專利名稱：一種利用液相指紋圖譜鑒別蜂膠真假的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種利用液相指紋圖譜鑒別蜂膠真假的方法，該方法主要應(yīng)用于蜂膠與楊樹(shù)膠的鑒別。
背景技術(shù)：
由于蜂膠在市場(chǎng)上的熱銷，很多不法商販想方設(shè)法制假售假，以牟取暴利，現(xiàn)在最常見(jiàn)的制假售假方法，就是以楊樹(shù)皮加水熬制，制成楊樹(shù)膠。早期楊樹(shù)膠見(jiàn)于2000年，其外觀發(fā)粘，氣味近似蜂膠，比較容易用外觀鑒別，發(fā)展到現(xiàn)今，楊樹(shù)膠與正宗的蜂膠摻雜在一起出售或?qū)顦?shù)膠進(jìn)一步提純精制以達(dá)到蒙蔽客戶的目的，經(jīng)過(guò)處理的楊樹(shù)膠已難用感官來(lái)區(qū)別。以至于如今市場(chǎng)上假膠橫行，有專家認(rèn)為，現(xiàn)在市場(chǎng)上至少有70％的蜂膠是假的。而目前用于鑒別蜂膠真假的有效方法很少，蜂膠的兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)一個(gè)是商業(yè)部頒發(fā)的標(biāo)準(zhǔn)代號(hào)為SB/T10096-92的蜂膠，另一個(gè)是國(guó)家農(nóng)業(yè)部頒發(fā)的標(biāo)準(zhǔn)代號(hào)為NY/T5136-2002的無(wú)公害食品蜂膠。用這兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)均無(wú)法鑒別蜂膠與楊樹(shù)膠，因?yàn)闃?biāo)準(zhǔn)中的膠含量、總黃酮、氧化指標(biāo)等項(xiàng)目，楊樹(shù)膠均能達(dá)到要求。所以不能運(yùn)用這兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行鑒別。液相指紋圖譜已被廣泛用于中藥材的原料鑒別[何春年等，葛根藥材HPLC指紋圖譜研究，中國(guó)中藥雜志2003.(12).28]，文獻(xiàn)已有報(bào)道，用氣相色譜法測(cè)定超臨界萃取后的蜂膠的指紋圖譜[馬海樂(lè)等，蜂膠超臨界CO2萃取物的GC指紋圖譜研究，養(yǎng)蜂科技2005，(1)，36-38]，以區(qū)別于乙醇提取的蜂膠。還有運(yùn)用氣相質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)研究蜂膠中化學(xué)成分[劉波靜，氣相色譜/質(zhì)譜法分析研究蜂膠中化學(xué)成分，分析化學(xué)2001，(7)，861]，以上方法均不能提供蜂膠與楊樹(shù)膠鑒別方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種方便快捷、效果好、耗費(fèi)少、準(zhǔn)確性高的利用液相指紋圖譜鑒別蜂膠真假的方法。本發(fā)明解決上述技術(shù)問(wèn)題所采用的技術(shù)方案是該利用液相指紋圖譜鑒別蜂膠真假的方法，其步驟是(1)、將純蜂膠用乙醇超聲溶解、過(guò)濾后，得到純蜂膠提取溶液；
(2)、用真空干燥法測(cè)定純蜂膠固形物含量，然后稱取適量該純蜂膠提取溶液，用流動(dòng)相進(jìn)行定容，混勻，用濾膜過(guò)濾，上液相色譜儀分析，采集0-20min的色譜圖，得到純蜂膠的色譜圖；(3)、重復(fù)上述(1)、(2)的方法，得到楊樹(shù)膠的色譜圖；(4)、重復(fù)上述(1)、(2)的方法，得到目標(biāo)蜂膠的色譜圖；(5)、將目標(biāo)蜂膠的色譜圖與純蜂膠的色譜圖和楊樹(shù)膠的色譜圖進(jìn)行比較，從而判斷目標(biāo)蜂膠的真假。
本發(fā)明所述的液相色譜儀的流速為0.5——1.5ml/min。
本發(fā)明所述的液相色譜儀的檢測(cè)波長(zhǎng)為360nm或254nm或272nm或276nm。
本發(fā)明所述的液相色譜儀的進(jìn)樣量為1-10ul。
本發(fā)明所述的液相色譜儀所用的色譜柱為Hypersil Rp-C18(4.6mm×150mm，3um)或相當(dāng)?shù)纳V柱。
本發(fā)明所述的流動(dòng)相為甲醇0.4％ H3PO4＝65∶35。
本發(fā)明同現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下優(yōu)點(diǎn)及效果1、運(yùn)用HPLC法來(lái)鑒別蜂膠，不需要使用質(zhì)譜儀來(lái)確證，因此成本低；2、根據(jù)黃酮類化合物組份組成的不同，區(qū)別蜂膠真假。蜂膠黃酮類化合物的組份組成用液相指紋圖譜來(lái)反映，建立楊樹(shù)膠與蜂膠的標(biāo)準(zhǔn)液相指紋圖譜，用比對(duì)法鑒別蜂膠真假，準(zhǔn)確性高。


圖1為實(shí)施例1純蜂膠原料檢測(cè)的指紋色譜圖。
圖2為實(shí)施例1楊樹(shù)膠原料指紋色譜圖。
圖3為實(shí)施例1摻假30％商品膠的檢測(cè)指紋色譜圖。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明，以下實(shí)施例是對(duì)本發(fā)明的解釋而本發(fā)明并不局限于以下實(shí)施例。
實(shí)施例1取純蜂膠5g，用20ml，95％乙醇超聲溶解，過(guò)濾，得到純蜂膠溶液，用真空干燥法測(cè)定其中的純蜂膠固形物，稱取該液適量，使其中含純蜂膠固形物20mg，用甲醇0.4％ H3PO4＝65∶35的流動(dòng)相定容至50ml，混勻，用0.45um濾膜過(guò)濾，上液相色譜儀進(jìn)行分析，液相色譜儀采用Hypersil Rp-C18(4.6mm×150mm，3um)的色譜柱，流速調(diào)整到1.0ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為360nm，進(jìn)樣量為2ul，采集0-20min的色譜圖，即圖一。
取楊樹(shù)膠5g，用20ml，95％乙醇超聲溶解，過(guò)濾，得到楊樹(shù)膠溶液，用真空干燥法測(cè)定其中的楊樹(shù)膠固形物，稱取該液適量，使其中含楊樹(shù)膠固形物20mg，用甲醇0.4％ H3PO4＝65∶35的流動(dòng)相定容至50ml，混勻，用0.45um濾膜過(guò)濾，上液相色譜儀進(jìn)行分析，液相色譜儀采用Hypersil Rp-C18(4.6mm×150mm，3um)的色譜柱，流速調(diào)整到1.0ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為360nm，進(jìn)樣量為2ul，采集0-20min的色譜圖，即圖二。
取目標(biāo)蜂膠5g，用20ml，95％乙醇超聲溶解，過(guò)濾，得到目標(biāo)蜂膠溶液，用真空干燥法測(cè)定其中的目標(biāo)蜂膠固形物，稱取該液適量，使其中含目標(biāo)蜂膠固形物20mg，用甲醇0.4％ H3PO4＝65∶35的流動(dòng)相定容至50ml，混勻，用0.45um濾膜過(guò)濾，上液相色譜儀進(jìn)行分析，液相色譜儀采用Hypersil Rp-C18(4.6mm×150mm，3um)的色譜柱，流速調(diào)整到1.0ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為360nm，進(jìn)樣量為2ul，采集0-20min的色譜圖，即圖三。
表1蜂膠HPLC特征峰峰號(hào)、保留時(shí)間

根據(jù)上述方法，分別測(cè)定了純蜂膠、楊樹(shù)膠和摻假商品蜂膠的指紋圖譜。由圖1至3可知，純蜂膠的7號(hào)峰、11號(hào)峰特征明顯，而楊樹(shù)膠則無(wú)7號(hào)和11號(hào)峰，且7號(hào)峰高于附近的峰；純蜂膠不含6號(hào)峰，而楊樹(shù)膠含有6號(hào)峰。以此，可以鑒別蜂膠真假，而目標(biāo)蜂膠的實(shí)際摻假量為30％。
實(shí)施例2
取純蜂膠5g，用20ml，95％乙醇超聲溶解，過(guò)濾，得到純蜂膠溶液，用真空干燥法測(cè)定其中的純蜂膠固形物，稱取該液適量，使其中含純蜂膠固形物20mg，用甲醇0.4％ H3PO4＝65∶35的流動(dòng)相定容至50ml，混勻，用0.45um濾膜過(guò)濾，上液相色譜儀進(jìn)行分析，液相色譜儀采用Hypersil Rp-C18(4.6mm×150mm，3um)的色譜柱，流速調(diào)整到0.5ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm，進(jìn)樣量為1ul，采集0-20min的色譜圖。
取楊樹(shù)膠5g，用20ml，95％乙醇超聲溶解，過(guò)濾，得到楊樹(shù)膠溶液，用真空干燥法測(cè)定其中的楊樹(shù)膠固形物，稱取該液適量，使其中含楊樹(shù)膠固形物20mg，用甲醇0.4％ H3PO4＝65∶35的流動(dòng)相定容至50ml，混勻，用0.45um濾膜過(guò)濾，上液相色譜儀進(jìn)行分析，液相色譜儀采用Hypersil Rp-C18(4.6mm×150mm，3um)的色譜柱，流速調(diào)整到0.5ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm，進(jìn)樣量為1ul，采集0-20min的色譜圖。
取目標(biāo)蜂膠5g，用20ml，95％乙醇超聲溶解，過(guò)濾，得到目標(biāo)蜂膠溶液，用真空干燥法測(cè)定其中的目標(biāo)蜂膠固形物，稱取該液適量，使其中含目標(biāo)蜂膠固形物20mg，用甲醇0.4％ H3PO4＝65∶35的流動(dòng)相定容至50ml，混勻，用0.45um濾膜過(guò)濾，上液相色譜儀進(jìn)行分析，液相色譜儀采用Hypersil Rp-C18(4.6mm×150mm，3um)的色譜柱，流速調(diào)整到0.5ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm，進(jìn)樣量為1ul，采集0-20min的色譜圖。
表1蜂膠HPLC特征峰峰號(hào)、保留時(shí)間

根據(jù)上述方法，分別測(cè)定了純蜂膠、楊樹(shù)膠和摻假商品蜂膠的指紋圖譜。由得到的色譜圖可知，純蜂膠的7號(hào)峰、11號(hào)峰特征明顯，而楊樹(shù)膠則無(wú)7號(hào)和11號(hào)峰，且7號(hào)峰高于附近的峰；純蜂膠不含6號(hào)峰，而楊樹(shù)膠含有6號(hào)峰。以此，可以鑒別蜂膠真假，而目標(biāo)蜂膠的實(shí)際摻假量為30％。
實(shí)施例3取純蜂膠5g，用20ml，95％乙醇超聲溶解，過(guò)濾，得到純蜂膠溶液，用真空干燥法測(cè)定其中的純蜂膠固形物，稱取該液適量，使其中含純蜂膠固形物20mg，用甲醇0.4％ H3PO4＝65∶35的流動(dòng)相定容至50ml，混勻，用0.45um濾膜過(guò)濾，上液相色譜儀進(jìn)行分析，液相色譜儀采用Hypersil Rp-C18(4.6mm×150mm，3um)的色譜柱，流速調(diào)整到1.5ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為272nm，進(jìn)樣量為10ul，采集0-20min的色譜圖。
取楊樹(shù)膠5g，用20ml，95％乙醇超聲溶解，過(guò)濾，得到楊樹(shù)膠溶液，用真空干燥法測(cè)定其中的楊樹(shù)膠固形物，稱取該液適量，使其中含楊樹(shù)膠固形物20mg，用甲醇0.4％ H3PO4＝65∶35的流動(dòng)相定容至50ml，混勻，用0.45um濾膜過(guò)濾，上液相色譜儀進(jìn)行分析，液相色譜儀采用Hypersil Rp-C18(4.6mm×150mm，3um)的色譜柱，流速調(diào)整到1.5ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為272nm，進(jìn)樣量為10ul，采集0-20min的色譜圖。
取目標(biāo)蜂膠5g，用20ml，95％乙醇超聲溶解，過(guò)濾，得到目標(biāo)蜂膠溶液，用真空干燥法測(cè)定其中的目標(biāo)蜂膠固形物，稱取該液適量，使其中含目標(biāo)蜂膠固形物20mg，用甲醇0.4％ H3PO4＝65∶35的流動(dòng)相定容至50ml，混勻，用0.45um濾膜過(guò)濾，上液相色譜儀進(jìn)行分析，液相色譜儀采用Hypersil Rp-C18(4.6mm×150mm，3um)的色譜柱，流速調(diào)整到1.5ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為272nm，進(jìn)樣量為10ul，采集0-20min的色譜圖。
表1蜂膠HPLC特征峰峰號(hào)、保留時(shí)間

根據(jù)上述方法，分別測(cè)定了純蜂膠、楊樹(shù)膠和摻假商品蜂膠的指紋圖譜。由得到的色譜圖可知，純蜂膠的7號(hào)峰、11號(hào)峰特征明顯，而楊樹(shù)膠則無(wú)7號(hào)和11號(hào)峰，且7號(hào)峰高于附近的峰；純蜂膠不含6號(hào)峰，而楊樹(shù)膠含有6號(hào)峰。以此，可以鑒別蜂膠真假，而目標(biāo)蜂膠的實(shí)際摻假量為30％。
權(quán)利要求
1.一種利用液相指紋圖譜鑒別蜂膠真假的方法，其特征是(1)、將純蜂膠用乙醇超聲溶解、過(guò)濾后，得到純蜂膠提取溶液；(2)、用真空干燥法測(cè)定純蜂膠固形物含量，然后稱取適量該純蜂膠提取溶液，用流動(dòng)相進(jìn)行定容，混勻，用濾膜過(guò)濾，上液相色譜儀分析，采集0-20min的色譜圖，得到純蜂膠的色譜圖；(3)、重復(fù)上述(1)、(2)的方法，得到楊樹(shù)膠的色譜圖；(4)、重復(fù)上述(1)、(2)的方法，得到目標(biāo)蜂膠的色譜圖；(5)、將目標(biāo)蜂膠的色譜圖與純蜂膠的色譜圖和楊樹(shù)膠的色譜圖進(jìn)行比較，從而判斷目標(biāo)蜂膠的真假。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用液相指紋圖譜鑒別蜂膠真假的方法，其特征是所述的液相色譜儀的流速為0.5——1.5ml/min。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用液相指紋圖譜鑒別蜂膠真假的方法，其特征是所述的液相色譜儀的檢測(cè)波長(zhǎng)為360nm或254nm或272nm或276nm。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用液相指紋圖譜鑒別蜂膠真假的方法，其特征是所述的液相色譜儀的進(jìn)樣量為1-10ul。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用液相指紋圖譜鑒別蜂膠真假的方法，其特征是所述的液相色譜儀所用的色譜柱為Hypersil Rp-C18(4.6mm×150mm，3um)或相當(dāng)?shù)纳V柱。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用液相指紋圖譜鑒別蜂膠真假的方法，其特征是所述的流動(dòng)相為甲醇0.4％H3PO4＝65∶35。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種一種利用液相指紋圖譜鑒別蜂膠真假的方法，該方法主要應(yīng)用于蜂膠與楊樹(shù)膠的鑒別，用真空干燥法測(cè)定蜂膠固形物含量，然后稱取適量該蜂膠提取溶液，用流動(dòng)相進(jìn)行定容，混勻，用濾膜過(guò)濾，上液相色譜儀分析，采集0－20min的色譜圖，得到該蜂膠的色譜圖，再用同樣的方法得到純蜂膠和楊樹(shù)膠的色譜圖，將三者進(jìn)行比較，判斷蜂膠的真假。本發(fā)明方便快捷、效果好、耗費(fèi)少、準(zhǔn)確性高的優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)G01N30/86GK1719247SQ200510060230
公開(kāi)日2006年1月11日 申請(qǐng)日期2005年7月29日 優(yōu)先權(quán)日2005年7月29日
發(fā)明者錢(qián)志明, 周平, 孫建芳 申請(qǐng)人:浙江蜂之語(yǔ)蜂業(yè)集團(tuán)有限公司