專利名稱：急性心肌梗死檢測(cè)試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實(shí)用新型涉及一種檢測(cè)用的試劑盒，具體涉及一種急性心肌梗死檢測(cè)試劑盒。
背景技術(shù)：
心肌肌鈣蛋白I (cTnl)是心肌肌鈣蛋白復(fù)合物的亞單位，存在于心肌肌原纖維細(xì)肌絲上， 相對(duì)分子質(zhì)量為24 000，是心肌細(xì)胞特有的結(jié)構(gòu)蛋白。在正常情況下，血液中cTnl的含量很 低，當(dāng)一些病變引起心肌細(xì)胞損傷時(shí)，cTnl迅速?gòu)浬⑷搜褐?，致使血液中cTnl的含量迅速 升高。大量研究CTnT己被證實(shí)為心肌損傷最特異、最敏感的指標(biāo)之一，是診斷急性心肌梗死 (acute myocardial infarction, AMI)的"金標(biāo)準(zhǔn)，，。
糖原磷酸化酶(glycogen phosphorylase， GPBB)為糖原分解的關(guān)鍵酶，在心肌細(xì)胞肌漿 網(wǎng)構(gòu)成糖原分解復(fù)合物，該復(fù)合物對(duì)缺血引起的糖原分解特別敏感，使其構(gòu)成發(fā)生改變，形 成可溶性GPBB，透過細(xì)胞膜進(jìn)入血液，對(duì)急性心肌缺血的早期診斷優(yōu)于心電圖，是目前發(fā)現(xiàn) 的AMI病人胸痛發(fā)作后4小時(shí)內(nèi)最敏感的指標(biāo)。
常用的測(cè)定方法有放射性免疫法、高壓液相色譜分析法、生化分析儀及各種診斷試劑盒。 這些方法需要儀器及專業(yè)人員的配備，且操作費(fèi)時(shí)。同時(shí)傳統(tǒng)的快檢試劑條只能檢測(cè)一個(gè)指 標(biāo)，而實(shí)踐中，往往需要同時(shí)檢測(cè)多個(gè)指標(biāo)，采用多個(gè)單項(xiàng)檢測(cè)的試劑盒和試劑條分別操作 就顯得繁瑣費(fèi)時(shí)。
發(fā)明內(nèi)容
本實(shí)用新型要解決的技術(shù)問題是給出一種同時(shí)檢測(cè)人心肌肌鈣蛋白I/糖原磷酸化酶同 工酶BB的急性心肌梗死檢測(cè)試劑盒，操作更為簡(jiǎn)便。針對(duì)cTnl與GPBB對(duì)AMI診斷的特點(diǎn)，將 GPBB和心肌特異性標(biāo)志物cTnI結(jié)合起來(lái),將對(duì)心肌缺血的早期診斷具有絕對(duì)特異性和高度 敏感性。
為解決上述技術(shù)問題，本實(shí)用新型采用了下述技術(shù)方案
一種急性心肌梗死檢測(cè)試劑盒，包括底板、試劑條和盒蓋，其中，底板上設(shè)有二個(gè)相互 平行的卡槽，二個(gè)卡槽內(nèi)分別放置人心肌肌鈣蛋白I檢測(cè)試劑條和糖原磷酸化酶同工酶BB檢測(cè)試劑條，底板上設(shè)有與盒蓋對(duì)應(yīng)的卡槽或突起，底板可與盒蓋扣合，盒蓋上設(shè)有二個(gè)加樣 孔及二個(gè)觀測(cè)窗口。
上述人心肌肌鈣蛋白I檢測(cè)試劑條包括底部托板、吸水墊、硝酸纖維素膜、玻璃纖維紙 和樣品墊，其中，樣品墊、玻璃纖維紙、硝酸纖維素膜和吸水墊依次首尾銜接并固定于底部 托板上。人心肌肌鈣蛋白I檢測(cè)試劑條中，硝酸纖維素膜與盒蓋的一個(gè)觀察窗口相對(duì)應(yīng)，樣 品墊與盒蓋的一個(gè)加樣孔相對(duì)應(yīng)。硝酸纖維素膜上設(shè)有包被有心肌肌鈣蛋白I單克隆抗體的 檢測(cè)線和包被有羊抗鼠多克隆抗體的質(zhì)控線，玻璃纖維紙上固定有心肌肌鈣蛋白I單克隆抗 體膠體金混合物。上述檢測(cè)線和質(zhì)控線相互平行，其中檢測(cè)線近加樣孔端，質(zhì)控線遠(yuǎn)離加樣
孑L端。
上述糖原磷酸化酶同工酶BB檢測(cè)試劑條包括底部托板、吸水墊、硝酸纖維素膜、玻璃纖 維紙和樣品墊，其中，樣品墊、玻璃纖維紙、硝酸纖維素膜和吸水墊依次首尾銜接并固定于 底部托板上。糖原磷酸化酶同工酶BB檢測(cè)試劑條中，硝酸纖維素膜與盒蓋的一個(gè)觀察窗口相 對(duì)應(yīng)，所述樣品墊與盒蓋的一個(gè)加樣孔相對(duì)應(yīng)。硝酸纖維素膜上設(shè)有包被有糖原磷酸化酶同 工酶BB單克隆抗體的檢測(cè)線和包被有羊抗鼠多克隆抗體的質(zhì)控線，玻璃纖維紙上固定糖原 磷酸化酶同工酶BB單克隆抗體膠體金混合物。上述檢測(cè)線和質(zhì)控線相互平行，其中檢測(cè)線 近加樣孔端，質(zhì)控線遠(yuǎn)離加樣孔端。
本實(shí)用新型可用于人心肌肌鈣蛋白I/糖原磷酸化酶同工酶BB的體外診斷檢測(cè)，對(duì)急性心 肌梗死的早期篩查有重要意義。


圖1:急性心肌梗死檢測(cè)試劑盒底板示意圖 圖2:急性心肌梗死檢測(cè)試劑盒盒蓋示意圖
圖3:人心肌肌鈣蛋白I檢測(cè)試劑和糖原磷酸化酶同工酶BB檢測(cè)試劑條結(jié)構(gòu)示意圖 圖4:人心肌肌鈣蛋白I檢測(cè)試劑和糖原磷酸化酶同工酶BB檢測(cè)試劑條側(cè)視圖
具體實(shí)施方式
如圖1和2所示急性心肌梗死檢測(cè)試劑盒，包括底板l、試劑條和盒蓋2，其中，底板l上 設(shè)有二個(gè)相互平行的卡槽3、 4， 二個(gè)卡槽內(nèi)分別放置人心肌肌鈣蛋白I檢測(cè)試劑條5和糖原磷 酸化酶同工酶BB檢測(cè)試劑條6，底板上設(shè)有與盒蓋對(duì)應(yīng)的卡槽或突起，底板可與盒蓋扣合，
4盒蓋上設(shè)有加樣孔7及觀測(cè)窗口8。
人心肌肌鈣蛋白I檢測(cè)試劑條結(jié)構(gòu)如圖3和4所示，包括底部托板9、吸水墊IO、硝酸纖維 素膜ll、玻璃纖維紙12和樣品墊13，其中，樣品墊13、玻璃纖維紙12、硝酸纖維素膜ll和吸 水墊i0依次首尾銜接并固定于底部托板9上。人心肌肌鈣蛋白I檢測(cè)試劑條中，硝酸纖維素膜 11與盒蓋的觀察窗口8相對(duì)應(yīng)，樣品墊13與盒蓋的加樣孔7相對(duì)應(yīng)。硝酸纖維素膜ll上設(shè)有包 被有心肌肌鈣蛋白I單克隆抗體的檢測(cè)線14和包被有羊抗鼠多克隆抗體的質(zhì)控線15，玻璃纖 維紙12上固定有心肌肌鈣蛋白I單克隆抗體膠體金混合物。上述檢測(cè)線14和質(zhì)控線15相互平 行，其中檢測(cè)線14近加樣孔7端，質(zhì)控線15遠(yuǎn)離加樣孔7端。
上述糖原磷酸化酶同工酶BB檢測(cè)試劑條結(jié)構(gòu)如圖3和4所示，包括底部托板9、吸水墊IO、 硝酸纖維素膜ll、玻璃纖維紙12和樣品墊13，其中，樣品墊13、玻璃纖維紙12、硝酸纖維素 膜11和吸水墊10依次首尾銜接并固定于底部托板9上。糖原磷酸化酶同工酶BB檢測(cè)試劑條中， 硝酸纖維素膜11與盒蓋的觀察窗口8相對(duì)應(yīng)，所述樣品墊13與盒蓋的加樣孔7相對(duì)應(yīng)。硝酸纖 維素膜11上設(shè)有包被有糖原磷酸化酶同工酶BB單克隆抗體的檢測(cè)線14和包被有羊抗鼠多克 隆抗體的質(zhì)控線15，玻璃纖維紙12上固定糖原磷酸化酶同工酶BB單克隆抗體膠體金混合物。 上述檢測(cè)線14和質(zhì)控線15相互平行，其中檢測(cè)線14近加樣孔7端，質(zhì)控線15遠(yuǎn)離加樣孔7端。
上述急性心肌梗死檢測(cè)試劑盒中使用的材料按如下方法制得
1. 單克隆抗體的制備
以人心肌組織為主要原材料分別提取純化cTnl和GPBB作為免疫原，分別免疫BALB/c 小鼠，經(jīng)初次免疫及多次加強(qiáng)免疫。分離小鼠的脾細(xì)胞并與SP2/0骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞融 合，制得雜交瘤細(xì)胞。培養(yǎng)篩選出兩株抗cTnl細(xì)胞株和兩株抗GPBB細(xì)胞株。注入小鼠腹 腔誘生腹水后，純化得心肌肌鈣蛋白I單克隆抗體I 、 II和糖原磷酸化酶同工酶BB單克隆 抗體I、 II 。
2. 膠體金顆粒與單克隆抗體的結(jié)合
把心肌肌鈣蛋白I單克隆抗體I ，糖原磷酸化酶同工酶BB單克隆抗體I分別標(biāo)記在紅色 的膠體金顆粒上，固定在玻璃纖維紙上，干燥備用。
3. 包被硝酸纖維素膜
質(zhì)控線由羊抗鼠多克隆抗體包被，檢測(cè)線分別包被糖原磷酸化酶同工酶BB單克隆抗體 II 、心肌肌鈣蛋白I單克隆抗體II。 上述急性心肌梗死檢測(cè)試劑盒使用方法
用加樣吸管吸取血清/血漿樣品，然后滴3滴(約120ul)血清/血漿樣品到試劑盒的每個(gè)
5加樣孔中。每檢測(cè)一份不同的樣品注意要使用不同的吸管。在滴加樣品后15分鐘內(nèi)判讀結(jié) 果。只在結(jié)果觀察窗口的質(zhì)控線(C線)位置出現(xiàn)一條紅色線條為陰性結(jié)果。在結(jié)果觀察 窗口內(nèi)出現(xiàn)兩條色帶，即檢測(cè)線(T線)和質(zhì)控線(C線)位置各出現(xiàn)一條紅色線條，為陽(yáng) 性結(jié)果。表示樣品中有超過檢出靈敏度的心肌鈣蛋白I或糖原磷酸化酶同工酶BB存在。質(zhì) 控線(C線)不出現(xiàn)表明測(cè)試結(jié)果是不確定的，應(yīng)重試。
權(quán)利要求1.一種急性心肌梗死檢測(cè)試劑盒，包括底板、試劑條和盒蓋，其特征在于，底板上設(shè)有二個(gè)相互平行的卡槽，二個(gè)卡槽內(nèi)分別放置人心肌肌鈣蛋白I檢測(cè)試劑條和糖原磷酸化酶同工酶BB檢測(cè)試劑條，底板上設(shè)有與盒蓋對(duì)應(yīng)的卡槽或突起，底板可與盒蓋扣合，盒蓋上設(shè)有二個(gè)加樣孔及二個(gè)觀測(cè)窗口。
2. 如權(quán)利要求l所述的急性心肌梗死檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述人心肌肌鈣蛋白I 檢測(cè)試劑條包括底部托板、吸水墊、硝酸纖維素膜、玻璃纖維紙和樣品墊，其中， 樣品墊、玻璃纖維紙、硝酸纖維素膜和吸水墊依次首尾銜接并固定于底部托板上。
3. 如權(quán)利要求2所述的急性心肌梗死檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述硝酸纖維素膜與盒 蓋的一個(gè)觀察窗口相對(duì)應(yīng)，所述樣品墊與盒蓋的一個(gè)加樣孔相對(duì)應(yīng)。
4. 如權(quán)利要求2所述的急性心肌梗死檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述硝酸纖維素膜上設(shè) 有包被有心肌肌鈣蛋白I單克隆抗體的檢測(cè)線和包被有羊抗鼠多克隆抗體的質(zhì)控線， 所述玻璃纖維紙上固定有心肌肌鈣蛋白I單克隆抗體膠體金混合物。
5. 如權(quán)利要求4所述的急性心肌梗死檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述檢測(cè)線和質(zhì)控線相 互平行，其中檢測(cè)線近加樣孔端，質(zhì)控線遠(yuǎn)離加樣孔端。
6. 如權(quán)利要求l所述的急性心肌梗死檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述糖原磷酸化酶同工 酶BB檢測(cè)試劑條包括底部托板、吸水墊、硝酸纖維素膜、玻璃纖維紙和樣品墊，其 中，樣品墊、玻璃纖維紙、硝酸纖維素膜和吸水墊依次首尾銜接并固定于底部托板 上。
7. 如權(quán)利要求6所述的急性心肌梗死檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述硝酸纖維素膜與盒 蓋的一個(gè)觀察窗口相對(duì)應(yīng)，所述樣品墊與盒蓋的一個(gè)加樣孔相對(duì)應(yīng)。
8. 如權(quán)利要求6所述的急性心肌梗死檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述硝酸纖維素膜上設(shè) 有包被有糖原磷酸化酶同工酶BB單克隆抗體的檢測(cè)線和包被有羊抗鼠多克隆抗體 的質(zhì)控線，所述玻璃纖維紙上固定糖原磷酸化酶同工酶BB單克隆抗體膠體金混合 物。
9. 如權(quán)利要求8所述的急性心肌梗死檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述檢測(cè)線和質(zhì)控線相 互平行，其中檢測(cè)線近加樣孔端，質(zhì)控線遠(yuǎn)離加樣孔端。
專利摘要本實(shí)用新型涉及一種急性心肌梗死檢測(cè)試劑盒，包括底板、試劑條和盒蓋，其底板上設(shè)有二個(gè)相互平行的卡槽，二個(gè)卡槽內(nèi)分別放置人心肌肌鈣蛋白I檢測(cè)試劑條和糖原磷酸化酶同工酶BB檢測(cè)試劑條，底板上設(shè)有與盒蓋對(duì)應(yīng)的卡槽或突起，底板可與盒蓋扣合，盒蓋上設(shè)有二個(gè)加樣孔及二個(gè)觀測(cè)窗口。本實(shí)用新型可同時(shí)定性檢測(cè)人心肌肌鈣蛋白I/糖原磷酸化酶同工酶BB二項(xiàng)指標(biāo)，操作簡(jiǎn)便，彌補(bǔ)了傳統(tǒng)心肌梗死診斷方法的不足，對(duì)于急性心肌梗死的早期篩查有重要意義。
文檔編號(hào)G01N33/68GK201302572SQ20082015591
公開日2009年9月2日 申請(qǐng)日期2008年11月25日 優(yōu)先權(quán)日2008年11月25日
發(fā)明者波 衛(wèi) 申請(qǐng)人:上海市浦東新區(qū)人民醫(yī)院