一種用于測(cè)定高密度脂蛋白膽固醇的試劑盒的制作方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及一種用于測(cè)定高密度脂蛋白膽固醇的試劑盒。所述試劑盒包括第一試劑和第二試劑，其中，第一試劑包括抑制非高密度脂蛋白溶解的表面活性劑I和溶解高密度脂蛋白的表面活性劑II，所述表面活性劑I和所述表面活性劑II混合后的HLB值在13～14范圍內(nèi)，表面活性劑I和表面活性劑II在第一試劑中的體積比為1:30～1:1。該試劑盒通過(guò)幾種成分的協(xié)同作用，提高了試劑盒的穩(wěn)定性，能特異性釋放HDL，同時(shí)能特異掩蔽抑制非HDL的解離，并可消除血清中其他成分的干擾，保證測(cè)量的準(zhǔn)確性。
【專(zhuān)利說(shuō)明】—種用于測(cè)定高密度脂蛋白膽固醇的試劑盒

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及膽固醇的測(cè)定【技術(shù)領(lǐng)域】，尤其涉及一種用于測(cè)定高密度脂蛋白膽固醇的試劑盒。

【背景技術(shù)】
[0002]人體血液中的膽固醇除了游離膽固醇，大部分與極低密度脂蛋白(VLDL)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)等脂蛋白結(jié)合成脂蛋白膽固醇形式存在。其中，HDL亦稱(chēng)為al脂蛋白，比較富含磷脂質(zhì)，在血清中的含量約為300mg/dl。其蛋白質(zhì)部分，A — I約為75%，A — II約為20%。HDL接受來(lái)自于包括動(dòng)脈壁的各組織的膽固醇，通過(guò)直接逆轉(zhuǎn)運(yùn)或間接逆轉(zhuǎn)運(yùn)，將其運(yùn)入肝臟，再清除出血液，因此HDL與積累于細(xì)胞內(nèi)的膽固醇的除去作用相關(guān)。因此高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)是動(dòng)脈粥樣硬化(AS)、冠心病(CHD)的等各種動(dòng)脈硬化癥的危險(xiǎn)預(yù)防因子(呈負(fù)相關(guān))，其在血液中的水平對(duì)動(dòng)脈硬化性疾病的診斷有特異的輔助作用。
[0003]HDL-C增高最主要的臨床價(jià)值是能夠?qū)?dòng)脈粥樣硬化斑塊的泡沫細(xì)胞轉(zhuǎn)移至肝臟排出體外，可見(jiàn)于原發(fā)性高密度脂蛋白血癥(家族性高α-脂蛋白血癥)，并發(fā)現(xiàn)此群家族中長(zhǎng)壽者多。接受雌激素胰島素或某些藥物(如煙酸、維生素Ε，肝素等)治療者，亦可增高，蝦青素可顯著提升人類(lèi)高密度脂蛋白膽固醇。高密度脂蛋白膽固醇降低常見(jiàn)于腦血管病冠心病、高甘油三酯血癥、肝功能損害如急慢性肝炎、肝硬化、肝癌、糖尿病、吸煙、缺少運(yùn)動(dòng)等其降低可作為冠心病的危險(xiǎn)指標(biāo)。因此，體內(nèi)高密度脂蛋白膽固醇濃度測(cè)定對(duì)診斷冠心病、心腦血管病、肝炎、肝硬化等疾病具有一定的參考意義。
[0004]目前HDL-C含量測(cè)定在臨床試驗(yàn)中已經(jīng)常規(guī)化。美國(guó)膽固醇教育計(jì)劃(NCEP)對(duì)HDL-C測(cè)定的建議中指出=HDL-C測(cè)定的準(zhǔn)確性非常重要，因?yàn)镠DL-C在一個(gè)很窄的濃度范圍內(nèi)與冠心病呈負(fù)相關(guān)；CHD危險(xiǎn)增高的界限是在HDL-C濃度范圍的低端，測(cè)定的細(xì)小誤差會(huì)產(chǎn)生相對(duì)大的影響。
[0005]測(cè)定高密度脂蛋白膽固醇的方法很多，目前市場(chǎng)上流通的主要是勻相測(cè)定法，包括PEG修飾酶法、選擇抑制法、清除法和免疫分離法。
[0006]PEG修飾法是用PEG修飾改性膽固醇酯酶(CEH)和膽固醇氧化酶(COD)，修飾酶對(duì)脂蛋白的結(jié)構(gòu)具有選擇性，其次序是LDL < VLDL < CM < HDL ;另外葡聚糖、α -環(huán)糊精硫酸鹽(α-S⑶)和Mg2+與非HDL形成復(fù)合物，可以避免修飾酶對(duì)非HDL的作用，因此在葡聚糖、Mg2+、a -環(huán)糊精硫酸鹽和修飾酶作用下可以直接測(cè)定HDL-C。
[0007]選擇抑制法(pro法)是在Rl (第一試劑)中含表面活性劑I (HDL-C的反應(yīng)抑制劑)、聚陰離子和某種鹽，乳糜微粒(CM)、VLDL、LDL在多聚陰離子一鹽環(huán)境下發(fā)生凝聚，同時(shí)表面活性劑I與凝聚的脂蛋白的疏水集團(tuán)有高度親和力，能吸附在凝聚的脂蛋白的顆粒表面形成遮蔽，抑制非HDL-C的反應(yīng)，同時(shí)，HDL上也有表面活性劑I，但由于親和力較弱，反應(yīng)時(shí)可逆的；R2(第二試劑)中含有對(duì)HDL親水基團(tuán)有高度親和力的表面活性劑IUHDL-C的反應(yīng)促進(jìn)劑)，其對(duì)HDL的吸附不僅置換出第一反應(yīng)中與HDL親和的表面活性劑I，還能使HDL形成可溶性復(fù)合物，使HDL-C參與反應(yīng)。
[0008]清除法是利用表面活性劑對(duì)脂蛋白的親和性差異。在Rl (第一試劑)反應(yīng)促進(jìn)劑(表面活性劑I)的作用下，血清中非HDL形成可溶性復(fù)合物，可溶性復(fù)合物表層的游離膽固醇在COD催化下反應(yīng)生成H2O2，通過(guò)過(guò)氧化物酶(POD)(或過(guò)氧化氫酶(CAT)，Rl中不加P0D,不加疊氮鈉)除去H2O2 ;然后，加入R2 (第二試劑)，在特殊選擇性表面活性劑作用下，只有HDL可溶，所釋放的膽固醇在膽固醇酯酶(CEH)和COD作用下，生成H2O2,通過(guò)POD (如果Rl中用CAT除去H2O2,則R2中要添加疊氮鈉抑制其作用)、4_AAP和色原，發(fā)生顯色反應(yīng)，直接測(cè)定HDL-C。
[0009]免疫分離法有兩種，一是PEG/抗體包裹法，用低濃度的PEG4000包裹非HDL，加入特異性抗apoB、apoCIII抗體,使非HDL顆粒復(fù)合物凝聚,然后加入膽固醇酶試劑,檢測(cè)HDL-C，最后加入鹽酸胍試劑，終止酶促反應(yīng)和溶解含apoB脂蛋白復(fù)合物，避免干擾吸光度測(cè)定；二是抗體免疫分離法，Rl中的抗人β脂蛋白抗體首先與血清中非HDL結(jié)合形成不溶性抗原-抗體復(fù)合物，加入R2后，復(fù)合物不與酶試劑起反應(yīng)，只有HDL-C與酶試劑發(fā)生反應(yīng)，生成H2O2,最后通過(guò)Trinder反應(yīng)測(cè)定HDL-C含量。
[0010]PEG修飾法需要對(duì)酶進(jìn)行修飾，很大程度上降低了酶的活性，造成成本增加；免疫分離法特異性抗體價(jià)格昂貴且反應(yīng)步驟多，實(shí)用性差；清除法和選擇抑制法主要關(guān)鍵是表面活性劑的選擇，但表面活性劑的使用比較困難，對(duì)非HDL的掩蔽抑制不完全，同時(shí)對(duì)HDL的釋放不徹底。
[0011]針對(duì)上述問(wèn)題，非常有必要開(kāi)發(fā)一種對(duì)HDL-C的檢測(cè)更加靈敏的產(chǎn)品。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0012]本發(fā)明提供了一種測(cè)定高密度脂蛋白中的膽固醇的試劑盒，可簡(jiǎn)單、高效地檢測(cè)高密度脂蛋白膽固醇的含量。
[0013]本發(fā)明提供的用于測(cè)定高密度脂蛋白中的膽固醇的試劑盒包括包括第一試劑(R1)，所述Rl包括抑制非高密度脂蛋白溶解的表面活性劑I和溶解高密度脂蛋白的表面活性劑II，并且所述表面活性劑I和所述表面活性劑II混合后的親水疏水平衡值(Hydrophile-Lipophile Balance Number,HLB 值)為 13 ?14。其中，HLB 值也稱(chēng)水油度，它既與表面活性劑的親水親油性有關(guān)，又與表面活性劑的表面(界面)張力、界面上的吸附性、乳化性及乳狀液穩(wěn)定性、分散性、溶解性、去污性等基本性能有關(guān)，還與表面活性劑的應(yīng)用性能有關(guān)。HLB值越大代表親水性越強(qiáng)，HLB值越小代表親油性越強(qiáng)，一般而言，HLB值從I?40之間。親油性表面活性劑HLB較低，親水性表面活性劑HLB較高。親水親油轉(zhuǎn)折點(diǎn)HLB為10。HLB小于10為親油性，大于10為親水性。HLB在實(shí)際應(yīng)用中有重要參考價(jià)值。
[0014]在本申請(qǐng)中，除非標(biāo)明或毫無(wú)疑義的表明HLB值是公式計(jì)算值還是實(shí)際測(cè)量值，否則在本申請(qǐng)中均指實(shí)際測(cè)量值。
[0015]在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，所述表面活性劑I在所述Rl中的體積含量為0.1?3.0%。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述表面活性劑I在所述Rl中的體積含量為0.3?1.0%。
[0016]在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，所述表面活性劑II在所述Rl中的體積含量為0.1?3.0%。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述表面活性劑II在所述Rl中的體積含量為1.0?2.5%。
[0017]在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，所述表面活性劑I和所述表面活性劑II在所述Rl中的體積比為1:30?1:1。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述表面活性劑I和所述表面活性劑II在所述Rl中的體積比為1:20?1:1。在一個(gè)進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述表面活性劑I和所述表面活性劑II在所述Rl中的體積比為1:15?1: 1.5。
[0018]在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，所述表面活性劑I選自聚氧乙烯烷基醚、(聚氧丙烯-聚氧乙烯)嵌段聚合物和壬基酚聚氧乙烯醚中的一種或多種；和/或所述表面活性劑II選自聚氧乙烯基聯(lián)苯乙烯化苯基醚、聚氧乙烯烷基醚、失水山梨糖醇脂肪酸酯和聚氧乙烯油酸酯中的一種或多種。例如，所述表面活性劑I選自Emulgen系列(如Emulgen A90、Emulgen220 和 Emulgen LS114 等)、Pluronic 系列(如 Pluronic F_88、Pluronic L121 和Pluronic F127等)、NP系列(如NP-30、NP-1O和NP-7等)中的任一種或多種；表面活性劑 II 選自 Emulgen 系列(Emulgen B66、Emulgen LS110、Emulgen709 等)、P1nin 系列(如P1nin D6512、P1nin YE309 等)、Noigen 系列(Noigen EA-157、Noigen EA-167、NoigenEA-177等)中的任一種或多種。
[0019]在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，所述Rl還包括CAT和COD。將COD和CAT添加于Rl中，能夠消除游離膽固醇產(chǎn)生的H2O2，從而消除游離膽固醇的干擾。并且CAT的使用濃度優(yōu)選為100-1000KU/L，COD的使用濃度優(yōu)選為1-50KU/L。
[0020]在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，所述Rl還包括抗壞血酸氧化酶和/或膽紅素氧化酶，分別用于氧化抗環(huán)血酸和氧化膽紅素。并且抗壞血酸氧化酶的使用濃度選自1-20KU/L，膽紅素氧化酶的使用濃度選自1-20KU/L。因?yàn)槟懝檀紲y(cè)試原理是COD氧化膽固醇形成H2O2最終H202+4-AAP+T00S在過(guò)氧化物酶作用下生成醌類(lèi)物質(zhì)，在546nm的波長(zhǎng)下測(cè)試其吸光度。如果不加入抗壞血酸氧化酶，抗壞血酸會(huì)還原H2O2,消耗掉H2O2，對(duì)測(cè)試結(jié)果有影響；抗壞血酸氧化酶可將抗壞血酸氧化成去氫抗壞血酸，而去氫抗壞血酸不能還原H2O2,從而提高了測(cè)試結(jié)果的準(zhǔn)確性。膽紅素本身有在450nm左右有吸收峰，會(huì)干擾吸光度，造成測(cè)試結(jié)果不準(zhǔn)確。膽紅素氧化酶能氧化膽紅素成為膽綠素，而膽綠素在546nm波長(zhǎng)附近無(wú)吸收峰。
[0021]在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，所述Rl還包括聚陰離子、Mg2+、α -環(huán)糊精硫酸鹽、顯色齊U、第一防腐劑、第一保護(hù)劑和第一緩沖液。聚陰離子和Mg2+共同沉淀非HDL，a-S⑶有內(nèi)空腔的疏水環(huán)境，有微弱的極性與脂蛋白的疏水性基團(tuán)結(jié)合，分子空腔外側(cè)為親水性基團(tuán)，能包裹沉淀的非HDL，同時(shí)環(huán)糊精的磺酸基團(tuán)可使CM、VLDL顆粒進(jìn)入環(huán)狀的糊精結(jié)構(gòu)，可以避免酶的催化作用，其能力還與鹽濃度有關(guān)。
[0022]在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，試劑盒中還包括第二試劑，所述第二試劑包括助色劑、過(guò)氧化物酶、膽固醇酯酶、第二防腐劑和第二緩沖液，并任選地包括第二保護(hù)劑。因?yàn)轱@色劑和助色劑(例如4-AAP)放置一起，會(huì)緩慢反應(yīng)形成顯色物質(zhì)，影響吸光度讀取，因此有必要分開(kāi)，把顯色劑放在Rl中，助色劑放在R2中；或把助色劑放在Rl中，顯色劑放在R2中。因?yàn)檎麄€(gè)反應(yīng)是酶的反應(yīng)，要保證Rl和R2中的pH和離子強(qiáng)度不影響酶的活性，因此要有合適的濃度和PH的緩沖液，即所述的第一緩沖液和所述的第二緩沖液，然后再加酶保護(hù)劑。另外，第一防腐劑和第二防腐劑可以相同，也可以不同，優(yōu)選它們相同；第一保護(hù)劑和第二保護(hù)劑可以相同，也可以不同，優(yōu)選它們相同；第一緩沖液可以相同，也可以不同，優(yōu)選它們相同。
[0023]在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，所述聚陰離子的使用濃度選自0.l_5g/L，且所述聚陰離子選自硫酸葡聚糖、硫酸葡聚糖鹽、肝素、肝素鹽、鎢磷酸、鎢磷酸鹽、硫酸寡糖、硫酸寡糖鹽和硫酸軟骨素中的一種或多種。
[0024]在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，所述α -環(huán)糊精硫酸鹽的使用濃度選自0.l_2g/L，且所述α-環(huán)糊精硫酸鹽選自鈉鹽、鉀鹽、銨鹽、鎂鹽、鈣鹽中的任一種或多種。
[0025]在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，所述顯色劑的濃度為0.5_5mmol/L。所述顯色劑選自苯胺類(lèi)化合物或苯酚類(lèi)化合物；所述苯胺類(lèi)化合物選自N-(3_磺基丙基)苯胺、N-乙基-N-(2-羥基-3-磺基丙基)-3-甲基苯胺(TOOS)、N-乙基_N_(2_羥基-3-磺基丙基)_3，5- 二甲基苯胺(MAOS)、N-乙基-N-(2-羥基_3_磺基丙基)_3，5- 二甲氧基苯胺(DAOS)、N-乙基-N- (-3-磺基丙基)-3-甲基苯胺(TOPS)、N- (2-羥基-3-磺基丙基)-3,5-二甲氧基苯胺(HDAOS)、N，N-二甲基-3-甲基苯胺、N，N-二(3-磺基丙基)-3，5-二甲氧基苯胺、N-乙基-N-(3-磺基丙基)-3-甲氧基苯胺、N-乙基-N-(3-磺基丙基)苯胺、N-乙基-N-(3-磺基丙基)-3，5-二甲氧基苯胺、N-(3-磺基丙基)-3，5-二甲氧基苯胺、N-乙基-N-(3-磺基丙基)_3，5- 二甲基苯胺、N-乙基-N-(2-羥基-3-磺基丙基)-3-甲氧基苯胺、N-乙基-N-(2-羥基-3-磺基丙基)苯胺、N-乙基-N-(3-甲基苯基)-N'-琥珀酰乙二胺(EMSE)、N-乙基-N-(3-甲基苯基)-N '-乙酰乙二胺、N-乙基-N- (2-羥基-3-磺基丙基)-4-氟-3，5- 二甲氧基苯胺(F-DAOS)中的任一種；所述苯酚類(lèi)化合物選自苯酚、4-氯苯酚、3-甲基苯酚、3-羥基-2，4，6-三碘苯甲酸(HTIB)中的任一種。
[0026]在一個(gè)具體的實(shí)施方案中,所述助色劑的使用濃度選自l-10mmol/L。所述助色劑選自4-氨基安替比林(4-AAP)或3-甲基-2-苯并噻唑啉酮肼。
[0027]在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，所述POD的使用濃度為1-50KU/L。
[0028]在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，所述CEH的使用濃度為1-50KU/L。
[0029]在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，所述第一防腐劑的使用濃度為0.1-lml/L，所述第二防腐劑的使用濃度為0.l-2g/L。且所述第一防腐劑選自山梨酸鉀、苯甲酸鈉、亞硝酸鈉、Proclin系列中的任一種或多種；所述第二防腐劑為疊氮鈉。
[0030]在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，所述第一保護(hù)劑的使用濃度選自l-10g/L，所述第二保護(hù)劑的使用濃度選自l_20g/L，且所述第一保護(hù)劑和所述第二保護(hù)劑各自獨(dú)立的選自甘油、白蛋白、蔗糖、NaCl, EDTA中的任一種或多種。保護(hù)劑通過(guò)與酶的基團(tuán)結(jié)合，能夠降低其它成分對(duì)酶的抑制作用，提高酶的效率；或者與酶發(fā)生鍵合作用，穩(wěn)定酶的構(gòu)象；或者與重金屬離子結(jié)合，避免重金屬對(duì)酶活性的抑制；或者促進(jìn)反應(yīng)的進(jìn)行。
[0031]在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，所述第一緩沖液和所述第二緩沖液的使用濃度各自獨(dú)立的選自0.01-0.5mol/L，pH各自獨(dú)立的選自6.0-8.0，且所述第一緩沖液的溶劑和所述第二緩沖液的溶劑各自獨(dú)立地選自三羥甲基氨基甲烷緩沖劑、磷酸鹽緩沖劑、Good’s緩沖劑、硼酸緩沖劑中的任一種或多種。其中，所述Good’ s緩沖劑選自2-嗎啉乙磺酸(MES)、二(2-羥基)亞氨基三(羥甲基)甲烷(Bis-Tris)、N-(2-乙酰胺)亞氨基二乙酸(ADA)、哌嗪-N，V -二(2-乙烷磺酸)(PIPES)、N-(2-乙酰胺)_2_氨基甲磺酸(BES)、3-嗎啉代丙磺酸(MOPS) ,N-[H (羥甲基)甲基]-2-氨基甲磺酸(TES)、2-[4-(2-羥甲基)-1-哌嗪]乙烷磺酸(HEPES)、3-[N，N ' -二(2-羥甲基)氨]_2_羥基丙磺酸(DIPSO) ,N-[H (羥甲基)甲基]-2-羥基-3-氨基丙磺酸(TAPSO)、哌嗪-N，-二(2-羥基丙磺酸)(POPSO)、3-[4-(2-羥甲基)-1_哌嗪]-2-羥基丙磺酸(HEPPSO)、3-[4_(2_羥甲基)_1_哌嗪]丙磺酸[(H)EPPS]、N-[三(羥甲基)甲基]甘氨酸(Tricine)、N，V -二(2-羥甲基)甘氨酸(Bicine)、N-三(羥甲基)甲基_3_氨基丙磺酸(TAPS)、N-環(huán)己基-2-氨基甲磺酸(CHES)、N-環(huán)己基-3-氨基-2-羥基丙磺酸(CAPSO)、N-環(huán)己基-3-氨基丙磺酸(CAPS)中的任一種或多種。
[0032]在本發(fā)明的一個(gè)具體的實(shí)施方案中，第一試劑包括如上所述的表面活性劑1、所述表面活性劑I1、聚陰離子、Mg2+、第一防腐劑、第一保護(hù)劑、第一緩沖液、顯色劑、CAT、C0D、抗壞血酸氧化酶、膽紅素氧化酶和α-S⑶；第二試劑包括如上所述的第二緩沖液、第二保護(hù)劑、第二防腐劑、助色劑、POD和CEH。
[0033]在測(cè)定HDL-C時(shí)，許多廠(chǎng)家把表面活性劑I和表面活性劑II分別放置在Rl和R2中，沒(méi)有考慮表面活性劑的復(fù)配作用，或者考慮了復(fù)配作用，但是這些廠(chǎng)家忽略了測(cè)定過(guò)程中的酶反應(yīng)是一個(gè)極快速的反應(yīng)，兩種表面活性劑在復(fù)配的同時(shí)，酶同樣作用于非HDL，造成測(cè)試結(jié)果不準(zhǔn)確。
[0034]而在本發(fā)明中的反應(yīng)的第一階段，兩種表面活性劑同時(shí)在Rl中混合，混合后的表面活性劑通過(guò)疏水鍵、氫鍵等作用，所述表面活性劑的CMC值、HLB值等都會(huì)有復(fù)雜的變化，因而表面活性劑I和II的作用也不再是簡(jiǎn)單的1+1 = 2的結(jié)果，而是具有協(xié)同增效作用。例如，把表面活性劑I和表面活性劑II復(fù)配添加在第一試劑中，表面活性劑I為掩蔽非HDL的主要表面活性劑，而表面活性劑II 一方面輔助表面活性劑I抑制非HDL的解離，另一方面又促進(jìn)HDL的釋放，使得HDL在僅有第一試劑參與反應(yīng)的第一階段就釋放完全，并與非HDL的掩蔽同步進(jìn)行。
[0035]對(duì)于表面活性劑復(fù)配的HLB值，有研究通過(guò)公式(I)計(jì)算得到，但計(jì)算結(jié)果和實(shí)驗(yàn)測(cè)量結(jié)果最多可以相差1-2個(gè)HLB值，同時(shí)復(fù)配方案較少，沒(méi)有形成最佳復(fù)配方案。
[0036]

【權(quán)利要求】
1.一種用于測(cè)定高密度脂蛋白中的膽固醇的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括第一試劑，所述第一試劑包括抑制非高密度脂蛋白溶解的表面活性劑I和溶解高密度脂蛋白的表面活性劑II，并且所述表面活性劑I和所述表面活性劑II混合后的親水疏水平衡值為13 ~14。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述表面活性劑I在所述第一試劑中的體積含量為0.1~3.0%。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述表面活性劑II在所述第一試劑中的體積含量為0.1~3.0%。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述表面活性劑I和所述表面活性劑II在所述第一試劑中的體積比為1:30~1:1。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4所述的試劑盒，其特征在于，所述表面活性劑I選自聚氧乙烯烷基醚、(聚氧丙烯-聚氧乙烯)嵌段聚合物和壬基酚聚氧乙烯醚中的一種或多種；和/或所述表面活性劑II選自聚氧乙烯基聯(lián)苯乙烯化苯基醚、聚氧乙烯烷基醚、失水山梨糖醇脂肪酸酯和聚氧乙烯油酸酯中的一種或多種。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述第一試劑還包括過(guò)氧化氫酶和膽固醇氧化酶。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述第一試劑還包括抗壞血酸氧化酶和/或膽紅素氧化酶。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述第一試劑還包括聚陰離子、Mg2+、α -環(huán)糊精硫酸鹽、顯色劑、第一防腐劑、第一保護(hù)劑和第一緩沖液。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括第二試劑，所述第二試劑包括助色劑、過(guò)氧化物酶、膽固醇酯酶、第二防腐劑和第二緩沖液，并任選地包括第二保護(hù)劑。
10.根據(jù)權(quán)利要求8或9所述的試劑盒，其特征在于，所述聚陰離子選自硫酸葡聚糖、硫酸葡聚糖鹽、肝素、肝素鹽、鎢磷酸、鎢磷酸鹽、硫酸寡糖、硫酸寡糖鹽和硫酸軟骨素中的一種或多種； 所述α-環(huán)糊精硫酸鹽選自鈉鹽、鉀鹽、銨鹽、鎂鹽和鈣鹽中的任一種或多種； 所述顯色劑選自苯胺類(lèi)化合物或苯酚類(lèi)化合物；所述苯胺類(lèi)化合物選自N-(3-磺基丙基)苯胺、N-乙基-N-(2-羥基-3-磺基丙基)-3-甲基苯胺、N-乙基-N-(2-羥基-3-磺基丙基)_3，5-二甲基苯胺、N-乙基-N-(-3-磺基丙基)-3-甲基苯胺、N-(2-羥基-3-磺基丙基)_3，5- 二甲氧基苯胺、N，N- 二甲基-3-甲基苯胺、N, N- 二(3-磺基丙基)_3，5- 二甲氧基苯胺、N-乙基-N-(3-磺基丙基)-3-甲氧基苯胺、N-乙基-N-(3-磺基丙基)苯胺、N-乙基-N-(3-磺基丙基)_3，5- 二甲氧基苯胺、N-(3-磺基丙基)_3，5- 二甲氧基苯胺、N-乙基-N-(3-磺基丙基)-3，5-二甲基苯胺、N-乙基-N-(2-羥基-3-磺基丙基)-3-甲氧基苯胺、N-乙基-N-(2-羥基-3-磺基丙基)苯胺、N-乙基-N-(3-甲基苯基)-N’ -琥珀酰乙二胺、N-乙基-N-(3-甲基苯基)-N’乙酰乙二胺和N-乙基-N-(2-羥基-3-磺基丙基)-4_氟_3，5- 二甲氧基苯胺中的任一種；所述苯酚類(lèi)化合物選自苯酚、4-氯苯酚、3-甲基苯酚和3-羥基-2，4，6-三碘苯甲酸中的任一種； 所述助色劑選自4-氨基安替比林或3-甲基-2-苯并噻唑啉酮肼；所述第一防腐劑選自山梨酸鉀、苯甲酸鈉、亞硝酸鈉和Proclin系列中的任一種或多種； 所述第二防腐劑為疊氮鈉； 所述第一保護(hù)劑和所述第二保護(hù)劑各自獨(dú)立地選自甘油、白蛋白、蔗糖、NaCl和乙二胺四乙酸二鈉中的任一種或多種； 所述第一緩沖液的溶劑和所述第二緩沖液的溶劑各自獨(dú)立地選自三羥甲基氨基甲烷緩沖劑、磷酸鹽緩沖劑、Good’s緩沖劑和硼酸緩沖劑中的任一種或多種；其中，所述Good’s緩沖劑選自2-嗎啉乙磺酸、二(2-羥基)亞氨基三(羥甲基)甲烷、N-(2-乙酰胺)亞氨基二乙酸、哌嗪-N，N’ - 二(2-乙烷磺酸)、N-(2-乙酰胺)-2-氨基甲磺酸、3-嗎啉代丙磺酸、N-[三(羥甲基)甲基]-2-氨基甲磺酸(TES)、2-[4-(2-羥甲基)-1-哌嗪]乙烷磺酸、3-[N，N’ - 二(2-羥甲基)氨]-2-羥基丙磺酸、N-[三(羥甲基)甲基]-2-羥基-3-氨基丙磺酸、哌嗪-N，N’ - 二(2-羥基丙磺酸)、3-[4-(2_羥甲基)-1_哌嗪]-2-羥基丙磺酸、3-[4-(2-羥甲基)-1-哌嗪]丙磺酸[(H)EPPS]、N-[三(羥甲基)甲基]甘氨酸、N，N’-二(2-輕甲基)甘氨酸、N-三(羥甲基)甲基-3-氨基丙磺酸、N-環(huán)己基-2-氨基甲磺酸、N-環(huán)己基-3-氨基-2-羥基丙磺酸和N-環(huán)己基-3-氨基丙磺酸中的任一種或多種。
11.根據(jù)權(quán)利要 求9所述的試劑盒，其特征在于，所述第二試劑中不包括表面活性劑。
【文檔編號(hào)】G01N33/92GK104076158SQ201410328097
【公開(kāi)日】2014年10月1日 申請(qǐng)日期:2014年7月10日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月10日
【發(fā)明者】袁錦云, 時(shí)敏, 韋銳, 葉強(qiáng), 張華杰 申請(qǐng)人:深圳市新產(chǎn)業(yè)生物醫(yī)學(xué)工程股份有限公司