專利名稱：竹葉提取物及其制品中黃酮含量的測(cè)定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及天然產(chǎn)物的測(cè)定方法，具體涉及天然產(chǎn)物中黃酮類物質(zhì)的測(cè)定方法， 更特別地涉及竹葉提取物及其制品中黃酮含量的測(cè)定方法。
背景技術(shù)：
竹葉作為一種“藥食兩用的天然植物”已被廣大消費(fèi)者所接受，竹葉提取物主要功 能性成分為黃酮糖苷，具有抗氧化和抑菌活性，可以作為一種生物黃酮類保健營(yíng)養(yǎng)素進(jìn)行 開(kāi)發(fā)。以竹葉為原料，利用硅膠柱層析、大孔樹(shù)脂柱層析、有機(jī)溶劑液液萃取等方法制備的 竹葉黃酮粉產(chǎn)品已經(jīng)上市，因此，竹葉提取物在食品、化工、醫(yī)藥、農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域具有廣闊的市 場(chǎng)前景。目前，用于測(cè)定竹葉提取物及其制品中黃酮含量的方法是分光光度法，分光光度 法是利用黃酮類化合物結(jié)構(gòu)上的酚羥基及其還原性羰基能夠與金屬鹽試劑形成有色絡(luò)合 物原理進(jìn)行測(cè)定。此法設(shè)備價(jià)廉，操作簡(jiǎn)便，但樣品未經(jīng)分離純化，受花色素、酚酸及其它酚 性成分的干擾，誤差較大，結(jié)果高于實(shí)際含量。此外，由于竹葉提取物及其制品中的黃酮類 成分比較復(fù)雜，不同種類的黃酮化合物相互之間的的含量亦相差非常大，分光光度法的另 一項(xiàng)重要缺點(diǎn)是難以了解竹葉提取物及其制品中各種黃酮化合物的分布及其具體含量、比 例等，而對(duì)這些參數(shù)的了解對(duì)于產(chǎn)品的深入開(kāi)發(fā)和評(píng)價(jià)具有重要意義。盡管我國(guó)林業(yè)科研人員對(duì)竹葉提取物的開(kāi)發(fā)利用已進(jìn)行了一定的研究，由于行業(yè) 中仍缺乏測(cè)定竹葉提取物及其制品中黃酮含量的明確而有效的方法，這在一定程度上制約 了竹葉提取物的開(kāi)發(fā)利用。因此，建立一個(gè)更精準(zhǔn)的測(cè)定竹葉提取物及其制品中黃酮含量 的方法具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明人令人驚奇地發(fā)現(xiàn)，通過(guò)將竹葉提取物或其制品進(jìn)行酸水解處理，然后采 用特定的色譜條件進(jìn)行高效液相色譜分析，可以準(zhǔn)確地測(cè)定竹葉提取物或其制品中的黃酮 化合物的組成分布及其含量。本發(fā)明基于上述發(fā)現(xiàn)而得以完成。發(fā)明概述因此，本發(fā)明第一方面涉及測(cè)定竹葉提取物或其制品中黃酮化合物種類和/或含 量的方法，其包括以下步驟(a)使竹葉提取物或其制品進(jìn)行酸解處理；(b)提供用于HPLC 分析用的反相高效液相色譜系統(tǒng)；(c)分別將不同的標(biāo)準(zhǔn)品溶液注入液相色譜系統(tǒng)，進(jìn)行 色譜分離；(d)將步驟(a)酸解溶液注入液相色譜系統(tǒng)，進(jìn)行色譜分離；(e)對(duì)竹葉提取物 或其制品中的黃酮類化合物進(jìn)行定性表征；和任選地，(f)對(duì)竹葉提取物或其制品中的黃 酮類化合物進(jìn)行定量表征。本發(fā)明第二方面提供了一種信息說(shuō)明資料，其中記載了本發(fā)明第一方面任一項(xiàng)所 述的方法。發(fā)明詳述
本發(fā)明第一方面涉及測(cè)定竹葉提取物或其制品中黃酮化合物種類和/或含量的 方法，其包括以下步驟(a)使竹葉提取物或其制品在鹽酸甲醇溶液中加熱，進(jìn)行酸解處理，過(guò)濾，得酸解 溶液；(b)提供反相高效液相色譜系統(tǒng)，其包括色譜柱、流動(dòng)相、包括等度和/或梯度的 洗脫程序、以及裝配有二極管陣列檢測(cè)器或紫外檢測(cè)器的色譜儀；(c)分別將不同的標(biāo)準(zhǔn)品溶液注入液相色譜系統(tǒng)，進(jìn)行色譜分離，所述各標(biāo)準(zhǔn)品溶 液獨(dú)立地包含一種或多種選自下列7個(gè)的標(biāo)準(zhǔn)品異葒草苷、葒草苷、牡荊苷、異牡荊苷、木 犀草素-6-C-阿拉伯糖苷、木犀草素、苜蓿素；(d)將步驟(a)所得酸解溶液注入液相色譜系統(tǒng)，進(jìn)行色譜分離；(e)根據(jù)步驟(C)所得各標(biāo)準(zhǔn)品的色譜響應(yīng)值以及步驟(d)所得酸水解溶液的色 譜響應(yīng)值，對(duì)所述竹葉提取物或其制品中的黃酮類化合物進(jìn)行定性表征；和任選地，(f)根據(jù)步驟(C)所得各標(biāo)準(zhǔn)品的色譜響應(yīng)值以及步驟(d)所得酸水解溶液的色 譜響應(yīng)值，對(duì)所述竹葉提取物或其制品中的黃酮類化合物進(jìn)行定量表征。在本發(fā)明第一方面所述方法的一個(gè)實(shí)施方案中，其中在步驟(a)中，所述鹽酸甲 醇溶液是甲醇與25%鹽酸的混合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述甲醇與25%鹽酸的混合物是 二者以體積比O 6) 1“2 5) 1、或約4 1的混合物，優(yōu)選是約4 1的混合物。在本發(fā)明第一方面所述方法的一個(gè)實(shí)施方案中，其中在步驟(a)中，所述加熱是 在沸水浴中加熱。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述加熱是在沸水浴中回流。在本發(fā)明第一方面所述方法的一個(gè)實(shí)施方案中，其中在步驟(a)中，所述酸解處 理的時(shí)間為1 3小時(shí)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述酸解處理的時(shí)間為1. 5 2. 5小時(shí)。在 一個(gè)實(shí)施方案中，所述酸解處理的時(shí)間為約2小時(shí)。在本發(fā)明第一方面所述方法的一個(gè)實(shí)施方案中，其中在步驟(a)中，所述竹葉提 取物或其制品與鹽酸甲醇溶液的比為50mg (IOml 50ml)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述竹 葉提取物或其制品與鹽酸甲醇溶液的比為50mg (15ml 40ml)、50mg (20ml 30ml)、 或約50mg 25ml，優(yōu)選的比為約50mg 25ml。本領(lǐng)域技術(shù)人員理解，根據(jù)所述竹葉提取物或其制品中的黃酮類化合物的含量 不同，所述竹葉提取物或其制品與鹽酸甲醇溶液的比可以作適當(dāng)?shù)母淖儯垣@得較佳的酸 解效果；類似地，其它因素亦可作適當(dāng)改變。在一個(gè)實(shí)施方案中，在步驟(a)中，所述鹽酸 甲醇溶液是甲醇與25%鹽酸二者以體積比約4 1的混合物，所述加熱是在沸水浴中回 流，所述酸解處理的時(shí)間為約2小時(shí)，所述竹葉提取物或其制品與鹽酸甲醇溶液的比為約 50mg 25ml。在本發(fā)明第一方面所述方法的一個(gè)實(shí)施方案中，其中在步驟(b)中，所述色譜柱 是ODS柱。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述色譜柱是5 μ m粒度填料的ODS柱。在一個(gè)實(shí)施方案中， 所述色譜柱是5 μ m粒度填料的ODS柱。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述色譜柱是5 μ m粒度填料的 YMC-Pack ODS AQ型色譜柱。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述色譜柱是5 μ m粒度填料的YMC-Pack ODS AQSG. 6mm x 250mm)色譜柱，或者是具有在本發(fā)明所述色譜條件下與該5 μ m粒度填 料的YMC-Pack ODS AQ型6mm χ 250mm)色譜柱分離效果相當(dāng)?shù)纳V柱。在一個(gè)實(shí)施方 案中，所述色譜柱是ODS柱，并且其在在本發(fā)明所述色譜條件下可以使下列標(biāo)準(zhǔn)品相互之間的分離度達(dá)到1. 0以上異葒草苷、葒草苷、牡荊苷、異牡荊苷、木犀草素-6-C-阿拉伯糖 苷、木犀草素、苜蓿素。優(yōu)選地，該色譜柱可使上述7個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品相互之間的分離度達(dá)到1. 1 以上、1.2以上、1.3以上、1.5以上、或2.0以上。在本發(fā)明第一方面所述方法的一個(gè)實(shí)施方案中，其中在步驟(b)中，所述流動(dòng)相 包括流動(dòng)相A和流動(dòng)相B，所述流動(dòng)相A是乙腈，所述流動(dòng)相B是0.5% (V/V)磷酸水溶液。在本發(fā)明第一方面所述方法的一個(gè)實(shí)施方案中，其中在步驟(b)中，所述洗脫程 序是以0. 5 2ml/min(優(yōu)選約lml/min)的流速，在第一洗脫時(shí)間段內(nèi)以包含10 15% 流動(dòng)相A和加至100%流動(dòng)相B的混合液中進(jìn)行等度洗脫，然后在第一洗脫時(shí)間段內(nèi)從上 述混合液經(jīng)線性梯度變化到包含40 50%流動(dòng)相A和加至100%流動(dòng)相B的混合液中進(jìn) 行梯度洗脫。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述第一洗脫時(shí)間段使用的洗脫液是包含約12%流動(dòng)相 A和約88%流動(dòng)相B (本領(lǐng)域技術(shù)人員理解，(1) 二者之和為100%，和/或⑵兩種流動(dòng)相 的比例可作適當(dāng)調(diào)整以獲得更佳的分離效果；此(1)和(2)在其它情況下亦是適用的)的 混合液。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述第二洗脫時(shí)間段使用的梯度洗脫液是包含約12%流動(dòng)相 A和約88%流動(dòng)相B的混合液經(jīng)線性梯度變化到包含約45%流動(dòng)相A和約55%流動(dòng)相B 的混合液。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述第一洗脫時(shí)間段為30 60min，優(yōu)選35 55min，優(yōu)選 40 50min，優(yōu)選約45min。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述第二洗脫時(shí)間段為30 60min，優(yōu)選 35 55min，優(yōu)選40 50min，優(yōu)選約45min。本領(lǐng)域技術(shù)人員理解，在優(yōu)選的情況下，所述 第一洗脫時(shí)間段洗脫操作完畢后，即刻開(kāi)始所述第二洗脫時(shí)間段。在本發(fā)明第一方面所述方法的一個(gè)實(shí)施方案中，其中在步驟(b)中，所述色譜系 統(tǒng)設(shè)定的檢測(cè)波長(zhǎng)為320 380nm，優(yōu)選330 370nm，優(yōu)選340 360nm，優(yōu)選約350nm。在本發(fā)明第一方面所述方法的一個(gè)實(shí)施方案中，其中在步驟(b)中，所述色譜柱 的柱溫控制在15 45°C，優(yōu)選20 40°C，優(yōu)選25 35°C，優(yōu)選約30°C。在本發(fā)明第一方面所述方法的一個(gè)實(shí)施方案中，其中在步驟(b)中，所述色譜系 統(tǒng)的進(jìn)樣體積為5 50 μ L，優(yōu)選5 40 μ L，優(yōu)選5 30 μ L，優(yōu)選10 20 μ L，優(yōu)選IOyL 或 10μ L。在本發(fā)明第一方面所述方法的一個(gè)實(shí)施方案中，其中在步驟(C)中，所述標(biāo)準(zhǔn)品 溶液包括僅包含7個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品之一的溶液，這種包含單一標(biāo)準(zhǔn)品的溶液可以方便地用于定性 測(cè)定，亦可用于定量測(cè)定。在一個(gè)實(shí)施方案中，其中在步驟(c)中，所述標(biāo)準(zhǔn)品溶液包括僅 包含7個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品之一的溶液，并且包含某一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品的溶液可以具有不同的溶質(zhì)濃度，即 對(duì)于某一標(biāo)準(zhǔn)品的溶液可以配制有多個(gè)，它們之間的濃度分布在一定范圍內(nèi)，例如各溶質(zhì) 濃度獨(dú)立地分布在0. 0001mg/mL到lmg/mL的范圍內(nèi)，優(yōu)選分布在0. 001mg/mL到0. lmg/mL 的范圍內(nèi)。在本發(fā)明第一方面所述方法的一個(gè)實(shí)施方案中，其中在步驟(C)中，所述標(biāo)準(zhǔn)品 溶液包含全部7個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品，這種包含全部7個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品的溶液可以方便地用于定量測(cè)定。在 一個(gè)實(shí)施方案中，其中在步驟(c)中，所述標(biāo)準(zhǔn)品溶液包含全部7個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品，并且該標(biāo)準(zhǔn) 品溶液可以具有不同的溶質(zhì)濃度，即該標(biāo)準(zhǔn)品溶液可以配制有多個(gè)，各標(biāo)準(zhǔn)品溶液之間 以及每一標(biāo)準(zhǔn)品中的具體溶質(zhì)的濃度分布在一定范圍內(nèi)，例如各溶質(zhì)濃度獨(dú)立地分布在 0. 0001mg/mL到lmg/mL的范圍內(nèi)，優(yōu)選分布在0. 001mg/mL到0. lmg/mL的范圍內(nèi)。在本發(fā)明第一方面所述方法的一個(gè)實(shí)施方案中，在步驟(c)中，對(duì)于不論是包含全部7個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，還是包含單個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，其中牡荊苷、木犀草 素-6-C-阿拉伯糖苷、木犀草素、和苜蓿素的濃度各自獨(dú)立地分布在0. OOOlmg/mL到0. 2mg/ mL的范圍內(nèi)，優(yōu)選分布在0. 001mg/mL到0. 02mg/mL的范圍內(nèi)。在一個(gè)實(shí)施方案中，在步驟 (c)中，對(duì)于不論是包含全部7個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，還是包含單個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)準(zhǔn)品溶 液，其中葒草苷和異牡荊苷的濃度各自獨(dú)立地分布在0. 0005mg/mL到0. 4mg/mL的范圍內(nèi)， 優(yōu)選分布在0. 005mg/mL到0. 04mg/mL的范圍內(nèi)。在一個(gè)實(shí)施方案中，在步驟(c)中，對(duì)于 不論是包含全部7個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，還是包含單個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，其中異葒 草苷的濃度分布在0. 002mg/mL到lmg/mL的范圍內(nèi)，優(yōu)選分布在0. 02mg/mL到0. lmg/mL的 范圍內(nèi)。在本發(fā)明第一方面所述方法的一個(gè)實(shí)施方案中，在步驟(d)中，所述注入液相色 譜系統(tǒng)的所述酸解溶液可任選地用流動(dòng)相稀釋。該稀釋優(yōu)選地可以使該酸解溶液中的黃酮 類化合物的濃度與步驟(C)的標(biāo)準(zhǔn)品溶液中的黃酮類化合物的濃度基本上相當(dāng)?shù)姆秶Ｔ?一個(gè)實(shí)施方案中，該稀釋優(yōu)選地可以使該酸解溶液中的各黃酮類化合物的濃度獨(dú)立地分布 在0. 0001mg/mL到lmg/mL的范圍內(nèi)，優(yōu)選分布在0. 001mg/mL到0. lmg/mL的范圍內(nèi)。在一 個(gè)實(shí)施方案中，該流動(dòng)相可以為包含10 15%流動(dòng)相A和加至100%流動(dòng)相B的混合液， 優(yōu)選可以為包含約12%流動(dòng)相A和約88%流動(dòng)相B的混合液。在本發(fā)明第一方面所述方法的一個(gè)實(shí)施方案中，在步驟(C)和/或步驟(d)中，所 述色譜分離是根據(jù)步驟(b)所述洗脫程序進(jìn)行洗脫的。在本發(fā)明第一方面所述方法的一個(gè)實(shí)施方案中，在步驟(e)中，所述定性表征是 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖中色譜峰顯示的保留時(shí)間，確定酸水解溶液的色譜中各色譜峰的歸屬。 由此可以確定所述竹葉提取物或其制品中包含的黃酮類化合物的種類。本領(lǐng)域技術(shù)人員理 解，在上述通過(guò)色譜峰顯示的保留時(shí)間確定色譜峰歸屬時(shí)，標(biāo)準(zhǔn)品的保留時(shí)間與樣品相應(yīng) 物質(zhì)的保留時(shí)間之間，以及同一樣品不同進(jìn)樣批次的保留時(shí)間之間，可以容許有本領(lǐng)域技 術(shù)人員可理解和接受的誤差，例如與對(duì)照品的保留時(shí)間相比，樣品相應(yīng)物質(zhì)的保留時(shí)間可 以有例如 士0. 5min、士0. 25min、士0. lmin、或 士0. 05min 的偏差。在本發(fā)明第一方面所述方法的一個(gè)實(shí)施方案中，在步驟(f)中，所述定量表征是 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖中色譜峰顯示的保留時(shí)間和響應(yīng)強(qiáng)度(例如峰高、峰面積，優(yōu)選峰面 積)，確定酸水解溶液的色譜中各色譜峰的歸屬以及其在色譜進(jìn)樣溶液中的濃度，進(jìn)一步確 定所述竹葉提取物或其制品中包含的黃酮類化合物的種類及其各自的含量，進(jìn)一步確定所 述竹葉提取物或其制品中包含的總黃酮含量。在本發(fā)明第一方面所述方法的一個(gè)實(shí)施方案中，在步驟(f)中，所述定量表征酸 水解溶液中各色譜峰所歸屬的黃酮在色譜進(jìn)樣溶液中的濃度，其是根據(jù)步驟(C)所得各標(biāo) 準(zhǔn)品的色譜響應(yīng)值以及步驟(d)所得酸水解溶液的色譜響應(yīng)值，通過(guò)外標(biāo)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法 換算獲得的。在本發(fā)明第一方面所述方法的一個(gè)實(shí)施方案中，在步驟(f)中，所述定量表征竹 葉提取物或其制品中所含黃酮類化合物[例如，各黃酮化合物可分別表示為異葒草苷 (X1)、葒草苷(X2)、牡荊苷(X3)、異牡荊苷(x4)、木犀草素-6-C-阿拉伯糖苷(X5)、木犀草素 (X6)、苜蓿素(X7)]的各自含量，該各自含量是通過(guò)以下式(1)計(jì)算確定的
權(quán)利要求
1.測(cè)定竹葉提取物或其制品中黃酮化合物種類和/或含量的方法，其包括以下步驟(a)使竹葉提取物或其制品在鹽酸甲醇溶液中加熱，進(jìn)行酸解處理，過(guò)濾，得酸解溶液；(b)提供反相高效液相色譜系統(tǒng)，其包括色譜柱、流動(dòng)相、包括等度和/或梯度的洗脫 程序、以及裝配有二極管陣列檢測(cè)器或紫外檢測(cè)器的色譜儀；(c)分別將不同的標(biāo)準(zhǔn)品溶液注入液相色譜系統(tǒng)，進(jìn)行色譜分離，所述各標(biāo)準(zhǔn)品溶液獨(dú) 立地包含一種或多種選自下列7個(gè)的標(biāo)準(zhǔn)品異葒草苷、葒草苷、牡荊苷、異牡荊苷、木犀草 素-6-C-阿拉伯糖苷、木犀草素、苜蓿素；(d)將步驟(a)所得酸解溶液注入液相色譜系統(tǒng)，進(jìn)行色譜分離；(e)根據(jù)步驟(c)所得各標(biāo)準(zhǔn)品的色譜響應(yīng)值以及步驟(d)所得酸水解溶液的色譜響 應(yīng)值，對(duì)所述竹葉提取物或其制品中的黃酮類化合物進(jìn)行定性表征；和任選地，(f)根據(jù)步驟(c)所得各標(biāo)準(zhǔn)品的色譜響應(yīng)值以及步驟(d)所得酸水解溶液的色譜響 應(yīng)值，對(duì)所述竹葉提取物或其制品中的黃酮類化合物進(jìn)行定量表征。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，在步驟(a)中，該方法具有以下(i)至(ν)中的任一項(xiàng)或多 項(xiàng)所述特征(i)所述鹽酸甲醇溶液是甲醇與25%鹽酸的混合物；( )所述加熱是在沸水浴中加熱；(iii)所述酸解處理的時(shí)間為1 3小時(shí)；(iv)所述竹葉提取物或其制品與鹽酸甲醇溶液的比為50mg (IOml 50ml);(ν)所述鹽酸甲醇溶液是甲醇與25%鹽酸二者以體積比約4 1的混合物，所述加熱 是在沸水浴中回流，所述酸解處理的時(shí)間為約2小時(shí)，所述竹葉提取物或其制品與鹽酸甲 醇溶液的比為約50mg 25ml。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，在步驟(b)中，該方法具有以下(i)至(iv)中的任一項(xiàng)或 多項(xiàng)所述特征(i)所述色譜柱是ODS柱；( )所述色譜柱是5 μ m粒度填料的ODS柱；(iii)所述色譜柱是5μ m粒度填料的YMC-Pack ODS AQ型色譜柱；(iv)所述色譜柱是ODS柱，并且其在色譜條件下可以使下列標(biāo)準(zhǔn)品相互之間的分離度 達(dá)到1. 0以上異葒草苷、葒草苷、牡荊苷、異牡荊苷、木犀草素-6-C-阿拉伯糖苷、木犀草 素、首猜素。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，在步驟(b)中，該方法具有以下(i)至(ix)中的任一項(xiàng)或 多項(xiàng)所述特征(i)所述流動(dòng)相包括流動(dòng)相A和流動(dòng)相B，所述流動(dòng)相A是乙腈，所述流動(dòng)相B是0. 5% (V/V)磷酸水溶液；( )所述洗脫程序是以0. 5 2ml/min(優(yōu)選約lml/min)的流速，在第一洗脫時(shí)間段 內(nèi)以包含10 15%流動(dòng)相A和加至100%流動(dòng)相B的混合液中進(jìn)行等度洗脫，然后在第一 洗脫時(shí)間段內(nèi)從上述混合液經(jīng)線性梯度變化到包含40 50%流動(dòng)相A和加至100%流動(dòng) 相B的混合液中進(jìn)行梯度洗脫；(iii)所述第一洗脫時(shí)間段使用的洗脫液是包含約12%流動(dòng)相A和約88%流動(dòng)相B的混合液；(iv)所述第二洗脫時(shí)間段使用的梯度洗脫液是包含約12%流動(dòng)相A和約88%流動(dòng)相 B的混合液經(jīng)線性梯度變化到包含約45%流動(dòng)相A和約55%流動(dòng)相B的混合液； (ν)所述第一洗脫時(shí)間段為30 60min (vi)所述第二洗脫時(shí)間段為30 60min；(vii)所述色譜系統(tǒng)設(shè)定的檢測(cè)波長(zhǎng)為320 380nm；(viii)所述色譜柱的柱溫控制在15 45°C；(ix)所述色譜系統(tǒng)的進(jìn)樣體積為5 50μ L。
5.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，在步驟(c)中，該方法具有以下(i)至(ii)中的任一項(xiàng)或 多項(xiàng)所述特征(i)所述標(biāo)準(zhǔn)品溶液包括僅包含7個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品之一的溶液，并且包含某一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品的溶 液，其溶質(zhì)濃度獨(dú)立地分布在0. 0001mg/mL到lmg/mL的范圍內(nèi)；( )所述標(biāo)準(zhǔn)品溶液包含全部7個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品，并且其中各溶質(zhì)濃度獨(dú)立地分布在 0. 0001mg/mL 到 lmg/mL 的范圍內(nèi)；
6.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，在步驟(c)和/或步驟(d)中，所述色譜分離是根據(jù)權(quán)利要 求4所述特征進(jìn)行洗脫的。
7.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，該方法具有以下(i)至(iii)中的任一項(xiàng)或多項(xiàng)所述特征 (i)在步驟(e)中，所述定性表征是根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖中色譜峰顯示的保留時(shí)間，確定酸水解溶液的色譜中各色譜峰的歸屬；( )在步驟(f)中，所述定量表征是根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖中色譜峰顯示的保留時(shí)間和響 應(yīng)強(qiáng)度，確定酸水解溶液的色譜中各色譜峰的歸屬以及其在色譜進(jìn)樣溶液中的濃度，進(jìn)一 步確定所述竹葉提取物或其制品中包含的黃酮類化合物的種類及其各自的含量，進(jìn)一步確 定所述竹葉提取物或其制品中包含的總黃酮含量。(iii)在步驟(f)中，所述定量表征酸水解溶液中各色譜峰所歸屬的黃酮在色譜進(jìn)樣 溶液中的濃度，其是根據(jù)步驟(c)所得各標(biāo)準(zhǔn)品的色譜響應(yīng)值以及步驟(d)所得酸水解溶 液的色譜響應(yīng)值，通過(guò)外標(biāo)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法換算獲得的。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)的方法中，在步驟(f)中，所述定量表征竹葉提取物或其制 品中所含黃酮類化合物的各自含量，該各自含量是通過(guò)以下式(1)計(jì)算確定的z/(o/0) = ^iLpI χ ιοο%m...............(1)式中Xi—樣品中各個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品黃酮單一組分的質(zhì)量百分含量(％ )； Ci—根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得出的樣品中各個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品黃酮(異葒草苷、葒草苷、牡荊苷、異牡 荊苷、木犀草素-6-C-阿拉伯糖苷、木犀草素、苜蓿素)的濃度(mg/mL)； V——樣品溶液定容體積(mL)； m-樣品質(zhì)量數(shù)(mg)。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)的方法中，在步驟(f)中，所述定量表征竹葉提取物或其制 品中包含的總黃酮含量，該總黃酮含量是通過(guò)以下式(2)計(jì)算確定的X = X1+X2+X3+X4+X5+ (X6+X7) X 1. 53......... (2)式中X—樣品中總黃酮苷質(zhì)量百分含量(％)；XI—樣品中異葒草苷質(zhì)量百分含量(％)； X2—樣品中葒草苷質(zhì)量百分含量(％ )； X3—樣品中牡荊苷質(zhì)量百分含量(％ )； X4—樣品中異牡荊苷質(zhì)量百分含量(％ )；X5——樣品中木犀草素-6-C-阿拉伯糖苷質(zhì)量百分含量(％)； X6——樣品中木犀草素質(zhì)量百分含量(％ )； X7——樣品中苜蓿素質(zhì)量百分含量(％ )； 1. 53——苷元分子質(zhì)量與糖苷分子質(zhì)量的換算因子。
10. 一種信息說(shuō)明資料，其中記載了權(quán)利要求1-9任一項(xiàng)所述的方法。進(jìn)一步地，該信 息說(shuō)明資料是呈選自下列的形式紙質(zhì)文件(包括但不限于文件單頁(yè)、小冊(cè)子、刊物)、磁介 質(zhì)、光盤、軟盤、電子出版物、網(wǎng)絡(luò)出版物等，以及它們的組合。
全文摘要
本發(fā)明涉及竹葉提取物及其制品中黃酮含量的測(cè)定方法，具體地說(shuō)，其包括以下步驟(a)使竹葉提取物或其制品進(jìn)行酸解處理；(b)提供用于HPLC分析用的反相高效液相色譜系統(tǒng)；(c)分別將不同的標(biāo)準(zhǔn)品溶液注入液相色譜系統(tǒng)，進(jìn)行色譜分離；(d)將步驟(a)酸解溶液注入液相色譜系統(tǒng)，進(jìn)行色譜分離；(e)對(duì)竹葉提取物或其制品中的黃酮類化合物進(jìn)行定性表征；和任選地，(f)對(duì)竹葉提取物或其制品中的黃酮類化合物進(jìn)行定量表征。本發(fā)明的方法可以準(zhǔn)確地測(cè)定竹葉提取物或其制品中的黃酮化合物的組成分布及其含量。
文檔編號(hào)G01N30/89GK102141558SQ20101060552
公開(kāi)日2011年8月3日 申請(qǐng)日期2010年12月27日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月27日
發(fā)明者姚曦, 岳永德, 湯鋒, 王進(jìn), 郭雪峰 申請(qǐng)人:國(guó)際竹藤網(wǎng)絡(luò)中心