專利名稱：傅立葉紅外光譜檢測血清中核酸含量的方法
技術領域：
本發(fā)明屬于檢測方法，具體涉及用傅立葉紅外光譜檢測血清中核酸含量的方法。
背景技術：
在發(fā)生病變的組織細胞中會發(fā)生代謝和組成結構的改變，從而引起代謝產物以及微觀環(huán)境改變，主要體現在氧化還原性、化學鍵位置、溫度、極性和離子濃度等參數的變化。 由于血液中細胞的代謝產物會脫落到血清之中，因此會改變血清的成分變化，影響到血清的物質構成和含量。血清中分子的結構是確定的，且其結構變換可以通過分子振動反映在紅外光譜中，因此，紅外光譜技術是從物質的分子振動光譜來識別和區(qū)分不同的物質結構的，成為研究物質分子結構的有效手段。通常情況下，利用FIlR高分辨手段，對不同的組織進行了分析并能在分子水平上揭示不同組織核酸含量的差別，對于這些差別的鑒定方法， 也就是通過紅外的譜峰歸屬后的核酸官能團的變化加以區(qū)別。該方法對同一塊組織的光譜采集部位不同，得到的光譜也有所不同，難以實現光譜的重現性。在此情況下，我們用血清能夠反映突變組織的變化，還能獲得清晰的紅外光譜。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是克服現有技術中存在的缺陷，提供一種快速、準確、操作簡便的血清中核酸的檢測方法。該方法包括如下步驟1. 一種利用紅外光譜檢測血清中核酸的方法，包括a)對臨床已確診的肝癌，肺癌，胰腺癌和正常人取空腹靜脈血；b)用離心機離心后，不加抗凝劑，取上層血清保存待用；c)血清采集后，立刻進行光譜采集，時間不超過1小時；d)采集血清的紅外光譜圖光譜范圍400001^-400011-1 ；e)取核酸中磷酸二酯基團ν asP0_2和蛋白質酰胺II譜帶紅外光譜譜面積相比；f)在與步驟b)中相同的條件下取待測樣本；g)在與步驟C)中相同的條件下采集待測樣本的紅外光譜圖；h)取步驟f)中的紅外光譜ν asP0_2與酰胺11帶譜面積相比。本發(fā)明采用傅立葉紅外光譜法對不同血清中的核酸含量進行了檢測，此方法便捷、快速、經濟。


附圖1是正常人、十二指腸癌、肝癌、肺癌患者的血清紅外光譜；附圖2是紅外光譜圖正常血清與癌血清磷酸二酯基ν asP0_2和酰胺II譜帶。
具體實施方式
1.樣品采集血清取自臨床已確認的肝癌、肺癌、胰腺癌和正常人，采取受試者的空腹靜脈血5ml，用離心機離心5分鐘，轉速為2000轉/分鐘，不加抗凝劑，取上層血清保存。2.紅外光譜的采集紅外光譜儀為美國熱電公司的Nicolet 360型傅里葉變換紅外光譜儀。分辨率為4CHT1，掃描累加32次，并將以上多次采集的光譜的平均結果作為樣品的標準紅外光譜圖，掃描范圍^OOcn^lOOcnT1，室溫(23°C )測量。3.譜段的選擇通過觀察對照血清紅外光譜的差異選擇譜段區(qū)域，即選擇鑒別血清中的核酸官能團譜段，優(yōu)先鑒別采用的譜段為1M5CHT1和ΙΜδοπΓ1。FIlR光譜特征峰的確認詳見后面表 1。4.血清的檢測我們按照與對照血清相同的方式樣品制備、采集光譜，再在譜峰1245cm-1和 1545cm-1處將待測樣品光譜數據與對照血清光譜數據進行對比，分析。具體來說，即若待測血清中核酸相對含量數值小于正常血清1. 5時，表明該血清中核酸相對含量接近正常血清；核酸含量高于1. 5時，血清可能發(fā)生病變，通過待測血清與對照血清相應指標(酰胺II，核酸ν #02的_吸收頻率，吸光度)對比分析可以反映出核酸相對含量在高于1. 5時更接近哪種血清的匹配值(詳見表2、3)。表1 FIlR光譜特征峰的初步指認
權利要求
1.傅立葉紅外光譜檢測血清中核酸含量的方法，其特征是具體步驟如下a)對臨床已確診的肝癌，肺癌，胰腺癌和正常人取空腹靜脈血；b)用離心機離心后，不加抗凝劑，取上層血清保存待用；c)血清采集后，進行光譜采集；d)采集血清的紅外光譜圖光譜范圍^OOcn^-^OcnT1，將多次采集的光譜的平均結果作為樣品的標準紅外光譜圖；e)取核酸中磷酸二酯基團νasP0_2和蛋白質酰胺II譜帶紅外光譜譜面積相比；f)在與步驟b)中相同的條件下取待測樣本；g)在與步驟c)中相同的條件下采集待測樣本的紅外光譜圖；h)取步驟f)中的紅外光譜VasPCT2與酰胺II帶譜面積相比。
2.按權利要求1所述的方法，其特征是其中實驗要求的血清采集后，進行光譜采集，時間不超過1小時。
3.權利要求1的方法，其特征是其中所述正常，確定的血清和待測樣品血清的紅外光譜采集方式在位4000CHT1至400CHT1的紅外光譜段內進行32次的掃描，并將以上采集的光譜的平均結果作為樣品的標準紅外光譜圖。
4.按權利要求1所述的方法，其特征是其核酸中磷酸二酯基團VasPCI2和蛋白質酰胺 II譜帶，所述步驟d)中紅外譜帶選自1240cm"1和1545cm"10
5.按權利要求1所述的方法，其特征是其中步驟d)中所述的正常血清中VasPCT2與酰胺II譜面積比值為標準指標。
全文摘要
本發(fā)明涉及利用傅立葉紅外光譜(FTIR)檢測血清中核酸含量的方法，更具體地說，涉及一種用傅立葉紅外光譜檢測幾種血清中核酸相對含量的方法，本發(fā)明是利用FTIR研究血清中細胞核酸相對含量的變化，揭示它們在分子水平上的組成和分子結構的差異。本發(fā)明利用核酸分子νasPO-2官能團的譜面積與蛋白質酰胺II帶譜面積相比，這個比值代表血清中核酸的相對含量，可以用來區(qū)分和檢測不同血清中核酸含量。本發(fā)明快速、準確、操作簡便。
文檔編號G01N21/35GK102331408SQ20111015668
公開日2012年1月25日 申請日期2011年6月9日 優(yōu)先權日2011年6月9日
發(fā)明者孫秀平, 沈子駿, 趙麗輝, 韓德明 申請人:長春理工大學