一種液基薄層細(xì)胞涂片檢查抗酸桿菌的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種液基薄層細(xì)胞涂片檢查抗酸桿菌的方法，步驟如下：收集標(biāo)本，采受試者痰液2-5ml；配制處理液，液基薄層細(xì)胞涂片查抗酸桿菌痰前處理液自行配制；離心，上述痰液加入到自制的痰前處理液中，振蕩若干分鐘；制片，用吸管吸取痰前處理液試管底部的痰液若干毫升，入制片倉中，制片倉放入制片機中，制片機制好后取出干燥；抗酸染色和鏡檢。本發(fā)明的優(yōu)點是：比現(xiàn)有技術(shù)痰厚涂片檢查抗酸桿菌陽性率提高數(shù)十倍，可以盡早發(fā)現(xiàn)結(jié)核病傳染源，早診斷、早治療，減輕病人負(fù)擔(dān)，控制結(jié)核病的蔓延。
【專利說明】 一種液基薄層細(xì)胞涂片檢查抗酸桿菌的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種檢查抗酸桿菌的方法，尤其涉及一種液基薄層細(xì)胞涂片檢查抗酸桿菌的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]結(jié)核病是嚴(yán)重危害人類健康的慢性傳染病。在結(jié)核病控制工作中，結(jié)核病細(xì)菌學(xué)檢查對于發(fā)現(xiàn)傳染源，確定診斷和制定治療方案具有重要意義，是診斷結(jié)核病的金標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)核病細(xì)菌學(xué)檢查目前有涂片抗酸染色鏡檢和分離培養(yǎng)。涂片抗酸染色鏡檢是世界范圍內(nèi)結(jié)核病細(xì)菌學(xué)檢查中使用廣泛的技術(shù)，此法設(shè)備簡便、操作容易，但檢出陽性率較低(約5%-10%)，且近年呈下降趨勢。分離培養(yǎng)較涂片抗酸染色鏡檢法敏感性、特異性強，但設(shè)備要求高，操作繁雜，培養(yǎng)時間長，需要2個月才報告結(jié)果，不能滿足臨床診斷的需要。為突破涂片抗酸染色鏡檢陽性率低，分離培養(yǎng)時間長，出結(jié)果慢的局限，國內(nèi)外一直在探討簡便實用陽性率高的檢查方法，但未見成功的報道。我們創(chuàng)新發(fā)明的液基薄層細(xì)胞涂片檢查抗酸桿菌的新技術(shù)，該技術(shù)較涂片抗酸染色檢查抗酸桿菌陽性率提高數(shù)十倍，又無假陽性，可以作為診斷結(jié)核病的金標(biāo)準(zhǔn)，有推廣應(yīng)用的前景。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的在于提供一種液基薄層細(xì)胞涂片檢查抗酸桿菌的方法，該方法比現(xiàn)有的涂片檢查抗酸桿菌陽性率提高數(shù)十倍，可以盡早發(fā)現(xiàn)結(jié)核病傳染源，早診斷、早治療，減輕病人負(fù)擔(dān)，控制結(jié)核病的蔓延。
[0004]本發(fā)明是這樣來實現(xiàn)的，一種液基薄層細(xì)胞涂片檢查抗酸桿菌的方法，其特征在于方法步驟如下:
(O收集標(biāo)本，采受試者痰液(胸腹水、腦脊液、尿液、支氣管沖洗液，穿刺液等)2-5ml ；
(2)配制處理液，液基薄層細(xì)胞涂片查抗酸桿菌標(biāo)本前處理液自行配制；
(3)離心，上述標(biāo)本加入到自制的痰前處理液中，振蕩5-30分鐘(視標(biāo)本而定)，離心機2000轉(zhuǎn)/分，離心2-10分鐘后取出；
(4)制片，用吸管吸取經(jīng)振蕩離心后的標(biāo)本前處理液試管底部的標(biāo)本1-2毫升，入制片倉中，制片倉放入制片機中，6-10分鐘后，制片機制好后取出干燥；
(5)抗酸染色，涂片干燥后，加熱固定，滴加石碳酸復(fù)紅染液，保持染色5-10分鐘，流水輕緩沖洗，沖去染色液，滴加脫色劑，脫色1-15分鐘,流水輕緩沖洗,沖去脫色液,滴加亞甲藍復(fù)染液，染色30秒，流水輕緩沖洗，待玻片干燥后鏡檢；
(6)顯微鏡檢查，用IOx目鏡雙目顯微鏡鏡檢(物鏡用IOOx油鏡)讀片；
(7)鏡檢結(jié)果報告。
[0005]抗酸桿菌陰性(_):連續(xù)觀察300個不同視野，未發(fā)現(xiàn)抗酸桿菌。
[0006]抗酸桿菌陽性(報告抗酸桿菌數(shù)):1-8條/300視野。
[0007]抗酸桿菌陽性(1+):3-9條/100視野，連續(xù)觀察300個視野。[0008]抗酸桿菌陽性(2+):1-9條/10視野，連續(xù)觀察100個不同視野。
[0009]抗酸桿菌陽性(3+):1-9條/每視野。
[0010]抗酸桿菌陽性(4+):> 10條/每視野。
[0011]本發(fā)明的優(yōu)點是:比現(xiàn)有技術(shù)的痰厚涂片檢查抗酸桿菌陽性率提高數(shù)十倍，可以盡早發(fā)現(xiàn)結(jié)核病傳染源，早診斷、早治療，減輕病人負(fù)擔(dān)，控制結(jié)核病的蔓延。
【具體實施方式】
[0012]以下結(jié)合本發(fā)明的實施例作進一步詳細(xì)描述，但本實施例并不用于限制本發(fā)明，凡是采用本發(fā)明的相似結(jié)構(gòu)及其相似變化，均應(yīng)列入本發(fā)明的保護范圍。
[0013]具體實施例一:
(1)收集標(biāo)本。采受試者痰液2-5ml;
(2)配制處理液。液基薄層細(xì)胞涂片查抗酸桿菌痰前處理液自行配制；
(3)離心。上述痰液加入到自制的痰前處理液中，振蕩20-30分鐘，離心機2000轉(zhuǎn)/分，尚心2-10分鐘后取出；
(4)制片。用吸管吸取經(jīng)振蕩離心后的痰前處理液試管底部的痰液1-2毫升，入制片倉中，制片倉放入制片機中，6-10分鐘制片機制好后取出干燥；
(5)抗酸染色，涂片干燥后，加熱固定，滴加石碳酸復(fù)紅染液，保持染色5-10分鐘，流水輕緩沖洗，沖去染色液，滴加脫色劑，脫色1-15分鐘,流水輕緩沖洗,沖去脫色液,滴加亞甲藍復(fù)染液，染色30秒，流水輕緩沖洗，待玻片干燥后鏡檢；
(6)顯微鏡檢查，用IOx目鏡雙目顯微鏡鏡檢(物鏡用IOOx油鏡)讀片；
(7)鏡檢結(jié)果報告。
[0014]具體實施例二:
(1)收集標(biāo)本。采受試者腦脊液2-5ml;
(2)配制處理液。液基薄層細(xì)胞涂片查抗酸桿菌痰前處理液自行配制；
(3)離心。上述腦脊液痰液加入到自制的痰前處理液中，振蕩5-10分鐘，離心機2000轉(zhuǎn)/分，離心2-10分鐘后取出；
(4)制片。用吸管吸取經(jīng)振蕩離心后的痰前處理液試管底部的腦脊液1-2毫升，入制片倉中，制片倉放入制片機中，6-10分鐘后，制片機制好后取出干燥；
(5)抗酸染色，涂片干燥后，加熱固定，滴加石碳酸復(fù)紅染液，保持染色5-10分鐘，流水輕緩沖洗，沖去染色液，滴加脫色劑，脫色1-15分鐘,流水輕緩沖洗,沖去脫色液,滴加亞甲藍復(fù)染液，染色30秒，流水輕緩沖洗，待玻片干燥后鏡檢；
(6)顯微鏡檢查，用IOx目鏡雙目顯微鏡鏡檢(物鏡用IOOx油鏡)讀片；
(7)鏡檢結(jié)果報告。
[0015]具體實施例三:
(1)收集標(biāo)本。采受試者支氣管沖洗液2-5ml;
(2)配制處理液。液基薄層細(xì)胞涂片查抗酸桿菌痰前處理液自行配制；
(3)離心。上述支氣管沖洗液痰液加入到自制的痰前處理液中，振蕩10-20分鐘，離心機2000轉(zhuǎn)/分，離心2-10分鐘后取出；
(4)制片。用吸管吸取經(jīng)振蕩離心后的痰前處理液試管底部的支氣管沖洗液1-2毫升，入制片倉中，制片倉放入制片機中，6-10分鐘后,制片機制好后取出干燥；
(5)抗酸染色，涂片干燥后，加熱固定，滴加石碳酸復(fù)紅染液，保持染色5-10分鐘，流水輕緩沖洗，沖去染色液，滴加脫色劑，脫色1-15分鐘,流水輕緩沖洗,沖去脫色液,滴加亞甲藍復(fù)染液，染色30秒，流水輕緩沖洗，待玻片干燥后鏡檢；
(6)顯微鏡檢查，用IOx目鏡雙目顯微鏡鏡檢(物鏡用IOOx油鏡)讀片；
(7)鏡檢結(jié)果報告。
[0016]具體實施例四:
(O收集標(biāo)本。受試者胸腹水l-5ml ；
(2)配制處理液。液基薄層細(xì)胞涂片查抗酸桿菌痰前處理液自行配制；
(3)離心。上述胸腹水加入到自制的痰前處理液中，振蕩10-20分鐘，離心機2000轉(zhuǎn)/分，尚心2-10分鐘后取出；
(4)制片。用吸管吸取經(jīng)振蕩離心后的痰前處理液試管底部的胸腹水1-2毫升，入制片倉中，制片倉放入制片機中，6-10分鐘后，制片機制好后取出干燥；
(5)抗酸染色，涂片干燥后，加熱固定，滴加石碳酸復(fù)紅染液，保持染色5-10分鐘，流水輕緩沖洗，沖去染色液，滴加脫色劑，脫色1-15分鐘,流水輕緩沖洗,沖去脫色液,滴加亞甲藍復(fù)染液，染色30秒，流水輕緩沖洗，待玻片干燥后鏡檢；
(6)顯微鏡檢查，用IOx目鏡雙目顯微鏡鏡檢(物鏡用IOOx油鏡)讀片；
(7)鏡檢結(jié)果報告。
[0017]具體實施例五:
(1)收集標(biāo)本。采受試者穿刺液2-5ml;
(2)配制處理液。液基薄層細(xì)胞涂片查抗酸桿菌痰前處理液自行配制；
(3)離心。上述穿刺液加入到自制的痰前處理液中，振蕩20-30分鐘，離心機2000轉(zhuǎn)/分，尚心2-10分鐘后取出；
(4)制片。用吸管吸取經(jīng)振蕩離心后的痰前處理液試管底部的穿刺液1-2毫升，入制片倉中，制片倉放入制片機中，6-10分鐘后，制片機制好后取出干燥；
(5)抗酸染色，涂片干燥后，加熱固定，滴加石碳酸復(fù)紅染液，保持染色5-10分鐘，流水輕緩沖洗，沖去染色液，滴加脫色劑，脫色1-15分鐘,流水輕緩沖洗,沖去脫色液,滴加亞甲藍復(fù)染液，染色30秒，流水輕緩沖洗，待玻片干燥后鏡檢；
(6)顯微鏡檢查，用IOx目鏡雙目顯微鏡鏡檢(物鏡用IOOx油鏡)讀片；
(7)鏡檢結(jié)果報告。
[0018]具體實施例六:
(1)收集標(biāo)本。采受試者尿液2-5ml;
(2)配制處理液。液基薄層細(xì)胞涂片查抗酸桿菌痰前處理液自行配制；
(3)離心。上述尿液加入到自制的痰前處理液中，振蕩5-10分鐘，離心機2000轉(zhuǎn)/分，尚心2-10分鐘后取出；
(4)制片。用吸管吸取經(jīng)振蕩離心后的痰前處理液試管底部的尿液1-2毫升，入制片倉中，制片倉放入制片機中，6-10分鐘后，制片機制好后取出干燥；
(5)抗酸染色，涂片干燥后，加熱固定，滴加石碳酸復(fù)紅染液，保持染色5-10分鐘，流水輕緩沖洗，沖去染色液，滴加脫色劑，脫色1-15分鐘,流水輕緩沖洗,沖去脫色液,滴加亞甲藍復(fù)染液，染色30秒，流水輕緩沖洗，待玻片干燥后鏡檢；
(6)顯微鏡檢查，用IOx目鏡雙目顯微鏡鏡檢(物鏡用IOOx油鏡)讀片；
(7)鏡檢結(jié)果報告。
[0019]試驗結(jié)論:液基薄層細(xì)胞涂片檢查抗酸桿菌方法比現(xiàn)有技術(shù)的痰厚涂片檢查抗酸桿菌陽性率提高數(shù)十倍。
【權(quán)利要求】
1.一種液基薄層細(xì)胞涂片檢查抗酸桿菌的方法，其特征在于方法步驟如下: (O收集標(biāo)本，采受試者痰液(胸腹水、腦脊液、尿液、支氣管沖洗液，穿刺液等)2-5ml ； (2)配制處理液，液基薄層細(xì)胞涂片查抗酸桿菌標(biāo)本前處理液自行配制； (3)離心，上述標(biāo)本加入到自制的痰前處理液中，振蕩5-30分鐘，離心機2000轉(zhuǎn)/分，尚心2-10分鐘后取出； (4)制片，用吸管吸取經(jīng)振蕩離心后的標(biāo)本前處理液試管底部的標(biāo)本1-2毫升，入制片倉中，制片倉放入制片機中，6-10分鐘后，制片機制好后取出干燥； (5)抗酸染色，涂片干燥后，加熱固定，滴加石碳酸復(fù)紅染液，保持染色5-10分鐘，流水輕緩沖洗，沖去染色液，滴加脫色劑，脫色1-15分鐘,流水輕緩沖洗,沖去脫色液,滴加亞甲藍復(fù)染液，染色30秒，流水輕緩沖洗，待玻片干燥后鏡檢； (6)顯微鏡檢查； (7)鏡檢結(jié)果報告。
【文檔編號】G01N1/30GK103822815SQ201410111666
【公開日】2014年5月28日 申請日期:2014年3月25日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月25日
【發(fā)明者】胡望福, 周小玫, 詹國蒼, 羅智勇, 劉高焦, 陳學(xué)峰, 段水蓮, 劉子?xùn)|, 肖人鴻, 彭江琴 申請人:吉安協(xié)和醫(yī)院