專利名稱：適合便攜式微芯片毛細(xì)管電泳設(shè)備的簡易進(jìn)樣方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及適合便攜式芯片毛細(xì)管電泳設(shè)備的簡易進(jìn)樣方法。具體地說，通過傾斜微芯片，樣品池中的液面高度高于樣品廢液池的液面高度，于是產(chǎn)生液壓差，實現(xiàn)了液壓驅(qū)動進(jìn)樣。
背景技術(shù)：
自從Manz等設(shè)計使用了平面玻璃芯片[參見(a)D.J.Harrison，A.Manz，Z.Fan，H.Luedi and H.M.Widmer，Anal.Chem.，1992，64，1926-1932.(b)A.Manz，D.J.Harrison，E.M.J.Verpoorte，J.C.Fettinger，A.Paulus，H.Ludi and H.M.Widmer，J.Chromatogr.A，1992，593，253-258.]，微芯片毛細(xì)管電泳就被廣泛地研究應(yīng)用[參見(a)D.Mijatovic，J.C.T.Eijkel and A.van den Berg，Lab Chip，2005，5，492-500.(b)T.Vilkner，D.Janasek andA.Manz，Anal.Chem.，2004，76，3373-3386.(c)P.S.Dittrich，K.Tachikawa，and A.Manz，Anal.Chem.，2006，78，3887-3907.]。成功地進(jìn)行分析的先決條件是精確地實現(xiàn)微量樣品進(jìn)樣?？蒲泄ぷ魍度肓舜罅康木蜁r間研究和改進(jìn)進(jìn)樣方法，在所有已報道的進(jìn)樣方式中，基于電滲流驅(qū)動的電動進(jìn)樣最為主要法，但這種進(jìn)樣方式有兩個缺點，進(jìn)樣狀況受管道表面性質(zhì)的影響非常大和對于不同淌度的組分進(jìn)樣存在偏差(bias)[參見(a)J.P.Alarie，S.C.Jacobson and J.M.Ramsey，Electrophoresis，2001，22，312-317.(b)B.E.Slentz，N.A.Penner and F.Regnier，Anal.Chem.，2002，74，4835-4840.]。為了避免這種偏差進(jìn)樣，壓力驅(qū)動進(jìn)樣得以應(yīng)用，這種進(jìn)樣方式不受管壁表面和樣品的性質(zhì)的影響。Bai等提出了使用多通進(jìn)樣閥和三個注射泵組成的壓力夾流進(jìn)樣方式，進(jìn)樣量可以達(dá)到納升級[參見X.Bai，H.J.Lee，J.S.Rossier，F(xiàn).Reymond，H.Schafer，M.Wossner and H.H.Girault，Lab Chip，2002，2，45-49.]。Solignac和Gijs建立了一種利用機(jī)械驅(qū)動器，在儲液池的隔膜上施加一個壓力脈沖，實現(xiàn)了樣品流體動力進(jìn)樣[參見D.Solignac and M.A.M.Gijs，Anal.Chem.，2003，75，1652-1657.]。Zhang等建立了一種方法用于微芯片毛細(xì)管電泳的定量準(zhǔn)確、沒有偏差的皮升級的樣品進(jìn)樣，樣品的驅(qū)動是利用注射泵產(chǎn)生的負(fù)壓、電滲流以及芯片儲液池中不同液面高度差產(chǎn)生的液壓共同作用[參見L.Zhang，X.Yinand Z.Fang，Lab Chip，2006，6，258-264.]。Lin課題組報道了在微流控芯片上，通過液壓與電動力相結(jié)合的進(jìn)樣方式[參見H.Gai，L.Yu，Z.Dai，Y.Ma and B.C.Lin，Electrophoresis，2004，25，1888-1894.]，這種進(jìn)樣方式主要的缺點在于存在峰形拖尾，拖尾的影響有時甚至對分離是致命的，使得樣品不能被分離或定量。
還沒有文獻(xiàn)報道使用一種不需要外加設(shè)備且進(jìn)樣效果理想的簡單進(jìn)樣方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種適合便攜式微芯片毛細(xì)管電泳設(shè)備的簡易進(jìn)樣方法。
本發(fā)明的技術(shù)方案如下一種適合便攜式微芯片毛細(xì)管電泳設(shè)備的簡易進(jìn)樣方法，它由下列步驟組成步驟1.將微芯片平放，將樣品溶液注入樣品池中，將磷酸鹽(PBS)緩沖溶液注入樣品廢液池和緩沖液池中，緩沖液廢液池中也注入緩沖溶液，并且與緩沖液池的液面高度基本一致，步驟2.然后將步驟1的微芯片傾斜進(jìn)樣，傾斜的角度為10°-25°，傾斜的方向是使樣品池高，樣品廢液池低，進(jìn)樣40秒鐘，步驟3.將步驟2進(jìn)樣后的微芯片放平，同時施加分離電壓進(jìn)行電泳分離。
上述的進(jìn)樣方法，所述的步驟2，可以用一個固定角度的楔將微芯片傾斜。
本發(fā)明的進(jìn)樣方法簡單易行，進(jìn)樣效果好，基本上不需要額外的進(jìn)樣設(shè)備。


圖1為本發(fā)明中測量電滲流時所應(yīng)用的微芯片示意圖，其中A為緩沖液池，B為分離管道出口，C為樣品池，D為樣品廢液池，E為進(jìn)樣管道和分離管道交叉口，F(xiàn)為緩沖液廢液池，WE為電化學(xué)工作電極。
圖2為本發(fā)明的實施例中500μM多巴胺和500μM兒茶酚的混合溶液實施液壓進(jìn)樣后芯片電泳的分離電泳圖，圖中5納安標(biāo)尺說明峰高的強(qiáng)度，A為多巴胺，B為兒茶酚。
具體實施例方式
實施例1.利用本發(fā)明的進(jìn)樣方式，以多巴胺和兒茶酚混合樣品實施微芯片毛細(xì)管電泳分離測定。
利用500μM多巴胺和500μM兒茶酚的標(biāo)準(zhǔn)溶液來檢驗本發(fā)明的進(jìn)樣方法的效果。
將微芯片平放，將13.5μL的500μM多巴胺和500μM兒茶酚混合樣品溶液放入樣品池(C)中(液面高度大約為0.27cm)，15μL20mM的磷酸鹽(PBS)緩沖溶液放入樣品廢液池(D)和緩沖液池(A)中(液面高度大約為0.30cm)，緩沖液廢液池(F)中也放入20mM的PBS緩沖溶液，并且與緩沖液池(A)的液面高度基本一致。然后將微芯片傾斜進(jìn)樣，用一個固定角度17°的楔使微芯片傾斜17°。進(jìn)樣40秒后，將微芯片放平，同時施加分離電壓800V進(jìn)行電泳分離，在檢測電位+1.4V(vs.Ag/AgCl電極)進(jìn)行檢測。得到電泳圖，見圖2。根據(jù)峰形和分離效果來看，進(jìn)樣效果完全滿足芯片毛細(xì)管電泳的要求。
實施例2.
除了將楔的角度改成10°，使微芯片傾斜10°以外，其他都同實施例1，其分離效果與實施例1的分離效果相同。
實施例3.
除了將楔的角度改成25°，使微芯片傾斜25°以外，其他都同實施例1，其分離效果與實施例1的分離效果相同。
權(quán)利要求
1.一種適合便攜式微芯片毛細(xì)管電泳設(shè)備的簡易進(jìn)樣方法，其特征是它由下列步驟組成步驟1.將微芯片平放，將樣品溶液注入樣品池中，將磷酸鹽(PBS)緩沖溶液注入樣品廢液池和緩沖液池中，緩沖液廢液池中也注入緩沖溶液，并且與緩沖液池的液面高度基本一致，步驟2.然后將步驟1的微芯片傾斜進(jìn)樣，傾斜的角度為10°-25°，傾斜的方向是使樣品池高，樣品廢液池低，進(jìn)樣40秒鐘，步驟3.將步驟2進(jìn)樣后的微芯片放平，同時施加分離電壓進(jìn)行電泳分離。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的進(jìn)樣方法，其特征是所述的步驟2中，用一個固定角度的楔將微芯片傾斜。
全文摘要
一種適合便攜式微芯片毛細(xì)管電泳設(shè)備的簡易進(jìn)樣方法，它是將微芯片平放，將樣品溶液注入樣品池中，將磷酸鹽(PBS)緩沖溶液注入樣品廢液池和緩沖液池中，緩沖液廢液池中也注入緩沖溶液，并且與緩沖液池的液面高度基本一致，然后將微芯片傾斜進(jìn)樣，傾斜的角度為10°－25°，傾斜的方向是使樣品池高，樣品廢液池低，進(jìn)樣40秒鐘，將進(jìn)樣后的微芯片放平，同時施加分離電壓進(jìn)行電泳分離。本發(fā)明的進(jìn)樣方法簡單易行，進(jìn)樣效果好，基本上不需要進(jìn)樣設(shè)備。
文檔編號G01N27/447GK101034080SQ20071002138
公開日2007年9月12日 申請日期2007年4月10日 優(yōu)先權(quán)日2007年4月10日
發(fā)明者王偉, 周方, 朱俊杰, 張劍榮 申請人:南京大學(xué), 鹽城工學(xué)院