專利名稱：快速Feulgen染色方法
技術領域：
本發(fā)明屬于生物細胞、組織染色技術領域，特別涉及一種快速Feulgen染色方法。
背景技術：
在常規(guī)的細胞涂片、組織印片、冷凍切片、快速石蠟切片或滴片的病理診斷過程中，單憑病理細胞、組織的形態(tài)判斷其良惡性狀態(tài)遇到困難時，細胞核DNA含量的測量和倍體分析可提供重要參考。為此，要求細胞核DNA的Feulgen染色法能滿足臨床快速病理診斷的要求。
根據(jù)細胞核DNA細胞化學染色的原理，染色過程中的鹽酸水解和Schiff’s試劑染色兩項操作步驟是非常關鍵和重要的。細胞核DNA經鹽酸水解，使其脫氧戊糖和嘌呤之間的糖苷鍵斷開，戊糖端形成醛基，與Schiff’s試劑結合生成紫紅色化合物。傳統(tǒng)的Feulgen染色法使用1N的鹽酸，在60℃的條件下水解細胞核DNA一小時，水解結果不穩(wěn)定，染色效果較差，已被十多年前的改良Feulgen染色法所替代，即室溫條件下，使用5N的鹽酸水解和Schiff’s試劑染色各約一小時左右，取得了良好的染色效果，并廣泛用于細胞核DNA含量的定量分析。然而，這些方法的完整染色時間達兩個多小時，不適合臨床快速病理診斷應用。所以，不斷有人作縮短Feulgen染色時間的嘗試。龔志錦等在室溫下用7N、8N鹽酸水解細胞核DNA的Feulgen染色法，取得了較好染色效果，染色時間縮短至45～50分鐘。凌玉琴等應用微波爐處理的Feulgen染色法，極大地縮短了染色時間。但是，染色過程中對微波爐輸出功率的準確性要求很高，染色效果不穩(wěn)定，F(xiàn)eulgen染色液也只能一次性使用。因此，其在臨床診斷方面的應用受到極大的限制。

發(fā)明內容
為了解決上述現(xiàn)有技術中存在的不足之處，本發(fā)明的目的在于提供一種快速、簡便、穩(wěn)定、易于自動化操作的Feulgen染色方法，該方法具有良好的染色效果，大大縮短了染色時間。
本發(fā)明的目的通過下述技術方案實現(xiàn)一種快速Feulgen染色方法，包括如下步驟將細胞涂片、組織印片、冷凍切片、石蠟切片或滴片等先放入4～6N鹽酸水解3～10min，再放入Schiff’s試劑中染色8～15min，自來水沖洗2～5min，蒸餾水漂洗2～3次，快速梯度乙醇脫水，封片。
為了更好地實現(xiàn)本發(fā)明，所述鹽酸和Schiff’s試劑均須先預熱達50～70℃，所述整個鹽酸水解過程和Schiff’s試劑染色過程均在50～70℃的溫度進行。
所述鹽酸和Schiff’s試劑可以反復多次使用而不需任何處理。
本發(fā)明與現(xiàn)有技術相比，具有如下優(yōu)點和有益效果本發(fā)明采用4～6N鹽酸水解過程和Schiff’s試劑染色過程都在50～70℃恒溫箱內進行，操作簡單，染色效果穩(wěn)定，染色時間縮短到不足20分鐘，既滿足臨床快速診斷要求，也適合進行細胞核DNA含量與倍體的定量分析，而且4～6N鹽酸溶液和Schiff’s試劑可以反復多次使用。如果與自動染片機結合，整個Feulgen染色過程可由機器自動完成，適合試劑或染色機生產廠家研發(fā)新的染色機和染色試劑盒進行推廣。


圖1為快速Feulgen染色法染肝細胞核涂片圖。
圖2為10只小鼠肝細胞涂片的DNA含量直方圖。
具體實施例方式
下面結合附圖及實施例對本發(fā)明作進一步詳細的描述，但本發(fā)明的實施方式不限于此。
實施例1生后30天昆明小白鼠10只，制備肝細胞懸液涂片，室溫干燥，4％多聚甲醛固定3min。每只小鼠的肝細胞涂片按下述方法進行Feulgen染色5N鹽酸和Schiff’s試劑放入60℃的恒溫箱中預熱至60℃，固定后的肝細胞涂片先放入5N鹽酸水解5min，再放入Schiff’s試劑中染色10min，自來水沖洗3min，蒸餾水漂洗3次，快速梯度乙醇脫水，封片。5N鹽酸和Schiff’s試劑均須先預熱達60℃，整個鹽酸水解過程和Schiff’s試劑染色過程均在60℃的溫度下進行。
按柯勒照明要求調整LEICA LB顯微鏡光源，在物鏡(20×NA0.5)與黑白攝像機之間插入535/35的帶通濾光片，按TIGER細胞圖像分析儀(已用顯微測微臺尺和中國計量科學院出產的標準密度片標定其幾何標尺和吸光度值)測量吸光度的要求校正系統(tǒng)基準，隨機攝取肝細胞涂片上聚焦的肝細胞核圖像(每只小鼠不少于10幀，細胞核總數(shù)不少于500個)，按TIGER細胞圖像分析儀測量吸光度的操作要求，測量單個肝細胞核的DNA總量，以面積積分吸光度(IA)表述。
如圖1所示，肝細胞涂片內肝細胞單個核分布均勻，大小差異明顯，染色深，呈紫紅色，核內結構清晰，背景著色淡。圖2為2c、4c、8c肝細胞單個核的DNA總量均值直方圖，其CV值均＜10％，各倍體肝細胞單個核的DNA含量均值的比值均接近于2或4，呈明顯的倍數(shù)關系。
實施例2本發(fā)明快速Feulgen染色方法，包括如下步驟4N鹽酸和Schiff’s試劑放入50℃的恒溫箱中預熱至50℃，將肝組織印片先放入4N鹽酸水解3min，再放入Schiff’s試劑中染色8min，自來水沖洗2min，蒸餾水漂洗2次，快速梯度乙醇脫水，封片。整個鹽酸水解過程和Schiff’s試劑染色過程均在50℃的溫度下進行。4N鹽酸溶液和Schiff’s試劑可以反復多次使用而不需任何處理。
實施例3本發(fā)明快速Feulgen染色方法，包括如下步驟6N鹽酸和Schiff’s試劑放入70℃的恒溫箱中預熱至70℃，將肝組織冷凍切片先放入6N鹽酸水解10min，再放入Schiff’s試劑中染色15min，自來水沖洗5min，蒸餾水漂洗3次，快速梯度乙醇脫水，封片。所述整個鹽酸水解過程和Schiff’s試劑染色過程均在70℃的溫度下進行。6N鹽酸溶液和Schiff’s試劑可以反復多次使用而不需任何處理。
權利要求
1.一種快速Feulgen染色方法，其特征在于包括如下步驟將細胞涂片、組織印片、冷凍切片、石蠟切片或滴片先放入4～6N鹽酸水解3～10min，再放入Schiff’s試劑中染色8～15min，自來水沖洗2～5min，蒸餾水漂洗2～3次，快速梯度乙醇脫水，封片。
2.根據(jù)權利要求1所述的Feulgen染色方法，其特征在于，所述鹽酸和Schiff’s試劑均先預熱達50～70℃。
3.根據(jù)權利要求1所述的Feulgen染色方法，其特征在于，所述鹽酸水解過程和Schiff’s試劑染色過程在50～70℃的溫度進行。
4.根據(jù)權利要求1所述的Feulgen染色方法，其特征在于，所述鹽酸和Schiff’s試劑能反復使用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種快速Feulgen染色方法，該染色方法將細胞涂片、組織印片、冷凍切片、滴片或石蠟切片等先放入4～6N鹽酸水解3～10min，再放入Schiff’s試劑中染色8～15min，自來水沖洗2～5min，蒸餾水漂洗2～3次，快速梯度乙醇脫水，封片。該Feulgen染色方法快速、簡便、穩(wěn)定、易于自動化操作，具有良好的染色效果，大大縮短了染色時間。
文檔編號G01N1/30GK1837772SQ20061003489
公開日2006年9月27日 申請日期2006年4月10日 優(yōu)先權日2006年4月10日
發(fā)明者夏潮涌, 金日男 申請人:暨南大學