抗α-共核蛋白抗體診斷腦中的α-共核蛋白的升高水平的用途
【專利摘要】本公開涉及抗α-共核蛋白抗體診斷腦中的α-共核蛋白的升高水平的用途。確切來說，本公開涉及在向測試受試者施用抗α-共核蛋白抗體或其抗原結合片段之后評價血漿或CSF中的α-共核蛋白的水平的方法，所述抗α-共核蛋白抗體或其抗原結合片段可以結合具有足夠活性的α-共核蛋白以改變從腦至血液或從腦至CSF的α-共核蛋白的凈流出。
【專利說明】抗Ct-共核蛋白抗體診斷腦中的α-共核蛋白的升高水平
的用途
[0001]電子遞交的序列表的引用
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[0003]背景
[0004]公開領域
[0005]本公開涉及抗α-共核蛋白(synuclein)抗體診斷腦中的α-共核蛋白的升高水平的用途。確切來說，本公開涉及在向測試受試者施用抗α-共核蛋白抗體或其抗原結合片段之后評價血漿或腦脊髓液(CSF)中的α-共核蛋白的水平的方法，所述抗α-共核蛋白抗體或其抗原結合片段可以結合具有足夠活性的α-共核蛋白以改變從腦至血液或腦至CSF的α -共核蛋白的凈流出。
[0006]公開背景
[0007]哺乳動物腦通過定位于腦毛細管和軟蛛網膜下的膜的血腦屏障(BBB)和定位于絨毛膜叢的血液-腦脊髓液(CSF)屏障而與血液分開。α-共核蛋白在非病理條件下在腦中相對豐富。它是主要存在于胞質溶膠中的天然未折疊蛋白。它通過增加從突觸前末梢釋放的遞質而在突觸傳遞和突觸可塑性中起重要作用。(Liu等，EMBOJ23:4506 - 4516 (2004))。α -共核蛋白的突變與早期發(fā)作的帕金森氏病的罕見家族情況相關，并且α-共核蛋白從它的可溶形式轉變成聚集的不可溶形式是神經變性病癥(如帕金森氏病、路易體癡呆(DLB)以及若干其它神經變性疾患)發(fā)病的重要事件之一。(Dawson 等，Science302:819 - 822 (2003) ；Bennett 等，Pharmacol Ther.105:311-331 (2005) ;George, JM., Genome B1l.3(1):reviews3002.1 - reviews3002.6 (2002))。另外，已經在帕金森氏病患者的腦脊髓液(CSF)和血清中發(fā)現單體α-共核蛋白和低聚體α-共核蛋白，因為很明顯α-共核蛋白和甚至它的聚集的種類可以穿過血腦屏障。(El-Agnaf 等，FASEB J.20: 4I9 - 425 (2OO6) ；Tokuda 等，B1chemB1physRes Commun.349:162 - 166(2006) ；Lee 等，JNeural Transm.113:1435 - 1439 (2006)；Mollenhauer 等，Exp Neurol.213:315 - 325(2008) ；E1-Agnaf 等，FASEB J.17:1945 -1947 (2003) ;Li 等，Exp Neuro1204:583 - 588 (2007)。
[0008]對帕金森氏病的小鼠模型的免疫研究示出抵抗α -共核蛋白的小鼠單克隆抗體可以減少細胞內α-共核蛋白聚集體的積聚(Masliah等，Neuron, 46:857 - 868 (2005)；Masliah等，PLoS One, 6 (4): el9338 (2011)支持了中和神經毒性聚集體而不會干擾單體α-共核蛋白的有益功能的抗體可以是有用的治療劑的想法。然而，鑒于它們的非人來源，基于鼠的抗體在人中的治療用途和診斷用途會通過人抗小鼠抗體(HAMA)反應受阻。
[0009]因此，存在對開發(fā)一種用于評價患者腦中的α-共核蛋白的升高水平的方法的需要。
[0010]簡述[0011]一個實施方案涉及一種診斷測試受試者的腦中的α-共核蛋白的升高水平的方法，所述方法包括:(a)在向測試受試者外周施用抗α-共核蛋白抗體或其抗原結合片段之后，在指定時間間隔下測定從測試受試者獲得的血漿樣品中的α-共核蛋白的水平，其中抗體或其片段可以結合具有足夠親和性的α-共核蛋白以改變從腦至血液的α-共核蛋白的凈流出；(b)將測試受試者中的α-共核蛋白的測定的水平與參比標準比較；其中血漿樣品與參比標準中的α-共核蛋白的水平之間的差異或相似性與測試受試者的腦中的α-共核蛋白的水平相關。
[0012]還公開了一種診斷測試受試者的腦中的α-共核蛋白的升高水平的方法，所述方法包括:(a)提供抗α-共核蛋白抗體或其抗原結合片段，其中抗體或其片段可以結合具有足夠親和性的α-共核蛋白以改變從腦至血液的α-共核蛋白的凈流出；(b)指導醫(yī)療服務提供者向測試受試者外周施用抗體并且在施用之后在指定的時間間隔下從受試者獲得血漿樣品；(C)測定血漿樣品中的α-共核蛋白的水平；(d)將測試受試者中的α-共核蛋白的測定的水平與參比標準比較；其中血漿樣品與參比標準中的α-共核蛋白的水平之間的差異或相似性與測試受試者的腦中的α-共核蛋白的水平相關。
[0013]進一步公開了一種診斷測試受試者的腦中的α-共核蛋白的升高水平的方法，所述方法包括:(a)向測試受試者外周施用抗α-共核蛋白抗體或其抗原結合片段，其中抗體或其片段可以結合具有足夠親和性的α-共核蛋白以改變從腦至血液的α-共核蛋白的凈流出；(b)在施用之后在指定的時間間隔下從測試受試者獲得血漿樣品，并且遞交樣品用于確定α-共核蛋白的水平；(C)將血漿樣品中的α-共核蛋白的水平與參比標準比較；其中血漿樣品與參比標準中的α-共核蛋白的水平之間的差異或相似性與測試受試者的腦中的α-共核蛋白的水平相關。
[0014]進一步公開了如本文所描述的方法，其進一步包括將血漿樣品中的α-共核蛋白的水平與在施用抗α-共核蛋白抗體或其抗原結合片段之前從測試受試者獲得的血漿樣品比較。
[0015]在具體實施方案中，以上描述的方法中的參比標準包括在一個或多個對照受試者中的α -共核蛋白的測量的水平，其中對照受試者包括正常的健康個體和具有各種嚴重性的共核蛋白病的個體。
[0016]進一步公開了一種追蹤被治療共核蛋白疾病的受試者的腦中的α-共核蛋白水平的方法，所述方法包括在外周施用抗α-共核蛋白抗體或其抗原結合片段之后在指定時間下測定受試者的血漿中的α-共核蛋白的水平，其中抗體或其片段可以結合具有足夠親和性的α-共核蛋白以改變從腦至血液的α-共核蛋白的凈流出；并且其中受試者的血漿中的α-共核蛋白水平與受試者的腦中的水平相關。在具體實施方案中，以上描述的方法進一步包括在額外的外周施用抗α-共核蛋白抗體或其抗原結合片段之后在指定時間下測定受試者的血漿中的α-共核蛋白的水平，從而繪制受試者的腦中的α-共核蛋白水平隨時間變化的曲線圖。
[0017]一些實施方案包括如本文所描述的方法，其中方法涉及通過在施用抗α-共核蛋白抗體或其抗原結合片段之后在指定的時間間隔下測定從測試受試者獲得的CSF樣品中的α-共核蛋白的水平來診斷測試受試者的腦中的α-共核蛋白的升高水平，其中抗體或其片段可以結合具有足夠親和性的α-共核蛋白以改變從腦至CSF的α-共核蛋白的凈流出，并且其中CSF樣品與參比標準中的α-共核蛋白的水平之間的差異或相似性與測試受試者的腦中的α-共核蛋白的水平相關。一些實施方案包括如本文所描述的方法，其進一步包括將CSF樣品中的α-共核蛋白的水平與在施用抗α-共核蛋白抗體或其抗原結合片段之前從測試受試者獲得的CSF樣品比較。
[0018]一些實施方案包括追蹤被治療共核蛋白疾病的受試者的腦中的α-共核蛋白水平的方法，所述方法包括在外周施用抗α-共核蛋白抗體或其抗原結合片段之后在指定時間下測定受試者的CSF樣品中的α-共核蛋白的水平，其中抗體或其片段可以結合具有足夠親和性的α -共核蛋白以改變從腦至CSF的α -共核蛋白的凈流出；并且其中受試者的CSF中的α -共核蛋白水平與受試者的腦中的水平相關。
[0019]一些實施方案包括如本文所描述的方法，其中抗體或其抗原結合片段特異性地與包含VH和VL的參比抗體相同的α -共核蛋白表位結合，其中VH包含SEQ ID NO: 2并且VL包含SEQ IDN0:3。在一些實施方案中，抗體或其抗原結合片段競爭性地抑制包含VH和VL的參比抗體與α -共核蛋白結合，其中VH包含SEQ ID NO: 2并且VL包含SEQ ID NO: 3。
[0020]進一步提供了如本文所描述的方法，其中抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區(qū)(VH)和輕鏈可變區(qū)(VL)，其中VH包含SEQ ID NO:4的互補決定區(qū)-1 (VHCDRl)氨基酸序列。[0021 ] 還提供了如本文所描述的方法，其中抗體或其抗原結合片段包含VH和VL，其中VH包含SEQ ID NO:5的互補決定區(qū)-2(VHCDR2)氨基酸序列。
[0022]一些實施方案包括如本文所描述的方法，其中抗體或其抗原結合片段包含VH和VL，其中VH包含SEQ ID NO: 6的互補決定區(qū)-3 (VHCDR3)氨基酸序列。
[0023]還提供了如本文所描述的方法，其中抗體或其抗原結合片段包含VH和VL，其中VL包含SEQ ID NO: 7的互補決定區(qū)-1 (VIXDRl)氨基酸序列。
[0024]一些實施方案包括如本文所描述的方法，其中抗體或其抗原結合片段包含VH和VL，其中VL包含SEQ ID NO: 8的互補決定區(qū)-2 (VIXDR2)氨基酸序列。
[0025]還公開了如本文所描述的方法，其中抗體或其抗原結合片段包含VH和VL，其中VL包含SEQ ID NO:9的互補決定區(qū)-3(VIXDR3)氨基酸序列。
[0026]進一步提供了如本文所描述的方法，其中抗體或其抗原結合片段包含其中抗體或其抗原結合片段包含VH和VL，其中VH包含SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 6的VHCDRl、VHCDR2 和 VHCDR3 氨基酸序列。
[0027]還公開了如本文所描述的方法，其中抗體或其抗原結合片段包含VH和VL，其中VL包含 SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 9 的 VLCDRl、VLCDR2 和 VLCDR3 氨基酸序列。
[0028]一些實施方案包括如本文所描述的方法，其中抗體或其抗原結合片段包含VH和VL，其中 VH包含 SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO:6 和 SEQ ID NO: 7 的 VHCDRUVHCDR2 和 VHCDR3 氨基酸序列，并且 VL 包含 SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 8 和 SEQ ID NO: 9 的 VLCDRl、VLCDR2 和 VLCDR3氨基酸序列。
[0029]一些實施方案包括如本文所描述的方法，其中抗體或其抗原結合片段包含SEQ IDNO: 2的VH氨基酸序列和SEQ ID NO: 3的VL氨基酸序列。
[0030]還公開了如本文所描述的方法，其中抗體或其抗原結合片段是單鏈Fv片段(scFv)、F(ab，)片段、F(ab)片段或 F (ab’)2 片段。
[0031]一些實施方案包括如本文所描述的方法，其中施用是通過靜脈內注射抗體。在一個實施方案中，抗體是人的。
[0032]其它實施方案包括如本文所描述的方法，其中指定的時間間隔是小于一周、或小于或等于24小時、或小于或等于3小時。
[0033]某些實施方案包括如本文所描述的方法，其中共核蛋白疾病選自由以下組成的組:帕金森氏病(ro)、帕金森氏病癡呆(PDD)、路易體癡呆(DLB)、阿爾茨海默氏病的路易體變體(LBVAD)、多系統萎縮癥(MSA)、單純性自主神經衰竭(PAF)、具有I型腦鐵積聚的神經變性(NBIA-1)、阿爾茨海默氏病、皮克病、小兒泛發(fā)型神經軸索營養(yǎng)不良(哈-斯二氏疾病)、肌萎縮性側索硬化、創(chuàng)傷性腦損傷以及唐氏綜合癥。
[0034]附圖簡述
[0035]圖1(A至B):當在過表達人α-共核蛋白的轉基因小鼠中12F4抗體施用時的劑量依賴型人α-共核蛋白血漿脈沖。
[0036]圖2:人α -共核蛋白血漿脈沖的時程和血漿12F4抗體濃度。
[0037]圖3(Α至C):急性高劑量12F4抗體治療過表達人α -共核蛋白的轉基因小鼠減少了腦人α-共核蛋白水平。
[0038]圖4(Α至C):人α-共核蛋白血漿水平顯著地反映了 12F4抗體注射后的腦α-共核蛋白水平。
[0039]圖5(Α至C):通過ELISA確定了血漿人α -共核蛋白(A)和嵌合12F4抗體水平(B)。(C)在用嵌合12F4抗體慢性治療過表達人α-共核蛋白的轉基因小鼠六個月之后，在血漿α-共核蛋白水平與腦α-共核蛋白水平之間存在顯著相關性。
[0040]圖6:當在食蟹猴中12F4施用時，α -共核蛋白腦脊髓液(CSF)脈沖和CSF/血清124F比率在0.1%附近。
[0041]圖7:轉基因α-共核蛋白小鼠中的體內微量透析示出當12F4施用時腦組織間隙流體(ISF) α-共核蛋白下降。
[0042]詳述
[0043]1.定義
[0044]應該注意術語“一個(a) ”或“一種(an) ”實體是指一個或多個所述實體；例如“一種抗α-共核蛋白抗體”理解為代表與α-共核蛋白特異性結合的一種或多種抗體。因此，術語“一個”(或“一種”)、“一個或多個”以及“至少一個”可以在本文中互換使用。
[0045]如本文所使用，術語“共核蛋白疾病(synucleinopathic diseases) ”或“共核蛋白病(synucleinopathies) ”是共有主要由神經元和神經膠質的選擇性易損群體中的不可溶α-共核蛋白蛋白質的聚集體組成的共同病理損傷的神經變性病癥的不同組。這些病癥包括帕金森氏病(H))、帕金森氏病癡呆(PDD)、路易體癡呆(DLB)、阿爾茨海默氏病的路易體變體(LBVAD)、多系統萎縮癥(MSA)、單純性自主神經衰竭(PAF)、具有I型腦鐵積聚的神經變性(NBIA-1)、阿爾茨海默氏病、皮克病、小兒泛發(fā)型神經軸索營養(yǎng)不良(哈-斯二氏疾病)、肌萎縮性側索硬化、創(chuàng)傷性腦損傷以及唐氏綜合癥。臨床上，取決于損傷的分布，它們的特征為運動、認知、行為以及自主功能的慢性衰退和漸進性衰退。
[0046]除非另外說明，否則術語“病癥”、“疾病(disease)”和“疾患(illness) ”在本文中互換使用。
[0047]如本文所使用，術語“結合分子”或“抗原結合分子”是指特異性結合抗原決定簇的分子這個它最廣泛的意思?？乖Y合分子的非限制性實例是保留抗原特異性結合的抗體及其片段以及與α-共核蛋白結合的其它非抗體分子，所述其它非抗體分子包括但不限于激素、受體、配體、主要組織相容性復合體(MHC)分子、陪伴分子如熱休克蛋白(HSP)以及細胞-細胞粘合分子如鈣粘蛋白、整合素、C型凝集素和免疫球蛋白(Ig)超家族的成員。因此，僅為了清楚起見并且不限制本公開的范圍，針對代表用于開發(fā)治療劑和診斷劑的結合分子的抗體和抗體樣分子討論大多數以下實施方案。在另一個實施方案中，所公開的結合分子包含抗體分子的至少一個重鏈或輕鏈⑶R。在另一個實施方案中，所公開的結合分子包含來自一個或多個抗體分子的至少兩個CDR。在另一個實施方案中，所公開的結合分子包含來自一個或多個抗體分子的至少三個CDR。在另一個實施方案中，所公開的結合分子包含來自一個或多個抗體分子的至少四個CDR。在另一個實施方案中，所公開的結合分子包含來自一個或多個抗體分子的至少五個CDR。在另一個實施方案中，所公開的結合分子包含來自一個或多個抗體分子的至少六個CDR。
[0048]本文公開了一種診斷測試受試者的腦中的α -共核蛋白的升高水平的方法，所述方法包括向受試者施用抗α-共核蛋白結合分子，例如抗體或其抗原結合片段、變體或衍生物。除非確切是指全尺寸的抗體如天然存在的抗體，否則術語“抗α-共核蛋白抗體”涵蓋全尺寸的抗體以及所述抗體的抗原結合片段、變體、類似物或衍生物，例如天然存在的抗體或以類似于抗體分子的方式結合抗原的免疫球蛋白分子或工程化的抗體分子或片段。
[0049]術語“抗體”和“免疫球蛋白”在本文中互換使用。抗體或免疫球蛋白至少包含重鏈的可變結構域，并且通常至少包含重鏈和輕鏈的可變結構域。脊椎動物系統中的基本免疫球蛋白結構是相對好理解 。參見，例如Harlow等(1988)Antibodies:A LaboratoryManual (第 2 版；Cold Spring Harbor Laboratory Press)。
[0050]如本文所使用，術語“免疫球蛋白”包括可以被生物化學區(qū)別的各種廣泛類別的多肽。本領域技術人員將領會重鏈被分類為Y (gamma)、μ (mu)、a (alpha)、δ (delta)或ε (epsilon) ( Y、μ、α、δ、ε ),在它們之中具有一些子類別(例如，Y I至Y 4)。這個鏈的本質是將抗體的“類別”分別確定為IgG、IgM、IgA、IgG或IgE。免疫球蛋白子類別(同種型)(例如，IgGU IgG2、IgG3、IgG4、IgAl等)被很好地表征并且已知給予功能特化。鑒于本公開，熟練的技術人員易于辨別出這些類別和同種型各自的修改版本，并且因此處于本公開的范圍內。所有免疫球蛋白類別清楚地處于本公開的范圍內。以下討論將總體上涉及免疫球蛋白分子的IgG類別。針對IgG，標準免疫球蛋白分子包含分子量大約23，000道爾頓的兩個相同輕鏈多肽和分子量53，000至70，000的兩個相同重鏈多肽。這四條鏈通常由二硫鍵以“Y”構型連接在一起，其中輕鏈從“Y”的開口處開始并且一直通過可變區(qū)與重鏈括在一起。
[0051]輕鏈被分類為K (kappa)或λ (lambda) (κ、λ)?？梢杂忙驶颚溯p鏈結合每種重鏈類別。通常，輕鏈和重鏈彼此共價鍵合，并且當通過雜交瘤、B細胞或基因工程宿主細胞來產生免疫球蛋白時，這兩條重鏈的“尾巴”部分由共價二硫鍵或非共價鍵彼此鍵合。在重鏈中，氨基酸序列從Y構型的叉端處的N-末端到每條鏈的底部處的C-末端。
[0052]輕鏈和重鏈均分成結構和功能同源性的區(qū)。就其功能使用術語“恒定的”和“可變的”。在這點上，將領會輕鏈部分(VL或VK)和重鏈部分(VH)的可變結構域決定抗原識別和特異性。相反，輕鏈(CL)和重鏈(CH1、CH2或CH3)的恒定結構域給予重要的生物性質，如分泌、經胎盤移動、Fe受體結合、補體結合以及類似性質。按照慣例，恒定區(qū)結構域的編號當它們變得離抗體的抗原結合位點或氨基末端更遠時增加。N-末端部分是可變區(qū)并且在C-末端部分處是恒定區(qū)；CH3結構域和CL結構域實際上分別包含重鏈和輕鏈的羧基-末端。
[0053]如上所指明，可變區(qū)允許抗體選擇性識別和特異性結合抗原上的表位。那就是說，抗體的VL結構域和VH結構域或這些可變結構域內的互補決定區(qū)(CDR)的子集組合以形成限定三維抗原結合位點的可變區(qū)。這個四級抗體結構形成了存在于Y的每條臂的末端處的抗原結合位點。更確切來說，通過每條VH和VL鏈上的三個CDR來限定抗原結合位點。在一些例子中，例如，源自駱駝科動物種類或基于駱駝科動物免疫球蛋白的工程化的某些免疫球蛋白分子(完整的免疫球蛋白分子)可以僅由重鏈組成，不具有輕鏈。參見，例如Hamers-Casterman 等，Nature363:446-448(1993)。
[0054]在天然存在的抗體中，存在于每個抗原結合結構域中的六個“互補決定區(qū)”或“CDR”是短的、非鄰接的氨基酸序列，當抗體在水性環(huán)境中呈現它的三維構型時，所述氨基酸序列特異性地放置以形成抗原結合結構域?？乖Y合結構域中的其余氨基酸(稱為“構架”區(qū))示出較小的分子間可變性。構架區(qū)大部分采用片層構象，并且CDR形成連接β-片層結構并且在一些情況下形成β-片層結構的部分的環(huán)。因此，構架區(qū)起到形成支架的作用，所述支架提供用于通過鏈間非共價的相互作用將CDR放置在正確的方向上。通過所放置的CDR形成的抗原結合結構域限定了與免疫反應性抗原上的表位互補的表面。這個互補表面促進了抗體與它的同源表位的非共價結合。分別包含CDR和構架區(qū)的氨基酸可以被本領域普通技術人員容易地鑒定出任何給定的重鏈可變結構域或輕鏈可變結構域，因為它們已經被精確地限定(參見以下)。
[0055]在其中本領域內使用和/或接受的術語存在兩種或更多種定義的情況下，如本文所使用的術語的定義旨在包括所有此類意義，除非明確地相反說明。一個具體實例是使用術語“互補決定區(qū)”(“CDR”)來描述在重鏈多肽和輕鏈多肽的可變區(qū)內發(fā)現的非鄰接抗原結合位點。這個具體區(qū)已經被Kabat等(1983)U.S.Dept, of Health and HumanServices, “Sequences of Proteins of Immunological Interest”和被 Chothia 和 Lesk, J.Mol.B1l.196:901-917(1987)所描述，這些參考文獻以引用的方式并入本文，其中定義包括當針對彼此比較時的氨基酸殘基的重疊或子集。不過，應用任一定義來指抗體或其變體的CDR旨在處于如本文所定義和使用的術語的范圍內。如通過每個以上引用的參考文獻所定義的涵蓋CDR的適當氨基酸殘基作為比較被列舉在以下表1中。涵蓋具體CDR的準確殘基編號將取決于⑶R的序列和大小而改變。本領域技術人員通?？梢源_定什么殘基包含給定抗體的可變區(qū)氨基酸序列的具體CDR。
[0056]表1.CDR 定義 1
[0057]
【權利要求】
1.一種診斷測試受試者的腦中的α-共核蛋白的升高水平的方法，所述方法包括: (a)在向所述測試受試者外周施用抗α-共核蛋白抗體或其抗原結合片段之后，在指定的時間間隔下測定從所述測試受試者獲得的血漿樣品中的α-共核蛋白的所述水平，其中所述抗體或其片段可以結合具有足夠親和性的α-共核蛋白以改變從腦至血液的α-共核蛋白的凈流出； (b)將所述測試受試者中的所述α-共核蛋白的所述測定的水平與參比標準比較；其中所述血漿樣品與所述參比標準中的α-共核蛋白的所述水平之間的差異或相似性與所述測試受試者的腦中的α-共核蛋白的所述水平相關。
2.—種診斷測試受試者的腦中的α-共核蛋白的升高水平的方法，所述方法包括: (a)提供抗α-共核蛋白抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其片段可以結合具有足夠親和性的α-共核蛋白以改變從腦至血液的α-共核蛋白的凈流出； (b)指導醫(yī)療服務提供者向所述測試受試者外周施用所述抗體并且在施用之后在指定的時間間隔下從所述受試者獲得血漿樣品； (C)測定所述血漿樣品中的α-共核蛋白的所述水平； (d)將所述測試受試者中的α-共核蛋白的所述測定的水平與參比標準比較；其中所述血漿樣品與 所述參比標準中的所述α-共核蛋白的所述水平之間的差異或相似性與所述測試受試者的腦中的α-共核蛋白的所述水平相關。
3.—種診斷測試受試者的腦中的α-共核蛋白的升高水平的方法，所述方法包括: (a)向所述測試受試者外周施用抗α-共核蛋白抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其片段可以結合具有足夠親和性的α-共核蛋白以改變從腦至血液的所述α-共核蛋白的凈流出； (b)在施用之后在指定的時間間隔下從所述測試受試者獲得血漿樣品，并且遞交所述樣品用于確定所述α-共核蛋白的所述水平； (C)將血漿樣品中的所述α-共核蛋白的所述水平與參比標準比較；其中所述血漿樣品與所述參比標準中的所述α-共核蛋白的所述水平之間的差異或相似性與所述測試受試者的腦中的所述α-共核蛋白的水平相關。
4.一種診斷測試受試者的腦中的α-共核蛋白的升高水平的方法，所述方法包括: (a)在向所述測試受試者外周施用抗α-共核蛋白抗體或其抗原結合片段之后，在指定的時間間隔下測定從所述測試受試者獲得的CSF樣品中的α -共核蛋白的所述水平，其中所述抗體或其片段可以結合具有足夠親和性的α-共核蛋白以改變從腦至CSF的α-共核蛋白的凈流出； (b)將所述測試受試者中的所述α-共核蛋白的所述測定的水平與參比標準比較；其中所述CSF樣品與所述參比標準中的α -共核蛋白的所述水平之間的差異或相似性與所述測試受試者的腦中的α-共核蛋白的所述水平相關。
5.一種診斷測試受試者的腦中的α-共核蛋白的升高水平的方法，所述方法包括: (a)提供抗α-共核蛋白抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其片段可以結合具有足夠親和性的α -共核蛋白以改變從腦至CSF的α -共核蛋白的凈流出； (b)指導醫(yī)療服務提供者向所述測試受試者外周施用所述抗體并且在施用之后在指定的時間間隔下從所述受試者獲得CSF樣品；(C)測定所述CSF中的α -共核蛋白的所述水平； (d)將所述測試受試者中的α-共核蛋白的所述測定的水平與參比標準比較；其中所述CSF樣品與所述參比標準中的所述α -共核蛋白的所述水平之間的差異或相似性與所述測試受試者的腦中的α-共核蛋白的所述水平相關。
6.一種診斷測試受試者的腦中的α-共核蛋白的升高水平的方法，所述方法包括: (a)向所述受試者外周施用抗α-共核蛋白抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其片段可以結合具有足夠親和性的α-共核蛋白以改變從腦至CSF的所述α-共核蛋白的凈流出； (b)在施用之后在指定的時間間隔下從所述測試受試者獲得CSF樣品，并且遞交所述樣品用于確定所述α-共核蛋白的所述水平； (c)將所述CSF樣品中的所述α-共核蛋白的所述水平與參比標準比較；其中所述CSF樣品與所述參比標準中的所述α-共核蛋白的所述水平之間的差異或相似性與所述測試受試者的腦中的所述α-共核蛋白的水平相關。
7.如權利要求1至3中任一項所述的方法，其進一步包括將所述血漿樣品中的所述α-共核蛋白的所述水平與在施用所述抗α-共核蛋白抗體或其抗原結合片段之前從所述測試受試者獲得的血漿樣品比較。
8.如權利要求4至6中任一項所述的方法，其進一步包括將所述CSF樣品中的所述α-共核蛋白的所述水平與在施用所述抗α-共核蛋白抗體或其抗原結合片段之前從所述測試受試者獲得的CSF樣 品比較。
9.如權利要求1至8中任一項所述的方法，其中所述參比標準包括在一個或多個對照受試者中的α -共核蛋白的測量的水平，其中所述對照受試者包括正常的健康個體和具有各種嚴重性的共核蛋白病的個體。
10.一種追蹤被治療共核蛋白疾病的受試者的腦中的所述α-共核蛋白水平的方法，所述方法包括在外周施用抗α-共核蛋白抗體或其抗原結合片段之后在指定時間下測定所述受試者的血漿中的α-共核蛋白的所述水平，其中所述抗體或其片段可以結合具有足夠親和性的α-共核蛋白以改變從腦至血液的所述α-共核蛋白的凈流出；并且其中所述受試者的血漿中的所述α-共核蛋白水平與所述受試者的腦中的所述水平相關。
11.一種追蹤被治療共核蛋白疾病的受試者的腦中的所述α-共核蛋白水平的方法，所述方法包括在外周施用抗α-共核蛋白抗體或其抗原結合片段之后在指定時間下測定所述受試者的CSF中的α -共核蛋白的所述水平，其中所述抗體或其片段可以結合具有足夠親和性的α-共核蛋白以改變從腦至CSF的所述α-共核蛋白的凈流出；并且其中所述受試者的CSF中的所述α -共核蛋白水平與所述受試者的腦中的所述水平相關。
12.如權利要求10所述的方法，其進一步包括在額外的外周施用所述抗α-共核蛋白抗體或其抗原結合片段之后在指定時間下測定所述受試者的血漿中的α-共核蛋白的所述水平，從而繪制所述受試者的腦中的所述α-共核蛋白水平隨時間變化的曲線圖。
13.如權利要求11所述的方法，其進一步包括在額外的外周施用所述抗α-共核蛋白抗體或其抗原結合片段之后在指定時間下測定所述受試者的CSF中的α -共核蛋白的所述水平，從而繪制所述受試者的腦中的所述α-共核蛋白水平隨時間變化的曲線圖。
14.如權利要求1至13中任一項所述的方法，其中所述抗體或其抗原結合片段特異性地與包含VH和VL的參比抗體相同的α -共核蛋白表位結合，其中所述VH包含SEQ ID NO: 2并且所述VL包含SEQ ID NO: 3。
15.如權利要求1至14中任一項所述的方法，其中所述抗體或其抗原結合片段競爭性地抑制包含VH和VL的參比抗體與α-共核蛋白結合，其中所述VH包含SEQ ID NO: 2并且所述VL包含SEQ ID NO: 3。
16.如權利要求1至15中任一項所述的方法，其中所述抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區(qū)(VH)和輕鏈可變區(qū)(VL)，其中所述VH包含SEQ ID NO:4的互補決定區(qū)-1 (VHCDRl)氨基酸序列。
17.如權利要求1至16中任一項所述的方法，其中所述抗體或其抗原結合片段包含VH和VL，其中所述VH包含SEQ ID NO: 5的互補決定區(qū)-2 (VHCDR2)氨基酸序列。
18.如權利要求1至17中任一項所述的方法，其中所述抗體或其抗原結合片段包含VH和VL，其中所述VH包含SEQ ID NO: 6的互補決定區(qū)-3 (VHCDR3)氨基酸序列。
19.如權利要求1至18中任一項所述的方法，其中所述抗體或其抗原結合片段包含VH和VL，其中所述VL包含SEQ ID NO: 7的互補決定區(qū)-1 (VIXDRl)氨基酸序列。
20.如權利要求1至19中任一項所述的方法，其中所述抗體或其抗原結合片段包含VH和VL，其中所述VL包含SEQ ID NO: 8的互補決定區(qū)-2 (VIXDR2)氨基酸序列。
21.如權利要求1至20中任一項所述的方法，其中所述抗體或其抗原結合片段包含VH和VL，其中所述VL包含SEQ ID NO: 9的互補決定區(qū)_3 (VLCDR3)氨基酸序列。
22.如權利要求1至21中任一項所述的方法，其中所述抗體或其抗原結合片段包含VH和 VL，其中所述 VH包含 SEQ ID NO:4,SEQ ID NO: 5,SEQ ID NO:6 的 VHCDRl、VHCDR2 和 VHCDR3氨基酸序列。
23.如權利要求1至22中任一項所述的方法，其中所述抗體或其抗原結合片段包含VH和 VL，其中所述 VL 包含 SEQ ID NO: 7,SEQ IDNO:8、SEQ ID NO:9 的 VLCDRl、VLCDR2 和 VLCDR3氨基酸序列。
24.如權利要求1至23中任一項所述的方法，其中所述抗體或其抗原結合片段包含VH和 VL，其中所述 VH 包含 SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO:6 的 VHCDR1、VHCDR2 和 VHCDR3氨基酸序列，并且所述 VL 包含 SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 9 的 VLCDRl、VLCDR2 和VLCDR3氨基酸序列。
25.如權利要求1至24中任一項所述的方法，其中所述抗體或其抗原結合片段包含SEQID NO: 2的VH氨基酸序列和SEQ ID NO: 3的VL氨基酸序列。
26.如權利要求1至25中任一項所述的方法，其中所述抗體或其抗原結合片段是單鏈Fv 片段(scFv)、F(ab，)片段、F(ab)片段或 F (ab’)2 片段。
27.如權利要求1至26中任一項所述的方法，其中所述施用是通過靜脈內注射所述抗體。
28.如權利要求1至27中任一項所述的方法，其中所述抗體是人的。
29.如權利要求1至9或14至28中任一項所述的方法，其中所述指定的時間間隔是小于一周。
30.如權利要求29所述的方法，其中所述指定的時間間隔是小于或等于24小時。
31.如權利要求30所述的方法，其中所述指定的時間間隔是小于或等于3小時。
32.如權利要求10至13中任一項所述的方法，其中所述共核蛋白疾病選自由以下組成的組:帕金森氏病(ro)、帕金森氏病癡呆(PDD)、路易體癡呆(DLB)、阿爾茨海默氏病的路易體變體(LBVAD)、多系統萎縮癥(MSA)、單純性自主神經衰竭(PAF)、具有I型腦鐵積聚的神經變性(NBIA-1)、阿爾茨海默氏病、皮克病、小兒泛發(fā)型神經軸索營養(yǎng)不良(哈-斯二氏疾病)、肌萎縮性側索硬化、創(chuàng)傷性腦損傷以及唐氏綜合癥。
【文檔編號】G01N33/53GK104040342SQ201280065165
【公開日】2014年9月10日 申請日期:2012年10月29日 優(yōu)先權日:2011年11月2日
【發(fā)明者】A·魏霍芬, T·恩格貝爾, J·格林姆 申請人:生物國際強制戒毒協會國際神經系統科學公司