專利名稱：一種用流動化學分析儀測定還原糖濃度的方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種測定還原糖濃度的方法，特別涉及一種用流動化學分析儀測定還原糖濃度的方法。
背景技術：
在食品原料特別是植物性原料中，糖類分布十分廣泛。糖類是大多數(shù)食品的主要成分之一，是食品工業(yè)的主要原料和輔助原料。測定食品中還原糖的方法很多，常用的方法有物理法、化學法、比色法和色譜法等?；瘜W法是應用的最為廣泛的常規(guī)分析方法。在國家標準《GB/T 5009. 7-2008食品中還原糖的測定》中采用直接滴定法和高錳酸鉀滴定法來測定還原糖的濃度，這兩種方法都屬于化學法，該方法操作復雜、繁瑣，測定速度慢，試劑消耗量大，采用滴定的測試方法人為誤差較大，尤其對于大批量樣品的檢測，不能及時地指導生產(chǎn)。二硝基水楊酸比色法，用于測定還原糖的濃度，由于該方法是在水浴后比色，測定時間長，而且水浴時間的長短對結果的影響很大，造成人為誤差大，導致數(shù)據(jù)重復性差?，F(xiàn)有技術(“用流動化學分析儀測定煙用香料中的還原糖”，彭軍倉、張迎新、胡喜懷，《煙草科技》， 2003年第5期，總第190期，第M-25，42頁)公開了一種用流動分析儀測定煙用香料中的還原糖的方法，它是根據(jù)在堿性環(huán)境中，香料中的還原糖的羥基被銅-新亞銅試劑還原為黃色的亞銅-新亞銅復合物的原理，在溫度78°C和波長460nm處測定此種復合物的吸光度從而計算出香料中的含糖量。該方法使用的顯色劑是新亞銅試劑，該試劑價格高，在大批量樣品的測定過程中消耗大，成本高。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種用流動化學分析儀測定還原糖濃度的方法，克服現(xiàn)有測定方法中存在的測量速度慢，操作繁瑣，人為誤差大，價格昂貴等缺點。為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術方案是這樣的一種用流動化學分析儀測定還原糖濃度的方法，包括了以下步驟(1)配制濃度為1000、1500、2000、2500和3000mg/ L的葡萄糖標準溶液，使標準溶液與顯色劑3，5- 二硝基水楊酸在流動化學分析儀中反應； (2)記錄流動化學分析儀測出的標準溶液在540nm波長下的吸光值，將標準溶液的吸光值同其中還原糖的濃度繪制還原糖標準工作曲線，進行回歸分析，得到還原糖回歸方程；(3) 將待測樣品溶液與顯色劑混合加熱，混合加熱溫度為95 99°C，在流動化學分析儀內(nèi)反應，記錄測得的吸光值。作為優(yōu)選，所述的顯色劑的配制步驟為將3，5- 二硝基水楊酸溶于NaOH溶液中，加入酒石酸鉀鈉溶液，混合均勻，加入結晶酚和亞硫酸鈉，溶解定容。所述的待測樣品為可溶性固體，配置待測樣品溶液步驟為稱取Ig固體樣品溶于 IOOml水中，在冰浴中IOOOOrpm勻質5min，用濾紙過濾。所述的待測樣品為液體，配置待測樣品溶液步驟為吸取樣品Iml用水定容至 100ml，混合均勻后用濾紙過濾。
用流動化學分析儀測定還原糖濃度的方法所測的還原糖的濃度范圍在1000 3000mg/L。與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明的優(yōu)點在于本發(fā)明采用3，5- 二硝基水楊酸作為顯色劑并與流動化學分析儀結合來測定還原糖的濃度，試劑價格便宜，配制程序簡單，實驗過程溫度和時間由儀器控制，精度高，重復性好，無人為誤差，測定結果準確可靠適于批量產(chǎn)品快速準確檢驗。


圖1為本發(fā)明用流動化學分析儀測定還原糖濃度的還原糖標準工作曲線圖。
具體實施例方式為了使本發(fā)明的目的、技術方案及優(yōu)點更加清楚明白，本發(fā)明進一步用以下具體實施例進行說明，但本發(fā)明絕非限于這些例子。實施例1 (用流動化學分析儀測定液體樣品中還原糖濃度) 1、儀器、試劑
1. 1、儀器API公司生產(chǎn)的AAS系列流動化學分析儀(311型自動取樣器、302D型泵系統(tǒng)、303A型反應系統(tǒng)、305D檢測器、FASPac-II系列檢測軟件)。1.2、試劑葡萄糖、3，5-二硝基水楊酸、NaOH、酒石酸鉀鈉、結晶酚、亞硫酸鈉、 Bri j、去離子水。2、儀器參數(shù)設定
進樣時間60 s ；沖洗時間90 s ；系統(tǒng)穩(wěn)定時間15 min ；測定波長:540 nm ；反應器溫度96°C ；每隔10個樣品做兩次自動清洗和一次基線校正。取樣器清洗液5-10滴Brij和IOOml去離子水混合，搖勻即得。3、制備標準溶液
準確稱取5 g經(jīng)過98 100°C干燥2 h的葡萄糖，用去離子水溶解后定容至500 mL, 即配成濃度為10，000 mg/L的葡萄糖標準儲備液；再移取標準儲備液各50、75、100、125和 150ml，用去離子水定容至500ml，即得到濃度分別為1000、1500、2000、2500和3000 mg/L的標準溶液。4、制備顯色劑
將5g 3，5-二硝基水楊酸溶于200mL摩爾濃度為2mol/L的NaOH溶液中，接著加入 500mL含130g酒石酸鉀鈉的溶液，混勻后加入5g結晶酚和5g亞硫酸鈉，溶解后定容至 IOOOmL,暗處保藏。5、制備待測樣品溶液
分別精確吸取待測麥汁樣品1#、2#各1 mL用水定容至IOOmL,混勻后用濾紙過濾，濾液即可進行分析。6、樣品測定
將取樣器清洗液、顯色劑、標準溶液和待測樣品溶液分別倒入測定管并放在自動取樣器的相應位置，設置反應池加熱溫度為96°C，待系統(tǒng)穩(wěn)定后在波長MOnm下測定吸光值，并設定對1000 mg/L,2000 mg/L及待測樣品1#、2#分別進行10次重復測定。
7、繪制還原糖標準工作曲線，得到還原糖濃度和吸光值的線性回歸方程為 y=0. 0004180x+0. 2370，其中χ為還原糖濃度(mg/L)，變化范圍為0-3000，y為吸光值，變化范圍為0-7. 2。標準工作曲線參見附圖1。8、方法精密度試驗
對1000 mg/L和2000 mg/L的標準樣品及待測樣品1#和2#分別進行10次測定。結果表明，精密度在0. 72 0. 89%之間，使用本發(fā)明方法測定還原糖含量具有較好的精密度。9、方法空白加標回收率試驗
由已知還原糖含量的標準樣品和待測樣品的空白加標回收率測定結果可知還原糖空白加標回收率在98. 24 101. 98%之間，平均加標回收率在99. 37 101. 1 之間，說明該方法是可行的。10、方法檢出限試驗
使用濃度為1000mg/L的葡萄糖溶液作為標準樣品，重復測定10次，測定結果的標準偏差 STD=8. 040，方法檢出限 MDL=8. 040X2. 821=22. 680mg/L。實施例2 (用流動化學分析儀測定固體樣品中還原糖濃度) 1、儀器、試劑
1. 1、儀器API公司生產(chǎn)的AAS系列流動化學分析儀(311型自動取樣器、302D型泵系統(tǒng)、303A型反應系統(tǒng)、305D檢測器、FASPac-II系列檢測軟件)。1.2、試劑葡萄糖、3，5-二硝基水楊酸、NaOH、酒石酸鉀鈉、結晶酚、亞硫酸鈉、 Bri j、去離子水。2、儀器參數(shù)設定
進樣時間60 s ；沖洗時間90 s ；系統(tǒng)穩(wěn)定時間15 min ；測定波長:540 nm ；反應器溫度96°C ；每隔10個樣品做兩次自動清洗和一次基線校正。取樣器清洗液5-10滴Brij和IOOml去離子水混合，搖勻即得。3、制備標準溶液
準確稱取5 g經(jīng)過98 100°C干燥2 h的葡萄糖，用去離子水溶解后定容至500 mL, 即配成濃度為10，000 mg/L的葡萄糖標準儲備液；再移取標準儲備液各50、75、100、125和 150ml，用去離子水定容至500ml，即得到濃度分別為1000、1500、2000、2500和3000 mg/L的標準溶液。4、制備顯色劑
將5g 3，5-二硝基水楊酸溶于200mL摩爾濃度為2mol/L的NaOH溶液中，接著加入 500mL含130g酒石酸鉀鈉的溶液，混勻后加入5g結晶酚和5g亞硫酸鈉，溶解后定容至 IOOOmL,暗處保藏。5、制備待測樣品溶液
精確稱取待測麥芽樣品1#、2#各1 g分別溶于100 mL水中，在冰浴中10，000 rpm均質5 min，然后用濾紙過濾備用。6、樣品測定
將取樣器清洗液、顯色劑、標準溶液和待測樣品溶液分別倒入測定管并放在自動取樣器的相應位置，設置反應池加熱溫度為95°C，待系統(tǒng)穩(wěn)定后在波長MOnm下測定吸光值，并設定對1000 mg/L,2000 mg/L及待測樣品1#、姊分別進行10次重復測定。
7、繪制還原糖標準工作曲線，得到還原糖濃度和吸光值的線性回歸方程為 y=0. 0004180x+0. 2370，其中χ為還原糖濃度(mg/L)，變化范圍為0-3000，y為吸光值，變化范圍為0-7. 2。標準工作曲線參見附圖1。8、方法精密度試驗
對1000 mg/L和2000 mg/L的標準樣品及待測樣品1#和2#分別進行10次測定。結果表明，精密度在0. 67 0. 80%之間，使用本發(fā)明方法測定還原糖含量具有較好的精密度。9、方法空白加標回收率試驗
由已知還原糖含量的標準樣品和待測樣品的空白加標回收率測定結果可知還原糖空白加標回收率在98. 24 101. 98%之間，平均加標回收率在99. 37 101. 1 之間，說明該方法是可行的。10、方法檢出限試驗
使用濃度為1000mg/L的葡萄糖溶液作為標準樣品，重復測定10次，測定結果的標準偏差 STD=8. 040，方法檢出限 MDL=8. 040X2. 821=22. 680mg/L。
權利要求
1.一種用流動化學分析儀測定還原糖濃度的方法，包括了以下步驟(1)配制不同濃度的葡萄糖標準溶液，使標準溶液與顯色劑在流動化學分析儀中反應；(2)將標準溶液與顯色劑混合加熱，在流動化學分析儀內(nèi)反應，記錄一定波長下流動化學分析儀測定的吸光值，將其同還原糖的濃度繪制還原糖標準工作曲線，并進行回歸分析，得到還原糖回歸方程；(3)記錄測定待測樣品溶液的吸光值，并計算出其中還原糖濃度，其特征在于所述的顯色劑為3，5- 二硝基水楊酸，流動化學分析儀測定波長為540nm，待測樣品溶液與顯色劑的混合加熱溫度為95 99°C。
2.根據(jù)權利要求1所述的一種用流動化學分析儀測定還原糖濃度的方法，其特征在于所述步驟(1)中標準溶液的配制濃度為1000、1500、2000、2500和3000mg/L。
3.根據(jù)權利要求1所述的一種用流動化學分析儀測定還原糖濃度的方法，其特征在于所述的顯色劑的配制步驟為將3，5-二硝基水楊酸溶于NaOH溶液中，加入酒石酸鉀鈉溶液，混合均勻，加入結晶酚和亞硫酸鈉，溶解定容。
4.根據(jù)權利要求1所述的一種用流動化學分析儀測定還原糖濃度的方法，其特征在于所述的待測樣品為可溶性固體，配置待測樣品溶液步驟為稱取Ig固體樣品溶于IOOml 水中，在冰浴中IOOOOrpm勻質5min，用濾紙過濾。
5.根據(jù)權利要求1所述的一種用流動化學分析儀測定還原糖濃度的方法，其特征在于所述的待測樣品為液體，配置待測樣品溶液步驟為吸取樣品Iml用水定容至100ml，混合均勻后用濾紙過濾。
6.根據(jù)權利要求1所述的一種用流動化學分析儀測定還原糖濃度的方法，其特征在于該方法所測還原糖的濃度范圍在1000 3000mg/L。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種用流動化學分析儀測定還原糖濃度的方法，它采用3,5-二硝基水楊酸作為顯色劑并與流動化學分析儀結合來測定還原糖的濃度，試劑價格便宜，配制程序簡單，實驗過程溫度和時間由儀器控制，精度高，重復性好，無人為誤差，測定結果準確可靠，適于批量產(chǎn)品快速準確檢驗。
文檔編號G01N21/75GK102288596SQ20111018821
公開日2011年12月21日 申請日期2011年7月6日 優(yōu)先權日2011年7月6日
發(fā)明者衛(wèi)春會, 宗緒巖, 江文濤, 羅惠波, 黃治國 申請人:四川理工學院