專利名稱：：一種中藥復(fù)雜體系中系列成分的快速篩選及鑒定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及中藥及藥物分析領(lǐng)域，具體涉及中藥復(fù)雜體系的成分分析，本發(fā)明可應(yīng)用于中藥注射液等中藥制劑的質(zhì)量控制以及中藥復(fù)雜體系中有效成分的確定。
背景技術(shù)：
：中藥是傳統(tǒng)中醫(yī)臨床應(yīng)用的主要形式，在人類健康事業(yè)中發(fā)揮著重要作用。盡管許多中藥已有幾千年臨床應(yīng)用的歷史，其臨床療效值得肯定，但迄今為止絕大多數(shù)中藥的成分構(gòu)成仍未得以闡明，已成為中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)、質(zhì)量控制及作用機(jī)理等中藥現(xiàn)代化關(guān)鍵科學(xué)問題研究的主要制約瓶頸。中藥這一復(fù)雜體系組份分析的難點(diǎn)在于其所含成分的多樣性、成分間物化性質(zhì)迥異、缺乏相應(yīng)的對(duì)照品進(jìn)行結(jié)構(gòu)確證。盡管近年來各種分析技術(shù)手段得到了長足的發(fā)展，但中藥復(fù)雜成分的全面檢測、鑒定仍是一個(gè)艱巨的挑戰(zhàn)。近年來，質(zhì)譜特別是各種色譜聯(lián)用質(zhì)譜技術(shù)以及質(zhì)譜串聯(lián)技術(shù)如單級(jí)四極桿質(zhì)譜、離子阱質(zhì)譜、飛行時(shí)間質(zhì)譜或三重四極桿質(zhì)譜與高效液相聯(lián)用及最新出現(xiàn)的高效液相-離子阱-飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜儀等，已發(fā)展成為化學(xué)成分定性、定量分析的主流技術(shù)之一，并以其快速、靈敏、低成本的特性在中藥復(fù)雜體系的研究中獲得了廣泛的應(yīng)用。但總體來說，目前的研究方法還存在一些不足(1)中藥成分復(fù)雜，但多數(shù)研究并不能實(shí)現(xiàn)中藥成分的全面鑒定，而只能對(duì)有標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品的化學(xué)成分進(jìn)行選擇性鑒定。(2)中藥成分復(fù)雜，運(yùn)用各種質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)進(jìn)行中藥復(fù)雜體系組分分析將產(chǎn)生海量的數(shù)據(jù)集，在為結(jié)構(gòu)推斷提供足夠信息的同時(shí)，也對(duì)信息的處理技術(shù)提出了新的挑戰(zhàn)。逐個(gè)鑒定化合物的方法費(fèi)時(shí)費(fèi)力，因此目前非常需要一種具有普遍適用性的、快速的中藥復(fù)雜體系成分分析與結(jié)構(gòu)鑒定方法。隨著植物化學(xué)領(lǐng)域的快速發(fā)展，越來越多的結(jié)果表明中藥的成分組成以系列化合物為主，大多數(shù)中藥的成分組成類別及其母核結(jié)構(gòu)已基本明確。如人參所含的主要有效成分為人參皂苷類成分，五味子中所含的主要有效成分為木脂素類成分。另外，具有相同的母核結(jié)構(gòu)的系列化合物在碰撞誘導(dǎo)裂解模式中會(huì)產(chǎn)生相似的碎裂途徑以及共有的與母核相關(guān)的診斷離子?；谥兴帍?fù)雜體系的這些特點(diǎn)，本發(fā)明建立了一種普適性的質(zhì)譜信息處理方法診斷離子延伸策略，實(shí)現(xiàn)了對(duì)中藥復(fù)雜體系中系列成分的快速篩選及鑒定。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明公開了一種快速篩選及鑒定中藥復(fù)雜體系中系列成分的分析方法。中藥復(fù)雜體系中系列成分的篩選及鑒定方法，包括以下步驟A、制備含有中藥復(fù)雜體系中各系列成分的供試品溶液，B、采用高效液相-離子阱-飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜儀對(duì)供試品溶液進(jìn)行正或負(fù)離子全掃描得到總離子流色譜圖以及多級(jí)碎片信息，C、運(yùn)用診斷離子延伸策略進(jìn)行中藥復(fù)雜體系中系列成分的快速篩選及鑒定，本發(fā)明中診斷離子延伸策略由如下幾個(gè)歩驟組成a、分別將標(biāo)準(zhǔn)品或系列成分的標(biāo)準(zhǔn)提取物注入高效液相-離子阱-飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜儀，獲得母離子及碎片離子的精確質(zhì)量數(shù)，綜合每一系列化合物的碎片信息，將普遍存在的、豐度較大的碎片離子選定為該系列成分的診斷離子，并根據(jù)碎裂的情況總結(jié)出系列成分的碎裂規(guī)律；b、將得到的每一系列成分的診斷離子分別輸入數(shù)據(jù)處理工作站，從而對(duì)通過B步驟得到的中藥復(fù)雜體系的總離子流色譜圖中所檢測到的峰進(jìn)行分類；C、基于分類后化合物的母離子與碎片離子的精確質(zhì)量數(shù)之差及各系列成分的碎裂規(guī)律判斷各化合物所含的基團(tuán)；d、結(jié)合分類的結(jié)果與化學(xué)基團(tuán)的結(jié)果以及系列成分的碎裂規(guī)律對(duì)化合物的結(jié)構(gòu)進(jìn)行確證。其中中藥復(fù)雜體系優(yōu)選單味中藥或中藥復(fù)方經(jīng)炮制后的產(chǎn)物。1、制備含有中藥復(fù)雜體系中各系列成分的供試品溶液制備時(shí)既要盡可能多地提取主要成分，又要盡量去除輔料等的干擾，根據(jù)中藥復(fù)雜體系自身特性選擇適宜的提取方法。提取方法通常包括過濾、液液萃取、固相萃取。液液萃取溶劑包括水飽和正丁醇、乙酸乙酯、乙醚、氯仿、苯、正己烷單一或按一定的比例混合使用，固相萃取則可以根據(jù)實(shí)際情況選擇不同填料的固相小柱。2、采用高效液相-離子阱-飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜儀對(duì)供試品溶液進(jìn)行正或負(fù)離子全掃描得到總離子流色譜圖以及多級(jí)碎片信息根據(jù)所研究中藥復(fù)雜體系的特性優(yōu)化色譜(包括色譜柱的長度、內(nèi)徑、填料，柱溫，流速，流動(dòng)相組成，洗脫梯度)、質(zhì)譜條件(儀器的各設(shè)定參數(shù))，運(yùn)用高效液相-離子阱-飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜儀全掃描得到其在正或負(fù)離子模式下的總離子流色譜圖以及多級(jí)碎片信息。碰撞誘導(dǎo)裂解的過程可采用自動(dòng)模式，軟件會(huì)自動(dòng)地基于一定的標(biāo)準(zhǔn)(如超過一定的豐度)選擇母離子進(jìn)行多級(jí)碎裂。在本發(fā)明中，三級(jí)碎裂的碎片離子信息就足以完成化合物結(jié)構(gòu)分析，盡管高效液相-離子阱-飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜儀能夠完成十級(jí)碎裂。其中色譜條件優(yōu)選為色譜柱柱長100-300mm，內(nèi)徑2-16誦，填料粒度2-7pm;柱溫10-70°C;進(jìn)樣量l-50pl;流速0.01-1.50ml/min;流動(dòng)相組成由水相和有機(jī)相組成，水相為含酸、堿或鹽的水，有機(jī)相為甲醇或乙腈；進(jìn)行梯度或等度洗脫。3、應(yīng)用高效液相-離子阱-飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜儀基于標(biāo)準(zhǔn)品或系列成分的標(biāo)準(zhǔn)提取物，獲得系列成分的診斷離子以及碎裂規(guī)律基于母核結(jié)構(gòu)的相似性可將中藥復(fù)雜體系中的化合物分為若干系列。每一系列的化合物具有相同的母核結(jié)構(gòu)，并且在碰撞誘導(dǎo)裂解模式中會(huì)產(chǎn)生相似的碎裂途徑以及共有的與母核相關(guān)的診斷離子。診斷離子延伸策略關(guān)鍵的第一步就是通過對(duì)于部分標(biāo)準(zhǔn)品的研究，確定系列成分的診斷離子及碎裂規(guī)律。由于中藥中某些成分的標(biāo)準(zhǔn)品難以獲得，因此系列成分的標(biāo)準(zhǔn)提取物也可以用于此類信息的獲得。分別將系列成分的標(biāo)準(zhǔn)品或標(biāo)準(zhǔn)提取物注入高效液相-離子阱-飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜儀，獲得母離子及碎片離子的精確質(zhì)量數(shù)，綜合每一系列化合物的碎片信息，將普遍存在的、豐度較大的碎片離子選定為該系列成分的診斷離子，并根據(jù)碎裂的情況總結(jié)出系列成分的碎裂規(guī)律。本發(fā)明中診斷離子和碎裂規(guī)律的獲得優(yōu)選島津公司最新推出的高效液相-離子阱-飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜儀。該儀器是目前唯一的連接離子阱和飛行時(shí)間質(zhì)譜的串聯(lián)質(zhì)譜儀，實(shí)現(xiàn)了既可以做多級(jí)質(zhì)譜，又能達(dá)到高質(zhì)量精度的強(qiáng)大功能，特別適合于獲得系列成分的碎裂規(guī)律及診斷離子。但本發(fā)明并不限于島津公司生產(chǎn)的高效液相-離子阱-飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜儀，也可以通過其它公司生產(chǎn)的高效液相、離子阱質(zhì)譜和飛行時(shí)間質(zhì)譜組合應(yīng)用來完成。4、將得到的每一系列成分的診斷離子分別輸入數(shù)據(jù)處理工作站，從而對(duì)通過步驟2得到的中藥復(fù)雜體系的總離子流色譜圖中所檢測到的峰進(jìn)行分類診斷離子可作為"marker"用于快速篩選出各系列成分。將每一系列成分的診斷離子分別輸入數(shù)據(jù)處理工作站，從通過歩驟2得到的總離子流色譜圖中逐一篩選出各系列化合物，同時(shí)也將總離子流色譜圖中所檢測到的峰劃分到相應(yīng)的類別中。在篩選過程中，碎片離子精確質(zhì)量數(shù)的測定值在診斷離子精確質(zhì)量數(shù)的理論值土20ppni的范圍內(nèi)均被篩選出來。5、基于分類后化合物的母離子與碎片離子的精確質(zhì)量數(shù)之差及各系列成分的碎裂規(guī)律判斷該化合物所含的基團(tuán)多級(jí)碎裂過程中的中性丟失相應(yīng)于化合物所含的基團(tuán)?；诙嗉?jí)碎裂過程中母離子與碎片離子的精確質(zhì)量數(shù)之差及各系列成分的碎裂規(guī)律可以詳細(xì)地判斷出待鑒定化合物所含的基團(tuán)?；鶊F(tuán)判斷過程中精確質(zhì)量數(shù)的測定值與理論值之間相差要小于20ppm?？紤]到中藥復(fù)雜體系在檢測過程中，成分間的干擾是一個(gè)普遍現(xiàn)象，因此選定20pptn作為篩選和鑒定化合物過程中的標(biāo)準(zhǔn)是比較合適的。6、結(jié)合分類的結(jié)果與化學(xué)基團(tuán)的結(jié)果以及系列成分的碎裂規(guī)律對(duì)化合物的結(jié)構(gòu)進(jìn)行確證。快速分類的結(jié)果是確定了待鑒定化合物的母核結(jié)構(gòu)，結(jié)合上一步驟中待鑒定化合物所含基團(tuán)的確定并參照參考文獻(xiàn)可初歩確定該化合物的結(jié)構(gòu)。若有相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)品，還可進(jìn)一步與標(biāo)準(zhǔn)品的保留時(shí)間、精確分子量、多級(jí)碎裂圖譜進(jìn)行比較，以確認(rèn)化合物的結(jié)構(gòu)。本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)-1.對(duì)中藥復(fù)雜體系進(jìn)行系列成分的快速篩選及鑒定，所得結(jié)果符合中藥的整體作用特點(diǎn)；2.不完全依賴于標(biāo)準(zhǔn)品，在獲得診斷離子及碎裂規(guī)律的基礎(chǔ)上，首先將所檢測到的峰進(jìn)行分類，進(jìn)一歩基于多級(jí)質(zhì)譜碎裂信息和精確質(zhì)量測定進(jìn)行復(fù)雜成分(包括己知成分和未知成分)的分析與結(jié)構(gòu)鑒定。3.本發(fā)明中運(yùn)用高效液相-離子阱-飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜儀可以獲得化合物高質(zhì)量精度的多級(jí)質(zhì)譜信息，不僅能快速獲得系列化合物的診斷離子和碎裂規(guī)律，也為中藥復(fù)雜體系中化合物鑒定的準(zhǔn)確性提供了保障。4.診斷離子延伸策略是一種普適性的質(zhì)譜信息處理方法。隨著植物化學(xué)領(lǐng)域的快速發(fā)展，大多數(shù)中藥的成分組成類別及其母核結(jié)構(gòu)已基本明確，具有全新未知母核結(jié)構(gòu)的化合物很少。因此運(yùn)用診斷離子延伸策略結(jié)合已知的植化信息，可以實(shí)現(xiàn)(1)將總離子流色譜圖中復(fù)雜的峰快速歸類于已知化合物類別，極大地簡化結(jié)構(gòu)鑒定的繁瑣過程；(2)中藥復(fù)雜體系中新化合物的發(fā)現(xiàn)(已知母核結(jié)構(gòu))；(3)理論上可以應(yīng)用于各種系列成分的分析。5.診斷離子延伸策略還可以延伸應(yīng)用于其它有機(jī)混合物的分析，比如水質(zhì)量分析、土壤中天然有機(jī)物分析、食物中多種農(nóng)藥殘?jiān)治龅?。圖l生脈注射液在負(fù)離子模式下的總離子流色譜圖。圖2生脈注射液在正離子模式下的總離子流色譜圖。具體實(shí)施例方式實(shí)施例1生脈注射液中系列成分的快速篩選與鑒定。a、制備含有生脈注射液中各系列成分的供試品溶液將市售生脈注射液(No.07010606，江蘇蘇中藥業(yè)股份有限公司)用超純水稀釋10倍后，用5倍量水飽和正丁醇提取，取有機(jī)層揮干，甲醇溶解待分析。b、采用高效液相-離子阱-飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜儀對(duì)供試品溶液進(jìn)行正或負(fù)離子全掃描得到總離子流色譜圖，并設(shè)定在數(shù)據(jù)采集過程中，將豐度超過一定標(biāo)準(zhǔn)的離子自動(dòng)進(jìn)行多級(jí)碎裂。儀器及工作站軟件高效液相-離子阱-飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜儀(島津，日本)，LCMSsolution3.0。人參皂苷系列成分的色譜參數(shù)如下柱型，Hypersil0DS2Cl8，250醒X4.6面i.d.，(大連，中國)；柱溫，35°C;進(jìn)樣量，5"1;流速，lml/min;流動(dòng)相組成，水(含0.02%冰醋酸，A)和乙腈(含O.02%冰醋酸，B);洗脫梯度，0-15min:20%(B)、15-35min:20-35%(B)、35-55min:35-40%(B)、55-70min:40-65%(B)、70-75min:65%(B)、75-80min:20%(B)。柱后分流一部分進(jìn)質(zhì)譜，一部分作為廢液排出。人參皂苷系列成分的質(zhì)譜參數(shù)如下離子化模式，ESI(-);噴霧氮?dú)饬魉伲?.5L/min;干燥氣壓力，0.lMPa;接口電壓，-3.5kV;檢測電壓，L7kV;脫溶劑溫度，200°C;加熱塊溫度，200°C;碎裂模式自動(dòng)三級(jí)碎裂模式，MS1中豐度超過10000的離子自動(dòng)進(jìn)行MS2碎裂，MS2中豐度超過10000的離子自動(dòng)進(jìn)行MS3碎裂；碰撞氣，氬氣；碰撞能量，MS2和MS3均為50X;碰撞氣MS2和MS3均為50。/。；碰撞時(shí)間MS2和MS3均為30ms測定范圍，MS':m/z200-1500，MS2:m/z100-1500，MS3:m/z50-1500;離子蓄積時(shí)間，10msec。在數(shù)據(jù)采集之前，先用三氟醋酸鈉進(jìn)行儀器在m/z50-5000的較正。木脂素系列成分的色譜參數(shù)如下流動(dòng)相組成，水和乙腈；其它參數(shù)與人參皂苷相同。木脂素系列成分的質(zhì)譜參數(shù)如下離子化模式,ESI(+);接口電壓，4.5kV;測定范圍，MS1:m/z300-600，MS2:m/z100-600，MS':m/z50-600;其它參數(shù)與人參皂苷相同。在以上條件下，全掃描得到生脈注射液在負(fù)、正離子模式下的總離子流色譜圖分別如圖1，2所示。c、應(yīng)用高效液相-離子阱-飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜儀基于標(biāo)準(zhǔn)品或系列成分的標(biāo)準(zhǔn)提取物，獲得系列成分的診斷離子以及碎裂規(guī)律基于母核結(jié)構(gòu)可將人參皂苷分為A,B,C,D,E五系列成分，木脂素分為I，II，III，IV，V五系列成分。將標(biāo)準(zhǔn)品20(S)-人參皂苷Rl,Rbl，Rb2，Rb3，Rc,Rd,Re，Rgl'Rg2,Rg3,Rhl,Rh2，五味子甲素，五味子乙素及五味子醇甲分別注入高效液相-離子阱-飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜儀，獲得母離子及碎片離子的精確質(zhì)量數(shù)，綜合每一系列化合物的碎片信息，將普遍存在的、豐度較大的碎片離子選定為該系列成分的診斷離子，并根據(jù)碎裂的情況總結(jié)出系列成分的碎裂規(guī)律。由于木脂素系列的標(biāo)準(zhǔn)品難以獲得，五味子標(biāo)準(zhǔn)提取物也用木脂素系列成分信息的獲得?；谝陨戏椒?，所獲得的人參皂苷各系列成分的碎裂規(guī)律和診斷離子的結(jié)構(gòu)如下石卒裂夷見j拿診斷離子木脂素各系列成分的碎裂規(guī)律和診斷離子的結(jié)構(gòu)如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage10</formula>d、將得到的每一系列成分的診斷離子分別輸入數(shù)據(jù)處理工作站，從而對(duì)通過步驟b得到的總離子流色譜圖中所檢測到的峰進(jìn)行分類應(yīng)用LCMSsolution3.0進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，將每一系列成分的診斷離子分別輸入工作站，從通過步驟2得到的總離子流色譜圖中逐一篩選出各系列化合物，同時(shí)也將總離子流色譜圖中所檢測到的峰劃分到相應(yīng)的類別中。在篩選過程中，碎片離子精確質(zhì)量數(shù)的測定值在診斷離子精確質(zhì)量數(shù)的理論值土20ppm的范圍內(nèi)均被篩選出來。負(fù)、正離子模式下所篩選出的各系列化合物及總離子流色譜圖中所檢測到的峰的分類結(jié)果分別如表1，2所示。e、基于分類后化合物的母離子與碎片離子的精確質(zhì)量數(shù)之差及各系列成分的碎裂規(guī)律判斷該化合物所含的基團(tuán)以人參皂苷為例，根據(jù)其碎裂規(guī)律，母離子與一系碎片離子的精確質(zhì)量數(shù)之差與糖殘基(如戊糖C5H804，132.0422;已糖C6H1005，162.0528;脫氧已糖C6H1004，146.0579)、右上方脂肪鏈(C6H12，84.0939)或水(H20，18.0211)相關(guān)?；鶊F(tuán)判斷過程中精確質(zhì)量數(shù)的測定值與理論值之間相差要小于20卯if、結(jié)合分類的結(jié)果與化學(xué)基團(tuán)的結(jié)果以及系列成分的碎裂規(guī)律對(duì)化合物的結(jié)構(gòu)進(jìn)行確證快速分類的結(jié)果是確定了待鑒定化合物的母核結(jié)構(gòu)，結(jié)合e中待鑒定化合物所含基團(tuán)的確定并參照參考文獻(xiàn)可初步的確定該化合物的結(jié)構(gòu)。對(duì)于有標(biāo)準(zhǔn)品的成分20(S)-人參皂苷Rl，Rbl,Rb2，Rb3,Rc，Rd，Re，Rgl，Rg2，Rg3,Rhl，Rh2，五味子甲素，五味子乙素及五味子醇甲，可進(jìn)一步與標(biāo)準(zhǔn)品的保留時(shí)間、精確分子量、多級(jí)碎裂圖譜進(jìn)行比較，以確證化合物的結(jié)構(gòu)。以峰12b作為例子具體說明快速篩選及鑒定過程。峰12b的碎片離子中含有475.3785和391.2837，因此通過d歩驟很容易將其歸為B型人參皂苷。準(zhǔn)分子離子783.4925與苷元離子(DFI1)475.3785的精確質(zhì)量數(shù)之差為308.1140，對(duì)應(yīng)于一個(gè)脫氧已糖與一個(gè)巳糖的組合丟失。苷元離子(DFI1)與碎片離子637.4356的質(zhì)量之差為162.0571對(duì)應(yīng)于一個(gè)已糖殘基，然而比苷元離子(DFI1)質(zhì)量數(shù)大146.06的離子并不存在，說明脫氧已糖和已糖是以雙糖的形式連接在苷元上的，而且已糖直接連在苷元上。碎片離子637.4356與準(zhǔn)分子離子之間的差值是146.0569，進(jìn)一步證明了末端脫氧己糖的存在。這些碎片離子提供了詳細(xì)的單糖連接順序的信息，結(jié)合母核結(jié)構(gòu)的確定，峰12被初步鑒定為人參皂苷Rg2。進(jìn)一步通過與標(biāo)準(zhǔn)品的保留時(shí)間、分子量、多級(jí)碎裂圖譜的比較，峰12b被最終確定為20(S)-人參皂苷Rg2。如表l，2所示，共分析出30余種人參皂苷類成分及20余種木脂素類成分，其中80%以上的人參皂苷和90%以上的木脂素可以運(yùn)用診斷離子延伸策略快速鑒定。這些結(jié)果證明了本發(fā)明具有極高的可行性和有效性。但由于質(zhì)譜分析自身的局限性，在缺乏相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)品的前提下，本發(fā)明對(duì)于某此差異很小的同分異構(gòu)體不能判別，如峰22可能是人參皂苷Rsl或Rs2。_表l.生脈注射液中人參皂苷類成分的鑒定_<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table><formula>formulaseeoriginaldocumentpage14</formula>a:診斷離子沒有出現(xiàn)；、用標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行確證了的組份；*:診斷離子。權(quán)利要求1、一種中藥復(fù)雜體系中系列成分的篩選及鑒定方法，包括以下步驟A、制備含有中藥復(fù)雜體系中各系列成分的供試品溶液，B、采用高效液相-離子阱-飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜儀對(duì)供試品溶液進(jìn)行正或負(fù)離子全掃描得到總離子流色譜圖以及多級(jí)碎片信息，C、運(yùn)用診斷離子延伸策略進(jìn)行中藥復(fù)雜體系中系列成分的篩選及鑒定，其特征在于診斷離子延伸策略由如下幾個(gè)步驟組成a、分別將標(biāo)準(zhǔn)品或系列成分的標(biāo)準(zhǔn)提取物注入高效液相-離子阱-飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜儀，獲得母離子及碎片離子的精確質(zhì)量數(shù)，綜合每一系列化合物的碎片信息，將普遍存在的、豐度較大的碎片離子選定為該系列成分的診斷離子，并根據(jù)碎裂的情況總結(jié)出系列成分的碎裂規(guī)律；b、將得到的每一系列成分的診斷離子分別輸入數(shù)據(jù)處理工作站，從而對(duì)通過B步驟得到的中藥復(fù)雜體系的總離子流色譜圖中所檢測到的峰進(jìn)行分類；c、基于分類后化合物的母離子與碎片離子的精確質(zhì)量數(shù)之差及各系列成分的碎裂規(guī)律判斷各化合物所含的基團(tuán)；d、結(jié)合分類的結(jié)果與化學(xué)基團(tuán)的結(jié)果以及系列成分的碎裂規(guī)律對(duì)化合物的結(jié)構(gòu)進(jìn)行確證。2、權(quán)利要求1的篩選及鑒定方法，其中中藥復(fù)雜體系是單味中藥或中藥復(fù)方經(jīng)炮制后的產(chǎn)物。3、權(quán)利要求1的篩選及鑒定方法，其中B步驟中色譜條件為色譜柱柱長100-300mm，內(nèi)徑2-16mm，填料粒度2-7,;柱溫10-70。C;進(jìn)樣量l-50pl;流速0.01-1.50ml/min;流動(dòng)相組成由水相和有機(jī)相組成，水相為含酸、堿或鹽的水，有機(jī)相為甲醇或乙腈；進(jìn)行梯度或等度洗脫。4、權(quán)利要求1的篩選及鑒定方法，其中a歩驟中獲得系列成分的診斷離子以及碎裂規(guī)律是基于標(biāo)準(zhǔn)品或系列成分的標(biāo)準(zhǔn)提取物得到。5、權(quán)利要求l的篩選及鑒定方法，其中a步驟中獲得的診斷離子與系列成分的母核相關(guān)。6、權(quán)利要求1的篩選及鑒定方法，其中b與c步驟中篩選及鑒定中藥復(fù)雜體系中系列成分的過程中，精確質(zhì)量數(shù)的測定值與理論值之間相差小于20ppm,全文摘要本發(fā)明涉及中藥及藥物分析領(lǐng)域，具體涉及中藥復(fù)雜體系的成分分析，本發(fā)明提供了一種普適性的策略可用于中藥復(fù)雜體系中系列成分的快速篩選及鑒定，步驟如下制備含有中藥復(fù)雜體系中各系列成分的供試品溶液、采用高效液相-離子阱-飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜儀對(duì)供試品溶液進(jìn)行正或負(fù)離子全掃描得到總離子流色譜圖以及多級(jí)碎片信息、運(yùn)用診斷離子延伸策略進(jìn)行中藥復(fù)雜體系中系列成分的快速篩選及鑒定。本發(fā)明可應(yīng)用于中藥注射液等中藥制劑的質(zhì)量控制以及中藥復(fù)雜體系中有效成分的確定。文檔編號(hào)G01N30/02GK101382525SQ20081015582公開日2009年3月11日申請日期2008年10月16日優(yōu)先權(quán)日2008年10月16日發(fā)明者吳曉蘭,王廣基,鄭超湳,郝海平申請人:中國藥科大學(xué)