專利名稱：多功能高效液相色譜柱后衍生分析儀的制作方法
技術(shù)領域：
本實用新型提供一種多功能高效液相色譜柱后衍生分析儀，屬于分析化學儀器設備技術(shù)領域。
背景技術(shù)：
高效液相色譜柱后衍生技術(shù)是高效液相色譜(High PerformanceLiquid Chromatography，HPLC)分離技術(shù)的發(fā)展。高效液相色譜鑒別技術(shù)所采用的檢測器一般是紫外檢測器，但是有很多的物質(zhì)在紫外光譜波段沒有吸收，或者紫外光的吸收能量很低，限制了紫外檢測器的應用。
柱后衍生技術(shù)是將高效液相色譜柱分離出的物質(zhì)，再通過一種特殊的裝置進行化學反應使之衍生為具有可見/紫外光(UV/Vis)吸收效應的物質(zhì)或者生成熒光基團，實現(xiàn)可見/紫外光(UV/Vis)檢測器或者熒光檢測器鑒別。
現(xiàn)有一種柱后衍生技術(shù)是將高效液相色譜柱分離出的物質(zhì)與恒流泵輸入的溶液匯合，并經(jīng)加熱反應后，再經(jīng)熒光檢測器鑒別。雖然，這種裝置可以實現(xiàn)某些化合物的鑒別例如氨基酸，但是熒光檢測器具有很大的局限性，許多化合物并不能實現(xiàn)鑒別，而且檢測靈敏度很低。
紫外檢測器(VWD)是HPLC系統(tǒng)中最常用的檢測器，在所有的微量物質(zhì)直接的色譜鑒別中，紫外檢測器(VWD)檢測靈敏度最高；但是紫外檢測器(VWD)不能承受酸或者堿性溶液的侵蝕，不能承受溫度變化，不能承受脈沖溶液的干擾。

發(fā)明內(nèi)容
本實用新型提供一種多功能高效液相色譜柱后衍生分析儀，其的目的將高效液相色譜柱分離的物質(zhì)經(jīng)過酸或者堿衍生溶液衍生反應以后，實現(xiàn)紫外(VWD)檢測器鑒別，而且也適用于DAD數(shù)字檢測器、可見-紫外光(UV-Vis)檢測器或者熒光檢測器。
本實用新型的技術(shù)解決方案如下由HPLC泵、壓力傳感器、過濾器、進樣器、色譜柱、精密恒溫箱、壓力傳感器、單向閥、二相切換閥按順序通過管路連接構(gòu)成進樣裝置，由柱塞泵、壓力傳感器、過濾器、單向閥按順序通過管路連接構(gòu)成衍生液注入裝置，通過三通與進樣裝置連接，混合器和衍生反應箱、單向閥、二相切換閥按順序通過管路連接構(gòu)成衍生液反應裝置；由柱塞泵、壓力傳感器、過濾器、單向閥、截止閥按順序通過管路連接構(gòu)成中和液裝置，與三通、衍生液反應裝置連接，混合器、恒溫槽、單向閥、三通、過濾器按順序通過管路連接構(gòu)成恒溫裝置，最后接檢測器輸入端，檢測器的輸出端連接到廢液池。其中，HPLC泵與流動相池連接；柱塞泵與衍生液池連接；柱塞泵與中和液池連接；柱塞泵與中和液池連接；二相切換閥的另端接廢液池，二相切換閥接三通，截止閥連接在廢液池與單向閥之間。
所述的檢測器可以是紫外檢測器(VWD)或DAD數(shù)字檢測器、可見-紫外光(UV-Vis)檢測器或者熒光檢測器。
上述的衍生反應箱的中部為加熱器，其上均勻纏繞有耐腐蝕材料制成的反應管，也可以在耐腐蝕的反應池外設有加熱裝置，加熱器通過數(shù)字溫度傳感器與恒溫調(diào)節(jié)裝置連接；恒溫槽由半導體恒溫器、反應管或反應池連接構(gòu)成恒溫裝置。
混合器由直徑φ0.1mm～φ1mm不等直徑的陶瓷球填充的柱狀體裝置。
所述的壓力傳感器、單向閥、二相切換閥、截止閥作為系統(tǒng)保護部件連接在本系統(tǒng)中。
壓力傳感器陶瓷電容壓力變送器進樣器HPLC系統(tǒng)專用進樣器色譜柱HPLC系統(tǒng)專用分析柱過濾器孔徑φ0.4μm聚四氟乙烯材料濾膜單向閥耐腐蝕材料制成二相切換法耐腐蝕材料制成截止閥耐腐蝕材料制成三通耐腐蝕材料制成并且無死點HPLC泵HPLC系統(tǒng)專用輸液泵柱塞泵耐腐蝕材料制成雙柱塞桿泵流動相池、廢液池、衍生液池、中和液池為通用玻璃瓶精密恒溫箱采用數(shù)字溫度傳感器、PID調(diào)節(jié)的精密恒溫裝置檢測器紫外檢測器(VWD)、DAD數(shù)字檢測器、可見-紫外光(UV-Vis)檢測器或者熒光檢測器本實用新型的工作過程如下待分析樣品依據(jù)HPLC分析條件經(jīng)進樣器注入；依據(jù)HPLC分析條件，HPLC泵1輸入流動相經(jīng)壓力傳感器2、過濾器4由進樣器3、過濾器4注入色譜柱5；樣品經(jīng)色譜柱5分離后經(jīng)壓力傳感器7單向閥8、二相切換閥9在三通14和衍生反應液匯合，經(jīng)混合器20進入衍生反應箱21進行化學反應，衍生反應液經(jīng)單向閥22、二相切換閥23與中和反應液在三通24匯合經(jīng)混合器25、恒溫槽26、單向閥27、三通28、過濾器29進入檢測器30再進入廢液池；使用UV-Vis檢測器30或熒光檢測器檢測，關閉截止閥19，樣品經(jīng)色譜柱5分離經(jīng)單向閥8、二相切換閥9和衍生反應液匯合于三通14、經(jīng)混合器20、衍生反應箱21、單向閥22、三通24、混合器25、恒溫槽26、單向閥27、三通28、過濾器29進入檢測器30后進入廢液池；關閉截止閥19，樣品經(jīng)色譜柱5分離后經(jīng)單向閥8、二相切換閥9、三通14、混合器20、衍生反應箱21、單向閥22、二相切換閥23、三通24、過濾器29進入檢測器30再進入廢液池是經(jīng)典的HPLC分析系統(tǒng)；衍生液經(jīng)柱塞泵10、壓力傳感器11、過濾器12、單向閥13在三通14與色譜柱分離物會合；
中和液經(jīng)柱塞泵15、壓力傳感器16、過濾器17、單向閥18、截止閥19在三通24與柱后衍生液分匯合；檢測工作結(jié)束后，清洗液經(jīng)HPLC輸液泵注入色譜柱5經(jīng)單向閥8、二相切換閥9，洗液進入廢液池；檢測工作結(jié)束后，衍生液池盛裝清洗液，經(jīng)柱塞泵10注入過濾器12、單向閥13、三通14、混合器20、衍生反應箱21、單向閥22、二相切換閥23、三通24并經(jīng)過濾器29、檢測器30，洗液進入廢液池；檢測工作結(jié)束后，關閉截止閥31，中和液池盛裝清洗液經(jīng)柱塞泵15注入，清洗過濾器17、單向閥18、截止閥19、三通24、混合器25、恒溫槽26、單相閥27、三通28、過濾器29、檢測器30，洗液進入廢液池；關閉截止閥19，中和液池盛裝清洗液經(jīng)柱塞泵15注入，清洗過濾器17、單向閥18、截止閥31，洗液進入廢液池；本實用新型的優(yōu)點在于高效液相色譜柱分離的物質(zhì)經(jīng)過酸或者堿衍生液反應后能夠得到中和處理，使其衍生液的pH值達到pH4～pH8范圍內(nèi)，更適于紫外檢測器(VWD)鑒別。
本實用新型的優(yōu)點還在于高效液相色譜柱分離的物質(zhì)與酸或者堿性衍生液匯合后能夠獲得混勻處理，使其色譜柱分離的物質(zhì)能夠完全參與化學反應；并且這種混合器還起到了緩沖作用，減少了柱塞泵輸入的酸或者堿性衍生溶液的流動脈沖，減少了柱塞泵輸入的中和溶液的流動脈沖，衍生反應液進入紫外檢測器更平穩(wěn)。
本實用新型的優(yōu)點還在于衍生反應液能夠進行溫度控制處理，使其衍生化學反應徹底，而且衍生液以其合適的溫度進入檢測器，避免了溫度過高或者過低對檢測器檢測池的影響，消除了溫度變化對檢測靈敏度的干擾。
本實用新型的優(yōu)點還在于衍生化學反應系統(tǒng)采取的諸多的單向閥、截止閥控制措施，避免人為或者其他因素造成酸或者堿性衍生溶液反沖對色譜柱的破壞和衍生反應的干擾。
本實用新型的優(yōu)點還在于采用了非接觸性的壓力傳感器，自動對系統(tǒng)中HPLC輸液泵、衍生液柱塞輸液泵、中和液柱塞輸液泵壓力控制，保證衍生反應平和、流速穩(wěn)定。
本實用新型的優(yōu)點還在于系統(tǒng)中采用了耐腐蝕的在線過濾器，避免大顆粒雜質(zhì)堵塞系統(tǒng)和檢測器。
本實用新型的優(yōu)點還在于當檢測工作結(jié)束后可以便捷的實現(xiàn)色譜柱、管路和檢測器等各自獨立的清洗。
本實用新型的優(yōu)點還在于檢測液和清洗液都能夠?qū)崿F(xiàn)集中回收，不構(gòu)成環(huán)境污染。


圖1為本實用新型結(jié)構(gòu)原理圖。
具體實施方式
根據(jù)圖1所示，由HPLC泵1、壓力傳感器2、過濾器4、進樣器3、色譜柱5、精密恒溫箱6及壓力傳感器7、單向閥8、二相切換閥9按順序通過管路連接構(gòu)成進樣裝置，由柱塞泵10、壓力傳感器11、過濾器12、單向閥13按順序通過管路連接構(gòu)成衍生液注入裝置，通過三通14與進樣裝置連接，混合器20和衍生反應箱21、單向閥22、二相切換閥23按順序通過管路連接構(gòu)成衍生液反應裝置；由柱塞泵15、壓力傳感器16、過濾器17、單向閥18、截止閥19按順序通過管路連接構(gòu)成中和液裝置，與三通24、衍生液反應裝置連接，混合器25、恒溫槽26、單向閥27、三通28、過濾器29按順序通過管路連接構(gòu)成恒溫裝置，最后接檢測器30輸入端，檢測器30的輸出端連接到廢液池；其中，HPLC泵1與流動相池連接；柱塞泵10與衍生液池連接；柱塞泵15與中和液池連接；二相切換閥9的另端接廢液池，二相切換閥23接三通28；截止閥31連接在廢液池與單向閥18之間；以下實施例對本實用新型進一步說明(1)前列地爾的質(zhì)量鑒別精密稱取前列地爾10mg，用乙腈-磷酸鹽緩沖液(pH6.3)(3∶2)的流動相溶液配制含前列地爾20μg/ml溶液，取20μl注入進樣器，HPLC輸液泵輸入流動相溶液，流速1ml/min，前列地爾樣品經(jīng)色譜柱分離；配制1M氫氧化鉀溶液，氫氧化鉀溶液經(jīng)柱塞泵1注入，流速1.5ml/min，調(diào)節(jié)衍生反應箱溫度并恒溫控制在45℃；配制0.2N鹽酸溶液，將稀鹽酸溶液經(jīng)柱塞泵2注入，流速0.5ml/min，調(diào)節(jié)恒溫槽溫度并恒溫控制在25℃；設定紫外檢測器(VWD)檢測波長278nm，記錄色譜曲線。
(2)前列腺素A1的質(zhì)量鑒別
精密稱取前列腺素A15mg，用乙腈-磷酸鹽緩沖液(pH6.3)(3∶2)的流動相溶液配制含前列腺素A12μg/ml溶液，取50μl注入進樣器，HPLC輸液泵輸入流動相溶液，流速1ml/min，前列腺素A1樣品經(jīng)色譜柱分離；配制1M氫氧化鉀溶液，將氫氧化鉀溶液經(jīng)柱塞泵1注入，流速0.85ml/min，調(diào)節(jié)衍生反應箱溫度并恒溫控制在60℃；配制0.2N鹽酸溶液，將稀鹽酸溶液經(jīng)柱塞泵2注入，流速0.5ml/min，調(diào)節(jié)恒溫槽溫度并恒溫控制在25℃；設定紫外檢測器(VWD)檢測波長278nm，記錄色譜曲線。
(3)脫水穿心蓮內(nèi)酯琥珀酸半酯單鉀鹽殘余內(nèi)酯的測定精密稱取穿心蓮內(nèi)酯琥珀酸半酯單鉀鹽10mg，用甲醇-水(3∶2)的流動相溶液配制含穿心蓮內(nèi)酯琥珀酸半酯單鉀鹽200μg/ml溶液，取50μl注入進樣器，HPLC輸液泵輸入流動相溶液，流速1ml/min，穿心蓮內(nèi)酯琥珀酸半酯單鉀鹽樣品經(jīng)色譜柱分離；配制1M碳酸氫鈉溶液，將碳酸氫鈉溶液經(jīng)柱塞泵1注入，流速1ml/min，調(diào)節(jié)衍生反應箱溫度并恒溫控制在65℃；配制0.2N鹽酸溶液，將稀鹽酸溶液經(jīng)柱塞泵2注入，流速1ml/min，調(diào)節(jié)恒溫槽溫度并恒溫控制在25℃；設定紫外檢測器(VWD)檢測波長254nm，記錄色譜曲線。
(4)氨基酸鑒別色譜柱硅膠填充柱流動相甲醇-水(3∶2)衍生反應試劑1M氫氧化鈉溶液或者鄰苯二甲醛(OPA)溶液檢測器熒光檢測器，激發(fā)波長λex330nm，發(fā)射波長λem465nm
氨基酸樣品由進樣器注入，HPLC輸液泵輸入流動相，流速1ml/min，色譜柱恒溫控制在40℃；衍生反應液經(jīng)柱塞泵1注入，流速0.5ml/min，調(diào)節(jié)衍生反應箱溫度并恒溫控制在100℃；關閉截止閥1，衍生液經(jīng)二相切換閥2進入恒溫槽，調(diào)節(jié)恒溫槽溫度并恒溫控制在25℃；設定熒光檢測器激發(fā)波長λex330nm；發(fā)射波長λem465nm，記錄色譜曲線。
權(quán)利要求1.一種多功能高效液相色譜柱后衍生分析儀，其特征在于由HPLC泵(1)、壓力傳感器(2)、過濾器(4)、進樣器(3)、色譜柱(5)、精密恒溫箱(6)及壓力傳感器(7)、單向閥(8)、二相切換閥(9)按順序通過管路連接構(gòu)成進樣裝置，由柱塞泵(10)、壓力傳感器(11)、過濾器(12)、單向閥(13)按順序通過管路連接構(gòu)成衍生液注入裝置，通過三通(14)與進樣裝置連接，混合器(20)和衍生反應箱(21)、單向閥(22)、二相切換閥(23)按順序通過管路連接構(gòu)成衍生液反應裝置；由柱塞泵(15)、壓力傳感器(16)、過濾器(17)、單向閥(18)、截止閥(19)按順序通過管路連接構(gòu)成中和液裝置，與三通(24)、衍生液反應裝置連接，混合器(25)、恒溫槽(26)、單向閥(27)、三通(28)、過濾器(29)按順序通過管路連接構(gòu)成恒溫裝置，最后接檢測器(30)輸入端，檢測器(30)的輸出端連接到廢液池；其中，HPLC泵(1)與流動相池連接；柱塞泵(10)與衍生液池連接；柱塞泵(15)與中和液池連接；二相切換閥(9)的另端接廢液池，二相切換閥(23)接三通(28)；截止閥(31)連接在廢液池與單向閥(18)之間；所述的檢測器(30)選自紫外檢測器或DAD數(shù)字檢測器、可見-紫外光檢測器或者熒光檢測器。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的分析儀，其特征在于衍生反應箱的中部為加熱器，其上均勻纏繞有耐腐蝕材料制成的反應管，或在耐腐蝕的反應池外設有加熱裝置，加熱器通過數(shù)字溫度傳感器與恒溫調(diào)節(jié)裝置連接。
專利摘要本實用新型提供為多功能高效液相色譜柱后衍生分析儀，由HPLC泵、進樣器、色譜柱、精密恒溫箱構(gòu)成進樣裝置，柱塞泵1、過濾器2、單向閥2構(gòu)成衍生液注入裝置，通過三通1與進樣裝置連接，混合器1和衍生反應箱、單向閥3、二相切換閥2構(gòu)成衍生液反應裝置；柱塞泵2、過濾器3、單向閥5、截止閥1構(gòu)成中和液裝置，與三通2、衍生液反應裝置連接，混合器2、恒溫槽、單向閥4、三通3、過濾器4構(gòu)成恒溫裝置，最后接檢測器輸入端，檢測器的輸出端連接到廢液池。將高效液相色譜柱分離的物質(zhì)經(jīng)過酸或者堿衍生溶液衍生反應以后，實現(xiàn)紫外(VWD)檢測器鑒別，而且也適用于DAD數(shù)字檢測器、可見－紫外光(UV－Vis)檢測器或者熒光檢測器。
文檔編號G01N30/62GK2852130SQ20052002845
公開日2006年12月27日 申請日期2005年4月1日 優(yōu)先權(quán)日2005年4月1日
發(fā)明者侯琬實, 騰利明, 侯文閣 申請人:侯文閣