專利名稱：一種基于微懸臂梁的檢測殺蟲晶體蛋白Cry1Ab的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種基于微懸臂梁檢測殺蟲晶體蛋白CrylAb的方法，具體涉及一種微懸臂梁表面修飾殺蟲晶體蛋白CrylAb抗體的方法及應(yīng)用。
背景技術(shù)：
CrylAb蛋白是一種源于蘇云金桿菌[Bacillus Thuringiensis (Bt)]的基因表達的毒蛋白。蘇云金芽孢桿菌為革蘭氏陽性菌，是一類對害蟲毒力 強、致死速度快且對害蟲天敵無毒性的昆蟲病原微生物。菌體在穩(wěn)定生長期可形成伴胞晶體蛋白，又稱殺蟲晶體蛋白(ICP)或D2內(nèi)毒素。ICP由Cry基因和Cyt基因編碼，對敏感昆蟲有較強毒性，而對高等動物和人無毒性。CrylAb屬于Cry基因家族，是Bt基因表達的毒蛋白(Microbiol.Rev. 1989，53，242)。Bt在農(nóng)田害蟲、森林害蟲及衛(wèi)生害蟲的防治中已成為化學(xué)合成農(nóng)藥的有力替代品，它還是轉(zhuǎn)基因抗蟲工程植物重要的基因來源。對Bt蛋白快速、準確地測定，將為育種、轉(zhuǎn)基因植物的蟲害管理和基因標識提供技術(shù)支撐。目前常見的Bt蛋白檢測方法有基于核酸DNA檢測的PCR法(Anal. Bioanal. Chem. 2003, 373，985)和基于蛋白檢測的酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA) (Nature, 1999，402，480)，PCR法能夠從作物種子開始到作物成熟整個過程中對轉(zhuǎn)基因成分進行精確測定，不受樣品的處理方法的影響，但容易出現(xiàn)假陰性和假陽性等問題，對于經(jīng)過高度處理的轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品及其衍生物，如植物油、糖或者淀粉等，它們不含任何DNA成分，因此PCR法很難實現(xiàn)對此類轉(zhuǎn)基因食品的檢測；酶聯(lián)免疫吸附檢測是基于抗原和抗體的特異性結(jié)合以及酶底物的高效催化特性的一種快速檢測技術(shù)，具有快速、靈敏、準確、低成本等特點，己能定性又能定量檢測目標轉(zhuǎn)基因蛋白。但該方法需要進行熒光標記，操作復(fù)雜。而微懸臂梁基于表面應(yīng)力的改變來檢測抗原和抗體的特異性結(jié)合，無需標記，操作簡單，且靈敏度更高。微懸臂梁生化傳感技術(shù)是近年來伴隨著掃描探針顯微鏡(SPM)和微機電系統(tǒng)(MEMS)迅速發(fā)展起來的一種新興技術(shù)。當(dāng)有生化反應(yīng)在微懸臂梁的單側(cè)表面發(fā)生時，其表面應(yīng)力的改變會導(dǎo)致微懸臂梁產(chǎn)生彎曲變形，通過光學(xué)或電學(xué)讀出方法可以測量變形值(Nat. Biotech. 2001，19，856;Chem. Rev. 2008，108，522)。和傳統(tǒng)的 ELISA 方法相t匕，基于抗體修飾的微懸臂梁免疫傳感技術(shù)具有以下優(yōu)點無需標記、靈敏度高、容易實現(xiàn)實時在線的大尺度、高通量、平行陣列測量，可能潛在地用于替代現(xiàn)有的酶聯(lián)免疫吸附檢測方法，對轉(zhuǎn)基因物種的分析檢測具有十分重要的意義。目前基于微懸臂梁的免疫傳感器主要是用于檢測 PSA (Biosens. Bioelectron.，2005, 20, 2157)、CRP (Biosens.Bioelectron. , 2004, 20, 269)、scFv (Proc. Natl. Acad. Sci. , 2005, 102, 14587)、IgG(Biosens. Bioelectron. , 2005, 21, 597)、myoglobin (Sens. Actuators, B2006, 117, 332)和GST (Nanotechnology, 2007, 18，125503)等等，但到目前為止，還沒有任何專利和文獻報道基于微懸臂梁的檢測轉(zhuǎn)基因蛋白(如殺蟲晶體蛋白CrylAb)的方法
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題在于提供一種新型無標記、高靈敏度、高特異性的基于微懸臂梁的檢測殺蟲晶體蛋白CrylAb的方法。為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明開發(fā)了一種基于微懸臂梁的檢測殺蟲晶體蛋白CrylAb的方法,包含以下步驟將帶金膜的微懸臂梁進行前處理，浸入巰基化試劑的醇類溶液中，使巰基化試劑修飾到微懸臂梁的金膜上，清洗；所述清洗包括用 乙醇清洗，氮氣吹干；將微懸臂梁浸入I-乙基-(3- 二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽(EDC .HCl)和N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)的混合溶液中，使巰基化試劑的羧基活化，清洗；所述清洗包括用去離子水清洗，用生物緩沖溶液清洗；將微懸臂梁浸入殺蟲晶體蛋白CrylAb抗體的生物緩沖溶液中，所述生物緩沖溶液包括PH 7. 4的PBS緩沖液，靜置，使活化后的羧基和殺蟲晶體蛋白CrylAb抗體的氨基結(jié)
八
口 o將上述修飾有CrylAb抗體的微懸臂梁用于對殺蟲晶體蛋白CrylAb的檢測。進一步地，所述巰基化試劑為11-巰基十一烷酸、6-巰基己酸或3-巰基丙酸，濃度為I X IOlTl X IO^3M ;所述濃度優(yōu)選為I X 1(T4M。進一步地，所述浸入巰基化試劑的醇類溶液的條件為時間為12tT24h，溫度為15°C ^37. 5°C ;所述時間優(yōu)選為12h，所述溫度優(yōu)選為15°C進一步地，所述前處理包括用去離子水清洗，氮氣吹干。進一步地，所述I-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽濃度為IOmg/ml 100mg/ml,優(yōu)選為10mg/ml ;所述N-輕基琥拍酰亞胺的濃度為10mg/ml 100mg/ml，優(yōu)選為10mg/ml ;所述I-乙基-(3- 二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽和N-羥基琥珀酰亞胺的體積比為廣5:1 ;所述體積比優(yōu)選為1:1 ;所述浸入的反應(yīng)時間為0. 5tT4h ;所述反應(yīng)時間優(yōu)選為4h。進一步地，所述殺蟲晶體蛋白CrylAb抗體的濃度為0. lmg/mflmg/ml,優(yōu)選為
0.lmg/ml0進一步地，所述靜置的條件為時間為4h 8h，優(yōu)選為4h。本發(fā)明具有如下有益效果I、本發(fā)明對轉(zhuǎn)基因植物中殺蟲晶體蛋白CrylAb的檢測具有很高的特異性和靈敏度，最低檢測限能達到0. 4pg/ml，低于現(xiàn)有的殺蟲晶體蛋白CrylAb酶聯(lián)免疫吸附檢測方法的檢測限(7. 8ngml 2. 9pg/ml)。2、本發(fā)明的方法無需標記、操作簡單、靈敏度高，可能用于替代現(xiàn)有的酶聯(lián)免疫吸附檢測方法，對轉(zhuǎn)基因物種的分析檢測具有十分重要的意義。
具體實施例方式實施例II、微懸臂梁表面修飾殺蟲晶體蛋白CrylAb抗體I)將帶金膜的微懸臂梁(美國Mikromasch,長350um,寬35um,厚lum,—側(cè)鍍有20nm的鉻和20nm的金)在物質(zhì)的量的比值為7:3的濃H2S04/30%H202的混合溶液中浸泡lmin，之后用去離子水清洗三次，氮氣吹干。然后將微懸臂梁浸入濃度為I X IQ-4M的巰基化試劑11-巰基十一烷酸的乙醇溶液中，時間為12h，溫度為15°C，取出用乙醇清洗三次，氮氣吹干；2)將步驟I)處理過的微懸臂梁浸入EDC HCl和NHS的混合溶液中，EDC HCl和NHS的濃度均為10mg/ml，I-乙基_ (3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽和N-羥基琥珀酰亞胺的體積比為I : I ;所述浸入的反應(yīng)時間為0. 5h。取出用去離子水洗三次，再用pH7. 4的PBS緩沖溶液洗三次；3)連接抗體將經(jīng)步驟2)處理過的微懸臂梁浸入濃度為0. lmg/ml的殺蟲晶體蛋白CrylAb抗體的溶液中，加入PBS溶液，避光條件下靜置4h，取出用pH 7. 4的PBS緩沖溶液洗三次，放A pH 7. 4的PBS緩沖溶液靜置Ih。2、微懸臂梁傳感器靈敏度效果檢測

(I)清洗去離子水清洗微懸臂梁傳感器樣品池三次，再用乙醇清洗三次，氮氣吹干。(2)樣品溶液用pH 7. 4的PBS緩沖溶液配置CrylAb蛋白溶液；樣品溶液濃度分另1J 為 0. 4pg/ml、4pg/ml、40pg/ml、0. 4ng/ml、4ng/ml(3)樣品測定將已修飾有CrylAb抗體的微懸臂梁置入微懸臂梁傳感器的樣品槽中，流動相為PH 7. 4的PBS緩沖溶液，流速為lml/h。當(dāng)微懸臂梁傳感器信號穩(wěn)定后分別加A Iml上述所配置的樣品溶液，避光條件下利用微懸臂梁傳感器進行監(jiān)測，得到微懸臂梁的彎曲位移曲線。(4)系統(tǒng)平衡反應(yīng)實驗結(jié)束后，取出微懸臂梁，用PBS平衡樣品池系統(tǒng)。每測定一個濃度后，取出微懸臂梁，然后按(I)進行新的操作。每一個修飾有CrylAb抗體的微懸臂梁只檢測一種濃度的CrylAb蛋白溶液。實驗設(shè)三次重復(fù)，結(jié)果取平均值，結(jié)果表明檢測不同濃度殺蟲晶體蛋白CrylAb的懸臂梁彎曲位移為6. Onm> 10. lnm、16. 0nm、25. 2nm和35. 5nm,說明該微懸臂梁檢測殺蟲晶體蛋白CrylAb的彎曲位移隨著CrylAb的濃度的增大而增大,最低能檢測0. 4pg/mlCrylAb.3、微懸臂梁傳感器特異性效果檢測(I)清洗去離子水清洗微懸臂梁傳感器樣品池三次，再用乙醇清洗三次，氮氣吹干;(2)樣品溶液用pH 7. 4的PBS緩沖溶液稀釋羊抗人IgG和豇豆胰蛋白酶抑制劑(CpTI);樣品溶液濃度均為I U g/ml ；(3)樣品測定將已修飾有CrylAb抗體的微懸臂梁置入微懸臂梁傳感器的樣品槽中，流動相為PH 7. 4的PBS緩沖溶液，流速為lml/h。當(dāng)微懸臂梁傳感器信號穩(wěn)定后分別加A Iml上述所配置的樣品溶液，避光條件下利用微懸臂梁傳感器進行監(jiān)測，得到微懸臂梁的彎曲位移曲線。(4)系統(tǒng)平衡反應(yīng)實驗結(jié)束后，取出微懸臂梁，用PBS平衡樣品池系統(tǒng)。每測定一個濃度后，取出微懸臂梁，然后按(I)進行新的操作。每一個修飾有CrylAb抗體的微懸臂梁只檢測一種蛋白溶液。實驗設(shè)三次重復(fù)，結(jié)果取平均值，結(jié)果表明檢測IgG和CpTI的懸臂梁彎曲位移均小于3nm。說明該懸臂梁對殺蟲晶體蛋白CrylAb的檢測具有特異性。實施例2I、微懸臂梁表面修飾殺蟲晶體蛋白CrylAb抗體I)將帶金膜的微懸臂梁(美國Mikromasch,長350um,寬35um,厚lum,—側(cè)鍍有20nm的鉻和20nm的金)在物質(zhì)的量的比值為7:3的濃H2S04/30%H202的混合溶液中浸泡lmin，之后用去離子水清洗三次，氮氣吹干。然后將微懸臂梁浸入濃度為IXlO-4M的巰基化試劑6-巰基己酸的乙醇溶液中，時間為12h，溫度為15° ，取出用乙醇清洗三次，氮氣吹干;2)將步驟I)處理過的微懸臂梁浸入EDC HCl和NHS的混合溶液中，EDC HCl和NHS的濃度為10mg/ml，I-乙基_ (3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽和N-羥基琥珀酰亞胺的體積比為1:1 ;所述浸入的反應(yīng)時間為0. 5h。取出用去離子水洗三次，再用pH 7. 4的PBS緩沖溶液洗三次；3)連接抗體將經(jīng)步驟2)處理過的微懸臂梁浸入濃度為0. lmg/ml的殺蟲晶體蛋白CrylAb抗體的溶液中，加入PBS溶液，避光條件下靜置4h，取出用pH 7. 4的PBS緩沖溶液洗三次，放A pH 7. 4的PBS緩沖溶液靜置Ih。2、微懸臂梁傳感器靈敏度效果檢測(I)清洗去離子水清洗微懸臂梁傳感器樣品池三次，再用乙醇清洗三次，氮氣吹干。(2)樣品溶液用pH 7. 4的PBS緩沖溶液配置CrylAb蛋白溶液；樣品溶液濃度分另1J 為 0. 4pg/ml、4pg/ml、40pg/ml、0. 4ng/ml、4ng/ml(3)樣品測定將已修飾有CrylAb抗體的微懸臂梁置入微懸臂梁傳感器的樣品槽中，流動相為PH 7. 4的PBS緩沖溶液，流速為lml/h。當(dāng)微懸臂梁傳感器信號穩(wěn)定后分別加A Iml上述所配置的樣品溶液，利用微懸臂梁傳感器進行監(jiān)測，得到微懸臂梁的彎曲位移曲線。(4)系統(tǒng)平衡反應(yīng)實驗結(jié)束后，取出微懸臂梁，用PBS平衡樣品池系統(tǒng)。每測定一個濃度后，取出微懸臂梁，然后按(I)進行新的操作。每一個修飾有CrylAb抗體的微懸臂梁只檢測一種濃度的CrylAb蛋白溶液。實驗設(shè)三次重復(fù)，結(jié)果取平均值，結(jié)果表明檢測不同濃度殺蟲晶體蛋白CrylAb的懸臂梁彎曲位移為3. 5nm、7. 2nm、ll. 0nm、18. 2nm和30. lnm,說明該微懸臂梁檢測殺蟲晶體蛋白CrylAb的彎曲位移隨著CrylAb的濃度的增大而增大,最低能檢測0. 4pg/ml CrylAb.3、微懸臂梁傳感器特異性效果檢測(I)清洗去離子水清洗微懸臂梁傳感器樣品池三次，再用乙醇清洗三次，氮氣吹干;(2)樣品溶液用pH 7.4的PBS緩沖溶液稀釋羊抗人IgG和豇豆胰蛋白酶抑制劑(CpTI);樣品溶液濃度均為I U g/ml ；(3)樣品測定將已修飾有CrylAb抗體的微懸臂梁置入微懸臂梁傳感器的樣品槽中，流動相為PH 7. 4的PBS緩沖溶液，流速為lml/h。當(dāng)微懸臂梁傳感器信號穩(wěn)定后分別加A Iml上述所配置的樣品溶液，利用微懸臂梁傳感器進行監(jiān)測，得到微懸臂梁的彎曲位移曲線。(4)系統(tǒng)平衡反應(yīng)實驗結(jié)束后，取出微懸臂梁，用PBS平衡樣品池系統(tǒng)。每測定一個濃度后，取出微懸臂梁，然后按(I)進行新的操作。每一個修飾有CrylAb抗體的微懸臂梁只檢測一種蛋白溶液。實驗設(shè)三次重復(fù)，結(jié)果取平均值，結(jié)果表明檢測IgG和CpTI的懸臂梁彎曲位移均小于3nm。說明該懸臂梁對殺蟲晶體蛋白CrylAb的檢測具有特異性。實施例3I、微懸臂梁表面修飾殺蟲晶體蛋白CrylAb抗體I)將帶金膜的微懸臂梁(美國Mikromasch,長350um,寬35um,厚lum,—側(cè)鍍有20nm的鉻和20nm的金)在物質(zhì)的量的比值為7:3的濃H2S04/30%H202的混合溶液中浸泡 lmin，之后用去離子水清洗三次，氮氣吹干。然后將微懸臂梁浸入濃度為IXlO-4M的巰基化試劑3-巰基丙酸的乙醇溶液中，時間為12h，溫度為15°C，取出用乙醇清洗三次，氮氣吹干;2)將步驟I)處理過的微懸臂梁浸入EDC HCl和NHS的混合溶液中，EDC HCl和NHS的濃度為10mg/ml，I-乙基_ (3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽和N-羥基琥珀酰亞胺的體積比為1:1 ;所述浸入的反應(yīng)時間為0. 5h。取出用去離子水洗三次，再用pH 7. 4的PBS緩沖溶液洗三次；3)連接抗體將經(jīng)步驟2)處理過的微懸臂梁浸入濃度為lmg/ml的殺蟲晶體蛋白CrylAb抗體的溶液中，加入PBS溶液，避光條件下靜置4h，取出用pH 7. 4的PBS緩沖溶液洗三次，放入pH 7. 4的PBS緩沖溶液靜置Ih。2、微懸臂梁傳感器靈敏度效果檢測(I)清洗去離子水清洗微懸臂梁傳感器樣品池三次，再用乙醇清洗三次，氮氣吹干。(2)樣品溶液用pH 7. 4的PBS緩沖溶液配置CrylAb蛋白溶液；樣品溶液濃度分另1J 為 0. 4pg/ml、4pg/ml、40pg/ml、0. 4ng/ml、4ng/ml(3)樣品測定將已修飾有CrylAb抗體的微懸臂梁置入微懸臂梁傳感器的樣品槽中，流動相為PH 7. 4的PBS緩沖溶液，流速為lml/h。當(dāng)微懸臂梁傳感器信號穩(wěn)定后分別加入Iml上述所配置的樣品溶液，利用微懸臂梁傳感器進行監(jiān)測，得到微懸臂梁的彎曲位移曲線。(4)系統(tǒng)平衡反應(yīng)實驗結(jié)束后，取出微懸臂梁，用PBS平衡樣品池系統(tǒng)。每測定一個濃度后，取出微懸臂梁，然后按(I)進行新的操作。每一個修飾有CrylAb抗體的微懸臂梁只檢測一種濃度的CrylAb蛋白溶液。實驗設(shè)三次重復(fù)，結(jié)果取平均值，結(jié)果表明檢測不同濃度殺蟲晶體蛋白CrylAb的懸臂梁彎曲位移為0nm、5. lnm、10. 0nm、13. 2nm和24. 3nm,說明該微懸臂梁檢測殺蟲晶體蛋白CrylAb的彎曲位移隨著CrylAb的濃度的增大而增大,最低能檢測4pg/ml CrylAb.3、微懸臂梁傳感器特異性效果檢測(I)清洗去離子水清洗微懸臂梁傳感器樣品池三次，再用乙醇清洗三次，氮氣吹干；
(2)樣品溶液用pH 7. 4的PBS緩沖溶液稀釋羊抗人IgG和豇豆胰蛋白酶抑制劑基因(CpTI);樣品溶液濃度均為I U g/ml ；(3)樣品測定將已修飾有CrylAb抗體的微懸臂梁置入微懸臂梁傳感器的樣品槽中，流動相為PH 7. 4的PBS緩沖溶液，流速為lml/h。當(dāng)微懸臂梁傳感器信號穩(wěn)定后分別加A Iml上述所配置的樣品溶液，避光條件下利用微懸臂梁傳感器進行監(jiān)測，得到微懸臂梁的彎曲位移曲線。(4)系統(tǒng)平衡反應(yīng)實驗結(jié)束后，取出微懸臂梁，用PBS平衡樣品池系統(tǒng)。每測定一個濃度后，取出微懸臂梁，然后按(I)進行新的操作。每一個修飾有CrylAb抗體的微懸臂梁只檢測一種蛋白溶液。實驗設(shè)三次重復(fù)，結(jié)果取平均值，結(jié)果表明檢測IgG和CpTI的懸臂梁彎曲位移均小于3nm。說明該懸臂梁對殺蟲晶體蛋白CrylAb的檢測具有特異性。
本發(fā)明在所列舉的濃度、修飾時間、比值和溫度范圍內(nèi)都可以達到本發(fā)明的技術(shù)效果。根據(jù)中國專利CN 102095855 (Anal. Bioanal. Chem.，2010，396，2203-2211、J. Agric. Food. Chem.，2011, 59，2184-2189)報道，現(xiàn)有的殺蟲晶體蛋白CrylAb酶聯(lián)免疫吸附檢測方法的檢測限為7. 8ng/mf2. 9pg/ml。通過上述實施例可以看出，本發(fā)明對轉(zhuǎn)基因植物中殺蟲晶體蛋白CrylAb的檢測具有很高的特異性和靈敏度，最低檢測限能達到0. 4pg/ml，低于現(xiàn)有的殺蟲晶體蛋白CrylAb酶聯(lián)免疫吸附檢測方法的檢測限范圍，具有高靈敏度。顯然，本發(fā)明的上述實施例僅僅是為清楚地說明本發(fā)明所作的舉例，而并非是對本發(fā)明的實施方式的限定。對于所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在上述說明的基礎(chǔ)上還可以做出其它不同形式的變化或變動。這里無法對所有的實施方式予以窮舉。凡是屬于本發(fā)明的技術(shù)方案所引伸出的顯而易見的變化或變動仍處于本發(fā)明的保護范圍之列。
權(quán)利要求
1.一種基于微懸臂梁的檢測殺蟲晶體蛋白CrylAb的方法，其特征在于，該方法包含以下步驟 將帶金膜的微懸臂梁進行前處理，浸入巰基化試劑的醇類溶液中，清洗； 將微懸臂梁浸入I-乙基-(3- 二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽和N-羥基琥珀酰亞胺的混合溶液中，清洗； 將微懸臂梁浸入殺蟲晶體蛋白CrylAb抗體的生物緩沖溶液中，靜置； 將上述修飾有CrylAb抗體的微懸臂梁用于對殺蟲晶體蛋白CrylAb的檢測。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，所述巰基化試劑為11-巰基十一烷酸、6-巰基己酸或3-巰基丙酸，濃度為I X KrtTl X 10_3M。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，所述浸入巰基化試劑的醇類溶液中的條件為時間為12h 24h，溫度為15。。 37. 50C o
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，所述前處理為在濃H2S04/30%H202的混合溶液中浸泡Imin ;所述濃H2SO4 30%H202物質(zhì)的量的比值為7 3。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，所述前處理還包括用去離子水清洗，氮氣吹干。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，所述I-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽的濃度為10mg/ml 100mg/ml ;所述N-輕基琥拍酰亞胺的濃度為IOmg/m廣100mg/ml ;所述I-乙基_ (3- 二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽和N-羥基琥珀酰亞胺的體積比為廣5 I ;所述浸入的反應(yīng)時間為0. 5tT4h。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，所述殺蟲晶體蛋白CrylAb抗體的濃度為0.lmg/ml lmg/ml o
8.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，所述靜置的時間為4tT8h。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種基于微懸臂梁的檢測殺蟲晶體蛋白Cry1Ab的方法。本發(fā)明以11-巰基十一烷酸、6-巰基己酸或3-巰基丙酸作為巰基化試劑修飾到微懸臂梁的金膜上，以1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽(EDC·HCl)和N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)活化巰基化試劑的羧基，使之和殺蟲晶體蛋白Cry1Ab抗體的氨基結(jié)合得到修飾有殺蟲晶體蛋白Cry1Ab抗體的微懸臂梁。本發(fā)明將此修飾有Cry1Ab抗體的微懸臂梁用于殺蟲晶體蛋白Cry1Ab的檢測，取得了良好效果。此方法無需標記、操作簡單、靈敏度高，可能用于替代現(xiàn)有的酶聯(lián)免疫吸附檢測方法，對轉(zhuǎn)基因物種的分析檢測具有十分重要的意義。
文檔編號G01N33/68GK102778569SQ20121014651
公開日2012年11月14日 申請日期2012年5月11日 優(yōu)先權(quán)日2012年5月11日
發(fā)明者佟振合, 吳驪珠, 彭榮鵬, 陳彬 申請人:中國科學(xué)院理化技術(shù)研究所