一種混合標(biāo)記物質(zhì)和標(biāo)記方法及其應(yīng)用的制作方法
【專(zhuān)利摘要】一種混合標(biāo)記物質(zhì)和標(biāo)記方法及其應(yīng)用。本發(fā)明涉及一種混合標(biāo)記物質(zhì)，包括標(biāo)記物和被標(biāo)記物，標(biāo)記物包括選自膠體金顆粒，乳膠顆粒，水溶性標(biāo)記物之中的至少兩種。優(yōu)選的，標(biāo)記物包括其中兩種物質(zhì)，如膠體金顆粒和乳膠顆粒。本發(fā)明還涉及了一種標(biāo)記混合標(biāo)記物質(zhì)的方法，包括標(biāo)記物和被標(biāo)記物的結(jié)合。不同的標(biāo)記物可以和相同的被標(biāo)記物共同標(biāo)記，也可以和相同的標(biāo)記物分別標(biāo)記再混合，不同的標(biāo)記物還可以和不同的被標(biāo)記物分別標(biāo)記。另外，本發(fā)明還涉及一種檢測(cè)試劑條，這種檢測(cè)試劑條上包括如上所述的混合標(biāo)記物質(zhì)。本發(fā)明取得的有益效果是：通過(guò)混合標(biāo)記物質(zhì)在檢測(cè)試劑條中的應(yīng)用，可以有效提高檢測(cè)的靈敏度和特異性。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種混合標(biāo)記物質(zhì)和標(biāo)記方法及其應(yīng)用
[0001]本申請(qǐng)是中國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)，申請(qǐng)?zhí)?00910102207.9，申請(qǐng)日:2009年09月03日的分案申請(qǐng)。

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0002]本發(fā)明涉及一種混合標(biāo)記物質(zhì)和標(biāo)記混合標(biāo)記物質(zhì)的方法以及其應(yīng)用，屬于免疫領(lǐng)域中所用的標(biāo)記物質(zhì)，尤其是快速診斷領(lǐng)域中應(yīng)用于檢測(cè)樣本中是否含有被分析物質(zhì)的檢測(cè)試劑條。

【背景技術(shù)】
[0003]快速診斷領(lǐng)域內(nèi)，用于檢測(cè)樣本中是否含有被分析物質(zhì)的工具，常常首選檢測(cè)試劑條。檢測(cè)試劑條可以包括樣本接受區(qū)域，標(biāo)記區(qū)域，檢測(cè)區(qū)域和吸收區(qū)域。一般來(lái)說(shuō)，可以直觀(guān)顯示檢測(cè)結(jié)果的帶顏色顆粒會(huì)和特定的抗原或者抗體標(biāo)記并固定在標(biāo)記區(qū)域上。在檢測(cè)過(guò)程中，這種標(biāo)記結(jié)合物可以和樣本中的物質(zhì)結(jié)合(如果有)，然后順著樣本到達(dá)檢測(cè)區(qū)域，并和檢測(cè)區(qū)域中的和特定的抗原或者抗體對(duì)應(yīng)的抗體或者抗原結(jié)合，并且通過(guò)顯示是否有顏色來(lái)判斷樣本中是否含有被分析物。
[0004]1971年Faulk和Taytor將膠體金引入免疫化學(xué)，此后免疫膠體金技術(shù)作為一種新的免疫學(xué)方法，在生物醫(yī)學(xué)各領(lǐng)域得到了日益廣泛的應(yīng)用。而今，膠體金是一種常用的標(biāo)記技術(shù)，是以膠體金作為示蹤標(biāo)志物應(yīng)用于抗原抗體的一種新型的免疫標(biāo)記技術(shù)，有其獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)。近年已在各種生物學(xué)研究中廣泛使用。在臨床使用的免疫印跡技術(shù)幾乎都使用其標(biāo)記。目前在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中的應(yīng)用主要是免疫層析法(immunochromatogra-phy)和快速免疫金滲濾法(Dot-1mmuogold filtrat1n assay DIGFA),用于檢測(cè) HBsAg、HCG 和抗雙鏈 DNA抗體等，具有簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確和無(wú)污染等優(yōu)點(diǎn)。同樣，乳膠標(biāo)記也具有相類(lèi)似的功能，不同的是，乳膠和抗原或抗體之間的結(jié)合是依靠偶聯(lián)作用的共價(jià)鍵作用而非靜電作用的。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明涉及一種混合標(biāo)記物質(zhì)，包括標(biāo)記物和被標(biāo)記物。優(yōu)選的，標(biāo)記物包括選自膠體金顆粒，乳膠顆粒，水溶性標(biāo)記物之中的至少兩種。優(yōu)選的，標(biāo)記物包括其中兩種物質(zhì)，如膠體金顆粒和乳膠顆粒。其中優(yōu)選的，這兩種標(biāo)記物可以分別標(biāo)記被標(biāo)記物，然后按照比例混合在一起。這種形式的混合標(biāo)記物，可以在檢測(cè)中互不干擾，增加樣本中被分析物質(zhì)的結(jié)合位點(diǎn)，提高檢測(cè)的特異性。另外優(yōu)選的，這兩種標(biāo)記物可以先后標(biāo)記同一種被標(biāo)記物，形成膠體金-被標(biāo)記物-乳膠這樣的結(jié)合物。這種結(jié)合物，可以具有較高的靈敏度，既在弱陽(yáng)性的情況下可以顯示較強(qiáng)的信號(hào)，在弱陰性的情況下也可以顯示陰性，因此在cut-off值附近具有較好的分辨作用。另外優(yōu)選的，標(biāo)記物還可以包括其中另外兩種標(biāo)記物或者三種標(biāo)記物。
[0006]本發(fā)明還涉及了一種標(biāo)記混合標(biāo)記物質(zhì)的方法，包括標(biāo)記物和被標(biāo)記物的結(jié)合。優(yōu)選的，標(biāo)記物至少包括選自膠體金顆粒，乳膠顆粒，以及水溶性標(biāo)記物的兩種或者三種。不同的標(biāo)記物可以和相同的被標(biāo)記物共同標(biāo)記，也可以和相同的標(biāo)記物分別標(biāo)記再混合，不同的標(biāo)記物還可以和不同的被標(biāo)記物分別標(biāo)記。在具體的優(yōu)選的實(shí)施例中，將膠體金顆粒和被標(biāo)記物集合在一起形成膠體金-被標(biāo)記物結(jié)合物；乳膠顆粒和被標(biāo)記物結(jié)合在一起形成乳膠-被標(biāo)記物結(jié)合物；最后將這兩種結(jié)合物混合在一起。在另外一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施例中，標(biāo)記混合標(biāo)記物質(zhì)的方法包括，將膠體金顆粒和被標(biāo)記物結(jié)合形成膠體金-被標(biāo)記物結(jié)合物；將乳膠顆粒和膠體金-被標(biāo)記物結(jié)合物結(jié)合形成膠體金-被標(biāo)記物-乳膠結(jié)合物。另外，本發(fā)明還涉及一種檢測(cè)試劑條，這種檢測(cè)試劑條上包括如上所述的混合標(biāo)記物質(zhì)。
[0007]本發(fā)明取得的有益效果是:通過(guò)混合標(biāo)記物質(zhì)在檢測(cè)試劑條中的應(yīng)用，可以有效提高檢測(cè)的靈敏度和特異性。

【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0008]圖1是本發(fā)明一個(gè)實(shí)施例標(biāo)記物和被標(biāo)記物的結(jié)合示意圖，其中，?表示一種標(biāo)記物，ο表示另一種標(biāo)記物，一^表示被標(biāo)記物。
[0009]圖2是本發(fā)明另一個(gè)實(shí)施例標(biāo)記物和被標(biāo)記物的結(jié)合示意圖。
[0010]圖3是本發(fā)明一個(gè)實(shí)施例的實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較圖。其中，C表示控制線(xiàn)，T表示測(cè)試線(xiàn)。I是將膠體金-Str印A抗體置于標(biāo)記墊上得到的結(jié)果；II是將乳膠-Str印A抗體置于標(biāo)記墊上得到的結(jié)果；III是將膠體金-str印A抗體和乳膠-str印A抗體共同置于標(biāo)記墊上得到的結(jié)果；IV是將膠體金-strep A抗體-乳膠置于標(biāo)記墊上得到的結(jié)果。

【具體實(shí)施方式】
[0011]下面對(duì)混合標(biāo)記物質(zhì)涉及的概念或這些所使用的技術(shù)術(shù)語(yǔ)做進(jìn)一步的說(shuō)明。
[0012]樣本
[0013]本發(fā)明所指的樣本指那些可以用來(lái)檢測(cè)、化驗(yàn)或診斷是否存在感興趣的被分析物質(zhì)的物質(zhì)。樣本可以是，例如，液體樣本，液體樣本可以包括血液、血漿、血清、尿液、唾液和各種分泌液,還可以包括固體樣本和半固體樣本經(jīng)過(guò)預(yù)先處理后形成的液體溶液。收集來(lái)的樣本可以用于免疫檢測(cè)、化學(xué)檢測(cè)、酶檢測(cè)等方法來(lái)檢測(cè)是否存在被分析物質(zhì)。
[0014]被標(biāo)記物
[0015]本發(fā)明中的被標(biāo)記物是指免疫領(lǐng)域內(nèi)可以和其他物質(zhì)通過(guò)物理或者化學(xué)方式結(jié)合的蛋白質(zhì)類(lèi)，包括抗原和抗體，以及抗體片段等。
[0016]抗原是指能夠刺激機(jī)體產(chǎn)生(特異性)免疫應(yīng)答，并能與免疫應(yīng)答產(chǎn)物抗體和致敏淋巴細(xì)胞結(jié)合，發(fā)生免疫效應(yīng)的物質(zhì)，如病原體、異種動(dòng)物血清等。在快速診斷領(lǐng)域內(nèi)，如測(cè)定丙肝病毒抗體(HCV)，就可以采用雙抗原夾心的方法，測(cè)定樣本中抗HCV總抗體。
[0017]“抗體”是指免疫球蛋白，無(wú)論是天然的還是部分或者全部合成的。這個(gè)術(shù)語(yǔ)還包括其中保持結(jié)合能力的抗體的衍生物，也包括任何含有與免疫球蛋白的結(jié)合域同源的或者很大程度上同源的結(jié)合域的蛋白質(zhì)。這些蛋白質(zhì)可能是源自天然物質(zhì)，也可能是部分或者全部合成的。一種抗體可能是單克隆的或者是多克隆的。一種抗體可能是任何免疫球蛋白類(lèi)型中的一員，包括任何人類(lèi)的免疫球蛋白類(lèi)型:IgG，IgM, IgA, IgD, IgG和IgE。“抗體片段”是抗體的衍生物或者抗體的小于全長(zhǎng)的一個(gè)部分?？贵w片段能夠保留至少一個(gè)全長(zhǎng)抗體的結(jié)合能力的顯著位點(diǎn)。在一個(gè)具體的流感檢測(cè)的實(shí)施例中，通常可以采用雙抗體夾心的方法，即被標(biāo)記物為流感抗體，可以給合標(biāo)記物，當(dāng)樣本中含有流感病毒時(shí)，流感抗體-標(biāo)記物結(jié)合物可以很快將流感病毒抗原捕捉到，并在檢測(cè)區(qū)域以陽(yáng)性有線(xiàn)的方式直觀(guān)顯示出來(lái)。在另一個(gè)具體的實(shí)施例中，被分析物質(zhì)是HCG，可以采用HCG抗體和標(biāo)記物質(zhì)的標(biāo)記，來(lái)顯示婦女的體液樣本，如尿液或者血液中是否含有HCG抗體，可以判斷婦女是否懷孕。
[0018]標(biāo)記物
[0019]本發(fā)明中的標(biāo)記物質(zhì)可以是酶，非水溶性顆粒，例如金屬膠體顆粒(膠體金顆粒)，乳膠顆粒等等，或者一些水溶性標(biāo)記物質(zhì)，還可以熒光標(biāo)記物質(zhì)。
[0020]混合標(biāo)記物質(zhì)
[0021]本發(fā)明中的混合標(biāo)記物質(zhì)，是指標(biāo)記物和被標(biāo)記物之間通過(guò)物理或者化學(xué)結(jié)合產(chǎn)生的結(jié)合物。這種混合標(biāo)記物質(zhì)中的標(biāo)記物質(zhì)，優(yōu)選的，在本發(fā)明中，至少包括兩種標(biāo)記物，以更加靈敏得捕捉信號(hào)。這兩種或者兩種以上的標(biāo)記物，可以是選自以上所述的任意兩種標(biāo)記物。如選擇熒光標(biāo)記物質(zhì)和膠體金顆粒作為標(biāo)記物，形成的混合標(biāo)記物質(zhì)可以包括以下幾種情況，一種是熒光物質(zhì)-被標(biāo)記物結(jié)合物和膠體金-被標(biāo)記物質(zhì)結(jié)合物的混合物，另一種是熒光物質(zhì)-被標(biāo)記物-膠體金結(jié)合物。
[0022]一個(gè)較佳的選擇是選用膠體金顆粒和乳膠顆粒作為標(biāo)記物膠體金具有很高的動(dòng)力學(xué)穩(wěn)定性，在穩(wěn)定因素不受破壞時(shí)自身凝聚極慢，可放置數(shù)年不發(fā)生凝聚。膠體金在弱堿環(huán)境下帶負(fù)電荷，可與蛋白質(zhì)分子的正電荷基團(tuán)形成牢固的結(jié)合，由于這種結(jié)合是靜電結(jié)合，所以不影響蛋白質(zhì)的生物特性。根據(jù)膠體金的一些物理性狀，如高電子密度、顆粒大小比較均勻、形狀及顏色(紫紅色)反應(yīng)，故是免疫反應(yīng)的一種較佳標(biāo)記物。同樣，乳膠顆粒也是作為標(biāo)記物質(zhì)較優(yōu)選擇，這是因?yàn)?，乳膠分子相對(duì)其他標(biāo)記物質(zhì)比較大，帶有乳膠顆粒的特異結(jié)合被分析物質(zhì)的分子在經(jīng)過(guò)阻攔區(qū)域時(shí)，大顆粒的物質(zhì)速度比小顆粒物質(zhì)慢，這樣可以讓帶有標(biāo)記物質(zhì)的特異結(jié)合被分析物質(zhì)的分子在阻攔區(qū)域上作稍長(zhǎng)停留與阻攔分子進(jìn)行充分反應(yīng)，有利于減少檢測(cè)結(jié)果的“假陽(yáng)性”。
[0023]在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施例中，混合標(biāo)記物質(zhì)包括膠體金-被標(biāo)記物結(jié)合物，以及乳膠-被標(biāo)記物結(jié)合物的混合物。具體的說(shuō)，是將膠體金顆粒和乳膠顆粒分別和被標(biāo)記物標(biāo)記，然后根據(jù)一定的比例混合在一起。優(yōu)選的，混合標(biāo)記物質(zhì)為膠體金-抗體結(jié)合物和乳膠-抗體結(jié)合物的混合物。另外優(yōu)選的，混合標(biāo)記物質(zhì)為膠體金-抗原結(jié)合物和乳膠-抗原結(jié)合物的混合物。在具體的例子中，如流感檢測(cè)中，如圖1所示，可以將膠體金顆粒和流感抗體在一定條件下分別標(biāo)記，然后將已得到的流感抗體乳膠結(jié)合物和流感抗體膠體金結(jié)合物共同處理到檢測(cè)試劑條的標(biāo)記區(qū)域上，并干燥，組裝成相關(guān)產(chǎn)品進(jìn)行試驗(yàn)。標(biāo)記膠體金和乳膠的方法，在現(xiàn)有技術(shù)中均有述及，這里不多累贅。采用這樣方式得到的混合標(biāo)記物質(zhì)，在技術(shù)上比較容易掌握，在試驗(yàn)過(guò)程中取得了相當(dāng)顯著的效果。這種方式發(fā)揮了膠體金標(biāo)記和乳膠標(biāo)記各自的優(yōu)點(diǎn)，可以有效得提高產(chǎn)品的靈敏度和特異性，這在后面的實(shí)施例中將具體體現(xiàn)。
[0024]在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施例中，混合標(biāo)記物質(zhì)包括膠體金-被標(biāo)記物-乳膠結(jié)合物。優(yōu)選的，將被標(biāo)記物和膠體金顆粒先標(biāo)記，得到膠體金-被標(biāo)記物結(jié)合物，然后，乳膠顆粒去標(biāo)記膠體金-被標(biāo)記物結(jié)合物，可以得到膠體金-被標(biāo)記物-乳膠這樣雙重標(biāo)記的結(jié)合物。另外優(yōu)選的，將被標(biāo)記物和乳膠顆粒先標(biāo)記，得到乳膠-被標(biāo)記物結(jié)合物，然后，用膠體金顆粒去標(biāo)記乳膠-被標(biāo)記物結(jié)合物，理論上也可以得到膠體金-被標(biāo)記物-乳膠這樣雙重標(biāo)記的結(jié)合物。這種混合標(biāo)記物質(zhì)包含了兩種不同特性的標(biāo)記物，相當(dāng)于在檢測(cè)過(guò)程中起到了雙保險(xiǎn)的作用，可以更加完全得參與免疫反應(yīng)，因?yàn)?，得到的結(jié)果是比較理想的，同樣可以將產(chǎn)品的靈敏度和特異性提升一個(gè)層次。在一個(gè)具體的判斷婦女是否懷孕的快速診斷檢測(cè)中，采用膠體金顆粒和HCG抗體在一定的PH等合適環(huán)境下進(jìn)行標(biāo)記，形成膠體金-HCGAb結(jié)合物(膠體金-HCG抗體結(jié)合物)，然后，再用乳膠顆粒標(biāo)記膠體金-HCGAb結(jié)合物，得到膠體金-HCGAb-乳膠結(jié)合物。將這種混合標(biāo)記物質(zhì)應(yīng)用于檢測(cè)樣本中是否含有HCG抗體的檢測(cè)試劑條中，優(yōu)選的，這種混合標(biāo)記物(膠體金-HCGAb-乳膠結(jié)合物)被處理在檢測(cè)試劑條的標(biāo)記區(qū)域上。這種混合標(biāo)記物質(zhì)取得的效果由于帶有更多的標(biāo)記物質(zhì)，而且發(fā)揚(yáng)了不同標(biāo)記物質(zhì)的長(zhǎng)處，規(guī)避了這些標(biāo)記物質(zhì)的不足之處，可以比較明顯得改善檢測(cè)的效果，如，不采用混合標(biāo)記物質(zhì)的檢測(cè)試劑條在cut-off值附近出現(xiàn)的陽(yáng)性或者陰性不確定的情況，在使用了帶有混合標(biāo)記物質(zhì)的檢測(cè)試劑條之后，情況得到了很好的改進(jìn)，用cut-off陽(yáng)性溶液實(shí)驗(yàn)得到較明顯的陽(yáng)性結(jié)果，而用cut-off陰性溶液實(shí)驗(yàn)得到明顯的陰性結(jié)果，這說(shuō)明檢測(cè)的靈敏度大大提高。
[0025]另外優(yōu)選的，在一個(gè)具體的實(shí)施例中，混合標(biāo)記物質(zhì)還可以包括膠體金-被標(biāo)記物結(jié)合物，以及水溶性標(biāo)記物-被標(biāo)記物結(jié)合物。在另一個(gè)具體的實(shí)施例中，混合標(biāo)記物質(zhì)包括膠體金-被標(biāo)記物-水溶性標(biāo)記物結(jié)合物。在另一個(gè)實(shí)施例中，混合標(biāo)記物質(zhì)包括乳膠-被標(biāo)記物結(jié)合物，以及水溶性標(biāo)記物-被標(biāo)記物結(jié)合物。在另外的具體的實(shí)施例中，混合標(biāo)記物質(zhì)包括乳膠-被標(biāo)記物-水溶性標(biāo)記物結(jié)合物。在另外優(yōu)選的方式中，混合標(biāo)記物質(zhì)還可以包括兩種以上的標(biāo)記物質(zhì)，如選用乳膠顆粒，磁性顆粒以及膠體金顆粒進(jìn)行標(biāo)記。這種方式的混合標(biāo)記物質(zhì)，可以在應(yīng)用到產(chǎn)品之后，除了免疫直觀(guān)得得到定性的結(jié)果，還可以在精密儀器下得到定量的結(jié)果。更為優(yōu)選的實(shí)施例中，混合標(biāo)記物質(zhì)的被標(biāo)記物上標(biāo)記了三種標(biāo)記物，膠體金顆粒，乳膠顆粒和水溶性標(biāo)記物共同被標(biāo)記在同一種被標(biāo)記物上。
[0026]本發(fā)明還涉及了一種標(biāo)記混合標(biāo)記物質(zhì)的方法，包括標(biāo)記物和被標(biāo)記物的結(jié)合。優(yōu)選的，標(biāo)記物至少包括膠體金顆粒和乳膠顆粒。在具體的優(yōu)選的實(shí)施例中，將膠體金顆粒和被標(biāo)記物集合在一起形成膠體金-被標(biāo)記物結(jié)合物；乳膠顆粒和被標(biāo)記物結(jié)合在一起形成乳膠-被標(biāo)記物結(jié)合物；最后將這兩種結(jié)合物混合在一起。在另外一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施例中，標(biāo)記混合標(biāo)記物質(zhì)的方法包括，將膠體金顆粒和被標(biāo)記物結(jié)合形成膠體金-被標(biāo)記物結(jié)合物；將乳膠顆粒和膠體金-被標(biāo)記物結(jié)合物結(jié)合形成膠體金-被標(biāo)記物-乳膠結(jié)合物。此外優(yōu)選的的實(shí)施例中，標(biāo)記混合標(biāo)記物質(zhì)的方法包括:將被標(biāo)記物和乳膠顆粒先標(biāo)記，得到乳膠-被標(biāo)記物結(jié)合物，然后，用膠體金顆粒去標(biāo)記乳膠-被標(biāo)記物結(jié)合物，理論上也可以得到膠體金-被標(biāo)記物-乳膠這樣雙重標(biāo)記的結(jié)合物。
[0027]本發(fā)明還涉及一種檢測(cè)樣本中是否含有被分析物質(zhì)的檢測(cè)試劑條。優(yōu)選的，這種檢測(cè)試劑條包括如上所述的混合標(biāo)記物質(zhì)。檢測(cè)試劑條可以包括一些組件或部件，如順次包括樣本接受區(qū)域，標(biāo)記區(qū)域和檢測(cè)區(qū)域以及吸收區(qū)域，檢測(cè)區(qū)域上通?？梢杂袡z測(cè)線(xiàn)。這些部件或者組件是現(xiàn)有【技術(shù)領(lǐng)域】?jī)?nèi)技術(shù)人員所公知的。優(yōu)選的，混合標(biāo)記物質(zhì)位于檢測(cè)試劑條的標(biāo)記區(qū)域上。
[0028]“被分析物質(zhì)”在本發(fā)明中包括一些半抗原物質(zhì)，這些半抗原包括毒品(如濫用藥物)?！盀E用藥物”(DOA)是指非醫(yī)學(xué)目的地使用藥品(通常起麻痹神經(jīng)的作用)。藥物濫用的例子包括可卡因；安非他明等。這些藥品被人體吸收后會(huì)分解成不同的小分子物質(zhì)，這些小分子物質(zhì)存在于血液、尿液、唾液、汗水等體液中或部分體液存在上述小分子物質(zhì)。被分析物質(zhì)還可以是人絨毛膜促性腺激素(hCG)，黃體生成素(LH)，卵巢刺激素(FSH)，丙肝病毒(HCV)，乙肝病毒(HBV)，乙肝表面抗原，艾滋病病毒和任何濫用的藥物。被分析物能夠在任何的液體或者液化樣本中檢測(cè)到，例如尿液，唾液，口水，血液，血漿，或者血清。
[0029]下面結(jié)合具體附圖對(duì)本發(fā)明的實(shí)施例子來(lái)進(jìn)行詳細(xì)的說(shuō)明。這些具體的實(shí)施例子僅僅是在不違背本發(fā)明精神下的有限列舉，并不排除本領(lǐng)域的一般技術(shù)人員把現(xiàn)有技術(shù)和本發(fā)明結(jié)合而產(chǎn)生的其他具體的實(shí)施方案。
[0030]實(shí)施例1
[0031]本實(shí)施例闡述了流感檢測(cè)試劑條。在檢測(cè)試劑條的標(biāo)記區(qū)域，共同標(biāo)記了乳膠-流感抗體結(jié)合物和膠體金(也稱(chēng)金標(biāo))_流感抗體結(jié)合物。下面是具體的標(biāo)記過(guò)程和采用的物質(zhì)，原理如圖1所示。
[0032]1.乳膠標(biāo)記:將流感A抗體如紅色乳膠混合，加入EDC后進(jìn)行反應(yīng)，4小時(shí)后，加入終止液，停止反應(yīng)，1000rpm離心去上清液，加入稀釋液，并超聲波破碎，得到流感抗體乳膠結(jié)合物，4 °C保存。
[0033]2.金標(biāo)標(biāo)記:將40nm膠體金溶液pH調(diào)至9.0，將流感A抗體用0.1Mol/L K2C03調(diào)pH至9.0，兩者混合，攪拌10分鐘，加入一定量的5 %胎牛血清和I %的聚乙二醇，加入的量:5% BSA使溶液終濃度為1% ;1%聚乙二醇加至總?cè)芤旱?/10。繼續(xù)攪拌10分鐘。然后在14000g，離心I小時(shí)。然后吸出上清，沉淀物用含1% BSA的PBS溶液將沉淀稀釋為為原體積的1/10，得到流感抗體膠體金結(jié)合物，4°C保存。
[0034]3.將已得的流感抗體乳膠結(jié)合物和金標(biāo)結(jié)合物稀釋到不同濃度，按一定處理到聚脂膜上，并干燥，組裝成相關(guān)產(chǎn)品進(jìn)行試驗(yàn)?？贵w乳膠結(jié)合物加上抗體膠體金結(jié)合物的靈敏度比單獨(dú)的抗體乳膠結(jié)合物或抗體膠體金結(jié)合物都高，特異性都良好。結(jié)果如表一:
[0035]表一:不同濃度流感抗體乳膠結(jié)合物和流感抗體金標(biāo)結(jié)合物檢測(cè)結(jié)果比較表
[0036]

【權(quán)利要求】
1.一種混合標(biāo)記物質(zhì)，包括標(biāo)記物和被標(biāo)記物，其特征在于，所述的標(biāo)記物包括選自膠體金顆粒，乳膠顆粒，水溶性標(biāo)記物之中的至少兩種。
2.如權(quán)利要求1所述的混合標(biāo)記物質(zhì)，其特征在于，所述的被標(biāo)記物包括至少一種抗體或抗原物質(zhì)。
3.如權(quán)利要求1或2所述的混合標(biāo)記物質(zhì)，其特征在于，所述的混合標(biāo)記物質(zhì)包括膠體金-被標(biāo)記物-乳膠結(jié)合物。
4.如權(quán)利要求1或2所述的混合標(biāo)記物質(zhì)，其特征在于，所述的混合標(biāo)記物質(zhì)包括膠體金-被標(biāo)記物結(jié)合物，以及水溶性標(biāo)記物-被標(biāo)記物結(jié)合物。
5.如權(quán)利要求1或2所述的混合標(biāo)記物質(zhì)，其特征在于，所述的混合標(biāo)記物質(zhì)包括膠體金-被標(biāo)記物-水溶性標(biāo)記物結(jié)合物。
6.如權(quán)利要求1或2所述的混合標(biāo)記物質(zhì)，其特征在于，所述的混合標(biāo)記物質(zhì)包括乳膠-被標(biāo)記物結(jié)合物，以及水溶性標(biāo)記物-被標(biāo)記物結(jié)合物。
7.如權(quán)利要求1或2所述的混合標(biāo)記物質(zhì)，其特征在于，所述的混合標(biāo)記物質(zhì)包括乳膠-被標(biāo)記物-水溶性標(biāo)記物結(jié)合物。
8.一種帶有混合標(biāo)記物質(zhì)的檢測(cè)試劑條，其中混合標(biāo)記物質(zhì)包括標(biāo)記物和被標(biāo)記物，其特征在于，所述的標(biāo)記物包括選自膠體金顆粒，乳膠顆粒，水溶性標(biāo)記物之中的至少兩種。
9.如權(quán)利要求8所述的檢測(cè)試劑條，其特征在于，所述的被標(biāo)記物包括至少一種抗體或抗原物質(zhì)。
10.如權(quán)利要求8所述的檢測(cè)試劑條，其特征在于，所述的檢測(cè)試劑條包括標(biāo)記區(qū)域和檢測(cè)區(qū)域，所述的混合標(biāo)記物質(zhì)位于標(biāo)記區(qū)域。
11.如權(quán)利要求8或9所述的檢測(cè)試劑條，其特征在于，所述的混合標(biāo)記物質(zhì)包括膠體金-被標(biāo)記物-乳膠結(jié)合物。
12.—種標(biāo)記混合標(biāo)記物質(zhì)的方法，包括標(biāo)記物和被標(biāo)記物的結(jié)合，其特征在于，所述的標(biāo)記物包括選自膠體金顆粒，乳膠顆粒，水溶性標(biāo)記物之中的至少兩種。
13.如權(quán)利要求12所述的標(biāo)記方法，其特征在于，包括以下步驟:膠體金顆粒和被標(biāo)記物結(jié)合形成膠體金-被標(biāo)記物結(jié)合物；乳膠顆粒和膠體金-被標(biāo)記物結(jié)合結(jié)合形成膠體金-被標(biāo)記物-乳膠結(jié)合物。
14.如權(quán)利要求12或13所述的標(biāo)記方法,其特征在于,所述的被標(biāo)記物包括抗原或者抗體。
【文檔編號(hào)】G01N33/532GK104198692SQ201410366392
【公開(kāi)日】2014年12月10日 申請(qǐng)日期:2009年9月3日 優(yōu)先權(quán)日:2009年9月3日
【發(fā)明者】吳銀飛 申請(qǐng)人:艾博生物醫(yī)藥(杭州)有限公司