專利名稱：一種快速測定食品中低聚乳果糖含量的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種快速測定食品中低聚乳果糖含量的方法，特別涉及髙含量寡糖半 成品或成品中低聚乳果糖的薄層色譜檢測方法。
背景技術(shù)：
低聚乳果糖(La"os"erase， O-jff-D-Ga/flc'o/^mwos^Hl—^-O-cc-D-g/MCopjrflwosj/-(l42)-/ -"-/r""o/"mw<w/V/e)，是一種由三個單糖組成的功能性低聚糖。 一般以乳糖和 蔗糖為原料，經(jīng)P-呋喃果糖苷酶作用下合成。由于低聚乳'果糖難以在人和動物腸道吸 收、熱量低，能顯著促進腸道雙歧桿菌、乳酸桿菌等益生菌的增殖，具有良好的保健 作用，是一種極具開發(fā)價值的功能性食品添加劑，有著廣闊的應(yīng)用前景。
目前，低聚乳果糖的檢測方法主要有髙效液相色譜法(配折光示差檢測器、蒸發(fā) 光檢測器或質(zhì)譜)和薄層色譜法(7%/"-/炒"d/wm^^m/;A乂 7XC)。雖然高效液相色 譜法檢測準確，但是儀器昂貴，費用較高，不利于國內(nèi)廣大基層檢測部門儀器落后、 操作人員素質(zhì)普遍偏低的環(huán)境下推廣，對于目前大多數(shù)國內(nèi)食品企業(yè)生產(chǎn)檢測不太現(xiàn) 實。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種操作簡單的檢測食品中低聚乳果糖的方法。 為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明釆用如下技術(shù)方案
(1) 配制一定梯度濃度的低聚乳果糖標準液；
(2) 將低聚乳果糖標準液在薄層板上采用條帶點樣，條帶的長度為1.5~3cm， 點樣量為3~6jiL，在層析缸中20~40匸恒溫展開；
(3) 展開劑展開后取出薄層板，吹干，噴上顯色劑，置于80~100"烘箱中顯色 7~15min，自然冷卻后取出顯色板，在低聚乳果糖的顯色區(qū)域，取1. 5cm x 4cm的條帶 面積，收集于離心管中，加入2 4mL水搖勻超聲10 20min后取出，3000~ 5000r/min 離心5-10min,取上清液。所述層析缸中展開劑是正丁醇冰乙酸水=8: 3-4: l-2， 顯色劑為苯胺-二苯胺-磷酸，所述薄層板為硅膠薄層板(Si F250)。
(4) 取l 2mL的上述上清液于具塞試管中，加1~24的5%苯酚溶液，搖勾， 迅速加3~5mLH2S04,搖句，沸水浴3 5min，取出，冷卻至室溫，在490nm處測定吸 光度。
(5) 根據(jù)低聚乳果糖標準液吸光度和濃度繪制出標準曲線。
(6) 將食品樣品前處理，去除蛋白質(zhì)、脂肪、淀粉或其他多糖類的物質(zhì)，然后按 (2) - (4)的步驟進行操作，通過標準曲線計算出樣品中的低聚乳果糖的含量。
.本發(fā)明所述的檢測方法，適用于各類食品中低聚乳果糖的薄層色譜檢測。食品的 前處理，可根據(jù)GB/T 5009. 7-2003所述的方法進行
乳類、乳制品及含蛋白質(zhì)的冷食類稱取約2.5()8- 5.00g固體試樣(吸取25.00mL~50. OOmL液體試樣)，置于250 mL容量瓶中，加50mL水，慢慢加入4mL乙酸鋅溶 液及5mL亞鐵氰化鉀溶液，加水至刻度，混勻，沉淀，靜置30min,用干燥濾紙過濾， 濾液備用。
汽水飲料吸取100.0mL試樣，置于蒸發(fā)皿中，用氫氧化鈉(40g/L)溶液中和至 中性，再水洛蒸發(fā)至原體積的四分之一后，移入250邁L容量瓶中，加水至刻度。
含大量淀粉的食品，稱取10. OOg ~ 20. OOg試樣置于250mL容量瓶中，加水200mL， 在451C水浴中加熱lh，并時時振搖。冷后加水至刻度，混勻，靜置，沉淀。吸取200mL 上清液于另一 250mL容量瓶中，以下按乳類、乳制品及含蛋白質(zhì)的冷食類中自"慢慢 加入5mL乙酸鋅溶液……"起依法操作。
汽水等含有二氧化碳的飲料吸取100.0mL試樣置于蒸發(fā)皿中，在水洛上除去二 氧化碳后，移入250mL容量瓶中，并用水洗滌蒸發(fā)皿，洗液并入容量瓶中，再加水至 刻度，混勻后備用。
含脂肪比較多的食品利用索氏提取法將其中的脂肪去除。
本發(fā)明所述的檢測方法，也適用于酶促反應(yīng)生產(chǎn)過程中低聚乳果糖含量的檢測。 其過程是將生產(chǎn)制造過程中含低聚乳果糖的半成品稀釋2 ~ 50倍；然后按上述(2 ) ~ (4)的步驟處理。
本發(fā)明用于食品或低聚乳果糖的薄層檢測方法的優(yōu)點是簡便、快速、價格低廉， 對儀器設(shè)備要求不高；樣品檢測準確，重復性好；克服了不利于在國內(nèi)廣大企業(yè)或基 層檢測部門儀器落后，操作人員素質(zhì)普遍偏低的環(huán)境下推廣等不足，具有良好的使用 前景。


附圖1為本發(fā)明根據(jù)低聚乳果糖標準液吸光度和濃度繪制出標準曲線。
附圖2為本發(fā)明檢測汽水飲料中低聚乳果糖含量的一個實施例的薄層色譜圖。圖 中標記l為葡萄糖、2為果糖、3為蔗糖、4為乳糖、5為低聚乳果糖。
附圖3為本發(fā)明檢測餅干中低聚乳果糖含量的一個實施例的薄層色譜圖。圖中標 記1為葡萄糖、2為果糖、3為蔗糖、4為乳糖、5為低聚乳果糖。
附圖.4為本發(fā)明檢測酶促反應(yīng)生產(chǎn)的半成品中低聚乳果糖含量的一個實施例的薄 層色譜圖。圖中標記l為葡萄糖、2為果糖、3為蔗糖、4為乳糖、5為低聚乳果糖，6、 7、 8分別為標準對照品葡萄糖、果糖、低聚乳果糖.
具體實施例方式
實施例1。
(1 )吸取100. OmL汽水飲料置于蒸發(fā)皿中，在水洛上除去二氧化碳后，移入250mL 容量瓶中，并用水洗滌蒸發(fā)皿，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，混匈后備用；(2) 將上述液體吸取5pL在所述薄層板上點樣，點樣釆用條帶點樣，條帶的長度為3cm， 在所述展開劑中展開，將點樣板置于層析缸中，25"C恒溫；(3)待展開后取出吹干， 噴上所述顯色劑，置于85lC烘箱中顯色10min，自然冷卻后取出顯色板，在低聚糖的顯色區(qū)域，取1.5cmx4cm的斑點條帶，收集于離心管中，加入3mL水搖句超聲 20min后取出，4800r/min離心10min,取上清液；(4 )取2mL的上述上清液于具塞試 管中，加l邁L的5。/。苯酚溶液，搖勾，迅速加5邁LH2S04,搖句，沸水浴3min，取出， 冷卻至室溫，在490nm處測定吸光度，根據(jù)標準曲線來計算餅干中低聚乳果糖的含量, 汽水飲料中低聚乳果糖的含量為3. 3%。
汽水飲料中低聚乳果糖薄層色譜圖如附圖2所示。
實施例2。
U)稱取50g餅干粉末于索氏提取器中，用索氏提取將其中的脂肪去除，萃取劑 為石油醚,提取溫度為80X:;(2)將去除脂肪的餅干殘渣置于250mL容量瓶中，加200邁L 水，在45X:水浴中加熱lh,并時時振搖。冷卻后加水至刻度，混勻，靜置。吸取200mL 上清液于另一 250mL容量瓶中，慢慢加入5mL乙酸鋅溶液及5mL亞鐵氟化鉀溶液，加 水至刻度，混勻，沉淀，靜置30min，用干燥濾紙過濾，棄去初濾液，濾液備用；(3) 將上述濾液吸取5jiL在所述薄層板上點樣，點樣釆用條帶點樣，條帶的長度為3c邁， 在所述展開劑中展開，將點樣板置于層析缸中，251C恒溫；(4)待展開后取出吹干， 噴上所述顯色劑，置于851C烘箱中顯色10min，自然冷卻后取出顯色板，在低聚乳果 塘的顯色區(qū)域，取1.5cmx4cm的斑點條帶，收集于離心管中，'加入3mL水搖勻超聲 20min后取出，4500r/min離心10min，取上清液；(5 )取2mL的上述上清液于具塞試 管中，加lmL的5。/。苯酴溶液，搖勾，迅速加5mL H2S04，搖勾，沸水浴3min,取出， 冷卻至室溫，在490nm處測定吸光度，根據(jù)標準曲線來計算餅干中低聚乳果糖的含量， 餅干中低聚乳果糖的含量為5. 2%。
餅干中低聚乳果糖薄層色譜圖如附圖3所示。
(1)將酶促反應(yīng)生產(chǎn)中半成品稀釋3倍；(2)將稀釋后的初產(chǎn)物吸取5jiL在所 述薄層板上點樣，點樣采用條帶點樣，條帶的長度為3cm，在層析缸中25C恒溫展開； (3)待展開后取出吹干，噴上所述顯色劑，置于85X:烘箱中顯色10min,自然冷卻后 取出顯色板，在低聚乳果糖的顯色區(qū)域，取1. 5cmx 4cm的斑點條帶，收集于離心管中， 加入3mL水搖勾超聲20min后取出，4500r/min離心10邁in，取上清液備用；(4)取 2mL的上述上清液于具塞試管中，加lmL的5%苯酴溶液，搖勾，迅速加5mL H2S04， 搖勾，沸水洛3min，取出，冷卻至室溫，在490n邁處測定吸光度，根據(jù)標準曲線來計 算酶促反應(yīng)初產(chǎn)物中低聚乳果糖的含量，低聚乳果糖含量為17%。 酶促反應(yīng)生產(chǎn)半成品中低聚乳果糖薄層色譜圖如附圖4所示.
權(quán)利要求
1、一種快速測定食品中低聚乳果糖含量的方法，其特征是(1)配制一定梯度濃度的低聚乳果糖標準液；(2)將低聚乳果糖標準液在薄層板上采用條帶點樣，條帶的長度為1.5～3cm，點樣量為3～6μL，在層析缸中20～40℃恒溫展開；(3)展開劑展開后取出薄層板，吹干，噴上顯色劑，置于80～100℃烘箱中顯色7～15min，自然冷卻后取出顯色板，在低聚乳果糖的顯色區(qū)域，取1.5cm×4cm的條帶面積，收集于離心管中，加入2～4mL水搖勻超聲10～20min后取出，3000～5000r/min離心5～10min，取上清液；所述層析缸中展開劑是正丁醇∶冰乙酸∶水＝8∶3-4∶1-2，顯色劑為苯胺-二苯胺-磷酸，所述薄層板為硅膠薄層板；(4)取1～2mL的上述上清液于具塞試管中，加1～2mL的5％苯酚溶液，搖勻，迅速加3～5mL H2SO4，搖勻，沸水浴3～5min，取出，冷卻至室溫，在490nm處測定吸光度；(5)根據(jù)低聚乳果糖標準液吸光度和濃度繪制出標準曲線；(6)將食品樣品前處理，去除蛋白質(zhì)、脂肪、淀粉或其他多糖類的物質(zhì)，然后按(2)-(4)的步驟進行操作，通過標準曲線計算出樣品中的低聚乳果糖的含量。
全文摘要
一種快速測定食品中低聚乳果糖含量的方法，配制一定梯度濃度的低聚乳果糖標準液；在薄層板上采用條帶點樣，條帶長1.5～3cm，點樣量3～6μL，在層析缸中20～40℃展開；取出薄層板，吹干，噴顯色劑，80～100℃烘箱中顯色7～15min，自然冷卻，在顯色區(qū)域，取1.5cm×4cm的條帶面積，收集于離心管中，加入2～4mL水搖勻超聲10～20min，3000～5000r/min離心5～10min；取1～2mL上清液于具塞試管中，加1～2mL的5％苯酚溶液，搖勻，迅速加3～5mL H₂SO₄，搖勻，沸水浴3～5min，取出，冷卻至室溫，490nm處測定吸光度；繪制出標準曲線；將食品樣品前處理，然后按前步驟操作，通過標準曲線計算出樣品中的低聚乳果糖的含量，本方法簡便、快速、價格低廉，儀器要求低；檢測準確，重復性好。
文檔編號G01N21/31GK101526510SQ200910115220
公開日2009年9月9日 申請日期2009年4月22日 優(yōu)先權(quán)日2009年4月22日
發(fā)明者代志凱, 印遇龍, 尤婭利, 廖春龍, 鄧澤元, 征 阮 申請人:南昌大學