一種制備宮炎平膠囊的檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種制備宮炎平膠囊的檢測方法，該方法涉及地稔、兩面針、五指毛桃的薄層色譜鑒別，阿魏酸酸的高效液相色譜含量測定及其限度。
【專利說明】一種制備宮炎平膠囊的檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種制備宮炎平膠囊的檢測方法。
【背景技術(shù)】
[0002]盆腔炎(Pelvic inflammatory diseade, PID)指女性上生殖道及其周圍組織的炎癥，主要包括子宮內(nèi)膜炎(endometritis)、輸卵管炎(salpingitis)、輸卵管卵巢膿腫(tubo-ovarian abscess, Τ0Α)、盆腔腹膜炎(peritonitis)。炎癥可局限于一個部位，也可同時累及幾個部位，最常見的是輸卵管炎、輸卵管卵巢炎。盆腔炎多發(fā)生在性活躍期、有月經(jīng)的婦女，初潮前、絕經(jīng)后或未婚者很少發(fā)生盆腔炎，若發(fā)生盆腔炎也往往是鄰近器官炎癥的擴(kuò)散。按其發(fā)病過程、臨床表現(xiàn)可分為急性與慢性兩種。
[0003]急性盆腔炎是指女性內(nèi)生殖器及其周圍結(jié)締組織、盆腔腹膜發(fā)生的急性炎癥，可局限于一個部位，也可幾個部位同時發(fā)病。常見致病菌為葡萄球菌、鏈球菌、大腸桿菌、厭氧菌及性傳播病原體，如淋菌、支原體、衣原體等。經(jīng)淋巴、血行或直接蔓延至盆腔而引起。常見急性子宮內(nèi)膜炎、子宮肌炎、輸卵管炎、輸卵管積膿、輸卵管卵巢膿腫、盆腔結(jié)締組織炎、盆腔腹膜炎，嚴(yán)重者可引起敗血癥及膿毒血癥。如不及時控制，可出現(xiàn)感染性休克甚至死亡。
[0004]慢性盆腔炎是指女性內(nèi)生殖器及其周圍結(jié)締組織、盆腔腹膜的慢性炎癥。其主要臨床表現(xiàn)為月經(jīng)紊亂、白帶增多、腰腹疼痛及不孕等，如已形成慢性附件炎，則可觸及腫塊。
[0005]目前治療急、慢性盆腔炎的藥物多為宮炎平片劑。由于片劑易吸濕、易被氧化，穩(wěn)定性不高，藥效較差。
[0006]宮炎平膠囊是由宮炎平片改變劑型而來，臨床上用于急、慢性盆腔炎的治療，有較好的效果。目前現(xiàn)有技術(shù)中已經(jīng)有涉及宮炎平膠囊的制備方法等專利申請，例如2005101214259，2005100032342，2005100352266，2008100028798，以及 2012101521990 等專利申請中，均公開了涉及宮炎平膠囊的制備方法或質(zhì)量控制方法。
[0007]然而上述專利申請中公開的相關(guān)方法仍然存在兩個方面的主要缺陷:
[0008]一方面，仍然存在缺乏專屬性導(dǎo)致的給鑒別造成困難的缺陷，或者由于薄層色譜鑒別方法檢出不明顯導(dǎo)致的雜質(zhì)干擾過大的缺陷，以及缺少含量測定檢測導(dǎo)致的不能很好的控制成品質(zhì)量的缺陷。
[0009]而另一方面，為了實(shí)現(xiàn)控制成品質(zhì)量，針對宮炎平膠囊全部的成份采用薄層色譜法對地穩(wěn)、兩面針、當(dāng)歸和五指毛桃等全部進(jìn)行藥材鑒別，又極大的增加了生產(chǎn)成本，雖然能控制質(zhì)量，但并不能滿足實(shí)際生產(chǎn)的要求。因此，目前現(xiàn)有技術(shù)中相關(guān)產(chǎn)品的制備方法都無法滿足實(shí)際生產(chǎn)的需要。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0010]本發(fā)明正是從現(xiàn)有技術(shù)出發(fā)，提供了一種制備宮炎平膠囊的檢測方法，即能實(shí)現(xiàn)精確控制成品質(zhì)量，又能控制生產(chǎn)成本，適于廣泛應(yīng)用實(shí)際生產(chǎn)過程中。[0011]本發(fā)明提供一種制備宮炎平膠囊的檢測方法，其中所述宮炎平膠囊由地稔、兩面針、當(dāng)歸、五指毛桃、柘木制成，所述地稔、兩面針、當(dāng)歸、五指毛桃、柘木的重量比為450: 170: 140: 100: 140 ;所述宮炎平膠囊采用如下制備方法獲得:
[0012]地稔 450g兩面針170g當(dāng)歸140g
[0013]五指毛桃IOOg柘木140g
[0014]以上五味，加水煎煮二次，每次加水12倍量，煎煮2小時，濾過，合并濾液，濃縮至相對密度在55?60°C測定為1.25，加乙醇至含醇量達(dá)50%，靜置24小時，濾過，濾液回收乙醇，濃縮至相對密度在60°C測定為1.35?1.40的稠膏，干燥，粉碎成細(xì)粉，加適量輔料，混勻，制粒，裝入膠囊，制成本品1000粒；
[0015]制備所述宮炎平膠囊的檢測方法為:
[0016](I)取本品10粒，傾出內(nèi)容物，研細(xì)，加甲醇30ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水IOml使溶解，加鹽酸2ml，加熱回流30分鐘，立即冷卻，用乙酸乙酯振搖提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘渣加甲醇Iml使溶解，作為供試品溶液；另取地稔對照藥材lg，加甲醇10ml，同法制成對照藥材溶液，再取沒食子酸對照品，加甲醇制成每Iml含0.5mg的溶液，作對照品溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各IOul，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸(9: 3: I)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以I %三氯化鐵乙醇溶液，供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；
[0017](2)取本品內(nèi)容物2g，研細(xì)，加水30ml，研磨2分鐘，濾過，濾液用三氯甲烷振搖提取2次，每次20ml，合并三氯甲烷液，蒸干，殘渣加三氯甲烷Iml使溶解，作為供試品溶液；另取兩面針對照藥材lg，加水煎煮20分鐘，濾過，濾液同供試品溶液制備方法制成對照藥材溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各IOy 1，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-丙酮-甲酸(18: 2: I)為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm波長紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光主斑點(diǎn)；
[0018](3)取本品內(nèi)容物3g，加三氯甲烷30ml，加熱回流2小時，放冷，濾過，濾液濃縮至0.5ml，作為供試品溶液；另取補(bǔ)骨脂素對照品加三氯甲烷制成每Iml含Img的溶液，作為對照品溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液20 μ 1，對照品溶液5 μ 1，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯(9: I)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%氫氧化鉀溶液顯色，置365nm波長紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；
[0019](4)含量測定
[0020]色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-1 %冰醋酸(15: 85)為流動相，檢測波長為323nm，理論板數(shù)按阿魏酸峰計算不低于1500，
[0021]對照品溶液的制備取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥24小時的阿魏酸對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每Iml含6.0 μ g的溶液，
[0022]供試品溶液的制備取本品內(nèi)容物，研細(xì)，精密稱取約5g，置于IOOml具塞錐形瓶中，加入50ml水，超聲處理40分鐘，放冷，過濾，精密吸取續(xù)濾液25ml至分液漏斗中，用鹽酸調(diào)節(jié)PH值至2，用乙醚振搖提取5次，每次15ml，合并乙醚液，用5 %碳酸氫鈉溶液振搖提取5次，每次30ml，合并碳酸氫鈉溶液，用鹽酸調(diào)節(jié)pH值至2，用乙醚振搖提取5次，每次15ml，合并乙醚液，揮干，殘渣用甲醇溶解移至5ml棕色量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液即得，
[0023]測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20 μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得。
[0024]優(yōu)選的，其中每粒含當(dāng)歸以阿魏酸(CiqHiqO4)計，不少于2.5 μ g。
[0025]優(yōu)選的，其中超聲處理的功率90W，頻率59KHz。
[0026]采用本發(fā)明的檢測方法，方法中主要涉及地稔、兩面針、五指毛桃的薄層色譜鑒另IJ，阿魏酸酸的高效液相色譜含量測定及其限度，一方面，解決了之前長期存在的由于缺乏專屬性導(dǎo)致的給鑒別造成困難的缺陷，另一方面，也排了除了干擾過大的缺陷以及由于缺少含量測定檢測導(dǎo)致的不能很好的控制成品質(zhì)量的缺陷。同時，在控制質(zhì)量的同時也降低了檢測成本，完全能滿足實(shí)際生產(chǎn)的要求。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0027]圖1地稔的薄層色譜圖
[0028]圖2薄層板的適用性試驗(yàn)
[0029]圖3溫度的適用性試驗(yàn)
[0030]圖4宮炎平膠囊兩面針?biāo)幉腡LC圖譜
[0031]圖5宮炎平膠囊五指毛桃藥材TLC圖譜
【具體實(shí)施方式】
[0032]下面，給出本發(fā)明制備宮炎平膠囊的檢測方法的具體實(shí)施例。
[0033]實(shí)施例1
[0034]地稔 450g兩面針 170g當(dāng)歸140g
[0035]五指毛桃IOOg柘木140g
[0036]制法方法:
[0037]以上五味，加水煎煮二次，每次加水12倍量，煎煮2小時，濾過，合并濾液，濃縮至相對密度為1.25 (55?60°C )，加乙醇至含醇量達(dá)50%，靜置24小時，濾過，濾液回收乙醇，濃縮至相對密度為1.35?1.40 (600C )的稠膏，干燥，粉碎成細(xì)粉，加適量輔料，混勻，制粒，裝入膠囊，制成1000粒，即得。
[0038]檢測方法:
[0039](I)取本品10粒，傾出內(nèi)容物，研細(xì)，加甲醇30ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水IOml使溶解，加鹽酸2ml，加熱回流30分鐘，立即冷卻，用乙酸乙酯振搖提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘渣加甲醇Iml使溶解，作為供試品溶液。另取地稔對照藥材lg，加甲醇10ml，同法制成對照藥材溶液。再取沒食子酸對照品，加甲醇制成每Iml含0.5mg的溶液，作對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2010年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各10ul，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸(9: 3:1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%三氯化鐵乙醇溶液。供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。[0040](2)取本品內(nèi)容物2g，研細(xì)，加水30ml，研磨2分鐘，濾過，濾液用三氯甲烷振搖提取2次，每次20ml，合并三氯甲烷液，蒸干，殘渣加三氯甲烷Iml使溶解，作為供試品溶液。另取兩面針對照藥材lg，加水煎煮20分鐘，濾過，濾液同供試品溶液制備方法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(中國藥典2010年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10 μ 1，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-丙酮-甲酸(18: 2: I)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光主斑點(diǎn)。
[0041](3)取本品內(nèi)容物3g，加三氯甲烷30ml，加熱回流2小時，放冷，濾過，濾液濃縮至
0.5ml，作為供試品溶液。另取補(bǔ)骨脂素對照品加三氯甲烷制成每Iml含Img的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2010年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液20 μ 1，對照品溶液5 μ 1，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯(9: I)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%氫氧化鉀溶液顯色，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
[0042](4)含量測定
[0043]照高效液相色譜法(中國藥典2010年版一部附錄VID)。
[0044]色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-1 %冰醋酸(15: 85)為流動相，檢測波長為323nm。理論板數(shù)按阿魏酸峰計算應(yīng)不低于1500。
[0045]對照品溶液的制備取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥24小時的阿魏酸對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每Iml含6.0 μ g的溶液，。
[0046]供試品溶液的制備取本品內(nèi)容物，研細(xì)，取，精密稱取約5g，置于IOOml具塞錐形瓶中，加入50ml水，超聲處理(功率90W，頻率59KHz) 40分鐘，放冷，過濾，精密吸取續(xù)濾液25ml至分液漏斗中，用鹽酸調(diào)節(jié)pH值至2，用乙醚振搖提取5次，每次15ml，合并乙醚液，用5%碳酸氫鈉溶液振搖提取5次，每次30ml，合并碳酸氫鈉溶液，用鹽酸調(diào)節(jié)pH值至2，用乙醚振搖提取5次，每次15ml，合并乙醚液，揮干，殘渣用甲醇溶解移至5ml棕色量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μΜ)濾過，取續(xù)濾液即得。
[0047]測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20 μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得。
[0048]本品每粒含當(dāng)歸以阿魏酸(CiqHiqO4)計,不得少于2.5 μ g。
[0049]實(shí)驗(yàn)例1:地稔薄層鑒別
[0050]供試品溶液的制備:取本品IO粒，傾出內(nèi)容物，研細(xì)，加甲醇30ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水IOml使溶解，加鹽酸2ml，加熱回流30分鐘，立即冷卻，用乙酸乙酯振搖提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘渣加甲醇Iml使溶解，作為供試品溶液。
[0051]對照藥材溶液的制備:取地稔對照藥材lg，加甲醇10ml，同法制成對照藥材溶液。
[0052]對照品溶液的制備:取沒食子酸對照品，加甲醇制成每Iml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。
[0053]陰性對照溶液的制備:取缺地稔的陰性樣品，同供試品溶液制備方法制成缺地稔陰性對照溶液。[0054]薄層層析:照薄層色譜法(附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述四種溶液各10 μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸(9: 3: I)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以I %三氯化鐵乙醇溶液。供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。通過多次試驗(yàn)，重復(fù)性好，陰性對照無干擾，故列入正文。結(jié)果見圖1，其中，I為陰性對照2.3.4.為供試品，批號:130606 130607 130608 ；5為地稔對照藥材；6為沒食子酸對照品，T = 25°C，RH = 58%。
[0055]耐用性考察
[0056]不同薄層板的比較
[0057]取同樣的地稔對照藥材溶液、沒食子酸對照品溶液、3批樣品溶液(按正文擬訂的方法制備)，分別點(diǎn)于自制的硅膠G薄層板和普通預(yù)制硅膠G薄層板(上海東方藥品科技實(shí)業(yè)有限公司生產(chǎn))上，結(jié)果兩種不同品牌的硅膠G薄層板均能達(dá)到良好的分離效果，結(jié)果基本一致，結(jié)果見圖2。其中，1.2.3.為供試品，批號:130606 130607 130608 ;4為地稔對照藥材；5為沒食子酸對照品，T = 25°C，RH = 58%。
[0058]不同溫度的比較
[0059]取同樣的地稔對照藥材溶液、沒食子酸對照品溶液、3批樣品溶液(按正文擬訂的方法制備)，點(diǎn)于自制的硅膠G薄層板上，分別考察常溫常濕(A:T = 25V, RH:= 58%)和低溫常濕(B:T = 8°C，RH = 58% )兩種條件下的分離情況，結(jié)果表明在以上溫度條件下均能達(dá)到良好的分離效果，溫度對分離影響不大，見圖3。其中，1.2.3.為供試品，批號:130606 130607 130608 ；4為地稔對照藥材；5為沒食子酸對照品，T = 8°C, RH = 58%。
[0060]不同濕度的比較
[0061]取同樣的地稔對照藥材溶液、沒食子酸對照品溶液、3批樣品溶液，點(diǎn)于自制的硅膠G薄層板上，分別考察常溫高濕(B:T = 25°C,RH = 88% )和常溫低濕(C:Τ = 25°C,RH=32% )三種條件下的分離情況，結(jié)果表明在以上濕度條件下均能達(dá)到良好的分離效果，濕度對分離影響不大，見圖3，圖3中，1.2.3.為供試品，批號:130606 130607 130608 ;4為地稔對照藥材；5為沒食子酸對照品；T = 25°C, RH = 32%。
[0062]實(shí)驗(yàn)例2:兩面針的薄層色譜鑒別
[0063]兩面針為方中臣藥，原方法中已建立該藥材的鑒別項(xiàng)，但經(jīng)多次試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)對照藥材色譜在與供試品色譜斑點(diǎn)對應(yīng)不夠整齊，對照藥材出現(xiàn)四個斑點(diǎn)而供試品只能對應(yīng)其中二個斑點(diǎn)，因此本方法在原方法的基礎(chǔ)上進(jìn)行修訂。供試品提取采用加水研磨、氯仿萃取替換原方法的乙醇水浴加熱回流，提取效率更高。對照藥材則采用水煎煮后用氯仿萃取，因?yàn)椴捎寐确伦鳛槿軇┌唿c(diǎn)成型性更好。展開劑更改為氯仿-丙酮-甲酸(18: 2: 1)，其他檢視方法保持不變。另按處方取不含兩面針的其它藥味，按制備方法制成陰性樣品，進(jìn)行陰性對照試驗(yàn)，結(jié)果陰性無干擾，對照藥材與供試品斑點(diǎn)對應(yīng)整齊、圓整、清晰，表明本方法可行。經(jīng)多批樣品實(shí)驗(yàn)觀察，供試品色譜中，在與對照藥品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，均符合規(guī)定。附三批樣品的TLC圖譜圖4，兩面針對照藥材由中國藥品生物制品檢定所提供，批號:121014-200302。圖中，1、兩面針對照藥材2、3、4三批樣品5、陰性樣品。
[0064]實(shí)驗(yàn)例3:五指毛桃的特征成分補(bǔ)骨脂素薄層色譜鑒別
[0065]參照有關(guān)文獻(xiàn)中的展開系統(tǒng)，以正己烷-醋酸乙酯(7: 3)展開為最佳，有紫外光燈(365nm)下檢視。另取除五指毛桃藥材外的其余幾味藥材按制法制成陰性樣品，進(jìn)行陰性試驗(yàn)，試驗(yàn)結(jié)果表明陰性樣品不干擾主斑點(diǎn)，經(jīng)數(shù)批樣品實(shí)驗(yàn)觀察，對照藥材與供試品斑點(diǎn)對應(yīng)整齊、圓整、清晰，表明為方法簡便、可行。附三批樣品的TLC圖譜5，補(bǔ)骨脂素對照品由中國藥品生物制品檢定所提供，批號:110739-200209。圖中，1、補(bǔ)骨指素對照品2、3、4三批樣品5、陰性樣品。
[0066]實(shí)驗(yàn)例4當(dāng)歸藥材中的有效成分阿魏酸含量測定
[0067]宮炎平膠囊由地稔、兩面針、當(dāng)歸、五指毛桃、穿破石五味藥組成，現(xiàn)擬定含量測定項(xiàng)以進(jìn)一步控制本品質(zhì)量。地稔為方中君藥，由于地稔藥材基礎(chǔ)研究薄弱，有效成分不甚明確，難以準(zhǔn)確定量。而兩面針具有行氣止痛，活血化瘀，祛風(fēng)通絡(luò)的功效，但對其有效成分氯化兩面針堿采用HPLC方法進(jìn)行了含量測定，結(jié)果因本制劑試品中的氯化兩面針堿含量極低，難以準(zhǔn)確定量，故轉(zhuǎn)為對當(dāng)歸藥材中的有效成分阿魏酸進(jìn)行含量測定方法研究，結(jié)果該法具有準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好、專屬性強(qiáng)，快捷簡便等特點(diǎn)，可用于控制本品的內(nèi)在質(zhì)量。
[0068]一、當(dāng)歸藥材阿魏酸含量測定
[0069]表1十批當(dāng)歸藥材阿魏酸含量測定結(jié)果
[0070]
【權(quán)利要求】
1.一種制備宮炎平膠囊的檢測方法，其中所述宮炎平膠囊由地稔、兩面針、當(dāng)歸、五指毛桃、柘木制成，所述地稔、兩面針、當(dāng)歸、五指毛桃、柘木的重量比為450: 170: 140: 100: 140 ;所述宮炎平膠囊采用如下制備方法獲得: 地稔 450g兩面針170g當(dāng)歸140g 五指毛桃100g柘木140g 以上五味,加水煎煮二次,每次加水12倍量，煎煮2小時，濾過，合并濾液，濃縮至相對密度在55~60°C測定為1.25，加乙醇至含醇量達(dá)50%，靜置24小時，濾過，濾液回收乙醇，濃縮至相對密度在60°C測定為1.35~1.40的稠膏，干燥，粉碎成細(xì)粉，加適量輔料，混勻，制粒，裝入膠囊，制成本品1000粒； 制備所述宮炎平膠囊的檢測方法為: (1)取本品10粒，傾出內(nèi)容物，研細(xì)，加甲醇30ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水IOml使溶解，加鹽酸2ml，加熱回流30分鐘，立即冷卻，用乙酸乙酯振搖提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘渣加甲醇Iml使溶解，作為供試品溶液；另取地稔對照藥材lg，加甲醇10ml，同法制成對照藥材溶液；再取沒食子酸對照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作對照品溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各10ul，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸(9: 3: 1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%三氯化鐵乙醇溶液，供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)； (2)取本品內(nèi)容物2g，研細(xì)，加水30ml，研磨2分鐘，濾過，濾液用三氯甲烷振搖提取2次，每次20ml，合并三氯甲烷液，蒸干，殘渣加三氯甲烷1ml使溶解，作為供試品溶液；另取兩面針對照藥材lg，加水煎煮20分鐘，濾過，濾液同供試品溶液制備方法制成對照藥材溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10y 1，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-丙酮-甲酸(18: 2: 1)為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm波長紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光主斑點(diǎn)； (3)取本品內(nèi)容物3g，加三氯甲烷30ml，加熱回流2小時，放冷，濾過，濾液濃縮至0.5ml，作為供試品溶液；另取補(bǔ)骨脂素對照品加三氯甲烷制成每1ml含Img的溶液，作為對照品溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液20 μ 1，對照品溶液5 μ 1，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯(9: I)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%氫氧化鉀溶液顯色，置365nm波長紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)； (4)含量測定 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-1 %冰醋酸(15: 85)為流動相，檢測波長為323nm，理論板數(shù)按阿魏酸峰計算不低于1500， 對照品溶液的制備取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥24小時的阿魏酸對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含6.0 μ g的溶液， 供試品溶液的制備取本品內(nèi)容物，研細(xì)，精密稱取約5g，置于100mL具塞錐形瓶中，加入50ml水，超聲處理40分鐘，放冷，過濾，精密吸取續(xù)濾液25ml至分液漏斗中，用鹽酸調(diào)節(jié)PH值至2，用乙醚振搖提取5次，每次15ml，合并乙醚液，用5%碳酸氫鈉溶液振搖提取5次，每次30ml，合并碳酸氫鈉溶液，用鹽酸調(diào)節(jié)pH值至2，用乙醚振搖提取5次，每次15ml，合并乙醚液，揮干，殘渣用甲醇溶解移至5ml棕色量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液即得， 測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20 μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得。
2.如權(quán)利要求1所述的檢測方法，其中每粒含當(dāng)歸以阿魏酸(CltlHltlO4)計，不少于2.5 μ g0
3.如權(quán)利要求1 所述的檢測方法，其中超聲處理的功率90W，頻率59KHz。
【文檔編號】G01N30/90GK103983735SQ201410228670
【公開日】2014年8月13日 申請日期:2014年5月26日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月26日
【發(fā)明者】李明輝, 王剛 申請人:江西民濟(jì)藥業(yè)有限公司