染色體基因上。PEV分析系統(tǒng)是利用果蠅的這個(gè)特性，將5’端和3’端的P序列之間存在的果蠅紅眼基因序列(white)插入到果蠅異染色質(zhì)基因附近，因受異染色質(zhì)基因轉(zhuǎn)錄抑制的影響，果蠅的紅眼呈紅白相間的斑點(diǎn)樣分布。根據(jù)眼睛顏色的強(qiáng)弱變化來探討染色質(zhì)結(jié)構(gòu)狀態(tài)的調(diào)節(jié)。，首先把決定紅眼的基因插入AR應(yīng)答序列(AR responseelement, ARE)的下游來構(gòu)建AR的報(bào)告基因，把此報(bào)告基因轉(zhuǎn)入白眼果蠅體內(nèi)制成轉(zhuǎn)報(bào)告基因果蠅。然后將此報(bào)告基因在P序列的幫助下隨機(jī)地插入染色體基因內(nèi)，通過果蠅眼睛表型的顏色變化、斑點(diǎn)形成與否及基因讀序的方法來篩選和鑒定報(bào)告基因插入在染色質(zhì)中的位置(異染色質(zhì)、常染色質(zhì))從而構(gòu)建PEV果蠅模型。另一個(gè)被插入AR應(yīng)答序列下游的報(bào)告基因是綠色突光蛋白基因(Green Fluorescence Protein,GFP),可通過人工分離果蜆幼蟲的眼盤(eye disc)觀測眼盤特異性表達(dá)的GFP從而檢測AR介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)。若報(bào)告基因插入在常染色質(zhì)上，在AR存在下，兩個(gè)報(bào)告基因(white、GFP)呈高表達(dá)，即眼睛表型的顏色呈紅色、眼盤特異性表達(dá)的熒光蛋白呈較強(qiáng)的顏色；若報(bào)告基因插入在異染色質(zhì)附近部位，兩個(gè)報(bào)告基因的表達(dá)則被抑制和減弱。由此，本實(shí)施例新構(gòu)建的AR介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控相依存的PEV生物模型系統(tǒng)(以下稱AR-PEV模型)能夠在生物個(gè)體水平上用肉眼觀測和把握染色質(zhì)結(jié)構(gòu)狀態(tài)。應(yīng)用這個(gè)分析系統(tǒng)，預(yù)計(jì)能夠在遺傳學(xué)上明確分析參與調(diào)控染色質(zhì)結(jié)構(gòu)的輔調(diào)節(jié)因子。
[0015]綜上所述，本發(fā)明構(gòu)建了既能觀測染色質(zhì)結(jié)構(gòu)變化，又能觀測核受體介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控水平變化的果蠅生物模型。
[0016]以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對于本【技術(shù)領(lǐng)域】的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以作出若干改進(jìn)和潤飾，這些改進(jìn)和潤飾也應(yīng)視為本發(fā)明。
【權(quán)利要求】
1.果蠅生物模型的構(gòu)建和篩選，其特征在于構(gòu)建了既能觀測染色質(zhì)結(jié)構(gòu)變化，又能觀測核受體介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控水平變化的果蠅生物模型。包括如下篩選步驟: 51、通過觀察果蠅紅眼基因決定的果蠅眼睛顏色的表型變化進(jìn)行第一次篩選: 52、通過檢測果蠅幼蟲的眼盤上表達(dá)的綠色熒光蛋白基因的強(qiáng)弱變化，在第一次篩選的基礎(chǔ)上進(jìn)行第二次篩選。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的果蠅生物模型的構(gòu)建和篩選，其特征在于，所述步驟SI的具體操作為:將轉(zhuǎn)有AR報(bào)告基因和AR表達(dá)基因的果蠅與數(shù)千種帶有各種基因突變型的果蠅雜交后，在果蠅子代通過觀測AR介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)錄活性的變化為指標(biāo)來篩選輔調(diào)節(jié)因子。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的果蠅生物模型的構(gòu)建和篩選，其特征在于，所述步驟S2的具體操作為:將轉(zhuǎn)有AR報(bào)告基因和AR表達(dá)基因的果蠅與數(shù)千種帶有各種基因突變型的果蠅雜交后，在果蠅子代通過觀測AR介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)錄活性的變化為指標(biāo)，即檢測果蠅幼蟲的眼盤上表達(dá)的綠色熒光蛋白基因的強(qiáng)弱變化來進(jìn)一步確認(rèn)輔調(diào)節(jié)因子。
【文檔編號】G01N21/64GK104304185SQ201410509551
【公開日】2015年1月28日 申請日期:2014年9月18日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月18日
【發(fā)明者】趙越, 王春玉, 林琳, 鄒仁龍, 王勝利, 孫洪邈, 孫士瑩, 吳怡 申請人:中國醫(yī)科大學(xué)