一種含麗春紅的蛋白質芯片點樣緩沖液及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于生物【技術領域】，公開了一種含麗春紅的蛋白質芯片點樣緩沖液，由麗春紅、Na2CO3、NaHCO3、甘油和去離子水組成，所述的甘油和去離子水的體積比為3:1～1:20，在所述的點樣緩沖液中，所述的Na2CO3的質量百分比濃度為0.05％～1％，所述的NaHCO3的質量百分比濃度為0.05％～2％，所述的麗春紅的質量百分比濃度為0.01％～50％。本發(fā)明將麗春紅染色劑直接加入到蛋白質芯片的點樣緩沖液中，使得該緩沖液呈現(xiàn)紅色，并用該緩沖液稀釋待點樣物質，于基片上點樣，使得蛋白質芯片上的樣點在芯片使用前即可通過圖像軟件或目視觀察分析，對蛋白質芯片上樣點的圓潤及均勻程度起到一個預判的作用。
【專利說明】一種含麗春紅的蛋白質芯片點樣緩沖液及其制備方法
【技術領域】:
[0001]本發(fā)明屬于生物【技術領域】，尤其涉及一種蛋白質芯片點樣緩沖液，具體來說是一種含麗春紅的蛋白質芯片點樣緩沖液及其制備方法。
【背景技術】:
[0002]生物芯片技術是上世紀90年代初發(fā)展起來的一種高通量、大規(guī)模并行分析檢測技術，曾被Science雜志兩度評為年度十大科技突破之一，它是利用分子間特異相互作用的原理，將多種技術(如生物化學、微加工、微電子、計算機等)融為一體的一項分析檢測技術。與傳統(tǒng)分析檢測方法所不同的是，它形成的微陣列使生化分析反應過程高度集成于某一載體之上，高通量地分析檢測成百上千種DNA、RNA、多肽、蛋白質等分子。目前常見的生物芯片有:基因芯片、蛋白質芯片、糖芯片以及其他小分子生物芯片。
[0003]在基因組學的研究背景下，為了滿足人類對數(shù)以萬計基因功能的大規(guī)模研究，基因芯片應運而生?；蛐酒且罁?jù)堿基互補配對原則，將大量已知序列的核酸探針高密度有序固定于某一載體表面，從而對待檢樣品中大量核酸成分進行分析檢測的技術，其高通量、快速、簡便等優(yōu)點滿足了人們對基因的大規(guī)模分析檢測的需求。目前，基因芯片主要應用于基因表達檢測、雜交測序、疾病預測和診斷等領域。但是，基因水平上的研究只能初步了解基因表達產(chǎn)物的變化，而作為直接影響生命活動變化的蛋白質則需要經(jīng)過轉錄、翻譯、加工等多個調控步驟才能形成，所以對其功能和結構的研究將具有重大的科學意義。隨著蛋白組學研究的興起，如同起初對基因組學的研究一樣，在利用傳統(tǒng)方法對蛋白質組功能進行分析研究時，同樣遇到了現(xiàn)有技術耗時、繁瑣、通量低等一系列問題。在彌補這些研究方法缺陷時，人們自然而然地模仿了基因芯片的原理，從而研制出了蛋白質芯片。
[0004]蛋白質芯片是將各種蛋白質(如抗原、抗體)、多肽以及受體、配體等有序固定于某一載體(如濾膜、凝膠、玻片、納米微珠和微孔板)之上，以分析檢測樣品中能與之特異相互作用的成分。雖然蛋白質芯片是在蛋白質組學的研究背景下產(chǎn)生的，但其應用不僅僅只局限于蛋白質組學。凡是有關抗體一抗原、蛋白質一蛋白質、蛋白質一核酸、蛋白質一脂類、蛋白質一小分子以及酶與底物相互作用的研究中，蛋白質芯片技術均有其獨特的用途。目前主要應用于蛋白質組學、食品檢驗、疾病診斷、藥物篩選、農(nóng)林畜牧業(yè)、司法鑒定等領域。
[0005]雖然，蛋白質芯片經(jīng)過20多年的發(fā)展，但目前所遇到的問題及技術難點仍較多，其中一難點即是，批量化生產(chǎn)固相蛋白質芯片中樣點的質量控制問題。因當前在蛋白質芯片的實際應用中，所使用的點樣緩沖液多為無色的碳酸鹽或磷酸鹽緩沖液，使得芯片在點樣后樣點仍成無色狀態(tài)，導致芯片在使用前無法對其樣點的形態(tài)進行預判，樣點是否呈現(xiàn)圓潤的狀態(tài)，是否會在檢測顯色后呈現(xiàn)“咖啡環(huán)”現(xiàn)象，從而嚴重影響定量檢測信號值的讀取，甚至點樣抗體是否已經(jīng)點在基片上，這些都無從知曉，而現(xiàn)今并沒有一種方法可以解決上述批量化生產(chǎn)蛋白質芯片的質量控制問題。
[0006]麗春紅(Ponceau S)，是煤焦油提煉出來的原料合成的偶氮染料，作為一種生物染色劑使用，可用于硝酸纖維素膜、PVDF膜和醋酸纖維素膜上蛋白的檢測。麗春紅帶負電荷，可以與帶正電荷的氨基酸殘基結合，同時麗春紅也可以與蛋白質的非極性區(qū)域相結合，從而在膜上形成紅色的斑點或條帶。麗春紅對蛋白質的染色是可逆的，染色后可以用PBST，蒸餾水或其它適當溶液洗去。

【發(fā)明內容】
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[0007]針對上述現(xiàn)有技術中存在的缺陷，本發(fā)明所要解決的技術問題是提供一種含麗春紅的蛋白質芯片點樣緩沖液，所述的這種含麗春紅的蛋白質芯片點樣緩沖液要解決現(xiàn)有技術中的點樣緩沖液多為無色的碳酸鹽或磷酸鹽緩沖液，使得芯片在點樣后樣點仍成無色狀態(tài)，導致芯片在使用前無法對其樣點的圓潤及均勻程度進行預判，從而無法對蛋白質芯片的批量化生產(chǎn)進行質量控制的技術問題。
[0008]本發(fā)明提供了一種用于蛋白質芯片的點樣緩沖液，由麗春紅、Na2CO3^ NaHCO3、甘油和去離子水組成，所述的甘油和去離子水的體積比為3:1~1:20，在所述的點樣緩沖液中，所述的Na2CO3的質量百分比濃度為0.05%~1%，所述的NaHCO3的質量百分比濃度為
0.05 %~2 %，所述的麗春紅的質量百分比濃度為0.01 %~50 %。
[0009]進一步的，所述的點樣緩沖液的pH為7~11。
[0010]進一步的，以IL來計算，在所述的點樣緩沖液中，Na2CO3S 1.59g，NaHCO3為2.93g，麗春紅為IOg,甘油為IOOmL,余量為去離子水。
[0011]進一步的，所述的點樣緩沖液的pH為9.6。
[0012]本發(fā)明和已有技術相比，其技術進步是顯著的，具有如下的優(yōu)點及效果:
[0013](I)本發(fā)明所提供的含麗春紅的蛋白質芯片點樣緩沖液，使得蛋白質芯片在完成點樣步驟后，即可呈現(xiàn)肉眼可見的紅色，使得蛋白質芯片上的樣點在芯片使用前即可通過圖像軟件或目視觀察分析，對蛋白質芯片上樣點的圓潤及均勻程度起到一個預判的作用，從而對蛋白質芯片的批量化生產(chǎn)進行質量控制；
[0014](2)本發(fā)明所使用麗春紅為常見的生物染色劑，其帶負電荷，可以與帶正電荷的氨基酸殘基結合，同時麗春紅也可以與蛋白質的非極性區(qū)域相結合，從而在基片上形成紅色的斑點或條帶。麗春紅對蛋白質的染色是可逆的，染色后可以用PBST，蒸餾水或其它適當溶液洗去，并不會對蛋白質芯片的檢測顯色效果產(chǎn)生影響；
[0015](3)本發(fā)明提供的點樣緩沖液中所用的甘油，具有使蛋白質芯片中樣點的形態(tài)更為圓潤飽滿以及保持一定的持水性；
[0016](4)本發(fā)明提供的點樣緩沖液中所用的Na2C03、NaHC03，具有使該點樣緩沖液pH值維持在一定的范圍之內，使得待點樣物質能夠更穩(wěn)定地固定于基片之上。
[0017]本發(fā)明和已有技術相比，其技術進步是顯著的。本發(fā)明將麗春紅染色劑加入到蛋白質芯片的點樣緩沖液中，使得該緩沖液呈現(xiàn)紅色，并用該緩沖液稀釋待點樣物質，于基片上點樣，使得蛋白質芯片上的樣點在芯片使用前即可通過圖像軟件或目視觀察分析，對蛋白質芯片上樣點的圓潤及均勻程度起到一個預判的作用，從而對蛋白質芯片的批量化生產(chǎn)進行質量控制。
【專利附圖】

【附圖說明】:
[0018] 圖1蛋白質芯片點樣后使用如實物圖。[0019]圖2蛋白質芯片檢測顯色后實物圖。
【具體實施方式】:
[0020]本發(fā)明提供了一種含麗春紅的蛋白質芯片點樣緩沖液，還包括一個所述點樣緩沖液的制備方法。就當前通用技術而言，在蛋白質芯片的點樣環(huán)節(jié)中，所使用的點樣緩沖液均為無色的碳酸鹽或磷酸鹽緩沖液。本發(fā)明采用添加麗春紅的有色點樣緩沖液，使得蛋白質芯片在點樣完成后即可使樣點呈現(xiàn)有色狀態(tài)，并在后續(xù)的封閉或雜交過程中，有色的麗春紅即被洗脫至無色，不會影響后續(xù)檢測的顯色效果。下面結合具體實施例對本發(fā)明作進一步說明，但本發(fā)明并不限于以下實施例。
[0021]實施例1
[0022]一種含麗春紅的蛋白質芯片點樣緩沖液，其組分為:麗春紅質量百分比濃度為10% ；Na2C03質量百分比濃度為0.15% ；NaHCO3質量百分比濃度為0.3% ;甘油150mL ;去離子水850mL。
[0023]上述一種含麗春紅的蛋白質芯片點樣緩沖液的制備方法，具體步驟為:
[0024](I)依次將麗春紅、Na2CO3^ NaHCO3按比例溶解于去離子水中；
[0025](2)將甘油按比例加入上述配制好的溶液中，攪拌均勻，得含麗春紅的蛋白質芯片點樣緩沖液。
[0026]采用上述方法所制得蛋白質芯片點樣緩沖液的點樣效果如圖1所示，并用該芯片所得的檢測顯色效果如圖2所示。
[0027]實施例2
[0028]一種含麗春紅的蛋白質芯片點樣緩沖液，其組分為:麗春紅質量百分比濃度為
0.01% ;Na2C03質量百分比濃度為1% ;NaHC03質量百分比濃度為2% ;甘油IOmL ;去離子水990mLo
[0029]上述一種含麗春紅的蛋白質芯片點樣緩沖液的制備方法，具體步驟為:
[0030](I)依次將麗春紅、Na2CO3^ NaHCO3按比例溶解于去離子水中；
[0031](2)將甘油按比例加入上述配制好的溶液中，攪拌均勻，得含麗春紅的蛋白質芯片點樣緩沖液。
[0032]實施例3
[0033]一種含麗春紅的蛋白質芯片點樣緩沖液，其組分為:麗春紅質量百分比濃度為50% ;Na2C03質量百分比濃度為0.05% ;NaHC03質量百分比濃度為0.05% ;甘油500mL ;去離子水500mL。
[0034]上述一種含麗春紅的蛋白質芯片點樣緩沖液的制備方法，具體步驟為:
[0035](I)依次將麗春紅、Na2CO3^ NaHCO3按比例溶解于去離子水中；
[0036](2)將甘油按比例加入上述配制好的溶液中，攪拌均勻，得含麗春紅的蛋白質芯片點樣緩沖液。
[0037]上述實施例為本發(fā)明較佳的實施方式，但本發(fā)明的實施方式并不受上述實施例的限制，其他的任何未背離本發(fā)明的精神實質與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡化，均應為等效的置換方式，都包含在本發(fā)明的保護范圍之內。
【權利要求】
1.一種用于蛋白質芯片的點樣緩沖液，其特征在于:由麗春紅、Na2CO3^ NaHCO3、甘油和去離子水組成，所述的甘油和去離子水的體積比為3:1~1:20，在所述的點樣緩沖液中，所述的Na2CO3的質量百分比濃度為0.05%~1%，所述的NaHCO3的質量百分比濃度為0.05 %~2 %，所述的麗春紅的質量百分比濃度為0.01 %~50 %。
2.如權利要求1所述的一種用于蛋白質芯片的點樣緩沖液，其特征在于:所述的點樣緩沖液的pH為7~11。
3.如權利要求1 所述的一種用于蛋白質芯片的點樣緩沖液，其特征在于:以IL來計算，在所述的點樣緩沖液中，Na2CO3為1.59g, NaHCO3為2.93g，麗春紅為10g，甘油為IOOmL,余量為去尚子水。
【文檔編號】G01N33/68GK103983793SQ201410234527
【公開日】2014年8月13日 申請日期:2014年5月29日 優(yōu)先權日:2014年5月29日
【發(fā)明者】邱實, 劉菁 申請人:上海理工大學