一種檢測紅霉素的膠體金試紙條及方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種檢測紅霉素的膠體金試紙條及方法。試紙條包括試紙和微孔試劑，所述微孔試劑中凍干有膠體金標(biāo)記的紅霉素單克隆抗體；所述試紙由樣品吸收墊、反應(yīng)膜、吸水墊、保護(hù)膜、底板依次連接組成，所述反應(yīng)膜上包括檢測區(qū)和質(zhì)控區(qū)，檢測區(qū)包被有紅霉素半抗原-載體蛋白偶聯(lián)物，質(zhì)控區(qū)包被有抗抗體。用本發(fā)明試紙條檢測紅霉素的方法簡單、快速、直觀、準(zhǔn)確、適用范圍廣、成本低、易推廣使用。
【專利說明】一種檢測紅霉素的膠體金試紙條及方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種檢測紅霉素的試紙條及方法，具體涉及一種用于檢測牛奶中紅霉素的膠體金試紙條。
【背景技術(shù)】
[0002]紅霉素(Erythromycin A)屬大環(huán)內(nèi)脂類抗生素,對葡萄球菌、各種鏈球菌和革蘭陽性桿菌均具有抗菌活性，應(yīng)用非常廣泛。紅霉素在養(yǎng)殖業(yè)(畜禽、水產(chǎn)品)中主要用于細(xì)菌性疾病的治療與防治。由于紅霉素在動(dòng)物體內(nèi)代謝時(shí)間較長，因此不可避免地殘留在動(dòng)物體內(nèi)，給食品安全帶來危害。因此，紅霉素類藥物在畜禽及水產(chǎn)品生產(chǎn)上的大量使用會(huì)導(dǎo)致其在畜禽組織、蜂蜜、牛奶、魚蝦等產(chǎn)品中殘留，危害公眾健康。農(nóng)業(yè)部第235號(hào)文件中已規(guī)定，該藥物的最聞殘留限量為200yg/kg。
[0003]目前檢測紅霉素殘留的測定方法主要有紫外法、液相色譜-熒光法、液相色譜-電化學(xué)法、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法、酶聯(lián)免疫分析法、微生物方法和放射性免疫法。酶聯(lián)免疫檢測技術(shù)將酶聯(lián)免疫反應(yīng)與生物技術(shù)相結(jié)合用于食品中藥物殘留的檢測，常以ELISA檢測試劑盒的形式出現(xiàn)且易商品化，逐漸發(fā)展成為紅霉素藥物的殘留含量檢測中最實(shí)用的檢測技術(shù)之一。膠體金免疫層析法與酶聯(lián)免疫法相比檢測時(shí)間更短，穩(wěn)定性好、操作簡便、無需其他儀器設(shè)備，結(jié)果判斷直觀可靠，適用于進(jìn)行現(xiàn)場快速篩選。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種檢測紅霉素的膠體金試紙條。
[0005]本發(fā)明所提供的膠體金試紙條包括試紙、微孔試劑，微孔試劑具有微孔塞，試紙包括反應(yīng)膜、樣品吸收墊、吸水墊、保護(hù)膜、底板；所述微孔試劑中凍干有紅霉素單克隆抗體-膠體金標(biāo)記物；反應(yīng)膜上包括檢測區(qū)和質(zhì)控區(qū)，均呈與所述試紙的長相垂直的條帶狀，檢測區(qū)包被有紅霉素半抗原-載體蛋白偶聯(lián)物，質(zhì)控區(qū)包被有羊抗鼠抗抗體。
[0006]所述紅霉素半抗原-載體蛋白偶聯(lián)物是由紅霉素半抗原與載體蛋白偶聯(lián)得到，所述載體蛋白可為牛血清白蛋白、卵清白蛋白、甲狀腺蛋白、血藍(lán)蛋白、人血清白蛋白。
[0007]所述紅霉素單克隆抗體-膠體金標(biāo)記物中的紅霉素單克隆抗體是以紅霉素半抗原-載體蛋白偶聯(lián)物作為免疫原制備獲得的紅霉素單克隆抗體。
[0008]所述保護(hù)膜粘貼在樣品吸收墊上，為檢測端，上面有MAX標(biāo)記線。
[0009]所述檢測區(qū)位于近于有MAX標(biāo)記的保護(hù)膜的一端，所述質(zhì)控區(qū)位于遠(yuǎn)離有MAX標(biāo)記的保護(hù)膜的一端。
[0010]所述底板可為PVC底板或其他硬質(zhì)不吸水的材料；所述樣品吸收墊為吸濾紙；所述吸水墊為吸水紙；所述反應(yīng)膜為硝酸纖維素膜；所述保護(hù)膜為PE材質(zhì)保護(hù)膜。
[0011]本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種制備上述膠體金試紙條的方法，其包括步驟:
[0012]I)制備凍干有紅霉素單克隆抗體-膠體金標(biāo)記物的微孔試劑；
[0013]2)制備具有包被紅霉素半抗原-載體蛋白偶聯(lián)物的檢測區(qū)和包被羊抗鼠抗抗體的質(zhì)控區(qū)的反應(yīng)膜；
[0014]3)將2)制備好的反應(yīng)膜與樣品吸收墊、吸水墊、保護(hù)膜、底板組裝成試紙；
[0015]4)將I)和3)制備好的凍干有紅霉素單克隆抗體-膠體金標(biāo)記物的微孔試劑和試紙組裝成試紙條。
[0016]具體地說,步驟包括:
[0017]I)將紅霉素與丙二胺反應(yīng)，制備紅霉素半抗原；
[0018]2)將紅霉素半抗原與載體蛋白偶聯(lián)，制備紅霉素半抗原-載體蛋白偶聯(lián)物；
[0019]3)用紅霉素半抗原-載體蛋白偶聯(lián)物免疫小鼠，將小鼠脾細(xì)胞和小鼠骨髓瘤細(xì)胞通過融合、篩選，得到分泌紅霉素單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株；
[0020]4)提取小鼠IgG免疫健康山羊，得到羊抗鼠抗抗體；
[0021]5)用檸檬酸三鈉與氯金酸反應(yīng)制備膠體金；
[0022]6)將制備的紅霉素單克隆抗體加入到制備的膠體金中，得到紅霉素單克隆抗體-膠體金標(biāo)記物；
[0023]7)將紅霉素單克隆抗體-膠體金標(biāo)記物凍干在微孔試劑中后，將微孔試劑加上微孑L塞；
[0024]8)將樣品吸收墊用含牛血清白蛋白(牛血清白蛋白在緩沖液中的終濃度為0.5%體積百分含量)、PH為7.2、0.lmol/L磷酸鹽緩沖液浸泡2h，37°C下烘干2h ；
[0025]9)在底板上按順序粘貼上樣品吸收墊、反應(yīng)膜、吸水墊和保護(hù)膜；
[0026]10)將制備好的微孔試劑、試紙組裝成試紙條，2?8°C條件下保存12個(gè)月。
[0027]本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種應(yīng)用上述膠體金試紙條檢測樣品中紅霉素殘留的方法，它包括步驟:
[0028](I)用試紙條進(jìn)行檢測；
[0029](2)分析檢測結(jié)果。
[0030]本發(fā)明中用試紙條檢測樣品時(shí)，將待檢樣品溶液滴加于微孔試劑中，混勻后室溫孵育5min,將標(biāo)有MAX標(biāo)記線端向下,插入孵育后的微孔試劑,待檢樣品液與微孔中的金標(biāo)抗體結(jié)合后一起向反應(yīng)膜擴(kuò)散；若待檢樣品液中紅霉素的含量高，則擴(kuò)散過程中待檢樣品液中的紅霉素可與金標(biāo)抗體相結(jié)合，進(jìn)而完全封閉金標(biāo)抗體上紅霉素的抗原結(jié)合點(diǎn)，阻止金標(biāo)抗體與反應(yīng)膜上紅霉素半抗原-載體蛋白偶聯(lián)物結(jié)合，檢測區(qū)不顯色，而抗抗體則可與金標(biāo)抗體結(jié)合，質(zhì)控區(qū)顯色；若待檢樣品液中紅霉素的含量低或無，則金標(biāo)抗體上的抗原結(jié)合位點(diǎn)不能被封閉，進(jìn)而金標(biāo)抗體會(huì)與反應(yīng)膜上紅霉素半抗原-載體蛋白偶聯(lián)物結(jié)合，檢測區(qū)顯色，同時(shí)抗抗體也可與金標(biāo)抗體結(jié)合，質(zhì)控區(qū)顯色。如果質(zhì)控區(qū)不顯色，則試紙失效。如圖4a、4b、4c、4d所示。
[0031]陽性:當(dāng)質(zhì)控區(qū)(C)顯示出條帶，而檢測區(qū)(T)不顯色，判為陽性，用“ + ”表示。
[0032]陰性:當(dāng)質(zhì)控區(qū)(C)和檢測區(qū)(T)均顯示出條帶，判為陰性，用“一”表示。
[0033]無效:當(dāng)質(zhì)控區(qū)(C)不顯示條帶,試紙失效。
[0034]本發(fā)明采用將高特異性的紅霉素單克隆抗體-膠體金標(biāo)記物凍干在微孔試劑中，能夠使金標(biāo)抗體與待檢樣品液充分接觸，充分反應(yīng)，從而減少誤差，增加整個(gè)體系的反應(yīng)靈敏度。本發(fā)明的試紙條具有靈敏度高、成本低、操作簡單、檢測時(shí)間短、儲(chǔ)存簡單、保質(zhì)期長的優(yōu)點(diǎn)。用本發(fā)明的試紙條檢測紅霉素，方法簡便、快速、直觀、準(zhǔn)確、適用范圍廣、成本低、 易推廣使用。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0035]圖1為試紙剖面結(jié)構(gòu)示意圖。
[0036]圖2為試紙俯視圖。
[0037]圖3為微孔試劑圖。
[0038]圖4a、4b、4c、4d為試紙檢測結(jié)果判定圖。
[0039]圖5為紅霉素半抗原合成路線圖。
[0040]圖6為紅霉素半抗原核磁共振氫譜圖。
【具體實(shí)施方式】
[0041 ] 下述實(shí)施例中所使用的實(shí)驗(yàn)方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。
[0042]實(shí)施例1檢測紅霉素的膠體金試紙條的構(gòu)成
[0043]一、試紙(圖1)
[0044]所述試紙是由底板、樣品吸收墊、反應(yīng)膜、吸水墊、保護(hù)膜組成；
[0045]所述樣品吸收墊1、反應(yīng)膜2、吸水墊3和保護(hù)膜7依次按順序粘貼在底板6上，樣品吸收墊的末端與反應(yīng)膜相連，反應(yīng)膜的末端與吸水墊相連，樣品吸收墊的始端與底板的始端對齊，吸水墊的末端與底板的末端對齊；
[0046]所述試紙的樣品吸收墊端粘貼有保護(hù)膜，保護(hù)膜7覆蓋在樣品吸收墊上的檢測端，在檢測端保護(hù)膜上印有MAX字樣(圖2)；
[0047]所述反應(yīng)膜上有檢測區(qū)4和質(zhì)控區(qū)5，均呈與所述試紙的長相垂直的條帶狀，檢測區(qū)位于近于有MAX標(biāo)記的保護(hù)膜的一端，質(zhì)控區(qū)位于遠(yuǎn)離有MAX標(biāo)記的保護(hù)膜的一端。檢測區(qū)包被有紅霉素半抗原-載體蛋白偶聯(lián)物(紅霉素半抗原-卵清白蛋白的偶聯(lián)物)，質(zhì)控區(qū)包被有羊抗鼠抗抗體；
[0048]所述底板為PVC底板；所述樣品吸收墊為吸濾紙；所述吸水墊為吸水紙；所述反應(yīng)膜為硝酸纖維素膜；所述保護(hù)膜為PE材質(zhì)保護(hù)膜。
[0049]二、微孔試劑(圖3)
[0050]所述微孔試劑8具有微孔塞9，微孔試劑中凍干有紅霉素單克隆抗體-膠體金標(biāo)記物。
[0051]將上述試紙、微孔試劑組裝成試紙條，在疒8°C環(huán)境中保存，有效期12個(gè)月。
[0052]實(shí)施例2實(shí)施例1中所述的膠體金試紙條的制備方法
[0053]一、試紙條的制備
[0054]試紙條的制備方法主要包括以下步驟:
[0055]I)制備凍干有紅霉素單克隆抗體-膠體金標(biāo)記物的微孔試劑；
[0056]2)制備具有包被紅霉素半抗原-載體蛋白偶聯(lián)物的檢測區(qū)和包被羊抗鼠抗抗體的質(zhì)控區(qū)的反應(yīng)膜；
[0057]3)將2)制備好的反應(yīng)膜與樣品吸收墊、吸水墊、保護(hù)膜、底板組裝成試紙；
[0058]4)將I)和3)制備好的凍干有紅霉素單克隆抗體-膠體金標(biāo)記物的微孔試劑和試紙組裝成試紙條。[0059]下面分步詳細(xì)敘述:
[0060](一)各部件的制備
[0061]1.紅霉素半抗原-載體蛋白偶聯(lián)物的合成與鑒定
[0062]( I)紅霉素半抗原的合成和鑒定
[0063]半抗原的合成(合成路線如圖5 )
[0064]0.15 g紅霉素在3 ml 二甲基亞砜(DMSO)中的混合物，60°C下緩慢滴加入0.1 ml1，3-丙二胺和0.1 ml吡啶在2 ml DMSO的混合液中，滴加完畢后，繼續(xù)反應(yīng)15小時(shí)，旋蒸除去溶劑和未反應(yīng)的丙二胺，定量得到丙二胺單紅霉素縮合物。
[0065]半抗原的鑒定
[0066]取上述產(chǎn)物經(jīng)核磁共振氫譜測定，如圖6所示，圖譜中1.0-3.4ppm之間增加的亞甲基峰說明半抗原合成成功。
[0067](2)免疫原的制備
[0068]取20mg紅霉素半抗原用0.9ml N，N-二甲基甲酰胺(DMF)溶解得到溶液I ;取0.1ml 10%的戊二醛加入溶液I中，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)8h得到溶液II ;取50mg牛血清白蛋白(BSA)用4ml 0.2mol/L pH9.6的碳酸鹽緩沖液(CB)溶解完全得到溶液III ;將溶液II加入到溶液III中，反應(yīng)24h ;加入25mg硼氫化鈉反應(yīng)2h ;用0.01mol/L的PBS透析三天,每天更換透析液三次，得到紅霉素免疫原。
[0069](3)包被原的制備
[0070]將BSA換成卵清白蛋白(OVA)按上述(2)的步驟制備得到紅霉素包被原。
[0071]2.紅霉素單克隆抗體的制備
[0072]( I)動(dòng)物免疫
[0073]將步驟I得到的免疫原注入Balb/c小鼠體內(nèi)，免疫劑量為150 μ g/只，使其產(chǎn)生
抗血清。
[0074](2)細(xì)胞融合和克隆化
[0075]取免疫Balb/c小鼠脾細(xì)胞，按8:1 (數(shù)量配比)比例與SP2/0骨髓瘤細(xì)胞融合，篩選得到穩(wěn)定分泌紅霉素單克隆抗體的紅霉素單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株。
[0076](3)細(xì)胞凍存和復(fù)蘇
[0077]將雜交瘤細(xì)胞用凍存液制成6X IO6個(gè)/ml的細(xì)胞懸液，在液氮中長期保存。復(fù)蘇時(shí)取出凍存管，立即放入37 °C水浴中速融，離心去除凍存液后，移入培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)。
[0078](4)單克隆抗體的制備與純化
[0079]增量培養(yǎng)法:將雜交瘤細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)基中，在37°C條件下進(jìn)行培養(yǎng)，用辛酸-飽和硫酸銨法將得到的培養(yǎng)液進(jìn)行純化，得到單克隆抗體，_20°C保存。
[0080]所述細(xì)胞培養(yǎng)基為向RPMI1640培養(yǎng)基中添加小牛血清和碳酸氫鈉，使小牛血清在細(xì)胞培養(yǎng)基中的終濃度為20% (質(zhì)量百分含量)，使碳酸氫鈉在細(xì)胞培養(yǎng)基中的終濃度為
0.2% (質(zhì)量百分含量)；所述細(xì)胞培養(yǎng)基的pH為7.4。
[0081]3.羊抗鼠抗抗體的制備
[0082]以羊作為免疫動(dòng)物，以鼠源抗體為免疫原對無病原體羊進(jìn)行免疫，得到羊抗鼠抗抗體。
[0083]4.紅霉素單克隆抗體-膠體金標(biāo)記物的制備[0084](I)膠體金的制備
[0085]用雙蒸去離子水將1%氯金酸稀釋成0.01% (質(zhì)量百分含量)，取100ml置于錐形瓶中，用恒溫電磁攪拌器加熱至沸騰，在持續(xù)高溫、持續(xù)攪拌下加入2.5ml 1%檸檬酸三鈉，繼續(xù)勻速攪拌加熱至溶液呈透亮的紅色時(shí)停止，冷卻至室溫后用去離子水恢復(fù)到原體積，4°C保存。制備好的膠體金外觀純凈、透亮、無沉淀和漂浮物。
[0086](2)紅霉素單克隆抗體-膠體金標(biāo)記物的制備
[0087]在磁力攪拌下，用0.2mol/L碳酸鉀調(diào)膠體金的pH值至7.2，按每毫升膠體金溶液中加入20-50 μ g抗體的標(biāo)準(zhǔn)向膠體金溶液中加入上述紅霉素單克隆抗體，繼續(xù)攪拌混勻IOminJPA 10%牛血清白蛋白(BSA)使其在膠體金溶液中的終濃度為1% (體積百分含量)，靜置lOmin。12000rpm, 4°C離心40min，棄上清液，沉淀用復(fù)溶緩沖液洗滌兩次，用體積為初始膠體金體積1/10的復(fù)溶緩沖液將沉淀重懸，置4°C備用。
[0088]復(fù)溶緩沖液:含牛血清白蛋白(BSA) 0.29Π).5% (體積百分含量)、吐溫_80
0.05%~0.2% (質(zhì)量百分含量)、pH7.2的0.02mol/L磷酸鹽緩沖液。
[0089]5.將紅霉素單克隆抗體-膠體金標(biāo)記物凍干到微孔試劑上
[0090]向微孔試劑微孔板中加入50 μ I紅霉素單克隆抗體-膠體金標(biāo)記物，放入冷凍干燥機(jī)中，在冷阱溫度為-50°C條件下，預(yù)凍3h后，再真空干燥15h，即可取出，得到凍干有紅霉素單克隆抗體-膠體金標(biāo)記物的微孔試劑，將微孔試劑加上微孔塞，密封保存。
[0091]6.樣品吸收墊的制備
[0092]將樣品吸收墊置于`含牛血清白蛋白(牛血清白蛋白在緩沖液中的終濃度為0.5%(體積百分含量))、pH7.2,0.lmol/L磷酸鹽緩沖液中浸泡2h，37°C烘2h備用。
[0093]7.反應(yīng)膜的制備
[0094]包被過程:用磷酸緩沖液將紅霉素半抗原-卵清白蛋白偶聯(lián)物稀釋到lmg/mL，用Isoflow點(diǎn)膜儀將其包被于硝酸纖維素膜上的檢測區(qū)(T)，包被量為1.0μ Ι/cm;用
0.01mol/L、ρΗ7.4的磷酸鹽緩沖液將羊抗鼠IgG抗體稀釋到200 μ g/mL,用Isoflow點(diǎn)膜儀將其包被于硝酸纖維素膜上的質(zhì)控區(qū)(C)，包被量為1.0μ Ι/cm。將包被好的反應(yīng)膜置于37°C條件下干燥16h，備用。
[0095](二)各部件的組裝
[0096]1.試紙的組裝
[0097]將所述樣品吸收墊、反應(yīng)膜、吸水墊、保護(hù)膜依次按順序粘貼在所述底板上；樣品吸收墊的末端與反應(yīng)膜的始端相連，反應(yīng)膜的末端與吸水墊的始端相連，樣品吸收墊的始端與底板的始端對齊，吸水墊的末端與底板的末端對齊；在組裝好的試紙樣品吸收墊上粘貼保護(hù)膜，保護(hù)膜上印有MAX標(biāo)記線。
[0098]2.試紙條的組裝
[0099]將上述步驟I得到的試紙與微孔試劑組裝成試紙條，在疒8°C的環(huán)境中貯存，有效期12個(gè)月。
[0100]實(shí)施例3樣品中紅霉素的檢測
[0101]1.用試紙條檢測樣品
[0102]從原包裝中取出所需數(shù)目的微孔試劑和試紙，并做好標(biāo)記；用微量移液器移取200 μ I待檢牛奶樣品于微孔中，緩慢抽吸且充分與微孔中試劑混勻，室溫(20°C -25°C)孵育5min ;將印有“MAX”線端朝下插入微孔中，使之充分浸入溶液中；室溫(20°C _25°C)孵育5min后,取出試紙,判定結(jié)果。
[0103]2.檢測結(jié)果分析
[0104]陽性:當(dāng)質(zhì)控區(qū)(C)顯示出條帶，檢測區(qū)(T)不顯色，判為陽性，用“ + ”表示，如圖4a ;陰性:當(dāng)質(zhì)控區(qū)(C)和檢測區(qū)(T)均顯示出條帶，判為陰性，用“一”表示，如圖4b ;無效:當(dāng)質(zhì)控區(qū)(C)不顯示條帶,試紙失效,如圖4c和4d所示。
[0105]實(shí)施例4試紙條技術(shù)參數(shù)的確定
[0106]1.檢測限試驗(yàn)
[0107]向空白牛奶樣品中分別添加紅霉素標(biāo)準(zhǔn)品至終濃度為0、5、10、20μ g/L，用試紙條進(jìn)行牛奶樣品檢測，結(jié)果為:當(dāng)紅霉素標(biāo)準(zhǔn)品濃度為0、5μ g/L時(shí)，試紙顯示出肉眼可見的兩條紅色線條，呈陰性；當(dāng)紅霉素標(biāo)準(zhǔn)品濃度為10、20μ g/L時(shí)，試紙質(zhì)控區(qū)顯色，但檢測區(qū)不顯色，呈陽性，表明本試紙條對牛奶樣品紅霉素檢測限10 μ g/L。
[0108]2.假陽性率、假陰性率試驗(yàn)
[0109]取已知紅霉素含量大于10 μ g/L的牛奶陽性樣品20份和紅霉素含量小于10 μ g/L的牛奶陰性樣品20份，用3個(gè)批次生產(chǎn)的試紙條分別進(jìn)行檢測，結(jié)果見表1、表2。
[0110]表1檢測陽性樣品結(jié)果
【權(quán)利要求】
1.一種檢測紅霉素的膠體金試紙條，其特征在于包括試紙和微孔試劑，所述試紙包括反應(yīng)膜、樣品吸收墊、吸水墊、保護(hù)膜、底板，所述反應(yīng)膜上有檢測區(qū)和質(zhì)控區(qū)，檢測區(qū)包被有紅霉素半抗原-載體蛋白偶聯(lián)物，質(zhì)控區(qū)包被有羊抗鼠抗抗體，所述微孔試劑中凍干有紅霉素單克隆抗體-膠體金標(biāo)記物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的膠體金試紙條，其特征在于所述試紙由樣品吸收墊、反應(yīng)膜、吸水墊、保護(hù)膜依次粘貼在底板上組成，所述微孔試劑上具有微孔塞。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的膠體金試紙，其特征在于所述保護(hù)膜粘貼在樣品吸收墊上，為檢測端，上面有MAX標(biāo)記線。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的膠體金試紙條，其特征在于所述檢測區(qū)位于近于有MAX標(biāo)記的保護(hù)膜的一端，所述質(zhì)控區(qū)位于遠(yuǎn)離有MAX標(biāo)記的保護(hù)膜的一端。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的膠體金試紙條，其特征在于所述紅霉素半抗原-載體蛋白偶聯(lián)物由紅霉素半抗原與載體蛋白偶聯(lián)得到，所述載體蛋白可為卵清白蛋白、牛血清白蛋白、甲狀腺蛋白、人血清白蛋白、血藍(lán)蛋白。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的膠體金試紙條，其特征在于所述紅霉素單克隆抗體-膠體金標(biāo)記物中的紅霉素單克隆抗體是以紅霉素半抗原-載體蛋白偶聯(lián)物作為免疫原制備獲得的。
7.一種制備權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述的膠體金試紙條的方法，其包括步驟: O制備凍干有紅霉素單克隆抗體-膠體金標(biāo)記物的微孔試劑； 2)制備具有包被紅霉素半抗原-載體蛋白偶聯(lián)物的檢測區(qū)和包被羊抗鼠抗抗體的質(zhì)控區(qū)的反應(yīng)膜； 3)將2)制備好的反應(yīng)膜與樣品吸收墊、吸水墊、保護(hù)膜、底板組裝成試紙； 4)將I)和3)制備好的凍干有紅霉素單克隆抗體-膠體金標(biāo)記物的微孔試劑和試紙組裝成試紙條。
8.—種檢測牛奶中紅霉素殘留的方法，其包括步驟: 1)用權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述的膠體金試紙條進(jìn)行檢測； 2)分析檢測結(jié)果。
【文檔編號(hào)】G01N33/577GK103777015SQ201210402826
【公開日】2014年5月7日 申請日期:2012年10月22日 優(yōu)先權(quán)日:2012年10月22日
【發(fā)明者】何方洋, 萬宇平, 馮才偉, 田甜, 陶光燦, 聶雯瑩, 劉琳, 馮靜 申請人:北京勤邦生物技術(shù)有限公司