栝樓桂枝湯的質(zhì)量檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了栝樓桂枝湯的質(zhì)量檢測方法，它是采用高效液相-串聯(lián)質(zhì)譜法（HPLC-MS)測定栝樓桂枝湯中瓜氨酸和Y-GABA含量的方法，其中，色譜條件：色譜柱：Ultimate?aq-c18S(4.6X100mm，3um);流動相為乙腈-0.1%甲酸水（15:85)，流速:0.3mL/min，柱溫30。。;質(zhì)譜條件：電噴霧離子源（ESI)，源噴射電壓2500V;源溫度：350°;正離子多反應(yīng)監(jiān)測（MRM)模式檢測。本發(fā)明采用HPLC-MS法應(yīng)用于復(fù)方栝樓桂枝湯中2種主要氨基酸含量測定，所建立的含量方法簡便，準(zhǔn)確，穩(wěn)定，重復(fù)性好，與高效液相色譜法比較，縮短了分析的時間，靈敏度高，在一定質(zhì)量濃度范圍內(nèi)被測物質(zhì)有較好的線性關(guān)系，可作為栝樓桂枝湯中瓜氨酸與Y-氨基丁酸的含量測定方法。
【專利說明】栝樓桂枝湯的質(zhì)量檢測方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及栝樓桂枝湯的質(zhì)量檢測方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 復(fù)方栝樓桂枝湯來源于東漢末年張仲景的《金匱要略》[1]，由天花粉、白芍、桂枝、 生姜、甘草及大棗6味藥組成。該方具有解肌調(diào)營，養(yǎng)營生津之功效，現(xiàn)代臨床用于治療頸 椎病、癲癇等。目前，該復(fù)方經(jīng)臨床劑量增減后被批準(zhǔn)為福建省第二人民醫(yī)院院內(nèi)制劑（批 件號：閩2013S0001)，用于治療太陽柔痙體強證，即腦卒中后肢體痙攣 [4]，癥見肢體肌肉痙 攣為特征的臨床病理綜合征。
[0003] 處方中君藥天花粉富含大量氨基酸，其中瓜氨酸和氨基丁酸是主要的具有生 理調(diào)節(jié)作用的物質(zhì)。瓜氨酸不能通過食物蛋白得到，只能通過其他氨基酸進行轉(zhuǎn)化，臨床上 具有增強免疫力、促進血液循環(huán)、維持血糖平衡、保持膽固醇正常、維護肺功能、提高腦力清 晰度、降低壓力、提高男性性功能等重要作用 [5]。
[0004] 氨基丁酸（簡稱Y-GABA)也是一種非蛋白氨基酸，是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中重要的 抑制性神經(jīng)傳達(dá)物質(zhì)。Y -GABA具有臨時降壓、緩解精神壓力、對胰腺癌細(xì)胞SW1990細(xì)胞的 生長及血管內(nèi)皮生長因子表達(dá)的影響，以及作為哺乳動物攝食和味覺的調(diào)控因子等 [6]。因 此測量兩種氨基酸的含量對于栝樓桂枝湯的質(zhì)量控制評價有一定的意義。
[0005] 近年來，2010年版中國藥典僅用瓜氨酸對天花粉進行定性鑒別，并無定量鑒別方 法，本文采用HPLC-MS法分別測定栝樓桂枝湯中瓜氨酸和γ -GABA的含量，為建立復(fù)方的質(zhì) 量評價標(biāo)準(zhǔn)提供一定的理論依據(jù)。
[0006]

【權(quán)利要求】
1. 栝樓桂枝湯的質(zhì)量檢測方法，其特征在于：它是采用高效液相-串聯(lián)質(zhì)譜法 (HPLC-MS)測定栝樓桂枝湯中瓜氨酸和γ-GABA含量的方法，其中，色譜條件：色譜 柱：Ultimate ?△〇-〇18柱（4.6父10〇111111，34111);流動相為乙腈-0.1% 甲酸水（15:85)， 流速：〇· 3mL/min，柱溫 30°C ; 質(zhì)譜條件：電噴霧離子源（ESI)，源噴射電壓2500V ;源溫度：350° ;正離子多反應(yīng)監(jiān)測 (MRM)模式檢測。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的質(zhì)量檢測方法，其特征在于：所述的質(zhì)譜條件為：用于定量分 析的離子瓜氨酸m/z 176 -m/z 70,裂解電壓（Fragmentor)為75V，碰撞能量（CE)為30eV; 氨基丁酸 m/z 104 -m/z 87,裂解電壓（Fragmentor)為 50V，碰撞能量（CE)為 10eV。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的質(zhì)量檢測方法，其特征在于：所述的栝樓桂枝湯的制備 方法為：桂枝和生姜分別加10倍量水用蒸餾法提取6h，收集揮發(fā)油，將兩者的藥渣與天花 粉、白芍、生姜、甘草、大棗混合，按處方比例量加10倍量水煎煮2次，每次1. 5h，過濾合并兩 次藥液，濃縮藥液，置-4°C冰箱保存?zhèn)溆谩?br> 4. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的質(zhì)量檢測方法，其特征在于：它包括如下步驟： a、 混合對照品溶液制備：分別精密稱取瓜氨酸和Y-GABA適量，用超純水溶解，定容， 搖勻，配置成質(zhì)量濃度為〇. 〇98mg/mL和1. 060mg/mL對照品貯備液，置4°C冰箱保存； b、 供試品溶液制備：精密量取栝樓桂枝湯lmL，用超純水定容至100mL，作為供試品儲 備液，臨用前將供試品貯備液稀釋25倍，定容，混勻，經(jīng)0. 45 μ m微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液混 勻，作為供試品溶液； c、 采用高效液相-串聯(lián)質(zhì)譜法（HPLC-MS)測定栝樓桂枝湯中瓜氨酸和γ-GABA含量。
【文檔編號】G01N27/62GK104215707SQ201410443142
【公開日】2014年12月17日 申請日期:2014年9月2日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月2日
【發(fā)明者】李煌, 陳立典, 張玉琴, 徐偉, 褚克丹 申請人:福建中醫(yī)藥大學(xué)