專(zhuān)利名稱(chēng)：檢測(cè)一種或多種豬病毒性腹瀉疾病抗體的試紙條的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種檢測(cè)豬病毒性傳染病抗體的器具，特別是涉及一種檢測(cè)一種或多種豬病毒性腹瀉疾病抗體的試紙條。
背景技術(shù)：
豬腹瀉性疾病是一類(lèi)嚴(yán)重影響?zhàn)B豬業(yè)發(fā)展的疾病，其中的病毒性腹瀉尤其難以防治。豬流行性腹瀉病毒(PEDV，代號(hào)P)、豬傳染性胃腸炎病毒(TGEV，代號(hào)T)和輪狀病毒(RV，代號(hào)R)是引起豬病毒性腹瀉的主要病毒，這三種病毒引起的豬腹瀉性疾病，其臨床癥狀相似，而且往往在同一個(gè)豬場(chǎng)混合感染的情況比較多。因此，為了及時(shí)預(yù)防和治療豬病毒性腹瀉，需要快速鑒別診斷豬病毒性腹瀉的特異方法，即需要快速檢測(cè)相關(guān)病毒或其特異抗體。目前，實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)這3種病毒抗體的方法有(1)在細(xì)胞系上培養(yǎng)相應(yīng)陽(yáng)性病毒，以檢測(cè)血清樣品中的相應(yīng)病毒抗體；(2)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)血清樣品中的相應(yīng)病毒抗體。以培養(yǎng)病毒來(lái)檢測(cè)抗體，需要實(shí)驗(yàn)室條件、高級(jí)專(zhuān)業(yè)人員和比較昂貴的儀器設(shè)備，操作繁瑣，檢測(cè)費(fèi)時(shí)、費(fèi)力；ELISA需要酶標(biāo)儀、較多的操作步驟和經(jīng)驗(yàn)；而且，這些方法一次只檢測(cè)一種豬病的抗體?？梢?jiàn)，上述方法盡管檢測(cè)特異或敏感，但操作不夠簡(jiǎn)便與快速，均不適合基層或現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)或診斷。因此，研究一種簡(jiǎn)便而快速的、可以檢測(cè)這3種豬病病毒抗體的實(shí)時(shí)在線檢測(cè)技術(shù)，非常重要而迫切。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)不足，提出一種檢測(cè)準(zhǔn)確、快速、使用方便、成本低的一步檢測(cè)一種或多種豬病毒性腹瀉疾病抗體的試紙條。
本發(fā)明的技術(shù)方案 一種檢測(cè)一種或多種豬病毒性腹瀉疾病抗體的試紙條，含有支撐層、反應(yīng)試劑載體吸附層，支撐層為不吸水薄片條，反應(yīng)試劑載體吸附層粘貼于支撐層上，反應(yīng)試劑載體吸附層由樣品端依次為測(cè)試端纖維層、吸附金標(biāo)SPA蛋白或與待檢抗體相應(yīng)的金標(biāo)抗原纖維層、纖維素膜層及手柄端的吸水材料層，在纖維素膜層上含有一個(gè)用純化的豬傳染性胃腸炎病毒TGEV、豬流行性腹瀉病毒PDEV和豬輪狀病毒RV溶液中的任一種印制的檢測(cè)印跡，或含有純化的TGEV、PDEV和RV溶液中分別任選兩種印制的檢測(cè)印跡，或含有純化的TGEV、PDEV和RV三種溶液任選一種排列順序印制的檢測(cè)印跡，纖維素膜層上還含有用羊或兔抗SPA蛋白的IgG溶液印制的對(duì)照印跡，或者含有用羊或兔抗豬傳染性胃腸炎病毒TGEV的IgG溶液、抗豬流行性腹瀉病毒PDEV的IgG溶液和抗豬輪狀病毒RV的IgG溶液中的任一種或任兩種或三種印制的對(duì)照印跡。
與待檢抗體相應(yīng)的金標(biāo)抗原為金標(biāo)純化豬傳染性胃腸炎病毒TGEV、豬流行性腹瀉病毒PDEV和豬輪狀病毒RV中的任一種、或任兩種、或全部，金標(biāo)抗原的成分與纖維素膜層上的檢測(cè)印跡所用的溶液成分對(duì)應(yīng)，纖維素膜層上的羊或兔抗SPA蛋白的IgG與所述金標(biāo)SPA蛋白對(duì)應(yīng)，纖維素膜層上的羊或兔抗病毒的IgG與所述纖維素膜層上的檢測(cè)印跡所用的溶液成分對(duì)應(yīng)。
支撐層用硬質(zhì)塑膠片條，或不吸水的硬紙片條；測(cè)試端纖維層用玻璃棉，或尼龍纖維膜，或聚酯纖維膜；吸水材料層用吸水紙；纖維素膜層用硝酸纖維素膜，或純纖維素膜，或羧化纖維素膜，或聚偏二氟乙烯纖維膜PVDF；吸附金標(biāo)SPA蛋白或與待檢抗體相應(yīng)的金標(biāo)抗原纖維層用玻璃棉，或尼龍纖維膜，或聚酯纖維膜。
纖維素膜層上含有一條或個(gè)檢測(cè)印跡時(shí)，一條或個(gè)檢測(cè)印跡和對(duì)照印跡的排列形式為
中的任一種；纖維素膜層上含有兩條或個(gè)檢測(cè)印跡時(shí)，兩條或個(gè)檢測(cè)印跡和對(duì)照印跡的排列形式為
中的任一種；纖維素膜層上含有三條或個(gè)檢測(cè)印跡時(shí)，三條或個(gè)檢測(cè)印跡和對(duì)照印跡的排列形式為
中的任一種。
纖維素膜層上依次含有用純化的豬傳染性胃腸炎病毒TGEV、豬流行性腹瀉病毒PDEV和豬輪狀病毒RV溶液中的任一種印制的直線式檢測(cè)印跡
用羊或兔抗SPA蛋白的IgG溶液或者用羊或兔抗豬傳染性胃腸炎病毒TGEV的IgG溶液/抗豬流行性腹瀉病毒PDEV的IgG溶液/抗豬輪狀病毒RV的IgG溶液中的任一種印制的直線式對(duì)照印跡
纖維素膜層上依次含有用純化的豬傳染性胃腸炎病毒TGEV、豬流行性腹瀉病毒PDEV和豬輪狀病毒RV溶液中的任兩種印制的雙平行直線式檢測(cè)印跡
用羊或兔抗SPA蛋白的IgG溶液或者用羊或兔抗豬傳染性胃腸炎病毒TGEV的IgG溶液/抗豬流行性腹瀉病毒PDEV的IgG溶液/抗豬輪狀病毒RV的IgG溶液中的任兩種合并印制的一條直線式對(duì)照印跡
纖維素膜層上依次含有用純化的豬傳染性胃腸炎病毒TGEV、豬流行性腹瀉病毒PDEV和豬輪狀病毒RV溶液印制的三條平行直線式檢測(cè)印跡
用羊或兔抗SPA蛋白的IgG溶液、或用羊或兔抗豬傳染性胃腸炎病毒TGEV的IgG溶液和抗豬流行性腹瀉病毒PDEV的IgG溶液和抗豬輪狀病毒RV的IgG溶液合并印制的一條直線式對(duì)照印跡
在測(cè)試端纖維層、吸附金標(biāo)SPA蛋白或金標(biāo)抗原纖維層及吸水材料層上覆蓋有塑膠保護(hù)膜，在測(cè)試端纖維層與金標(biāo)SPA蛋白或金標(biāo)抗原纖維層交界處對(duì)應(yīng)的塑膠保護(hù)膜上印制有樣品標(biāo)記線，該標(biāo)記線偏向測(cè)試端纖維層一側(cè)0.5cm處。
本發(fā)明的有益效果 1.本發(fā)明的檢測(cè)特異性強(qiáng)，敏感性高。本發(fā)明的檢測(cè)試紙條以膠體金標(biāo)記3種純化的豬病病毒抗原(Wi)或SPA為基礎(chǔ)制備而成，金標(biāo)抗原或SPA中金顆粒與抗原或SPA分子之間無(wú)共價(jià)鍵形成，二者通過(guò)異性電荷間的范德華力相結(jié)合，膠體金對(duì)這3種純化豬病病毒抗原(Wi)的特異性影響很小，也不影響SPA與抗體的結(jié)合及抗原與抗體的結(jié)合，且具有較高的標(biāo)記率。因此，該檢測(cè)試紙條具有較高的特異性和敏感性，可檢測(cè)到2納克的相應(yīng)的抗體蛋白。
2.本發(fā)明操作簡(jiǎn)便，快速。使用本發(fā)明試紙條時(shí)無(wú)需附加任何其它儀器和試劑，只要將其測(cè)試端插入待檢血清中30秒左右，然后在5分鐘左右即可判定檢測(cè)結(jié)果。
3.本發(fā)明的檢測(cè)結(jié)果顯示直觀、準(zhǔn)確。本發(fā)明的檢測(cè)試紙條以顯示棕紅色的檢測(cè)印跡線和對(duì)照印跡線
作為檢測(cè)的陽(yáng)性和陰性標(biāo)記，即在纖維素膜上只顯示一條棕紅色
對(duì)照印跡線，表示豬病抗體在被檢血清中未檢出，在纖維素膜上顯示一條棕紅色
對(duì)照印跡線和1～3條棕紅色檢測(cè)印跡線，則表示在被檢血清中檢出相應(yīng)豬病的抗體，檢測(cè)結(jié)果呈陽(yáng)性；結(jié)果判定直觀、準(zhǔn)確，簡(jiǎn)單明了，不易出現(xiàn)假陰性和假陽(yáng)性誤判。
4.本發(fā)明的檢測(cè)投資和檢測(cè)成本小。使用該快速檢測(cè)試紙條，不需另配其它儀器、設(shè)備和試劑，節(jié)省大量?jī)x器、設(shè)備和附加試劑費(fèi)用；一條試紙一次可以檢測(cè)1～3種豬病抗體，而且專(zhuān)業(yè)和非專(zhuān)業(yè)人士均可隨時(shí)隨地進(jìn)行實(shí)時(shí)在線檢測(cè)，無(wú)需支付專(zhuān)家診斷檢查費(fèi)或送樣品去診斷室的路費(fèi)，節(jié)省檢測(cè)成本，檢測(cè)費(fèi)用低。
5.本發(fā)明應(yīng)用范圍廣，便于普遍推廣應(yīng)用。本發(fā)明快速檢測(cè)試紙操作簡(jiǎn)單成“一步式”或“傻瓜式”，而且方便攜帶和保存，能滿足不同層次人員的需要，包括專(zhuān)業(yè)化驗(yàn)、海關(guān)檢疫、衛(wèi)生防疫、質(zhì)量監(jiān)測(cè)、畜產(chǎn)品加工、集約化養(yǎng)殖到個(gè)體養(yǎng)殖等，具有廣闊的市場(chǎng)前景和較大的經(jīng)濟(jì)、社會(huì)效益。
圖1為本發(fā)明中試紙條的結(jié)構(gòu)示意圖之一；圖2為圖1的俯視結(jié)構(gòu)示意圖； 圖3為本發(fā)明中試紙條的結(jié)構(gòu)示意圖之二；圖4為圖3的俯視結(jié)構(gòu)示意圖； 圖5為本發(fā)明中試紙條的結(jié)構(gòu)示意圖之三；圖6為圖5的俯視結(jié)構(gòu)示意圖； 圖7為本發(fā)明中試紙條的結(jié)構(gòu)示意圖之四；圖8為圖7的俯視結(jié)構(gòu)示意圖； 圖9為本發(fā)明中試紙條的結(jié)構(gòu)示意圖之五；圖10為圖9的俯視結(jié)構(gòu)示意圖； 圖11為本發(fā)明中試紙條的結(jié)構(gòu)示意圖之六；圖12為圖11的俯視結(jié)構(gòu)示意圖。
具體實(shí)施例方式 要制成本發(fā)明的檢測(cè)試紙條，需制備純化的TGEV、PDEV和RV及其多克隆抗體，以及抗SPA抗體，用于制備金標(biāo)抗原纖維、檢測(cè)印跡和對(duì)照印跡。
1.羊或兔抗SPA蛋白的IgG的制備 以50μg～100μg SPA/kg體重經(jīng)皮下和肌肉注射陰性健康羊或家兔3～4次，末次免疫20天后，靜脈采血，以ELISA測(cè)定其血清抗體效價(jià)在1∶2000以上，心臟采血或頸動(dòng)脈放血，收集其高免血清。取1份血清加2份PBS液(pH7.2)混勻，加等體積飽和硫酸銨液混勻，置4℃冰箱內(nèi)2h，在4℃、10000r/min離心15min，棄上清液；以適量PBS液(pH7.2)溶解沉淀，加飽和硫酸銨液至其最終濃度為33％，置4℃冰箱內(nèi)2h，在4℃、10000r/min條件下離心15min，棄上清液，以少量PBS液(pH7.2)溶解沉淀，置4℃冰箱內(nèi)用PBS液(pH7.2)過(guò)夜透析，換液2～3次，在4℃、10000r/min條件下離心15min，收集上清液，以紫外分光光度計(jì)測(cè)定其蛋白濃度。以飽和硫酸銨法提取的羊或兔抗SPAIgG，用于制備該快速檢測(cè)試紙條的對(duì)照印跡。
2.羊或兔抗TGEV、PDEV和RV的IgG(Xi)的制備 采用國(guó)家批準(zhǔn)的三種豬病(豬流行性腹瀉病毒(PEDV)、豬傳染性胃腸炎病毒(TGEV)和輪狀病毒(RV))的滅活疫苗或弱毒疫苗，多次免疫接種抗體陰性健康羊或兔。末次免疫20天后靜脈采血，以ELISA測(cè)定其血清TGEV、PDEV和RV抗體效價(jià)均在1∶2000以上，心臟采血或頸動(dòng)脈放血，收集其高免血清，以飽和硫酸銨法提取血清中IgG抗體(方法與提取抗SPA的IgG相同，不重述)。
3.純化TGEV、PDEV和RV(Wi)的制備 3.1 TGEV增殖純化取適應(yīng)ST或PK15細(xì)胞的豬傳染性胃腸炎病毒種毒液，適量接種ST或PK15單層細(xì)胞(細(xì)胞單層接毒前用PBS洗2遍)，加入不含血清的低糖DMEM維持液(但含有終濃度2g/L的水解乳蛋白)，37℃、5％CO2中靜置繼續(xù)培養(yǎng)。每天觀察，當(dāng)細(xì)胞病變達(dá)到80％時(shí)收獲培養(yǎng)物凍存于-30℃。將病毒細(xì)胞培養(yǎng)物反復(fù)凍融3次，8000r/min離心30min去除細(xì)胞碎片沉淀，上清液通過(guò)孔徑0.3μm無(wú)菌濾器過(guò)濾。將濾液用飽和硫酸銨沉淀法濃縮至原體積的1/100，以備蔗糖梯度離心。配制20％～50％連續(xù)濃度梯度的蔗糖溶液，從離心管底部逐層向上鋪設(shè)，在蔗糖液上部加濃縮后的病毒液，放入超速離心機(jī)，4℃38000r/min離心1.5h，取沉降在36％～40％蔗糖濃度之間的病毒帶，透析濃縮即為純化抗原。-32℃凍存?zhèn)溆谩?br>
3.2PDEV增殖純化取適應(yīng)Vero或ST細(xì)胞的豬流行性腹瀉病毒種毒液，適量接種Vero或ST單層細(xì)胞(細(xì)胞單層接毒前用PBS洗2遍)，37℃、5％CO2中吸附1h，加入2％血清低糖DMEM維持液(含終濃度5μg/mL的胰酶)，繼續(xù)靜置培養(yǎng)。每天觀察，當(dāng)細(xì)胞病變達(dá)到80％時(shí)收獲培養(yǎng)物凍存于-30℃。將病毒細(xì)胞培養(yǎng)物反復(fù)凍融3次，8000r/min離心30min去除細(xì)胞碎片沉淀，上清液通過(guò)孔徑0.3μm無(wú)菌濾器過(guò)濾。將濾液用飽和硫酸銨沉淀法濃縮至原體積的1/100，以備蔗糖梯度離心。配制20％～50％連續(xù)濃度梯度的蔗糖溶液，從離心管底部逐層向上鋪設(shè)，在蔗糖液上部加濃縮后的病毒液，放入超速離心機(jī)，4℃38000r/min離心1.5h，取沉降在36％～40％蔗糖濃度之間的病毒帶，透析濃縮即為純化抗原。-32℃凍存?zhèn)溆谩?br>
3.3RV增殖純化取適應(yīng)猴腎傳代細(xì)胞系MA-104或PK15的豬輪狀病毒種毒液，加入終濃度10μg/ml的胰酶，37℃作用30min，然后適量接種MA-104或PK15單層細(xì)胞(細(xì)胞單層接毒前用PBS洗2遍)，37℃、5％CO2中靜置培養(yǎng)1h后，每瓶加入無(wú)血清DMEM液(但含有終濃度1～2μg/ml的胰酶)繼續(xù)培養(yǎng)。每天觀察，當(dāng)細(xì)胞病變達(dá)到80％時(shí)收毒，凍存于-30℃待用。將豬輪狀病毒細(xì)胞培養(yǎng)物反復(fù)凍融3次，7000r/min離心40min，取上清，40000r/min離心1.5h，以少許的PBS溶解沉淀物。在超離管中加入50％氯化銫溶液作墊，在其上層加入10％～30％蔗糖溶液，最后層加上述病毒液，40000r/min離心2h，吸取氯化銫溶液墊層表面的濃縮病毒液，透析濃縮即為純化抗原。-32℃保存待用。
4.金標(biāo)純化TGEV、PDEV和RV(Wi)玻璃棉或金標(biāo)SPA玻璃棉的制備 以檸檬酸鈉還原法制備金溶膠，即在50～100ml沸騰的0.01～0.05％氯金酸水溶液中加入2～4ml的0.5～2％檸檬酸三鈉溶液，獲得直徑15nm左右的膠體金。以0.1mol/L的K2CO3調(diào)膠體金pH至8.5～9.5，以1∶1000～1300的標(biāo)記比將待標(biāo)記的純化病毒TGEV或PDEV或RV(W1或W2或W3)或者SPA加入pH8.5～9.5的金溶膠中，標(biāo)記10min后，加20％PEG10000至終濃度0.05％，4℃、1500～3000r/min離心20min，除去未結(jié)合的膠體金顆粒，4℃、15000r/min離心1h，棄上清，獲初步純化金標(biāo)病毒或SPA混合物后，用丙烯葡聚糖S-400柱層析，分離純化金標(biāo)蛋白，分別獲得膠體金標(biāo)記的TGEV、PDEV和RV或者SPA。將1∶100～500稀釋的膠體金標(biāo)記物吸附于精制玻璃棉中，4℃真空干燥，制備出金標(biāo)抗原或SPA玻璃棉。
5.該快速檢測(cè)試紙條實(shí)施檢測(cè)的原理 當(dāng)該快速檢測(cè)試紙條測(cè)試端插入待檢測(cè)血清后，待檢血清通過(guò)虹吸帶動(dòng)待檢豬病抗體及金標(biāo)抗原玻璃棉中的金標(biāo)抗原(Wi)一起向硝酸纖維素膜擴(kuò)散，并最終滲入手柄端濾紙中，擴(kuò)散過(guò)程中待檢豬病抗體可與相應(yīng)的金標(biāo)SPA或病毒抗原(Wi)相結(jié)合，該結(jié)合物進(jìn)而與纖維素膜上的純化病毒抗原檢測(cè)印跡結(jié)合，從而顯示出棕紅色的檢測(cè)印跡T、P、R；而羊(或兔)抗SPA的IgG或抗這3種病毒的IgG則可與金標(biāo)SPA或金標(biāo)病毒抗原(Wi)結(jié)合，形成棕紅色對(duì)照印跡C。如果待檢血清中沒(méi)有TGEV、PDEV、RV這3種豬病病毒的抗體，試紙條只顯示出一條棕紅色對(duì)照印跡C；血清中含有抗TGEV(PDEV或RV)的抗體，則分別與其金標(biāo)抗原W1(W2或W3)或SPA結(jié)合，再與纖維素膜上的純化病毒抗原檢測(cè)印跡T(P或R)結(jié)合，顯示棕紅色檢測(cè)印跡，為陽(yáng)性標(biāo)記；如果纖維素膜上沒(méi)有任何棕紅色印跡顯示，則表明試紙條已失效或操作失誤。
6.該快速檢測(cè)試紙條的檢測(cè)操作方法 (1)檢測(cè)樣品液的制備無(wú)菌取病豬的血液，并分離血清，以生理鹽水作1∶10～50倍稀釋血清待測(cè)。
(2)檢測(cè)操作將該快速檢測(cè)試紙條測(cè)試端插入待檢測(cè)血清中，插入深度不超過(guò)標(biāo)記線9，約30秒后取出試紙條，水平放置約1～5分鐘，同時(shí)觀察結(jié)果。
(3)結(jié)果判斷如果在檢測(cè)試紙條纖維素膜上只顯示出一條棕紅色對(duì)照印跡C，表示檢測(cè)結(jié)果呈陰性，說(shuō)明在被檢血清中未檢測(cè)出抗TGEV、PDEV和RV的抗體；如果檢測(cè)試紙條上的纖維素膜出現(xiàn)棕紅色的對(duì)照印跡C和檢測(cè)印跡T或P或R，表示檢測(cè)結(jié)果呈陽(yáng)性，即在待檢血清中檢測(cè)出抗TGEV或PDEV或RV的抗體；如果檢測(cè)印跡T、P、R同時(shí)出現(xiàn)，表示在待檢血清中檢測(cè)出抗TGEV、PDEV和RV這3種豬病病毒的抗體；如果纖維素膜上沒(méi)有任何一條棕紅色印跡顯示，則表明試紙條已失效或操作有誤。
實(shí)施例一參見(jiàn)圖1～圖2，圖中，1為支撐層，用硬質(zhì)塑膠片條制成，2為測(cè)試端纖維層，用玻璃棉制成，3為吸附有金標(biāo)SPA的纖維層(根據(jù)上述具體制備方法4制備的金標(biāo)SPA玻璃棉)，4為纖維素膜層，采用硝酸纖維素膜，5為吸水材料層，用吸水濾紙制成，將編號(hào)2、3、4、5各層依次從左至右粘貼在塑膠薄片條1上，彼此之間交界處纖維互相交叉滲透。在硝酸纖維素膜層4上，分別用純化TGEV、PDEV和RV病毒溶液印上檢測(cè)印跡T、P、R，用羊或兔抗SPAIgG溶液印上對(duì)照印跡C，印跡T、P、R、C的排列形式為
中的任一種，8-1為覆蓋在纖維層2和金標(biāo)SPA纖維層3上面的測(cè)試端白色塑膠保護(hù)膜，在2和3交界處對(duì)應(yīng)塑膠保護(hù)膜8-1位置上偏向于玻璃棉2一側(cè)0.5cm處印有標(biāo)記線9，9的右端印有箭頭及max字樣，吸水層5(手柄端)上覆蓋有黃色塑膠保護(hù)膜8-2。待測(cè)血清的制備及檢測(cè)步驟，同具體操作方法6中的檢測(cè)操作方法，不重述。
實(shí)施例二參見(jiàn)圖1～圖2，本實(shí)施例同實(shí)施例一基本相同，相同之處不再重述，不同之處在于3為吸附金標(biāo)抗原纖維層，它為吸附有金標(biāo)純化TGEV、PDEV和RV病毒的纖維層(根據(jù)上述具體制備方法4制備的金標(biāo)抗原玻璃棉)，在硝酸纖維素膜層4上，C為用抗TGEV、PDEV和RV的IgG溶液合并印制的
形對(duì)照印跡。
實(shí)施例三參見(jiàn)圖1～圖2，本實(shí)施例同實(shí)施例一基本相同，相同之處不再重述，不同之處在于支撐層1用不吸水的硬紙片條，纖維素膜層4采用聚偏二氟乙烯纖維膜PVDF。
實(shí)施例四參見(jiàn)圖1～圖2，本實(shí)施例同實(shí)施例一基本相同，相同之處不再重述，不同之處在于纖維素膜層4采用純纖維素膜，吸附有金標(biāo)SPA的纖維層3用聚酯纖維膜。
實(shí)施例五參見(jiàn)圖1～圖2，本實(shí)施例同實(shí)施例一基本相同，相同之處不再重述，不同之處在于纖維素膜層4采用羧化纖維素膜。
實(shí)施例六參見(jiàn)圖1～圖2，本實(shí)施例同實(shí)施例一基本相同，相同之處不再重述，不同之處在于測(cè)試端纖維層2用聚酯纖維膜。
實(shí)施例七參見(jiàn)圖1～圖2，本實(shí)施例同實(shí)施例一基本相同，相同之處不再重述，不同之處在于測(cè)試端纖維層2用聚酯纖維膜，纖維素膜層4采用純纖維素膜。
實(shí)施例八參見(jiàn)圖1～圖2，本實(shí)施例同實(shí)施例一基本相同，相同之處不再重述，不同之處在于測(cè)試端纖維層2用聚酯纖維膜，纖維素膜層4采用羧化纖維素膜。
實(shí)施例九參見(jiàn)圖1～圖2，本實(shí)施例同實(shí)施例一基本相同，相同之處不再重述，不同之處在于測(cè)試端纖維層2用聚酯纖維膜，纖維素膜層4采用聚偏二氟乙烯纖維膜PVDF。
實(shí)施例十參見(jiàn)圖1～圖2，本實(shí)施例同實(shí)施例一基本相同，相同之處不再重述，不同之處在于測(cè)試端纖維層2用尼龍纖維膜。
實(shí)施例十一參見(jiàn)圖1～圖2，本實(shí)施例同實(shí)施例一基本相同，相同之處不再重述，不同之處在于測(cè)試端纖維層2用尼龍纖維膜，纖維素膜層4采用純纖維素膜，吸附有金標(biāo)SPA的纖維層3用聚酯纖維膜。
實(shí)施例十二參見(jiàn)圖1～圖2，本實(shí)施例同實(shí)施例一基本相同，相同之處不再重述，不同之處在于測(cè)試端纖維層2用尼龍纖維膜，纖維素膜層4采用羧化纖維素膜。
實(shí)施例十三參見(jiàn)圖1～圖2，本實(shí)施例同實(shí)施例一基本相同，相同之處不再重述，不同之處在于測(cè)試端纖維層2用尼龍纖維膜，纖維素膜層4采用聚偏二氟乙烯纖維膜PVDF。
實(shí)施例十四參見(jiàn)圖1～圖2，本實(shí)施例同實(shí)施例二基本相同，相同之處不再重述，不同之處在于支撐層1用不吸水的硬紙片條，纖維素膜層4采用聚偏二氟乙烯纖維膜PVDF。
實(shí)施例十五參見(jiàn)圖1～圖2，本實(shí)施例同實(shí)施例二基本相同，相同之處不再重述，不同之處在于纖維素膜層4采用純纖維素膜，吸附金標(biāo)抗原纖維層3用尼龍纖維膜。
實(shí)施例十六參見(jiàn)圖1～圖2，本實(shí)施例同實(shí)施例二基本相同，相同之處不再重述，不同之處在于纖維素膜層4采用羧化纖維素膜。
實(shí)施例十七參見(jiàn)圖1～圖2，本實(shí)施例同實(shí)施例二基本相同，相同之處不再重述，不同之處在于測(cè)試端纖維層2用聚酯纖維膜，吸附金標(biāo)抗原纖維層3用尼龍纖維膜。
實(shí)施例十八參見(jiàn)圖1～圖2，本實(shí)施例同實(shí)施例二基本相同，相同之處不再重述，不同之處在于測(cè)試端纖維層2用聚酯纖維膜，纖維素膜層4采用純纖維素膜。
實(shí)施例十九參見(jiàn)圖1～圖2，本實(shí)施例同實(shí)施例二基本相同，相同之處不再重述，不同之處在于測(cè)試端纖維層2用聚酯纖維膜，纖維素膜層4采用羧化纖維素膜。
實(shí)施例二十參見(jiàn)圖1～圖2，本實(shí)施例同實(shí)施例二基本相同，相同之處不再重述，不同之處在于測(cè)試端纖維層2用聚酯纖維膜，纖維素膜層4采用聚偏二氟乙烯纖維膜PVDF。
實(shí)施例二十一參見(jiàn)圖1～圖2，本實(shí)施例同實(shí)施例二基本相同，相同之處不再重述，不同之處在于測(cè)試端纖維層2用尼龍纖維膜。
實(shí)施例二十二參見(jiàn)圖1～圖2，本實(shí)施例同實(shí)施例二基本相同，相同之處不再重述，不同之處在于測(cè)試端纖維層2用尼龍纖維膜，纖維素膜層4采用純纖維素膜。
實(shí)施例二十三參見(jiàn)圖1～圖2，本實(shí)施例同實(shí)施例二基本相同，相同之處不再重述，不同之處在于測(cè)試端纖維層2用尼龍纖維膜，纖維素膜層4采用羧化纖維素膜。
實(shí)施例二十四參見(jiàn)圖1～圖2，本實(shí)施例同實(shí)施例二基本相同，相同之處不再重述，不同之處在于測(cè)試端纖維層2用尼龍纖維膜，纖維素膜層4采用聚偏二氟乙烯纖維膜PVDF。
實(shí)施例二十五參見(jiàn)圖3～圖4，圖中，1為支撐層，用硬質(zhì)塑膠片條制成，2為測(cè)試端纖維層，用玻璃棉制成，3為吸附有金標(biāo)SPA的纖維層(根據(jù)上述具體制備方法4制備的金標(biāo)SPA玻璃棉)，4為纖維素膜層，采用硝酸纖維素膜，5為吸水材料層，用吸水濾紙制成，將編號(hào)2、3、4、5各層從左至右粘貼在塑膠薄片條1上，彼此之間交界處纖維互相交叉滲透。在硝酸纖維素膜層4上，分別用純化TGEV、PDEV病毒溶液印上檢測(cè)印跡T、P，用羊或兔抗SPA IgG溶液印上對(duì)照印跡C，印跡T、P、C的排列形式為
中的任一種，8-1為覆蓋在纖維層2和金標(biāo)SPA纖維層3上面的測(cè)試端白色塑膠保護(hù)膜，在2和3交界處對(duì)應(yīng)塑膠保護(hù)膜8-1位置上偏向于玻璃棉2一側(cè)0.5cm處印有標(biāo)記線9，9的右端印有箭頭及max字樣，吸水層5(手柄端)上覆蓋有黃色塑膠保護(hù)膜8-2。待測(cè)血清的制備及檢測(cè)步驟，同具體操作方法6中的檢測(cè)操作方法，不重述。
實(shí)施例二十六參見(jiàn)圖3～圖4，本實(shí)施例同實(shí)施例二十五基本相同，相同之處不再重述，不同之處在于3為吸附金標(biāo)抗原纖維層，它為吸附有金標(biāo)純化TGEV和PDEV病毒液的纖維層(根據(jù)上述具體制備方法4制備的金標(biāo)抗原玻璃棉)，在硝酸纖維素膜層4上，C為用抗TGEV、PDEV的IgG溶液合并印制的
形對(duì)照印跡。
實(shí)施例二十七參見(jiàn)圖3～圖4，本實(shí)施例同實(shí)施例二十五基本相同，相同之處不再重述，不同之處在于支撐層1用不吸水的硬紙片條，纖維素膜層4采用聚偏二氟乙烯纖維膜。
實(shí)施例二十八參見(jiàn)圖3～圖4，本實(shí)施例同實(shí)施例二十五基本相同，相同之處不再重述，不同之處在于纖維素膜層4采用純纖維素膜，吸附有金標(biāo)SPA的纖維層3用聚酯纖維膜。
實(shí)施例二十九參見(jiàn)圖3～圖4，本實(shí)施例同實(shí)施例二十五基本相同，相同之處不再重述，不同之處在于纖維素膜層4采用羧化纖維素膜。
實(shí)施例三十參見(jiàn)圖3～圖4，本實(shí)施例同實(shí)施例二十五基本相同，相同之處不再重述，不同之處在于測(cè)試端纖維層2用聚酯纖維膜。
實(shí)施例三十一參見(jiàn)圖3～圖4，本實(shí)施例同實(shí)施例二十五基本相同，相同之處不再重述，不同之處在于測(cè)試端纖維層2用聚酯纖維膜，纖維素膜層4采用純纖維素膜。
實(shí)施例三十二參見(jiàn)圖3～圖4，本實(shí)施例同實(shí)施例二十五基本相同，相同之處不再重述，不同之處在于測(cè)試端纖維層2用聚酯纖維膜，纖維素膜層4采用羧化纖維素膜。
實(shí)施例三十三參見(jiàn)圖3～圖4，本實(shí)施例同實(shí)施例二十五基本相同，相同之處不再重述，不同之處在于測(cè)試端纖維層2用聚酯纖維膜，纖維素膜層4采用聚偏二氟乙烯纖維膜PVDF。
實(shí)施例三十四參見(jiàn)圖3～圖4，本實(shí)施例同實(shí)施例二十五基本相同，相同之處不再重述，不同之處在于測(cè)試端纖維層2用尼龍纖維膜，吸附有金標(biāo)SPA的纖維層3用聚酯纖維膜。
實(shí)施例三十五參見(jiàn)圖3～圖4，本實(shí)施例同實(shí)施例二十五基本相同，相同之處不再重述，不同之處在于測(cè)試端纖維層2用尼龍纖維膜，纖維素膜層4采用純纖維素膜。
實(shí)施例三十六參見(jiàn)圖3～圖4，本實(shí)施例同實(shí)施例二十五基本相同，相同之處不再重述，不同之處在于測(cè)試端纖維層2用尼龍纖維膜，纖維素膜層4采用羧化纖維素膜。
實(shí)施例三十七參見(jiàn)圖3～圖4，本實(shí)施例同實(shí)施例二十五基本相同，相同之處不再重述，不同之處在于測(cè)試端纖維層2用尼龍纖維膜，纖維素膜層4采用聚偏二氟乙烯纖維膜PVDF。
實(shí)施例三十八參見(jiàn)圖3～圖4，本實(shí)施例同實(shí)施例二十六基本相同，相同之處不再重述，不同之處在于支撐層1用不吸水的硬紙片條，纖維素膜層4采用聚偏二氟乙烯纖維膜。
實(shí)施例三十九參見(jiàn)圖3～圖4，本實(shí)施例同實(shí)施例二十六基本相同，相同之處不再重述，不同之處在于纖維素膜層4采用純纖維素膜，吸附金標(biāo)抗原纖維層3用尼龍纖維膜。
實(shí)施例四十參見(jiàn)圖3～圖4，本實(shí)施例同實(shí)施例二十六基本相同，相同之處不再重述，不同之處在于纖維素膜層4采用羧化纖維素膜。
實(shí)施例四十一參見(jiàn)圖3～圖4，本實(shí)施例同實(shí)施例二十六基本相同，相同之處不再重述，不同之處在于測(cè)試端纖維層2用聚酯纖維膜。
實(shí)施例四十二參見(jiàn)圖3～圖4，本實(shí)施例同實(shí)施例二十六基本相同，相同之處不再重述，不同之處在于測(cè)試端纖維層2用聚酯纖維膜，纖維素膜層4采用純纖維素膜。
實(shí)施例四十三參見(jiàn)圖3～圖4，本實(shí)施例同實(shí)施例二十六基本相同，相同之處不再重述，不同之處在于測(cè)試端纖維層2用聚酯纖維膜，纖維素膜層4采用羧化纖維素膜。
實(shí)施例四十四參見(jiàn)圖3～圖4，本實(shí)施例同實(shí)施例二十六基本相同，相同之處不再重述，不同之處在于測(cè)試端纖維層2用聚酯纖維膜，纖維素膜層4采用聚偏二氟乙烯纖維膜PVDF。
實(shí)施例四十五參見(jiàn)圖3～圖4，本實(shí)施例同實(shí)施例二十六基本相同，相同之處不再重述，不同之處在于測(cè)試端纖維層2用尼龍纖維膜，吸附金標(biāo)抗原纖維層3用尼龍纖維膜。
實(shí)施例四十六參見(jiàn)圖3～圖4，本實(shí)施例同實(shí)施例二十六基本相同，相同之處不再重述，不同之處在于測(cè)試端纖維層2用尼龍纖維膜，纖維素膜層4采用純纖維素膜。
實(shí)施例四十七參見(jiàn)圖3～圖4，本實(shí)施例同實(shí)施例二十六基本相同，相同之處不再重述，不同之處在于測(cè)試端纖維層2用尼龍纖維膜，纖維素膜層4采用羧化纖維素膜。
實(shí)施例四十八參見(jiàn)圖3～圖4，本實(shí)施例同實(shí)施例二十六基本相同，相同之處不再重述，不同之處在于測(cè)試端纖維層2用尼龍纖維膜，纖維素膜層4采用聚偏二氟乙烯纖維膜PVDF。
實(shí)施例四十九參見(jiàn)圖5～圖6，圖中，1為支撐層，用硬質(zhì)塑膠片條制成，2為測(cè)試端纖維層，用玻璃棉制成，3為吸附有金標(biāo)SPA的纖維層(根據(jù)上述具體制備方法4制備的金標(biāo)SPA玻璃棉)，4為纖維素膜層，采用硝酸纖維素膜，5為吸水材料層，用吸水濾紙制成，將編號(hào)2、3、4、5各層從左至右粘貼在塑膠薄片條1上，彼此之間交界處纖維互相交叉滲透。在硝酸纖維素膜層4上，用純化PDEV病毒溶液印上檢測(cè)印跡P，用羊或兔抗SPA IgG溶液印上對(duì)照印跡C，印跡P、C的排列形式為
中的任一種，8-1為覆蓋在纖維層2和金標(biāo)SPA纖維層3上面的測(cè)試端白色塑膠保護(hù)膜，在2和3交界處對(duì)應(yīng)塑膠保護(hù)膜8-1位置上偏向于玻璃棉2一側(cè)0.5cm處印有標(biāo)記線9，9的右端印有箭頭及max字樣，吸水層5(手柄端)上覆蓋有黃色塑膠保護(hù)膜8-2。待測(cè)血清的制備及檢測(cè)步驟，同具體操作方法6中的檢測(cè)操作方法，不重述。
實(shí)施例五十參見(jiàn)圖5～圖6，本實(shí)施例同實(shí)施例四十九基本相同，相同之處不再重述，不同之處在于3為吸附金標(biāo)抗原纖維層，它為吸附有金標(biāo)純化PDEV病毒液的纖維層(根據(jù)上述具體制備方法4制備的金標(biāo)抗原玻璃棉)，在硝酸纖維素膜層4上，C為用抗PDEV的IgG溶液印制的
形對(duì)照印跡。
實(shí)施例五十一參見(jiàn)圖5～圖6，本實(shí)施例同實(shí)施例四十九基本相同，相同之處不再重述，不同之處在于支撐層1用不吸水的硬紙片條，纖維素膜層4采用聚偏二氟乙烯纖維膜PVDF。
實(shí)施例五十二參見(jiàn)圖5～圖6，本實(shí)施例同實(shí)施例四十九基本相同，相同之處不再重述，不同之處在于纖維素膜層4采用純纖維素膜，吸附有金標(biāo)SPA的纖維層3用聚酯纖維膜。
實(shí)施例五十三參見(jiàn)圖5～圖6，本實(shí)施例同實(shí)施例四十九基本相同，相同之處不再重述，不同之處在于纖維素膜層4采用羧化纖維素膜。
實(shí)施例五十四參見(jiàn)圖5～圖6，本實(shí)施例同實(shí)施例四十九基本相同，相同之處不再重述，不同之處在于測(cè)試端纖維層2用聚酯纖維膜。
實(shí)施例五十五參見(jiàn)圖5～圖6，本實(shí)施例同實(shí)施例四十九基本相同，相同之處不再重述，不同之處在于測(cè)試端纖維層2用聚酯纖維膜，纖維素膜層4采用純纖維素膜。
實(shí)施例五十六參見(jiàn)圖5～圖6，本實(shí)施例同實(shí)施例四十九基本相同，相同之處不再重述，不同之處在于測(cè)試端纖維層2用聚酯纖維膜，纖維素膜層4采用羧化纖維素膜。
實(shí)施例五十七參見(jiàn)圖5～圖6，本實(shí)施例同實(shí)施例四十九基本相同，相同之處不再重述，不同之處在于測(cè)試端纖維層2用聚酯纖維膜，纖維素膜層4采用聚偏二氟乙烯纖維膜PVDF。
實(shí)施例五十八參見(jiàn)圖5～圖6，本實(shí)施例同實(shí)施例四十九基本相同，相同之處不再重述，不同之處在于測(cè)試端纖維層2用尼龍纖維膜，吸附有金標(biāo)SPA的纖維層3用聚酯纖維膜。
實(shí)施例五十九參見(jiàn)圖5～圖6，本實(shí)施例同實(shí)施例四十九基本相同，相同之處不再重述，不同之處在于測(cè)試端纖維層2用尼龍纖維膜，纖維素膜層4采用純纖維素膜。
實(shí)施例六十參見(jiàn)圖5～圖6，本實(shí)施例同實(shí)施例四十九基本相同，相同之處不再重述，不同之處在于測(cè)試端纖維層2用尼龍纖維膜，纖維素膜層4采用羧化纖維素膜。
實(shí)施例六十一參見(jiàn)圖5～圖6，本實(shí)施例同實(shí)施例四十九基本相同，相同之處不再重述，不同之處在于測(cè)試端纖維層2用尼龍纖維膜，纖維素膜層4采用聚偏二氟乙烯纖維膜PVDF。
實(shí)施例六十二參見(jiàn)圖5～圖6，本實(shí)施例同實(shí)施例五十基本相同，相同之處不再重述，不同之處在于支撐層1用不吸水的硬紙片條，纖維素膜層4采用聚偏二氟乙烯纖維膜PVDF。
實(shí)施例六十三參見(jiàn)圖5～圖6，本實(shí)施例同實(shí)施例五十基本相同，相同之處不再重述，不同之處在于纖維素膜層4采用純纖維素膜，吸附金標(biāo)抗原纖維層3用尼龍纖維膜。
實(shí)施例六十四參見(jiàn)圖5～圖6，本實(shí)施例同實(shí)施例五十基本相同，相同之處不再重述，不同之處在于纖維素膜層4采用羧化纖維素膜。
實(shí)施例六十五參見(jiàn)圖5～圖6，本實(shí)施例同實(shí)施例五十基本相同，相同之處不再重述，不同之處在于測(cè)試端纖維層2用聚酯纖維膜，吸附金標(biāo)抗原纖維層3用尼龍纖維膜。
實(shí)施例六十六參見(jiàn)圖5～圖6，本實(shí)施例同實(shí)施例五十基本相同，相同之處不再重述，不同之處在于測(cè)試端纖維層2用聚酯纖維膜，纖維素膜層4采用純纖維素膜。
實(shí)施例六十七參見(jiàn)圖5～圖6，本實(shí)施例同實(shí)施例五十基本相同，相同之處不再重述，不同之處在于測(cè)試端纖維層2用聚酯纖維膜，纖維素膜層4采用羧化纖維素膜。
實(shí)施例六十八參見(jiàn)圖5～圖6，本實(shí)施例同實(shí)施例五十基本相同，相同之處不再重述，不同之處在于測(cè)試端纖維層2用聚酯纖維膜，纖維素膜層4采用聚偏二氟乙烯纖維膜PVDF。
實(shí)施例六十九參見(jiàn)圖5～圖6，本實(shí)施例同實(shí)施例五十基本相同，相同之處不再重述，不同之處在于測(cè)試端纖維層2用尼龍纖維膜。
實(shí)施例七十參見(jiàn)圖5～圖6，本實(shí)施例同實(shí)施例五十基本相同，相同之處不再重述，不同之處在于測(cè)試端纖維層2用尼龍纖維膜，纖維素膜層4采用純纖維素膜。
實(shí)施例七十一參見(jiàn)圖5～圖6，本實(shí)施例同實(shí)施例五十基本相同，相同之處不再重述，不同之處在于測(cè)試端纖維層2用尼龍纖維膜，纖維素膜層4采用羧化纖維素膜。
實(shí)施例七十二參見(jiàn)圖5～圖6，本實(shí)施例同實(shí)施例五十基本相同，相同之處不再重述，不同之處在于測(cè)試端纖維層2用尼龍纖維膜，纖維素膜層4采用聚偏二氟乙烯纖維膜PVDF。
實(shí)施例七十三參見(jiàn)圖7～圖8，本實(shí)施例同實(shí)施例一基本相同，相同之處不再重述，不同之處在于在硝酸纖維素膜層4上，分別用純化RV、PDEV和TGEV病毒溶液印上檢測(cè)印跡R、P、T，用羊或兔抗SPA IgG溶液印上對(duì)照印跡C，印跡R、P、T、C的排列形式為
中的任一種。
實(shí)施例七十四參見(jiàn)圖9～圖10，本實(shí)施例同實(shí)施例二十五基本相同，相同之處不再重述，不同之處在于在硝酸纖維素膜層4上，分別用純化RV、PDEV病毒溶液印上檢測(cè)印跡R、P，用羊或兔抗SPAIgG溶液印上對(duì)照印跡C，印跡R、P、C的排列形式為
中的任一種。
實(shí)施例七十五參見(jiàn)圖11～圖12，本實(shí)施例同實(shí)施例四十九基本相同，相同之處不再重述，不同之處在于在硝酸纖維素膜層4上，用純化TGEV病毒溶液印上檢測(cè)印跡T，用羊或兔抗SPA IgG溶液印上對(duì)照印跡C，印跡T、C的排列形式為
中的任一種。
權(quán)利要求
1.一種檢測(cè)一種或多種豬病毒性腹瀉疾病抗體的試紙條，含有支撐層、反應(yīng)試劑載體吸附層，支撐層為不吸水薄片條，反應(yīng)試劑載體吸附層粘貼于支撐層上，其特征是反應(yīng)試劑載體吸附層由樣品端依次為測(cè)試端纖維層、吸附金標(biāo)SPA蛋白或與待檢抗體相應(yīng)的金標(biāo)抗原纖維層、纖維素膜層及手柄端的吸水材料層，在纖維素膜層上含有一個(gè)用純化的豬傳染性胃腸炎病毒TGEV、豬流行性腹瀉病毒PDEV和豬輪狀病毒RV溶液中的任一種印制的檢測(cè)印跡，或含有純化的TGEV、PDEV和RV溶液中分別任選兩種印制的檢測(cè)印跡，或含有純化的TGEV、PDEV和RV三種溶液任選一種排列順序印制的檢測(cè)印跡，纖維素膜層上還含有用羊或兔抗SPA蛋白的IgG溶液印制的對(duì)照印跡，或者含有用羊或兔抗豬傳染性胃腸炎病毒TGEV的IgG溶液、抗豬流行性腹瀉病毒PDEV的IgG溶液和抗豬輪狀病毒RV的IgG溶液中的任一種或任兩種或三種印制的對(duì)照印跡。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試紙條，其特征是所述與待檢抗體相應(yīng)的金標(biāo)抗原為金標(biāo)純化豬傳染性胃腸炎病毒TGEV、豬流行性腹瀉病毒PDEV和豬輪狀病毒RV中的任一種、或任兩種、或全部，金標(biāo)抗原的成分與纖維素膜層上的檢測(cè)印跡所用的溶液成分對(duì)應(yīng)，纖維素膜層上的羊或兔抗SPA蛋白的IgG與所述金標(biāo)SPA蛋白對(duì)應(yīng)，纖維素膜層上的羊或兔抗病毒的IgG與所述纖維素膜層上的檢測(cè)印跡所用的溶液成分對(duì)應(yīng)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的試紙條，其特征是所述支撐層用硬質(zhì)塑膠片條，或不吸水的硬紙片條；所述測(cè)試端纖維層用玻璃棉，或尼龍纖維膜，或聚酯纖維膜；所述吸水材料層用吸水紙；所述纖維素膜層用硝酸纖維素膜，或純纖維素膜，或羧化纖維素膜，或聚偏二氟乙烯纖維膜PVDF；所述吸附金標(biāo)SPA蛋白或與待檢抗體相應(yīng)的金標(biāo)抗原纖維層用玻璃棉，或尼龍纖維膜，或聚酯纖維膜。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的試紙條，其特征是所述纖維素膜層上含有一條或個(gè)檢測(cè)印跡時(shí)，一條或個(gè)檢測(cè)印跡和對(duì)照印跡的排列形式為“||”、“＝”、“//”、“\\”、“-|”、“|-”、“+”、“⊥”、
、“●●”、
中的任一種；纖維素膜層上含有兩條或個(gè)檢測(cè)印跡時(shí)，兩條或個(gè)檢測(cè)印跡和對(duì)照印跡的排列形式為“|||”、
“///”、“\\\”、“●●●”、
中的任一種；纖維素膜層上含有三條或個(gè)檢測(cè)印跡時(shí)，三條或個(gè)檢測(cè)印跡和對(duì)照印跡的排列形式為“||||”、
“////”、“\\\\”、
“●●●●”、
中的任一種。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的試紙條，其特征是所述纖維素膜層上依次含有用純化的豬傳染性胃腸炎病毒TGEV、豬流行性腹瀉病毒PDEV和豬輪狀病毒RV溶液中的任一種印制的直線式檢測(cè)印跡“|”、用羊或兔抗SPA蛋白的IgG溶液或者用羊或兔抗豬傳染性胃腸炎病毒TGEV的IgG溶液/抗豬流行性腹瀉病毒PDEV的IgG溶液/抗豬輪狀病毒RV的IgG溶液中的任一種印制的直線式對(duì)照印跡“|”。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的試紙條，其特征是所述纖維素膜層上依次含有用純化的豬傳染性胃腸炎病毒TGEV、豬流行性腹瀉病毒PDEV和豬輪狀病毒RV溶液中的任兩種印制的雙平行直線式檢測(cè)印跡“||”、用羊或兔抗SPA蛋白的IgG溶液或者用羊或兔抗豬傳染性胃腸炎病毒TGEV的IgG溶液/抗豬流行性腹瀉病毒PDEV的IgG溶液/抗豬輪狀病毒RV的IgG溶液中的任兩種合并印制的一條直線式對(duì)照印跡“|”。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的試紙條，其特征是所述纖維素膜層上依次含有用純化的豬傳染性胃腸炎病毒TGEV、豬流行性腹瀉病毒PDEV和豬輪狀病毒RV溶液印制的三條平行直線式檢測(cè)印跡“|||”，用羊或兔抗SPA蛋白的IgG溶液、或用羊或兔抗豬傳染性胃腸炎病毒TGEV的IgG溶液和抗豬流行性腹瀉病毒PDEV的IgG溶液和抗豬輪狀病毒RV的IgG溶液合并印制的一條直線式對(duì)照印跡“|”。
8.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的試紙條，其特征是在所述測(cè)試端纖維層、吸附金標(biāo)SPA蛋白或金標(biāo)抗原纖維層及吸水材料層上覆蓋有塑膠保護(hù)膜，在測(cè)試端纖維層與金標(biāo)SPA蛋白或金標(biāo)抗原纖維層交界處對(duì)應(yīng)的塑膠保護(hù)膜上印制有樣品標(biāo)記線，該標(biāo)記線偏向測(cè)試端纖維層一側(cè)0.5cm處。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種檢測(cè)一種或多種豬病毒性腹瀉疾病抗體的試紙條；該試紙條含有支撐層和粘貼在其上面的反應(yīng)試劑載體吸附層，反應(yīng)試劑載體吸附層由樣品端依次為測(cè)試端纖維層、吸附金標(biāo)SPA蛋白或與待檢抗體相應(yīng)的金標(biāo)抗原纖維層、纖維素膜層及手柄端的吸水材料層，在纖維素膜層上含有一個(gè)或兩個(gè)或三個(gè)用純化的豬傳染性胃腸炎病毒TGEV、豬流行性腹瀉病毒PDEV和豬輪狀病毒RV溶液中的任一種或任兩種或三種印制的檢測(cè)印跡，纖維素膜層上還含有用羊或兔抗SPA蛋白的IgG溶液或者用羊或兔抗TGEV、PDEV、RV的IgG溶液中的任一種或任兩種或三種印制的對(duì)照印跡；本發(fā)明提供了一種檢測(cè)準(zhǔn)確、快速、使用方便、成本低的檢測(cè)一種或多種豬病毒性腹瀉疾病抗體的試紙條。
文檔編號(hào)G01N33/569GK101358972SQ20081014116
公開(kāi)日2009年2月4日 申請(qǐng)日期2008年8月28日 優(yōu)先權(quán)日2008年8月28日
發(fā)明者張改平, 肖治軍, 楊艷艷, 鄧瑞廣, 李學(xué)伍, 楊繼飛, 東 趙, 王愛(ài)萍, 邢廣旭, 柴書(shū)軍, 劉慶堂 申請(qǐng)人:河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院