專利名稱：一種治療心腦血管疾病的注射用丹紅凍干粉的制備方法及檢測方法
專利說明一種治療心腦血管疾病的注射用丹紅凍干粉的制備方法及檢測方法 本發(fā)明涉及中藥的制備工藝技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及注射用丹紅凍干粉的制備工藝[背景技術(shù)]丹紅注射液是由丹參、紅花組成，現(xiàn)代藥理分析丹參含有丹參酮、丹參酚、維生素E等物質(zhì)，具有入心包，通心竅，活血化淤作用。紅花為菊科植物紅花的干燥花，是我國傳統(tǒng)中藥材，其性味辛溫亦入心經(jīng)，能擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈，增加冠狀動(dòng)脈血流量，并能降低心肌耗氧量，被現(xiàn)代醫(yī)學(xué)廣泛用于治療心血管系統(tǒng)疾病中。該配方科學(xué)合理，符合中醫(yī)理論，二藥合用能起到活血通絡(luò)、化淤溶栓的藥理作用。臨床上主要用于瘀血閉阻所致的胸痹及中風(fēng)、冠心病、心絞痛、心肌梗塞、缺血性腦病、腦血栓及肺心病所瘀諸癥。丹紅注射液臨床使用多年，安全可靠，取得了較滿意的臨床療效。
原劑型注射液中丹參稀醇提，藥渣與紅花溫浸，提取液冷藏沉淀得注射液。由于該注射液使用的是水溶性部分，且原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的制法中無純化過程，不能除去大部分雜質(zhì)，產(chǎn)品質(zhì)量控制難度大，制劑質(zhì)量低，另外原劑型注射液的穩(wěn)定性差，不利于運(yùn)輸、貯存。本發(fā)明的目的是提供一種有效成分提取較充分、產(chǎn)品質(zhì)量好、產(chǎn)品穩(wěn)定性較好的一種治療心腦血管疾病的注射用丹紅凍干粉的制備方法。
本發(fā)明的技術(shù)方案如下一種治療心腦血管疾病的注射用丹紅凍干粉的制備方法，包括丹參、紅花二味藥材分開提取，水提醇沉法制備注射用丹紅原液和注射用丹紅凍干粉的制備一、丹參水提取丹參，加水6～10倍量(重量比)，煎煮2～4次，每次1～2小時(shí)，合并煎液，濾過；二、紅花水提取紅花加水15～25倍量(重量比)，70℃～90℃溫浸2～3次，每次1～2小時(shí)，合并煎液，濾過；
三、水提醇沉法制備注射用丹紅原液合并丹參和紅花的水提濾液，減壓濃縮至相對密度為1.10～1.15(60℃)的清膏，加入乙醇使含醇量達(dá)60％～70％，冷藏18～30小時(shí)，濾過，濾液回收乙醇，濃縮至相對密度為1.15～1.20(60℃)的清膏，再加入乙醇使含醇量達(dá)70％～75％，冷藏18～30小時(shí)，濾過，用30％～50％氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至7.0～8.0，冷藏8～16小時(shí)，濾過，濾液回收乙醇，加入注射用水至每1ml含生藥0.5g～1.5g，冷藏8～16小時(shí)，濾過，濾液濃縮至每1ml含生藥2.5g～3.0g，用鹽酸調(diào)節(jié)PH值至2.0～4.0，冷藏42～52小時(shí)，濾過，用20％～30％氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至6.0～7.0，作為注射用丹紅的原液；注射用丹紅原液質(zhì)量控制(1)相對密度為1.13～1.38；(2)指紋圖譜按國家藥典會提供的中藥色譜指紋圖譜相似度評價(jià)系統(tǒng)與標(biāo)準(zhǔn)圖譜比較，相似度不得低于0.95；3)每1ml含丹參以丹參素鈉(C9H9O5Na)、原兒茶醛(C7H6O3)、丹酚酸B(C36H30O16)的總量計(jì)不少于8.75mg；(4)每1ml含紅花以羥基紅花黃色素A(C27H30O15)計(jì)不少于0.5m；四、注射用丹紅凍干粉的制備向注射用丹紅的原液中加入甘露醇，溶解，加0.1％(g/ml)活性炭，攪拌10～20分鐘，濾過，濾液加注射用水制成每1ml含生藥2～4g，含甘露醇0.06g～0.13g，混勻；經(jīng)除菌過濾(0.22μm濾膜過濾)，無菌條件下灌裝；將灌裝藥液置降溫至-40℃～-50℃的凍干箱中，預(yù)凍3～6小時(shí)，冷凝器溫度-45℃～-55℃，抽真空至10Pa，-15℃～-30℃第一次升華20～40小時(shí)，至水層消失；25℃～35℃第二次升華10～20小時(shí)，抽真空壓塞，軋蓋，合格品按包裝要求進(jìn)行外包裝，即得；注射用丹紅質(zhì)量控制(1)指紋圖譜按國家藥典會提供的中藥色譜指紋圖譜相似度評價(jià)系統(tǒng)與標(biāo)準(zhǔn)圖譜比較，相似度不得低于0.95；(2)每瓶含丹參以丹參素鈉(C9H9O5Na)、原兒茶醛(C7H6O3)、丹酚酸B(C36H30O16)的總量計(jì)，不少于70mg；(3)每瓶含紅花以羥基紅花黃色素A(C27H30O15)計(jì)，不少于4.0mg；(4)每瓶含水溶性總酚酸以丹參素鈉(C9H9O5Na)計(jì)，不少于0.24g。
注射用丹紅原液的測定方法相對密度取本品溶液，依法測定(中國藥典2005年版一部附錄VII A)，應(yīng)控制在1.13～1.38；
指紋圖譜1、色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈-0.1％磷酸溶液為流動(dòng)相，梯度洗脫0～60分鐘，乙腈從0％上升為35％；檢測波長為238nm；柱溫25℃；流速1ml/min。理論板數(shù)按原兒茶醛峰計(jì)算應(yīng)不低于3000；2、參照物溶液的制備 取以五氧化二磷為干燥劑減壓干燥24小時(shí)的丹參素鈉、原兒茶醛、丹酚酸B、羥基紅花黃色素A對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml各含85μg、13μg、440μg、25μg的溶液，即得；3、供試品溶液的制備 取本品1ml，置25ml量瓶中加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得；4、測定法 分別精密吸取供試品溶液與參照物溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，按國家藥典會提供的中藥色譜指紋圖譜相似度評價(jià)系統(tǒng)與標(biāo)準(zhǔn)圖譜比較，相似度不得低于0.95。
丹參含量的測定1、色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-0.1％磷酸溶液為流動(dòng)相(梯度洗脫0～60分鐘，乙腈從0％上升至35％)；檢測波長為280nm；柱溫25℃；理論板數(shù)按原兒茶醛峰計(jì)算應(yīng)不低于3000；2、對照品溶液的制備 取丹參素鈉、原兒茶醛、丹酚酸B對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml各含85μg、13μg、440μg的溶液，即得；3、供試品溶液的制備 取本品1ml，置25ml量瓶中加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得；4、測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得；含丹參以丹參素鈉(C9H9O5Na)、原兒茶醛(C7H6O3)、丹酚酸B(C36H30O16)的總量計(jì)，每1ml不得少于8.75mg。
紅花含量的測定1、色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-0.1％磷酸溶液為流動(dòng)相(梯度洗脫0～60分鐘，乙腈從0％上升至35％)；檢測波長為403nm；柱溫25℃；理論板數(shù)按羥基紅花黃色素A峰計(jì)算應(yīng)不低于3000；2、對照品溶液的制備取羥基紅花黃色素A對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml約含25μg的溶液，即得；3、供試品溶液的制備取本品1ml，置25ml量瓶中加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得；4、測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得；含紅花以羥基紅花黃色素A(C27H30O15)計(jì)，每1ml不得少于0.5mg。
注射用丹紅凍干粉的測定指紋圖譜1、色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈-0.1％磷酸溶液為流動(dòng)相，梯度洗脫0～60分鐘，乙腈從0％上升為35％；檢測波長為238nm；柱溫25℃；流速1ml/min。理論板數(shù)按原兒茶醛峰計(jì)算應(yīng)不低于3000；2、參照物溶液的制備取以五氧化二磷為干燥劑減壓干燥24小時(shí)的丹參素鈉、原兒茶醛、丹酚酸B、羥基紅花黃色素A對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml各含85μg、13μg、440μg、25μg的溶液，即得；3、供試品溶液的制備取本品約0.2g，精密稱定，置25ml量瓶中加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得；4、測定法分別精密吸取供試品溶液與參照物溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，按國家藥典會提供的中藥色譜指紋圖譜相似度評價(jià)系統(tǒng)與標(biāo)準(zhǔn)圖譜比較，相似度不得低于0.95。
注射用丹紅凍干粉中丹參含量的測定1、色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-0.1％磷酸溶液為流動(dòng)相(梯度洗脫0～60分鐘，乙腈從0％上升至35％)；檢測波長為280nm；柱溫25℃；理論板數(shù)按原兒茶醛峰計(jì)算應(yīng)不低于3000；2、對照品溶液的制備取丹參素鈉、原兒茶醛、丹酚酸B對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml各含85μg、13μg、440μg的溶液，即得；3、供試品溶液的制備取本品約0.2g，精密稱定，置25ml量瓶中加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得；4、測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得；每瓶含丹參以丹參素鈉(C9H9O5Na)、原兒茶醛(C7H6O3)、丹酚酸B(C36H30O16)的總量計(jì)，不得少于70mg。
注射用丹紅凍干粉中紅花含量測定1、色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-0.1％磷酸溶液為流動(dòng)相(梯度洗脫0～60分鐘，乙腈從0％上升至35％)；檢測波長為403nm；柱溫25℃；理論板數(shù)按羥基紅花黃色素A峰計(jì)算應(yīng)不低于3000；2、對照品溶液的制備取羥基紅花黃色素A對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml約含25μg的溶液，即得；3、供試品溶液的制備取本品約0.2g，精密稱定，置25ml量瓶中加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得；4、測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得；每瓶含紅花以羥基紅花黃色素A(C27H30O15)計(jì)，不得少于4.0mg。
注射用丹紅凍干粉中水溶性總酚酸含量的測定1、對照品溶液的制備取丹參素鈉對照品適量，精密稱定，加水制成每1ml含45μg的溶液，搖勻，即得；2、供試品溶液的制備取本品約0.2g，精密稱定，置50ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取2ml置50ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得；3、測定法分別取對照品溶液與供試品溶液，照紫外可見分光光度法(中國藥典2005年版一部附錄VA)，在280nm的波長處測定吸收度，計(jì)算，即得；每瓶含水溶性總酚酸以丹參素鈉(C9H9O5Na)計(jì)，不得少于0.24g。
本發(fā)明注射用丹紅的制備方法提供了一種科學(xué)規(guī)范的的提取工藝，使有效成份更加有效的提取出來。參照丹參類注射液傳統(tǒng)提取純化工藝，采用水提醇沉法，對紅花進(jìn)行水提正交設(shè)計(jì)、丹參水提正交設(shè)計(jì)，最終確定紅花溫浸、丹參煎煮，合并二者提取液濃縮進(jìn)行醇沉純化，對濃縮液的相對密度、醇沉濃度等進(jìn)行了優(yōu)化選擇，并用丹酚酸B、丹參素鈉、原兒茶醛、紅花黃色素進(jìn)行了多指標(biāo)綜合評價(jià)各參數(shù)的選擇，生產(chǎn)出來的產(chǎn)品質(zhì)量高，穩(wěn)定性好。
通過浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)院進(jìn)行主要藥效學(xué)試驗(yàn)、一般藥理試驗(yàn)、急性毒性試驗(yàn)、大鼠長期毒性試驗(yàn)、犬長期毒性試驗(yàn)、血管、肌肉刺激試驗(yàn)、過敏試驗(yàn)、溶血試驗(yàn)等系列試驗(yàn)。表明我公司生產(chǎn)的注射用丹紅安全性、有效性得到了可靠保證。
主要藥效學(xué)試驗(yàn)結(jié)果表明注射用丹紅能明顯制冠狀動(dòng)脈結(jié)扎引起的心肌缺血和梗死范圍，使不同方法引起小鼠和大鼠腦缺血程度明顯降低，降低腦血管阻力增加腦血流量，提高動(dòng)物耐缺氧能力、改善血液流變性、抑制血小板聚集、擴(kuò)張血管等，提示注射用丹紅對缺血性心、腦血管疾病具有明顯的治療作用。
一般藥理試驗(yàn)表明注射用丹紅20g/kg對小鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)有一定的抑制作用，而10g/kg和5g/kg對小鼠對中樞神經(jīng)系統(tǒng)無明顯影響，4g/kg和2g/kg對家犬呼吸和循環(huán)系統(tǒng)均無明顯不良影響。
急性毒性試驗(yàn)結(jié)果表明注射用丹紅推薦臨床最大劑量為滴注60g生藥/人/天，相當(dāng)于1.0g/kg。小鼠尾靜脈注射最大給藥量160g生藥/kg，是推薦臨床大劑量的160倍。大鼠腹腔注射最大給藥量240g生藥/kg，是推薦臨床大劑量的240倍。
大鼠長期毒性試驗(yàn)結(jié)果表明注射用丹紅推薦臨床最大劑量的15倍(15g/kg)連續(xù)3個(gè)月腹腔注射給藥對大鼠無明顯的不良影響。
犬長期毒性試驗(yàn)表明注射用丹紅30、15和7.5g/kg給Beagle犬連續(xù)靜脈滴注給藥13周(3個(gè)月)，對犬的一般狀況、體溫、凝血時(shí)間、血常規(guī)、尿常規(guī)、心電圖和血清生化主要指標(biāo)等均無明顯不良影響；犬主要臟器巨檢和組織病理學(xué)檢查均未發(fā)現(xiàn)與用藥有關(guān)的異常變化。提示注射用丹紅30g/kg連續(xù)靜脈滴注3個(gè)月對Beagle犬無明顯的毒副作用。
血管刺激試驗(yàn)表明注射用丹紅(1g/ml)按5ml/kg(劑量為5g/kg)給家兔耳緣靜脈注射，1天1次，連續(xù)3天，經(jīng)肉眼觀察及組織病理學(xué)檢查，血管及周圍組織無異常發(fā)現(xiàn)，提示注射用丹紅對血管無刺激性。
肌肉刺激試驗(yàn)表明注射用丹紅按0.5ml/kg(劑量為2g/kg)給家兔肌肉注射1次，經(jīng)肉眼觀察及組織病理學(xué)檢查，肌肉組織均無異常發(fā)現(xiàn)，提示注射用丹紅對肌肉無刺激性。
過敏試驗(yàn)表明注射用丹紅(4g/ml)0.5ml/只，隔日1次給豚鼠腹腔注射3次致敏，在首次注射后第14天和21天，以4倍致敏劑量耳靜脈注射激發(fā)，結(jié)果豚鼠無明顯過敏反應(yīng)出現(xiàn)。
被動(dòng)皮膚過敏試驗(yàn)表明注射用丹紅2g/只和0.5g/只兩個(gè)劑量隔日1次給豚鼠腹腔注射致敏，共5次，致敏豚鼠血清不引起正常豚鼠被動(dòng)皮膚過敏反應(yīng)。
溶血試驗(yàn)表明注射用丹紅(終濃度0.08-0.40g/ml)與兔紅細(xì)胞生理鹽水混懸液溫浴不產(chǎn)生溶血反應(yīng)，也不引起紅細(xì)凝聚。附圖
是注射用丹紅原液和注射用丹紅凍干粉的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。
附圖中橫坐標(biāo)為保留時(shí)間(分鐘)，縱坐標(biāo)為電平響應(yīng)值(mV或mAU)。
附圖中有9個(gè)標(biāo)注*的峰為注射用丹紅原液和注射用丹紅凍干粉標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的主要成份峰。其保留時(shí)間分別約為14.5分鐘、19.5分鐘、26.1分鐘、39.7分鐘、43.8分鐘、44.9分鐘、47.3分鐘、47.9分鐘、49.4分鐘。一種治療心腦血管疾病的注射用丹紅凍干粉的制備方法，包括丹參、紅花二味藥材分開提取，水提醇沉法制備注射用丹紅原液和注射用丹紅凍干粉的制備1、丹參15kg加水8倍量，煎煮三次，每次1.5小時(shí)，合并煎液，濾過；2、紅花5kg加水20倍量，80℃溫浸兩次，每次1小時(shí)，濾過；3、合并上述濾液，減壓濃縮至相對密度為1.15(60℃)的清膏，加入乙醇使含醇量達(dá)70％，冷藏24小時(shí)，濾過，濾液回收乙醇，濃縮至相對密度為1.20(60℃)的清膏，再加入乙醇使含醇量達(dá)75％，冷藏24小時(shí)，濾過，用40％氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至7.5，冷藏18小時(shí)，濾過，濾液回收乙醇，加入注射用水至20升，冷藏20小時(shí)，濾過，濾液濃縮至每1ml含生藥2.8g，用鹽酸調(diào)節(jié)PH值至3.0，冷藏48小時(shí)，濾過，用20％氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至6.5，作為注射用丹紅的原液。
4、向注射用丹紅的原液中加入甘露醇，溶解，加0.1％(g/ml)活性炭，攪拌10分鐘，濾過，濾液加注射用水制成每1ml含生藥2.5g，含甘露醇0.08g，混勻；經(jīng)除菌過濾(0.22μm濾膜過濾)，無菌條件下灌裝。
5、將灌裝藥液置降溫至-50℃的凍干箱中，預(yù)凍4小時(shí)，冷凝器溫度-53℃，抽真空至10Pa，-25℃第一次升華約30小時(shí)，至水層消失；30℃第二次升華約15小時(shí)，抽真空壓塞，軋蓋，合格品按包裝要求進(jìn)行外包裝，即得。
權(quán)利要求
1.一種治療心腦血管疾病的注射用丹紅凍干粉的制備方法，包括丹參、紅花二味藥材分開提取，水提醇沉法制備注射用丹紅原液和注射用丹紅凍干粉的制備(1)丹參水提取丹參，加水6～10倍量(重量比)，煎煮2～4次，每次1～2小時(shí)，合并煎液，濾過；(2)紅花水提取紅花加水15～25倍量(重量比)，70℃～90℃溫浸2～3次，每次1～2小時(shí)，合并煎液，濾過；(3)水提醇沉法制備注射用丹紅原液合并丹參和紅花的水提濾液，減壓濃縮至相對密度為1.10～1.15(60℃)的清膏，加入乙醇使含醇量達(dá)60％～70％，冷藏18～30小時(shí)，濾過，濾液回收乙醇，濃縮至相對密度為1.15～1.20(60℃)的清膏，再加入乙醇使含醇量達(dá)70％～75％，冷藏18～30小時(shí)，濾過，用30％～50％氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至7.0～8.0，冷藏8～16小時(shí)，濾過，濾液回收乙醇，加入注射用水至每1ml含生藥0.5g～1.5g，冷藏8～16小時(shí)，濾過，濾液濃縮至每1ml含生藥2.5g～3.0g，用鹽酸調(diào)節(jié)PH值至2.0～4.0，冷藏42～52小時(shí)，濾過，用20％～30％氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至6.0～7.0，作為注射用丹紅的原液；注射用丹紅原液質(zhì)量控制(1)相對密度為1.13～1.38；(2)指紋圖譜按國家藥典會提供的中藥色譜指紋圖譜相似度評價(jià)系統(tǒng)與標(biāo)準(zhǔn)圖譜比較，相似度不得低于0.95；3)每1ml含丹參以丹參素鈉、原兒茶醛、丹酚酸B的總量計(jì)不少于8.75mg；(4)每1ml含紅花以羥基紅花黃色素A計(jì)不少于0.5m；(4)注射用丹紅凍干粉的制備向注射用丹紅的原液中加入甘露醇，溶解，加0.1％(g/ml)活性炭，攪拌10～20分鐘，濾過，濾液加注射用水制成每1ml含生藥2～4g，含甘露醇0.06g～0.13g，混勻；經(jīng)0.22μm濾膜過濾除菌，無菌條件下灌裝；將灌裝藥液置降溫至-40℃～-50℃的凍干箱中，預(yù)凍3～6小時(shí)，冷凝器溫度-45℃～-55℃，抽真空至10Pa，-15℃～-30℃第一次升華20～40小時(shí)，至水層消失；25℃～35℃第二次升華10～20小時(shí)，抽真空壓塞，軋蓋，合格品按包裝要求進(jìn)行外包裝，即得；注射用丹紅質(zhì)量控制(1)指紋圖譜按國家藥典會提供的中藥色譜指紋圖譜相似度評價(jià)系統(tǒng)與標(biāo)準(zhǔn)圖譜比較，相似度不得低于0.95；(2)每瓶含丹參以丹參素鈉、原兒茶醛、丹酚酸B的總量計(jì)，不少于70mg；(3)每瓶含紅花以羥基紅花黃色素A計(jì)，不少于4.0mg；(4)每瓶含水溶性總酚酸以丹參素鈉計(jì)，不少于0.24g。
2.注射用丹紅原液的測定方法相對密度取本品溶液，依法測定中國藥典2005年版一部附錄VIIA，應(yīng)控制在1.13～1.38；指紋圖譜(1)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈-0.1％磷酸溶液為流動(dòng)相，梯度洗脫0～60分鐘，乙腈從0％上升為35％；檢測波長為238nm；柱溫25℃；流速1ml/min。理論板數(shù)按原兒茶醛峰計(jì)算應(yīng)不低于3000；(2)參照物溶液的制備取以五氧化二磷為干燥劑減壓干燥24小時(shí)的丹參素鈉、原兒茶醛、丹酚酸B、羥基紅花黃色素A對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml各含85μg、13μg、440μg、25μg的溶液，即得；(3)供試品溶液的制備取本品1ml，置25ml量瓶中加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得；(4)測定法分別精密吸取供試品溶液與參照物溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，按國家藥典會提供的中藥色譜指紋圖譜相似度評價(jià)系統(tǒng)與標(biāo)準(zhǔn)圖譜比較，相似度不得低于0.95。
3.注射用丹紅原液中丹參含量的測定方法(1)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-0.1％磷酸溶液為流動(dòng)相，梯度洗脫0～60分鐘，乙腈從0％上升至35％；檢測波長為280nm；柱溫25℃；理論板數(shù)按原兒茶醛峰計(jì)算應(yīng)不低于3000；(2)對照品溶液的制備取丹參素鈉、原兒茶醛、丹酚酸B對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml各含85μg、13μg、440μg的溶液，即得；(3)供試品溶液的制備取本品1ml，置25ml量瓶中加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得；(4)測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得；含丹參以丹參素鈉、原兒茶醛、丹酚酸B的總量計(jì)，每1ml不得少于8.75mg。
4.注射用丹紅原液中紅花含量的測定方法(1)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-0.1％磷酸溶液為流動(dòng)相，梯度洗脫0～60分鐘，乙腈從0％上升至35％；檢測波長為403nm；柱溫25℃；理論板數(shù)按羥基紅花黃色素A峰計(jì)算應(yīng)不低于3000；(2)、對照品溶液的制備取羥基紅花黃色素A對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml約含25μg的溶液，即得；(3)、供試品溶液的制備取本品1ml，置25ml量瓶中加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得；(4)測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得；含紅花以羥基紅花黃色素A計(jì)，每1ml不得少于0.5mg。
5.注射用丹紅凍干粉指紋圖譜的測定方法(1)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈-0.1％磷酸溶液為流動(dòng)相，梯度洗脫0～60分鐘，乙腈從0％上升為35％；檢測波長為238nm；柱溫25℃；流速1ml/min；理論板數(shù)按原兒茶醛峰計(jì)算應(yīng)不低于3000；(2)參照物溶液的制備取以五氧化二磷為干燥劑減壓干燥24小時(shí)的丹參素鈉、原兒茶醛、丹酚酸B、羥基紅花黃色素A對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml各含85μg、13μg、440μg、25μg的溶液，即得；(3)供試品溶液的制備取本品約0.2g，精密稱定，置25ml量瓶中加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得；(4)測定法分別精密吸取供試品溶液與參照物溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，按國家藥典會提供的中藥色譜指紋圖譜相似度評價(jià)系統(tǒng)與標(biāo)準(zhǔn)圖譜比較，相似度不得低于0.95。
6.注射用丹紅凍干粉中丹參含量的測定方法(1)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-0.1％磷酸溶液為流動(dòng)相，梯度洗脫0～60分鐘，乙腈從0％上升至35％；檢測波長為280nm；柱溫25℃；理論板數(shù)按原兒茶醛峰計(jì)算應(yīng)不低于3000；(2)對照品溶液的制備取丹參素鈉、原兒茶醛、丹酚酸B對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml各含85μg、13μg、440μg的溶液，即得；(3)供試品溶液的制備取本品約0.2g，精密稱定，置25ml量瓶中加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得；(4)測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得；每瓶含丹參以丹參素鈉、原兒茶醛、丹酚酸B的總量計(jì)，不得少于70mg。
7.注射用丹紅凍干粉中紅花含量的測定方法(1)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-0.1％磷酸溶液為流動(dòng)相，梯度洗脫0～60分鐘，乙腈從0％上升至35％；檢測波長為403nm；柱溫25℃；理論板數(shù)按羥基紅花黃色素A峰計(jì)算應(yīng)不低于3000；(2)對照品溶液的制備取羥基紅花黃色素A對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml約含25μg的溶液，即得；(3)供試品溶液的制備取本品約0.2g，精密稱定，置25ml量瓶中加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得；(4)測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得；每瓶含紅花以羥基紅花黃色素A計(jì)，不得少于4.0mg。
8.注射用丹紅凍干粉中水溶性總酚酸含量的測定方法(1)對照品溶液的制備取丹參素鈉對照品適量，精密稱定，加水制成每1ml含45μg的溶液，搖勻，即得；(2)、供試品溶液的制備取本品約0.2g，精密稱定，置50ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取2ml置50ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得；(3)測定法分別取對照品溶液與供試品溶液，按照《中國藥典2005年版一部附錄VA》紫外可見分光光度法，在280nm的波長處測定吸收度，計(jì)算，即得；每瓶含水溶性總酚酸以丹參素鈉計(jì)，不得少于0.24g。
全文摘要
一種治療心腦血管疾病的注射用丹紅凍干粉的制備方法及檢測方法，涉及注射用丹紅凍干粉的制備工藝。原注射液使用的是水溶性部分，且原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的制法中無純化過程，不能除去大部分雜質(zhì)，產(chǎn)品質(zhì)量控制難度大，制劑質(zhì)量低，另外原劑型注射液的穩(wěn)定性差，不利于運(yùn)輸、貯存。本發(fā)明提供了一種科學(xué)規(guī)范的的提取工藝，使有效成份更加有效的提取出來。參照丹參類注射液傳統(tǒng)提取純化工藝，采用水提醇沉法，對紅花進(jìn)行水提正交設(shè)計(jì)、丹參水提正交設(shè)計(jì)，最終確定紅花溫浸、丹參煎煮，合并二者提取液濃縮進(jìn)行醇沉純化，對濃縮液的相對密度、醇沉濃度等進(jìn)行了優(yōu)化選擇，并用丹酚酸B、丹參素鈉、原兒茶醛、紅花黃色素進(jìn)行了多指標(biāo)綜合評價(jià)各參數(shù)的選擇，生產(chǎn)出來的產(chǎn)品質(zhì)量高，穩(wěn)定性好。
文檔編號G01N30/02GK1872148SQ200610075039
公開日2006年12月6日 申請日期2006年3月29日 優(yōu)先權(quán)日2006年3月29日
發(fā)明者湯旭東, 朱正兵 申請人:?？诳盗υ扑幱邢薰?br>