專利名稱：復方斑蝥口服制劑的質量控制方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種復方斑蝥口服制劑的質量控制方法，屬于對藥品進行質量控制的技術領域。
背景技術：
目前，腫瘤已發(fā)展成為嚴重危害人們生命的常見病、多發(fā)病，為居民死亡原因的第1、2位。全世界每年新發(fā)生的腫瘤1000余萬，而且近年仍呈上升趨勢。我國腫瘤死亡數(shù)占各種原因死亡數(shù)的比率從1957年的5.17％上升到1990的17.94％，其增長速度遠遠超過心、肺、腦血管病。這意味著現(xiàn)在活著的人每5-6個中或遲或早就會有一個死于癌癥。顯然，研究有效治療癌癥的藥物已成為藥學工作者的重要任務。復方斑蝥口服制劑由斑蝥、人參、黃芪、刺五加、三棱、半枝蓮、莪術、山茱萸、女貞子、熊膽粉、甘草共十一味藥物制備而成，具有破血消瘀，攻毒蝕瘡的作用，主要用于原發(fā)性肝癌、肺癌、直腸癌、惡性淋巴瘤、婦科惡性腫瘤等疾病。其中“復方斑蝥膠囊”在國家衛(wèi)生部藥品標準中藥成方制劑第十七冊有記載。
但是經過研究發(fā)現(xiàn)，現(xiàn)有復方斑蝥制劑的制備工藝中，斑蝥是以氯仿為溶劑進行提取或直接粉碎入藥，在提取過程中溶劑有殘留，而且提取物呈油狀，不溶于水，給制劑制備帶來了不便，同時直接入藥會導致雜質含量高，不利于產品的質量控制；而且人參、山茱萸、女貞子、半枝蓮四味藥材多是粉碎成細粉入藥，同樣極易造成雜質含量過高，不利于產品的質量控制。為此，申請人對復方斑蝥口服制劑的制備工藝進行了改進。工藝改進之后，其生產操作方便，利于控制，更適合于工業(yè)化大生產，且制劑中有效成分含量高，臨床效果好。但改進工藝后的復方斑蝥口服制劑也必須有相應的質量控制標準才能保證產品質量，從而確保其臨床療效。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的在于提供一種復方斑蝥口服制劑的質量控制方法，該口服制劑包括膠囊劑、片劑、顆粒劑、口服液。本發(fā)明針對現(xiàn)有技術的不足，對改進工藝后的復方斑蝥口服制劑的質量控制方法進行了研究，建立了斑蝥素的含量測定以及半枝蓮、甘草、刺五加的薄層鑒別項目，可有效控制這種復方斑蝥口服制劑的質量，從而確保了該制劑的臨床療效。
本發(fā)明所述復方斑蝥口服制劑是這樣構成的按照重量組份計算它由斑蝥0.6-6、人參1.5-15、黃芪7.5-100、刺五加7.5-100、三棱2.4-24、半枝蓮9-100、莪術2.4-24、山茱萸3-30、女貞子3-30、熊膽粉0.05-1.0和甘草1.5-15制備而成。其制備方法為方中十一味，除熊膽粉外，斑蝥粉碎為40～60目的細粉，水提1-4次，第一次加15-22倍量的水，浸泡30-50分鐘，提取1-2小時，第2-4次每次加8-15倍量的水，提取0.5-1小時，濾過，合并濾液；其余人參等9味水提2-3次，第一次加10-15倍量水，浸泡1-2.5小時，提取2-4小時，第2-3次每次加5-10倍量水，提取1-1.5小時，濾過，濾液合并，濃縮至相對密度在50-60℃測為1.00-1.15，放冷，加乙醇至含醇量為50-60％，冷藏12-24小時，濾過，濾液回收乙醇，繼續(xù)濃縮至相對密度在50-60℃時測為1.10～1.25的稠膏，加水至總量的50-70％，在4℃～8℃冷藏30-48h，取上清液，加入熊膽粉使溶解，加斑蝥提取液混勻，用常規(guī)方法制成片劑、膠囊劑、顆粒劑或口服液。本制劑中可加入輔料，也可不加入輔料。
本發(fā)明所述質量控制方法主要包括性狀、鑒別、檢查以及含量測定項目中的部分或全部；其中鑒別包括對制劑中人參、黃芪、半枝蓮、甘草和刺五加的薄層色譜鑒別；含量測定是對制劑中斑蝥所含斑蝥素的含量測定；人參的鑒別方法是以人參對照藥材及人參皂苷Rg1對照品為對照，以氯仿∶乙酸乙酯∶甲醇∶水＝5-50∶0.5-5∶1-9∶1-9放置后的下層溶液為展開劑的薄層色譜法；黃芪的鑒別方法是以黃芪對照藥材及黃芪甲苷對照品為對照，以氯仿∶乙酸乙酯∶甲醇∶水＝5-50∶0.5-5∶1-9∶1-9放置后的下層溶液為展開劑的薄層色譜法；半枝蓮的鑒別方法是以野黃芩苷對照品為對照，以乙酸∶乙醇＝9-1∶1-9為展開劑的薄層色譜法；甘草的鑒別方法是以甘草次酸對照品為對照，以30-60℃石油醚∶苯∶乙酸乙酯∶甲酸＝5-50∶5-50∶1-9∶0.1-0.9為展開劑的薄層色譜法；刺五加的鑒別方法是以紫丁香苷對照品為對照，以氯仿∶甲醇∶水＝9-1∶1-9∶0.5-5為展開劑的薄層色譜法；斑蝥中所含斑蝥素的含量測定方法是以斑蝥素對照品為對照的氣相色譜法。
具體的說，制劑中半枝蓮的鑒別方法為取片劑、膠囊劑、顆粒劑研細，加水溶解，或口服液，調pH，用等體積的乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯層再用水萃取，取乙酸乙酯層蒸干，殘渣加甲醇溶解，作為供試品溶液；另取野黃芩苷對照品，加甲醇溶解，作為對照品溶液；吸取供試品溶液和對照品溶液，照中國藥典薄層色譜法試驗，分別點于同一聚酰胺薄膜上，以乙酸∶乙醇＝9-1∶1-9為展開劑，上行展開，取出，晾干，噴以10％三氯化鐵乙醇液；供試品色譜中，在與對照品相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
制劑中甘草的鑒別方法為取片劑、膠囊劑、顆粒劑研細，加水溶解，或口服液，調pH，用水飽和正丁醇萃取，正丁醇液用正丁醇飽和的水洗滌，取正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇1mL，用少量甲醇轉移至磨口瓶中蒸干甲醇，加濃HCl，氯仿回流，放冷用水洗滌，棄水層，取氯仿層蒸干，殘渣用無水乙醇溶解，作為供試品溶液；另取甘草次酸對照品，加無水乙醇溶解，作為對照品溶液；吸取供試品溶液和對照品溶液，照中國藥典薄層色譜法試驗，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以30-60℃石油醚∶苯∶乙酸乙酯∶甲酸＝5-50∶5-50∶1-9∶0.1-0.9為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈200-320nm下檢視；供試品色譜中，在與對照品相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
制劑中刺五加的鑒別方法為取片劑、膠囊劑、顆粒劑研細，加水溶解，或口服液，用水飽和正丁醇萃取，分取正丁醇液，蒸干，殘渣加甲醇溶解，作為供試品溶液；另取紫丁香苷對照品，加甲醇溶解，作為對照品溶液；吸取供試品溶液和對照品溶液，照中國藥典薄層色譜法試驗，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以氯仿∶甲醇∶水＝9-1∶1-9∶0.5-5為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈200-320nm下檢視；供試品色譜中，在與對照品相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
所述鑒別方法包括以下項目的部分或全部(1)取片劑、膠囊劑、顆粒劑研細，或口服液，加5％氫氧化鈉溶液使溶解，轉至分液漏斗中，再用水洗滌容器，轉移至分液漏斗中，用水飽和正丁醇提取，正丁醇液蒸干，殘渣用水溶解，轉移至氧化鋁柱上，先用氯仿洗脫，棄去氯仿洗脫液，再用70％甲醇洗脫，洗脫液于水浴上蒸干，殘渣加甲醇使溶解，作為供試品溶液；另取人參對照藥材，加氯仿，加熱回流，棄去氯仿液，藥渣揮干溶劑，加甲醇回流提取，回收甲醇至干，殘渣加5％氫氧化鈉溶液使溶解，同供試品溶液制備方法制得對照藥材溶液；取黃芪對照藥材，加甲醇，加熱回流，濾過，濾液蒸干，殘渣加5％氫氧化鈉溶液使溶解，同供試品溶液制備方法制得對照藥材溶液；另取人參皂苷Rg1對照品及黃芪甲苷對照品，加甲醇溶解，作為對照品溶液；照中國藥典薄層色譜法實驗，吸取供試品溶液、對照藥材及對照品溶液，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿∶乙酸乙酯∶甲醇∶水＝5-50∶0.5-5∶1-9∶1-9于5～10℃放置8-18小時的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘5～10分鐘，置紫外光燈280-420nm下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材及對照品相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；(2)取片劑、膠囊劑、顆粒劑研細，加水溶解，或口服液，調pH，用等體積的乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯層再用水萃取，取乙酸乙酯層蒸干，殘渣加甲醇溶解，作為供試品溶液；另取野黃芩苷對照品，加甲醇溶解，作為對照品溶液；吸取供試品溶液和對照品溶液，照中國藥典薄層色譜法試驗，分別點于同一聚酰胺薄膜上，以乙酸∶乙醇＝9-1∶1-9為展開劑，上行展開，取出，晾干，噴以10％三氯化鐵乙醇液；供試品色譜中，在與對照品相應的位置上，顯相同顏色的斑點；(3)取片劑、膠囊劑、顆粒劑研細，加水溶解，或口服液，調pH，用水飽和正丁醇萃取，正丁醇液用正丁醇飽和的水洗滌，取正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇1mL，用少量甲醇轉移至磨口瓶中蒸干甲醇，加濃HCl，氯仿回流，放冷用水洗滌，棄水層，取氯仿層蒸干，殘渣用無水乙醇溶解，作為供試品溶液；另取甘草次酸對照品，加無水乙醇溶解，作為對照品溶液；吸取供試品溶液和對照品溶液，照中國藥典薄層色譜法試驗，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以30-60℃石油醚∶苯∶乙酸乙酯∶甲酸＝5-50∶5-50∶1-9∶0.1-0.9為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈200-320nm下檢視；供試品色譜中，在與對照品相應的位置上，顯相同顏色的斑點；(4)取片劑、膠囊劑、顆粒劑研細，加水溶解，或口服液，用水飽和正丁醇萃取，分取正丁醇液，蒸干，殘渣加甲醇溶解，作為供試品溶液；另取紫丁香苷對照品，加甲醇溶解，作為對照品溶液；吸取供試品溶液和對照品溶液，照中國藥典薄層色譜法試驗，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以氯仿∶甲醇∶水＝9-1∶1-9∶0.5-5為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈200-320nm下檢視；供試品色譜中，在與對照品相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
更具體的鑒別方法包括以下項目的部分或全部(1)取片劑、膠囊劑、顆粒劑各15-30g，研細，或口服液50-100ml，水浴揮干，加5％氫氧化鈉溶液5-20mL使溶解，轉至分液漏斗中，再用水1-10mL分1-3次洗滌容器，轉移至分液漏斗中，用水飽和正丁醇提取2-4次，每次5-15mL，合并正丁醇液，蒸干，殘渣用0.2-1.2mL水分2-3次溶解，轉移至氧化鋁柱上(中性氧化鋁100～200目，2g，干法裝柱，直徑1cm，長25cm)，先用20-50mL氯仿洗脫，棄去氯仿洗脫液，再用70％甲醇10-40mL洗脫，洗脫液于水浴上蒸干，殘渣加甲醇0.5-2mL使溶解，作為供試品溶液；另取人參對照藥材0.5-2g，加氯仿30-60mL，加熱回流0.5-2小時，棄去氯仿液，藥渣揮干溶劑，加甲醇30-60mL回流提取2-4小時，回收甲醇至干，殘渣加5％氫氧化鈉溶液5-20mL使溶解，同供試品溶液制備方法制得對照藥材溶液；取黃芪對照藥材1-5g，加甲醇10-30mL，加熱回流0.5-2小時，濾過，濾液蒸干，殘渣加5％氫氧化鈉溶液5-20mL使溶解，同供試品溶液制備方法制得對照藥材溶液；另取人參皂苷Rg1對照品及黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每1mL各含0.5-3mg的混合溶液，作為對照品溶液；照中國藥典薄層色譜法實驗，吸取供試品溶液、對照藥材及對照品溶液各2-10μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿∶乙酸乙酯∶甲醇∶水＝5-50∶0.5-5∶1-9∶1-9于5～10℃放置8-18小時的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘5～10分鐘，置紫外光燈280-420nm下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材及對照品相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；
(2)取片劑、膠囊劑、顆粒劑各1-6g，研細，加水溶解，或口服液10-30ml，調pH至1～2，用等體積的乙酸乙酯萃取2-4次，合并乙酸乙酯層用水萃取1-3次，每次10-30mL，取乙酸乙酯層蒸干，殘渣加甲醇0.5-2mL溶解，作為供試品溶液；另取野黃芩苷對照品，加甲醇制成每1mL含0.5-3mg的溶液，作為對照品溶液；吸取供試品溶液和對照品溶液各0.5-5μL，照中國藥典薄層色譜法試驗，分別點于同一聚酰胺薄膜上，以乙酸∶乙醇＝9-1∶1-9為展開劑，上行展開4cm，取出，晾干，噴以10％三氯化鐵乙醇液；供試品色譜中，在與對照品相應的位置上，顯相同顏色的斑點；(3)取片劑、膠囊劑、顆粒劑各5-20g，研細，加水溶解，或口服液30-80ml，調pH至1～2，用水飽和正丁醇萃取2-4次，每次10-40mL，合并正丁醇液，用正丁醇飽和的水洗滌正丁醇液1-5次，每次10-30mL，取正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇0.5-2mL，用少量甲醇轉移至磨口瓶中蒸干甲醇，加1-10mL濃HCl，30-80ml氯仿回流0.5-2小時，放冷用水洗滌2-4次，每次20-50mL，棄水層，取氯仿層蒸干，殘渣用無水乙醇溶解至0.1-1mL，作為供試品溶液；另取甘草次酸對照品，加無水乙醇制成每1mL含0.5-3mg的溶液，作為對照品溶液；吸取供試品溶液和對照品溶液各1-10μL，照中國藥典薄層色譜法試驗，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠GF254，以30-60℃石油謎∶苯∶乙酸乙酯∶甲酸＝5-50∶5-50∶1-9∶0.1-0.9為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈200-320nm下檢視；供試品色譜中，在與對照品相應的位置上，顯相同顏色的斑點；(4)取片劑、膠囊劑、顆粒劑各1-10g，研細，加水溶解，或口服液30-80ml，用水飽和正丁醇萃取2-4次，每次10-30mL，分取正丁醇液，蒸干，殘渣加甲醇0.5-3mL溶解，作為供試品溶液；另取紫丁香苷對照品，加甲醇制成每1mL含0.5-2mg的溶液，作為對照品溶液；吸取供試品溶液和對照品溶液各2-10μL，照中國藥典薄層色譜法試驗，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠GF254，以氯仿∶甲醇∶水＝9-1∶1-9∶0.5-5為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈200-320nm下檢視；供試品色譜中，在與對照品相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
斑蝥素的含量測定方法為照氣相色譜法測定規(guī)格為30m×0.25mm×0.25μm的聚苯基甲基硅氧烷毛細管柱；柱溫150-160℃；升溫程序為160℃-180℃時速度為2℃/min，180℃-200℃時速度為10℃/min，在30min內完成；氣化室溫度200-220℃；FID檢測器，檢測器溫度200-220℃；N2為載氣，流速30mL/min；分流比10∶1；理論板數(shù)以斑蝥素峰計算不得低于10000；取斑蝥素對照品，精密稱定，加氯仿溶解，搖勻，即得對照品溶液；取裝量差異項下的片劑、膠囊劑、顆粒劑精密稱定，加水溶解，或口服液，以濃鹽酸調pH，加氯仿提取，收集提取液，室溫揮干，殘渣加氯仿溶解并轉移至量瓶，加氯仿至刻度，搖勻，即得供試品溶液；分別精密量取對照品溶液與供試品溶液各0.5-5μl，注入氣相色譜儀測定含量；本口服制劑中，片劑中含斑蝥素C10H12O4不得少于0.05mg/g；膠囊劑中含斑蝥素C10H12O4不得少于0.025mg/g；顆粒劑中含斑蝥素C10H12O4不得少于0.01mg/g；口服液中含斑蝥素C10H12O4不得少于4mg/L。
更具體的斑蝥素含量測定方法為照氣相色譜法測定規(guī)格為30m×0.25mm×0.25μm的聚苯基甲基硅氧烷(5％苯基)毛細管柱；柱溫150-160℃；升溫程序為160℃-180℃時速度為2℃/min，180℃-200℃時速度為10℃/min，在30min內完成；氣化室溫度200-220℃；FID檢測器，檢測器溫度200-220℃；N2為載氣，流速30mL/min；分流比10∶1；理論板數(shù)以斑蝥素峰計算不得低于10000；取斑蝥素對照品適量，精密稱定，加氯仿制成每1mL含0.05-0.5mg的溶液，即得對照品溶液；取裝量差異項下的片劑、膠囊劑、顆粒劑1-10g，加水溶解，或口服液10-40mL，以濃鹽酸調pH至1-2，加氯仿提取2-4次，每次10-40mL，收集提取液，室溫揮干，殘渣加氯仿溶解并轉移至5mL量瓶，加氯仿至刻度，搖勻，即得供試品溶液；分別精密量取對照品溶液與供試品溶液各0.5-5μl，注入氣相色譜儀測定含量；本口服制劑中，片劑中含斑蝥素C10H12O4不得少于0.05mg/g；膠囊劑中含斑蝥素C10H12O4不得少于0.025mg/g；顆粒劑中含斑蝥素C10H12O4不得少于0.01mg/g；口服液中含斑蝥素C10H12O4不得少于4mg/L。
本發(fā)明所述質量控制方法包括性狀對于片劑，產品為薄膜衣片，除去薄膜衣后顯黃綠色至棕褐色，味微苦回甜；對于膠囊劑，內容物為黃綠色至棕褐色的粉末，味微苦回甜；對于顆粒劑，產品為棕黃色至深褐色的顆粒；味甜；對于口服液，產品為棕色液體；味甜；鑒別(1)取片劑、膠囊劑、顆粒劑研細，或口服液，加5％氫氧化鈉溶液使溶解，轉至分液漏斗中，再用水洗滌容器，轉移至分液漏斗中，用水飽和正丁醇提取，正丁醇液蒸干，殘渣用水溶解，轉移至氧化鋁柱上，先用氯仿洗脫，棄去氯仿洗脫液，再用70％甲醇洗脫，洗脫液于水浴上蒸干，殘渣加甲醇使溶解，作為供試品溶液；另取人參對照藥材，加氯仿，加熱回流，棄去氯仿液，藥渣揮干溶劑，加甲醇回流提取，回收甲醇至干，殘渣加5％氫氧化鈉溶液使溶解，同供試品溶液制備方法制得對照藥材溶液；取黃芪對照藥材，加甲醇，加熱回流，濾過，濾液蒸干，殘渣加5％氫氧化鈉溶液使溶解，同供試品溶液制備方法制得對照藥材溶液；另取人參皂苷Rg1對照品及黃芪甲苷對照品，加甲醇溶解，作為對照品溶液；照中國藥典薄層色譜法實驗，吸取供試品溶液、對照藥材及對照品溶液，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿∶乙酸乙酯∶甲醇∶水＝5-50∶0.5-5∶1-9∶1-9于5～10℃放置8-18小時的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘5～10分鐘，置紫外光燈280-420nm下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材及對照品相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；(2)取片劑、膠囊劑、顆粒劑研細，加水溶解，或口服液，調pH，用等體積的乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯層再用水萃取，取乙酸乙酯層蒸干，殘渣加甲醇溶解，作為供試品溶液；另取野黃芩苷對照品，加甲醇溶解，作為對照品溶液；吸取供試品溶液和對照品溶液，照中國藥典薄層色譜法試驗，分別點于同一聚酰胺薄膜上，以乙酸∶乙醇＝9-1∶1-9為展開劑，上行展開，取出，晾干，噴以10％三氯化鐵乙醇液；供試品色譜中，在與對照品相應的位置上，顯相同顏色的斑點；(3)取片劑、膠囊劑、顆粒劑研細，加水溶解，或口服液，調pH，用水飽和正丁醇萃取，正丁醇液用正丁醇飽和的水洗滌，取正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇1mL，用少量甲醇轉移至磨口瓶中蒸干甲醇，加濃HCl，氯仿回流，放冷用水洗滌，棄水層，取氯仿層蒸干，殘渣用無水乙醇溶解，作為供試品溶液；另取甘草次酸對照品，加無水乙醇溶解，作為對照品溶液；吸取供試品溶液和對照品溶液，照中國藥典薄層色譜法試驗，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以30-60℃石油醚∶苯∶乙酸乙酯∶甲酸＝5-50∶5-50∶1-9∶0.1-0.9為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈200-320nm下檢視；供試品色譜中，在與對照品相應的位置上，顯相同顏色的斑點；(4)取片劑、膠囊劑、顆粒劑研細，加水溶解，或口服液，用水飽和正丁醇萃取，分取正丁醇液，蒸干，殘渣加甲醇溶解，作為供試品溶液；另取紫丁香苷對照品，加甲醇溶解，作為對照品溶液；吸取供試品溶液和對照品溶液，照中國藥典薄層色譜法試驗，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以氯仿∶甲醇∶水＝9-1∶1-9∶0.5-5為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈200-320nm下檢視；供試品色譜中，在與對照品相應的位置上，顯相同顏色的斑點；檢查口服液pH值應在3～7之間，相對密度不低于0.08，其余項應符合中國藥典關于片劑、膠囊劑、顆粒劑或口服液項下的有關規(guī)定；含量測定斑蝥素照氣相色譜法測定規(guī)格為30m×0.25mm×0.25μm的聚苯基甲基硅氧烷毛細管柱；柱溫150-160℃；升溫程序為160℃-180℃時速度為2℃/min，180℃-200℃時速度為10℃/min，在30min內完成；氣化室溫度200-220℃；FID檢測器，檢測器溫度200-220℃；N2為載氣，流速30mL/min；分流比10∶1；理論板數(shù)以斑蝥素峰計算不得低于10000；取斑蝥素對照品，精密稱定，加氯仿溶解，搖勻，即得對照品溶液；取裝量差異項下的片劑、膠囊劑、顆粒劑精密稱定，加水溶解，或口服液，以濃鹽酸調pH，加氯仿提取，收集提取液，室溫揮干，殘渣加氯仿溶解并轉移至量瓶，加氯仿至刻度，搖勻，即得供試品溶液；分別精密量取對照品溶液與供試品溶液各0.5-5μl，注入氣相色譜儀測定含量；本口服制劑中，片劑中含斑蝥素C10H12O4不得少于0.05mg/g；膠囊劑中含斑蝥素C10H12O4不得少于0.025mg/g；顆粒劑中含斑蝥素C10H12O4不得少于0.01mg/g；口服液中含斑蝥素C10H12O4不得少于4mg/L。
申請人經研究發(fā)現(xiàn)，采用以下質量控制方法將更容易控制復方斑蝥口服制劑的質量，更利于保證該制劑的臨床療效。故所述質量控制方法還可包括性狀對于片劑，產品為薄膜衣片，除去薄膜衣后顯黃綠色至棕褐色，味微苦回甜；對于膠囊劑，內容物為黃綠色至棕褐色的粉末，味微苦回甜；對于顆粒劑，產品為棕黃色至深褐色的顆粒；味甜；對于口服液，產品為棕色液體；味甜；鑒別(1)取片劑、膠囊劑、顆粒劑各15-30g，研細，或口服液50-100ml，水浴揮干，加5％氫氧化鈉溶液5-20mL使溶解，轉至分液漏斗中，再用水1-10mL分1-3次洗滌容器，轉移至分液漏斗中，用水飽和正丁醇提取2-4次，每次5-15mL，合并正丁醇液，蒸干，殘渣用0.2-1.2mL水分2-3次溶解，轉移至氧化鋁柱上(中性氧化鋁100～200目，2g，干法裝柱，直徑1cm，長25cm)，先用20-50mL氯仿洗脫，棄去氯仿洗脫液，再用70％甲醇10-40mL洗脫，洗脫液于水浴上蒸干，殘渣加甲醇0.5-2mL使溶解，作為供試品溶液；另取人參對照藥材0.5-2g，加氯仿30-60mL，加熱回流0.5-2小時，棄去氯仿液，藥渣揮干溶劑，加甲醇30-60mL回流提取2-4小時，回收甲醇至干，殘渣加5％氫氧化鈉溶液5-20mL使溶解，同供試品溶液制備方法制得對照藥材溶液；取黃芪對照藥材1-5g，加甲醇10-30mL，加熱回流0.5-2小時，濾過，濾液蒸干，殘渣加5％氫氧化鈉溶液5-20mL使溶解，同供試品溶液制備方法制得對照藥材溶液；另取人參皂苷Rg1對照品及黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每1mL各含0.5-3mg的混合溶液，作為對照品溶液；照中國藥典薄層色譜法實驗，吸取供試品溶液、對照藥材及對照品溶液各2-10μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿∶乙酸乙酯∶甲醇∶水＝5-50∶0.5-5∶1-9∶1-9于5～10℃放置8-18小時的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘5～10分鐘，置紫外光燈280-420nm下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材及對照品相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；
(2)取片劑、膠囊劑、顆粒劑各1-6g，研細，加水溶解，或口服液10-30ml，調pH至1～2，用等體積的乙酸乙酯萃取2-4次，合并乙酸乙酯層用水萃取1-3次，每次10-30mL，取乙酸乙酯層蒸干，殘渣加甲醇0.5-2mL溶解，作為供試品溶液；另取野黃芩苷對照品，加甲醇制成每1mL含0.5-3mg的溶液，作為對照品溶液；吸取供試品溶液和對照品溶液各0.5-5μL，照中國藥典薄層色譜法試驗，分別點于同一聚酰胺薄膜上，以乙酸∶乙醇＝9-1∶1-9為展開劑，上行展開4cm，取出，晾干，噴以10％三氯化鐵乙醇液；供試品色譜中，在與對照品相應的位置上，顯相同顏色的斑點；(3)取片劑、膠囊劑、顆粒劑各5-20g，研細，加水溶解，或口服液30-80ml，調pH至1～2，用水飽和正丁醇萃取2-4次，每次10-40mL，合并正丁醇液，用正丁醇飽和的水洗滌正丁醇液1-5次，每次10-30mL，取正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇0.5-2mL，用少量甲醇轉移至磨口瓶中蒸干甲醇，加1-10mL濃HCl，30-80ml氯仿回流0.5-2小時，放冷用水洗滌2-4次，每次20-50mL，棄水層，取氯仿層蒸干，殘渣用無水乙醇溶解至0.1-1mL，作為供試品溶液；另取甘草次酸對照品，加無水乙醇制成每1mL含0.5-3mg的溶液，作為對照品溶液；吸取供試品溶液和對照品溶液各1-10μL，照中國藥典薄層色譜法試驗，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠GF254，以30-60℃石油謎∶苯∶乙酸乙酯∶甲酸＝5-50∶5-50∶1-9∶0.1-0.9為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈200-320nm下檢視；供試品色譜中，在與對照品相應的位置上，顯相同顏色的斑點；(4)取片劑、膠囊劑、顆粒劑各1-10g，研細，加水溶解，或口服液30-80ml，用水飽和正丁醇萃取2-4次，每次10-30mL，分取正丁醇液，蒸干，殘渣加甲醇0.5-3mL溶解，作為供試品溶液；另取紫丁香苷對照品，加甲醇制成每1mL含0.5-2mg的溶液，作為對照品溶液；吸取供試品溶液和對照品溶液各2-10μL，照中國藥典薄層色譜法試驗，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠GF254，以氯仿∶甲醇∶水＝9-1∶1-9∶0.5-5為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈200-320nm下檢視；供試品色譜中，在與對照品相應的位置上，顯相同顏色的斑點；檢查口服液pH值應在3～7之間，相對密度不低于0.08，其余項應符合中國藥典關于片劑、膠囊劑、顆粒劑或口服液項下的有關規(guī)定；含量測定斑蝥素照氣相色譜法測定規(guī)格為30m×0.25mm×0.25μm的聚苯基甲基硅氧烷(5％苯基)毛細管柱；柱溫150-160℃；升溫程序為160℃-180℃時速度為2℃/min，180℃-200℃時速度為10℃/min，在30min內完成；氣化室溫度200-220℃；FID檢測器，檢測器溫度200-220℃；N2為載氣，流速30mL/min；分流比10∶1；理論板數(shù)以斑蝥素峰計算不得低于10000；取斑蝥素對照品適量，精密稱定，加氯仿制成每1mL含0.05-0.5mg的溶液，即得對照品溶液；取裝量差異項下的片劑、膠囊劑、顆粒劑1-10g，加水溶解，或口服液10-40mL，以濃鹽酸調pH至1-2，加氯仿提取2-4次，每次10-40mL，收集提取液，室溫揮干，殘渣加氯仿溶解并轉移至5mL量瓶，加氯仿至刻度，搖勻，即得供試品溶液；分別精密量取對照品溶液與供試品溶液各0.5-5μl，注入氣相色譜儀測定含量；本口服制劑中，片劑中含斑蝥素C10H12O4不得少于0.05mg/g；膠囊劑中含斑蝥素C10H12O4不得少于0.025mg/g；顆粒劑中含斑蝥素C10H12O4不得少于0.01mg/g；口服液中含斑蝥素C10H12O4不得少于4mg/L。
本發(fā)明質量控制方法是經過大量的篩選試驗得到的最佳方案，以下實驗研究為本發(fā)明的優(yōu)選過程一、斑蝥素含量測定方法的研究本發(fā)明復方斑蝥制劑系由斑蝥、人參、黃芪等十一味藥材通過精制而成，斑蝥為方中抗癌的有效成份，且為毒性藥材，因此選擇斑蝥藥材中所含的斑蝥素作為含量控制指標，采用氣相色譜儀進行測定，并對該含量測定進行詳細的方法學研究。
1、儀器島津GC-2010氣相色譜儀；FID檢測器；RESTEC rtx-5石英毛細管氣相色譜柱；GC-Solution工作站；GCH-300氫氣發(fā)生器；GCB-2000全自動空氣原；SGE微量進樣器。
2、試藥氯仿--分析純，鹽酸--分析純，斑蝥素對照品--中國藥品生物制品檢定所提供，供含量測定用，批號110783-200410。
3、色譜條件規(guī)格為30m×0.25mm×0.25μm的ESTEC rtx-5石英毛細管氣相色譜柱；載氣為N2；柱溫150-160℃；升溫程序為160℃-2℃/min-180℃10℃/min-200℃(30min)；氣化室溫度210℃；檢測器溫度210℃；流速30mL/min；分流比10∶1。
4、提取方法的確定提取方法取本發(fā)明口服液體制劑，精密稱定，以濃鹽酸調pH至1，加氯仿提取3次，每次25mL，收集提取液，室溫揮干，殘渣加氯仿溶解并轉移至5mL量瓶，加氯仿至刻度，搖勻，即得。
4.1提取溶劑揮干溫度的考察分別在室溫及60℃水浴揮干氯仿提取液，制得供試液，測定其斑蝥素含量，測定結果見下表。
不同溫度下?lián)]干提取溶劑對斑蝥素含量測定的影響(n＝2)


試驗結果表明，在60℃水浴下?lián)]干斑蝥素有損失，因此選擇在室溫下?lián)]干氯仿提取液。
4.2調pH值所用鹽酸的濃度的考察分別以濃鹽酸及50％鹽酸水溶液調pH至1，制得供試品溶液，測定其斑蝥素含量，測定結果見下表。
不同濃度鹽酸對斑蝥素含量測定的影響(n＝2)

試驗結果表明，用濃鹽酸或50％鹽酸溶液對斑蝥素的含量影響不大，但50％鹽酸溶液耗用量較大，因此選擇以濃鹽酸調pH值。
4.3pH值的考察分別調pH至2、1.5、1，制得供試液，測定其斑蝥素含量，測定結果見下表。
不同pH值對斑蝥素含量測定的影響(n＝2)

試驗結果表明，調pH值小于2時，可將樣品中的斑蝥素提取完全，故選擇調pH至1-2，但當PH調至1時RSD最小，因此優(yōu)選調pH至1。
5、系統(tǒng)適用性試驗分別取斑蝥素對照品溶液、供試品溶液、缺斑蝥陰性供試品溶液注入氣相色譜儀，記錄色譜。在以上色譜條件下，斑蝥素的保留時間約為4.9分鐘，斑蝥素與相近的雜質峰完全分離，分離度大于1.5，即本試驗條件下斑蝥素與其他組分分離完全。理論塔板數(shù)以斑蝥素峰計約為15000，故擬定理論塔板數(shù)以斑蝥素峰計算，應不低于10000。
6、線性關系考察6.1標準溶液的制備精密稱取斑蝥素對照品12.63mg，置50mL量瓶中，加氯仿稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取0.25mL、1mL、2mL、3mL、4mL置5mL量瓶中，加氯仿稀釋至刻度，搖勻，即得斑蝥素對照品溶液0.01263mg/mL、0.05052mg/mL、0.10104mg/mL、0.15156mg/mL、0.20208mg/mL。
6.2標準曲線的繪制分別精密吸取斑蝥素標準溶液各2μL，注入氣相色譜儀，測定峰面積，記錄色譜圖，以峰面積A(μV)對質量數(shù)X(μg)進行線性回歸計算，得線性方程為A＝1041301.5140X-3964.2652，r＝0.9997，此標準曲線擬合成過原點的曲線方程A＝1027924.2242X，r＝0.9996，將0.10416μg帶入兩式進行計算，結果兩者的相對偏差為0.17％，故正文采用一點法計算含量。斑蝥素進樣量在0.02526μg～0.40416μg范圍內，線性關系良好。
斑蝥素線性關系考察

7、精密度試驗取斑蝥素對照品溶液(濃度為0.10104mg/mL)，重復進樣6次，測定峰面積，記錄圖譜，平均峰面積為202448，RSD為0.74％，結果表明精密度良好，結果見下表。
斑蝥素測定的精密度試驗

8、重復性試驗取本發(fā)明口服液體制劑，按本發(fā)明所述復方斑蝥口服制劑質量控制方法中含量測定項下供試液的制備方法，分別制備6份供試液，測定峰面積，記錄色譜圖。斑蝥素平均含量為0.02073mg/mL，RSD為2.22％。表明重復性良好，結果見下表。
制劑供試品中斑蝥素的重復性試驗

9、穩(wěn)定性試驗取本發(fā)明口服液體制劑，按本發(fā)明所述復方斑蝥口服制劑質量控制方法中含量測定項下供試液的制備方法制備供試液，分別于0、2、4、6、8小時測定其斑蝥素峰面積，記錄色譜圖。平均峰面積為223626，RSD為0.41％。表明供試品溶液中斑蝥素在8小時內穩(wěn)定，結果見下表。
制劑供試品中斑蝥素的穩(wěn)定性試驗

10、回收率試驗采用加樣回收法，分別精密量取平均含量為0.02073mg/mL的復方斑蝥口服液12.5mL，精密加入以氯仿為溶劑，含斑蝥素0.2526mg/mL的斑蝥素對照品溶液1mL，以濃鹽酸調pH至1，加氯仿提取3次，每次25mL，收集提取液，室溫揮干，殘渣加氯仿溶解并轉移至5mL量瓶，加氯仿至刻度，搖勻，即得供試品溶液。將供試液注入氣相色譜儀，測定含量，記錄色譜圖。計算回收率見下表。平均回收率為98.54％，RSD為1.40％，證明該方法可行。
供試品溶液中斑蝥素測定回收率試驗

11、樣品測定按本發(fā)明所述復方斑蝥口服制劑質量控制方法中含量測定項下的方法制備對照品溶液和10份復方斑蝥口服液供試品溶液，測定其中斑蝥素含量，分別進樣2μL，記錄色譜，測定峰面積，按下式計算含量

式中Ai供試品溶液峰面積As對照品溶液峰面積Cs斑蝥素對照品溶液濃度(mg/mL)測定結果見下表10份樣品中斑蝥素含量測定結果(n＝2)


二、人參、黃芪薄層鑒別研究以人參對照藥材及人參皂苷Rg1對照品為對照鑒別制劑中人參藥材以黃芪對照藥材及黃芪甲苷對照品為對照鑒別制劑中黃芪藥材供試品溶液制備方法一取本發(fā)明顆粒制劑，用水飽和正丁醇提取，正丁醇液蒸干，殘渣用水溶解，轉移至氧化鋁柱上，先用氯仿洗脫，棄去氯仿洗脫液，再用70％甲醇洗脫，洗脫液于水浴上蒸干，殘渣加甲醇使溶解，作為供試品溶液；同法制備缺人參和黃芪的陰性供試液。
供試品溶液制備方法二取本發(fā)明顆粒制劑，加5％氫氧化鈉溶液使溶解，轉至分液漏斗中，再用水洗滌容器，轉移至分液漏斗中，用水飽和正丁醇提取，正丁醇液蒸干，殘渣用水溶解，轉移至氧化鋁柱上，先用氯仿洗脫，棄去氯仿洗脫液，再用70％甲醇洗脫，洗脫液于水浴上蒸干，殘渣加甲醇使溶解，作為供試品溶液；同法制備缺人參和黃芪的陰性供試液。
對照藥材溶液制備方法取人參對照藥材，加氯仿，加熱回流，棄去氯仿液，藥渣揮干溶劑，加甲醇回流提取，回收甲醇至干，殘渣加5％氫氧化鈉溶液溶解，轉至分液漏斗中，再用水洗滌容器，轉移至分液漏斗中，用水飽和正丁醇提取，正丁醇液蒸干，殘渣用水溶解，轉移至氧化鋁柱上，先用氯仿洗脫，棄去氯仿洗脫液，再用70％甲醇洗脫，洗脫液于水浴上蒸干，殘渣加甲醇使溶解，作為對照藥材溶液；取黃芪對照藥材，加甲醇，加熱回流，濾過，濾液蒸干，殘渣加5％氫氧化鈉溶液溶解，轉至分液漏斗中，再用水洗滌容器，轉移至分液漏斗中，用水飽和正丁醇提取，正丁醇液蒸干，殘渣用水溶解，轉移至氧化鋁柱上，先用氯仿洗脫，棄去氯仿洗脫液，再用70％甲醇洗脫，洗脫液于水浴上蒸干，殘渣加甲醇使溶解，作為對照藥材溶液。
對照品溶液制備方法取人參皂苷Rg1對照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作為對照品溶液；取黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作為對照品溶液。
展開劑選擇分別以氯仿、乙酸乙酯、甲醇、水不同比例的混合溶液；三氯甲烷、甲酸不同比例的混合溶液；苯、甲酸乙酯不同比例的混合溶液；氯仿、乙酸乙酯、水不同比例的混合溶液為展開劑。
結果采用方法二制備供試品溶液，以氯仿∶乙酸乙酯∶甲醇∶水＝5-50∶0.5-5∶1-9∶1-9為展開劑，其分離度好，斑點顯色清晰，陰性對照無干擾，方法重現(xiàn)性好。最佳展開劑為氯仿∶乙酸乙酯∶甲醇∶水＝13∶1∶8∶2，鑒別效果最佳。
三、半枝蓮薄層鑒別研究以野黃芩苷對照品鑒別制劑中半枝蓮藥材供試品溶液制備方法一取本發(fā)明顆粒制劑，加水溶解，調pH至1～2，用等體積的乙酸乙酯萃取三次，合并乙酸乙酯層用水萃取兩次，每次15mL，取乙酸乙酯層蒸干，殘渣加甲醇1mL溶解，作為供試品溶液；同法制備缺半枝蓮的陰性供試液。
供試品溶液制備方法二取本發(fā)明顆粒制劑，精密稱定，用石油醚(60～90℃)提取至無色，充去醚液，藥渣揮去石油醚，加甲醇繼續(xù)提取至無色，蒸干，殘渣用20％甲醇溶解，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，用微孔濾膜濾過，作為供試品溶液；同法制備缺半枝蓮的陰性供試液。
展開劑選擇分別以乙酸∶乙醇不同比例的混合溶液；環(huán)己烷、乙酸乙酯不同比例的混合溶液；苯和乙酸不同比例的混合溶液；乙醇、水不同比例的混合溶液為展開劑。
結果采用方法一制備供試品溶液，以乙酸∶乙醇＝9-1∶1-9為展開劑，其分離度好，斑點顯色清晰，陰性對照無干擾，方法重現(xiàn)性好，專屬性強。最佳展開劑為乙酸∶乙醇＝4∶1。
四、甘草薄層鑒別研究方法一取藥物，用正丁醇提取，合并正丁醇液，用水洗滌，蒸干，殘渣加甲醇使溶解，作為供試品溶液；同法制備缺甘草的陰性供試品溶液；另取甘草對照藥材1g，加乙醚，加熱回流，濾過，藥渣加甲醇，加熱回流，濾過，濾液蒸干，殘渣加水使溶解，自用正丁醇提取起……同供試品制法，制成對照藥材溶液；再取甘草酸銨對照品，加甲醇制成每1mL含2mg的溶液，作為對照品溶液。以醋酸乙酯∶甲酸∶冰醋酸∶水＝15∶1∶1∶2為展開劑，展開，取出，晾干，以10％硫酸乙醇溶液為顯色劑，在105℃加熱至斑點顯色清晰，置紫外光燈(365nm)下檢視。
結果陰性樣品有干擾。供試品斑點背景干擾大，斑點不清晰，無法檢視。
故考慮以甘草次酸對照品為對照鑒別制劑中甘草藥材方法二供試品溶液制備一取本發(fā)明顆粒制劑，加水溶解，用正丁醇振搖提取三次(必要時離心)，合并正丁醇液，用水洗滌三次，正丁醇液置水浴上蒸干，殘渣加甲醇使溶解，作為供試品溶液；同法制備缺甘草的陰性供試液。
供試品溶液制備二取本發(fā)明顆粒制劑，加水溶解，調pH至1～2，用水飽和正丁醇萃取三次，合并正丁醇液，用正丁醇飽和的水洗滌正丁醇液三次，取正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇，用少量甲醇轉移至磨口瓶中蒸干甲醇，加濃HCl，氯仿回流，放冷用水洗滌，棄水層，取氯仿層蒸干，殘渣用無水乙醇溶解，作為供試品溶液；同法制備缺甘草的陰性樣品溶液。
展開劑選擇分別以苯、乙酸乙酯、甲酸不同比例的混合溶液；苯、丙酮、乙醇、乙酸不同比例的混合溶液；30-60℃石油醚、苯、甲酸不同比例的混合溶液；30-60℃石油醚、苯、乙酸乙酯、甲酸不同比例的混合溶液；環(huán)己烷、乙酸乙酯、甲酸不同比例的混合溶液為展開劑。
結果采用方法二中供試品溶液制備二來制備供試品溶液，以30-60℃石油醚∶苯∶乙酸乙酯∶甲酸＝5-50∶5-50∶1-9∶0.1-0.9為展開劑，其分離度好，斑點顯色清晰，陰性對照無干擾，方法重現(xiàn)性好。最佳展開劑為30-60℃石油醚∶苯∶乙酸乙酯∶甲酸＝10∶20∶7∶0.5。
五、刺五加薄層鑒別研究方法一取藥物，用氯仿萃取兩次，每次25mL，蒸干，殘渣用氯仿溶解并定容至0.5mL，作為供試品溶液；同法制備缺刺五加的陰性供試品溶液；另取異秦皮啶對照品，加甲醇制成每1mL含1mg溶液，作為對照品溶液。以氯仿∶甲醇＝19∶1為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈254nm下檢視。
結果在與對照品相應的位置上，斑點不清晰，陰性有干擾。
故考慮以紫丁香苷對照品鑒別制劑中刺五加藥材方法二取藥物，用水飽和正丁醇萃取三次，每次20mL，分取正丁醇液，蒸干，殘渣加甲醇1mL溶解，作為供試品溶液；同法制備缺刺五加的陰性供試液；另取紫丁香苷對照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作為對照品溶液。
展開劑選擇分別以環(huán)己烷、丙酮不同比例的混合溶液；乙腈、水不同比例的混合溶液；丙酮、甲醇不同比例的混合溶液；氯仿、甲醇、水不同比例的混合溶液為展開劑。
結果方法一的陰性樣品有干擾。方法二處理的樣品效果較好，陰性無干擾。故最終采用方法二制備供試品溶液，以氯仿∶甲醇∶水＝9-1∶1-9∶0.5-5為展開劑，其分離度好，斑點顯色清晰，陰性對照無干擾，方法重現(xiàn)性好，鑒別專屬性強。最佳展開劑為∶氯仿∶甲醇∶水＝7∶3∶1。
與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明針對改進工藝后的復方斑蝥口服制劑建立了斑蝥素的含量測定項目以及人參、黃芪、半枝蓮、甘草、刺五加的薄層鑒別項目，所述質量控制方法精密度高，重現(xiàn)性好，穩(wěn)定性好，回收率高，測量結果準確，可有效控制這種復方斑蝥口服制劑的質量，從而確保該制劑的臨床療效。
具體實施例方式以下通過實施例進一步說明本發(fā)明，但不作為對本發(fā)明的限制。
本發(fā)明的實施例1復方斑蝥片劑的質量控制方法包括性狀產品為薄膜衣片，除去薄膜衣后顯黃綠色至棕褐色，味微苦回甜。
鑒別(1)取片劑15g，加5％氫氧化鈉溶液5mL使溶解，轉至分液漏斗中，再用水1mL洗滌容器，轉移至分液漏斗中，用水飽和正丁醇提取2次，每次5mL，合并正丁醇液，蒸干，殘渣用0.2mL水分2次溶解，轉移至氧化鋁柱上(中性氧化鋁100～200目，2g，干法裝柱，直徑1cm，長25cm)，先用20mmL氯仿洗脫，棄去氯仿洗脫液，再用70％甲醇10mL洗脫，洗脫液于水浴上蒸干，殘渣加甲醇0.5mL使溶解，作為供試品溶液。另取人參對照藥材0.5g，加氯仿30mL，加熱回流0.5小時，棄去氯仿液，藥渣揮干溶劑，加甲醇30mL回流提取2小時，回收甲醇至干，自殘渣加5％氫氧化鈉溶液起……同供試品制法，制成對照藥材溶液。取黃芪對照藥材1g，加甲醇10mL，加熱回流0.5小時，濾過，濾液蒸干，自殘渣加5％氫氧化鈉溶液起……同供試品制法，制成對照藥材溶液。另取人參皂苷Rg1對照品及黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每1mL各含0.5mg的混合溶液，作為對照品溶液。照中國藥典薄層色譜法實驗，吸取供試品溶液4μL、對照藥材及對照品溶液各2μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿∶乙酸乙酯∶甲醇∶水＝50∶0.5∶9∶1于5～10℃放置8小時的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘5～10分鐘，置紫外光燈280nm下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材及對照品相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。
(2)取片劑1g，研細，加水溶解，調pH至1，用等體積的乙酸乙酯萃取2次，合并乙酸乙酯層用10mL水萃取，取乙酸乙酯層蒸干，殘渣加甲醇0.5mL溶解，作為供試品溶液。另取野黃芩苷對照品，加甲醇制成每1mL含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。吸取供試品溶液1μL和對照品溶液0.5μL，照中國藥典薄層色譜法試驗，分別點于同一聚酰胺薄膜上，以乙酸∶乙醇＝9∶1為展開劑，上行展開4cm，取出，晾干，噴以10％三氯化鐵乙醇液。供試品色譜中，在與對照品相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
(3)取片劑5g，研細，加水溶解，調pH至1，用水飽和正丁醇萃取2次，每次10mL，合并正丁醇液，用正丁醇飽和的水10mL洗滌正丁醇液，取正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇0.5mL，用少量甲醇轉移至磨口瓶中蒸干甲醇，加1mL濃HCl，30ml氯仿回流0.5小時，放冷用水洗滌2次，每次20mL，棄水層，取氯仿層蒸干，殘渣用無水乙醇溶解至0.1mL，作為供試品溶液。另取甘草次酸對照品，加無水乙醇制成每1mL含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。吸取供試品溶液4μL和對照品溶液1μL，照中國藥典薄層色譜法試驗，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以30-60℃石油謎∶苯∶乙酸乙酯∶甲酸＝50∶5∶9∶0.1為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈200nm下檢視。供試品色譜中，在與對照品相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
(4)取片劑1g，研細，加水溶解，用水飽和正丁醇萃取2次，每次10mL，分取正丁醇液，蒸干，殘渣加甲醇0.5mL溶解，作為供試品溶液。另取紫丁香苷對照品，加甲醇制成每1mL含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。吸取供試品溶液3μL和對照品溶液2μL，照中國藥典薄層色譜法試驗，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以氯仿∶甲醇∶水＝9∶1∶5為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈200nm下檢視。供試品色譜中，在與對照品相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
檢查應符合中國藥典關于片劑項下的有關規(guī)定。
含量測定斑蝥素照氣相色譜法測定規(guī)格為30m×0.25mm×0.25μm的聚苯基甲基硅氧烷(5％苯基)毛細管柱；柱溫150℃；升溫程序為160℃-180℃時速度為2℃/min，180℃-200℃時速度為10℃/min，在30min內完成；氣化室溫度200℃；FID檢測器，檢測器溫度200℃；N2為載氣，流速30mL/min；分流比10∶1；理論板數(shù)以斑蝥素峰計算不得低于10000。取斑蝥素對照品適量，精密稱定，加氯仿制成每1mL含0.05mg的溶液，即得對照品溶液；取裝量差異項下的片劑1g，加水溶解，以濃鹽酸調pH至1，加氯仿提取2次，每次10mL，收集提取液，室溫揮干，殘渣加氯仿溶解并轉移至5mL量瓶，加氯仿至刻度，搖勻，即得試品溶液。分別精密量取對照品溶液與供試品溶液各0.5μl，注入氣相色譜儀測定含量；本片劑中含斑蝥素(C10H12O4)不得少于0.05mg/g。
本發(fā)明的實施例2復方斑蝥膠囊劑的質量控制方法包括性狀內容物為黃綠色至棕褐色的粉末，味微苦回甜。
鑒別(1)取膠囊劑30g，研細，加5％氫氧化鈉溶液20mL使溶解，轉至分液漏斗中，再用水10mL分3次洗滌容器，轉移至分液漏斗中，用水飽和正丁醇提取4次，每次15mL，合并正丁醇液，蒸干，殘渣用1.2mL水分3次溶解，轉移至氧化鋁柱上(中性氧化鋁100～200目，2g，干法裝柱，直徑1cm，長25cm)，先用50mL氯仿洗脫，棄去氯仿洗脫液，再用70％甲醇40mL洗脫，洗脫液于水浴上蒸干，殘渣加甲醇2mL使溶解，作為供試品溶液。另取人參對照藥材2g，加氯仿60mL，加熱回流2小時，棄去氯仿液，藥渣揮干溶劑，加甲醇60mL回流提取4小時，回收甲醇至干，自殘渣加5％氫氧化鈉溶液起……同供試品制法，制成對照藥材溶液。取黃芪對照藥材5g，加甲醇30mL，加熱回流2小時，濾過，濾液蒸干，自殘渣加5％氫氧化鈉溶液起……同供試品制法，制成對照藥材溶液。另取人參皂苷Rg1對照品及黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每1mL各含3mg的混合溶液，作為對照品溶液。照中國藥典薄層色譜法實驗，吸取供試品溶液10μL、對照藥材及對照品溶液各5μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿∶乙酸乙酯∶甲醇∶水＝5∶5∶1∶9于5～10℃放置18小時的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘5～10分鐘，置紫外光燈420nm下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材及對照品相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。
(2)取膠囊劑6g，研細，加水溶解，調pH至2，用等體積的乙酸乙酯萃取4次，合并乙酸乙酯層用水萃取3次，每次30mL，取乙酸乙酯層蒸干，殘渣加甲醇2mL溶解，作為供試品溶液。另取野黃芩苷對照品，加甲醇制成每1mL含3mg的溶液，作為對照品溶液。吸取供試品溶液5μL和對照品溶液2.5μL，照中國藥典薄層色譜法試驗，分別點于同一聚酰胺薄膜上，以乙酸∶乙醇＝1∶9為展開劑，上行展開4cm，取出，晾干，噴以10％三氯化鐵乙醇液。供試品色譜中，在與對照品相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
(3)取膠囊劑20g，研細，加水溶解，調pH至2，用水飽和正丁醇萃取4次，每次40mL，合并正丁醇液，用正丁醇飽和的水洗滌正丁醇液5次，每次30mL，取正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇2mL，用少量甲醇轉移至磨口瓶中蒸干甲醇，加10mL濃HCl，80ml氯仿回流2小時，放冷用水洗滌4次，每次50mL，棄水層，取氯仿層蒸干，殘渣用無水乙醇溶解至1mL，作為供試品溶液。另取甘草次酸對照品，加無水乙醇制成每1mL含3mg的溶液，作為對照品溶液。吸取供試品溶液10μL和對照品溶液2.5μL，照中國藥典薄層色譜法試驗，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠GF254，以30-60℃石油謎∶苯∶乙酸乙酯∶甲酸＝5∶50∶1∶0.9為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈320nm下檢視。供試品色譜中，在與對照品相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
(4)取膠囊劑10g，研細，加水溶解，用水飽和正丁醇萃取4次，每次30mL，分取正丁醇液，蒸干，殘渣加甲醇3mL溶解，作為供試品溶液。另取紫丁香苷對照品，加甲醇制成每1mL含2mg的溶液，作為對照品溶液。吸取供試品溶液9μL和對照品溶液6μL，照中國藥典薄層色譜法試驗，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠GF254，以氯仿∶甲醇∶水＝1∶9∶0.5為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈320nm下檢視。供試品色譜中，在與對照品相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
檢查應符合中國藥典關于膠囊劑項下的有關規(guī)定。
含量測定斑蝥素照氣相色譜法測定規(guī)格為30m×0.25mm×0.25μm的聚苯基甲基硅氧烷(5％苯基)毛細管柱；柱溫160℃；升溫程序為160℃-180℃時速度為2℃/min，180℃-200℃時速度為10℃/min，在30min內完成；氣化室溫度220℃；FID檢測器，檢測器溫度220℃；N2為載氣，流速30mL/min；分流比10∶1；理論板數(shù)以斑蝥素峰計算不得低于10000。取斑蝥素對照品適量，精密稱定，加氯仿制成每1mL含0.5mg的溶液，即得對照品溶液；取裝量差異項下的膠囊劑10g，加水溶解，以濃鹽酸調pH至2，加氯仿提取4次，每次40mL，收集提取液，室溫揮干，殘渣加氯仿溶解并轉移至5mL量瓶，加氯仿至刻度，搖勻，即得供試品溶液。分別精密量取對照品溶液與供試品溶液各5μl，注入氣相色譜儀測定含量；本膠囊劑中含斑蝥素(C10H12O4)不得少于0.025mg/g。
本發(fā)明的實施例3復方斑蝥顆粒劑的質量控制方法包括性狀產品為棕黃色至深褐色的顆粒；味甜。
鑒別(1)取顆粒劑24g，加5％氫氧化鈉溶液10mL使溶解，轉至分液漏斗中，再用水8mL分2次洗滌容器，轉移至分液漏斗中，用水飽和正丁醇提取4次，分別為10、5、5、5ml，合并正丁醇液，蒸干，殘渣用0.9mL水分3次溶解，轉移至氧化鋁柱上(中性氧化鋁100～200目，2g，干法裝柱，直徑1cm，長25cm)，先用30ml氯仿洗脫，棄去氯仿洗脫液，再用70％甲醇25mL洗脫，洗脫液于水浴上蒸干，殘渣加甲醇1mL使溶解，作為供試品溶液。另取人參對照藥材1g，加氯仿40mL，加熱回流1小時，棄去氯仿液，藥渣揮干溶劑，加甲醇40mL回流提取3小時，回收甲醇至干，自殘渣加5％氫氧化鈉溶液起……同供試品制法，制成對照藥材溶液。取黃芪對照藥材3g，加甲醇20mL，加熱回流1小時，濾過，濾液蒸干，自殘渣加5％氫氧化鈉溶液起……同供試品制法，制成對照藥材溶液。另取人參皂苷Rg1對照品及黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每1mL各含1mg的混合溶液，作為對照品溶液。照中國藥典薄層色譜法實驗，吸取供試品溶液8μL；對照藥材及對照品溶液各4μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿∶乙酸乙酯∶甲醇∶水＝13∶1∶8∶2于5～10℃放置12小時的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘5～10分鐘，置365nm紫外光燈下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材及對照品相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。
(2)取顆粒劑4.5g，加水15mL溶解，調pH至1～2，用等體積的乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯層用水萃取2次，每次15mL，取乙酸乙酯層蒸干，殘渣加甲醇1mL溶解，作為供試品溶液。另取野黃芩苷對照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作為對照品溶液。吸取供試品溶液4μL和對照品溶液2μL，照中國藥典薄層色譜法試驗，分別點于同一聚酰胺薄膜上，以乙酸∶乙醇＝4∶1為展開劑，上行展開4cm，取出，晾干，噴以10％三氯化鐵乙醇液。供試品色譜中，在與對照品相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
(3)取顆粒劑15g，加水50mL溶解，調pH至1～2，用水飽和正丁醇萃取3次，每次25mL，合并正丁醇液，用正丁醇飽和的水洗滌正丁醇液3次，每次15mL，取正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇1mL，用少量甲醇轉移至磨口瓶中蒸干甲醇，加5mL濃鹽酸，50mL氯仿回流1小時，放冷用水洗滌3次，每次30mL，棄水層，取氯仿層蒸干，殘渣用無水乙醇溶解至0.5mL，作為供試品溶液。另取甘草次酸對照品，加無水乙醇制成每1mL含1mg的溶液，作為對照品溶液。吸取供試品溶液8μL和對照品溶液2μL，照中國藥典薄層色譜法試驗，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠GF254，以30-60℃石油謎∶苯∶乙酸乙酯∶甲酸＝10∶20∶7∶0.5為展開劑，展開，取出，晾干，置254nm紫外燈下檢視。供試品色譜中，在與對照品相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
(4)取顆粒劑7.5g，加水25mL溶解，用水飽和正丁醇萃取3次，每次20mL，分取正丁醇液，蒸干，殘渣加甲醇1mL溶解，作為供試品溶液。另取紫丁香苷對照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作為對照品溶液。吸取供試品溶液6μL和對照品溶液4μL，照中國藥典薄層色譜法試驗，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠GF254，以氯仿∶甲醇∶水＝7∶3∶1為展開劑，展開，取出，晾干，置254nm紫外燈下檢視。供試品色譜中，在與對照品相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
檢查應符合中國藥典關于顆粒劑項下有關的各項規(guī)定。
含量測定斑蝥素照氣相色譜法測定規(guī)格為30m×0.25mm×0.25μm的聚苯基甲基硅氧烷(5％苯基)毛細管柱；柱溫155℃；升溫程序為160℃-180℃時速度為2℃/min，180℃-200℃時速度為10℃/min，在30min內完成；氣化室溫度210℃；FID檢測器，檢測器溫度210℃；N2為載氣，流速30mL/min；分流比10∶1；理論板數(shù)以斑蝥素峰計算不得低于10000。取斑蝥素對照品適量，精密稱定，加氯仿制成每1ml含0.1mg的溶液，即得對照品溶液；取裝量差異項下的顆粒劑5g，精密稱定，加水25ml使溶解，以濃鹽酸調pH至1，加氯仿提取3次，每次25mL，收集提取液，室溫揮干，殘渣加氯仿溶解并轉移至5mL量瓶，加氯仿至刻度，搖勻，即得供試品溶液。分別精密量取對照品溶液與供試品溶液各2μl，注入氣相色譜儀測定含量；本顆粒劑中含斑蝥素(C10H12O4)不得少于0.01mg/g。
本發(fā)明的實施例4復方斑蝥口服液的質量控制方法包括
性狀產品為棕色液體；味甜。
鑒別(1)取口服液80mL，水浴揮干，加5％氫氧化鈉溶液15mL使溶解，轉至分液漏斗中，再用水5mL分2次洗滌容器，轉移至分液漏斗中，用水飽和正丁醇提取3次，分別為10、5、5mL，合并正丁醇液，蒸干，殘渣用0.6mL水分2次溶解，轉移至氧化鋁柱上(中性氧化鋁100～200目，2g，干法裝柱，直徑1cm，長25cm)，先用40mL氯仿洗脫，棄去氯仿洗脫液，再用70％甲醇30mL洗脫，洗脫液于水浴上蒸干，殘渣加甲醇1.5mL使溶解，作為供試品溶液。另取人參對照藥材1.5g，加氯仿50mL，加熱回流1.5小時，棄去氯仿液，藥渣揮干溶劑，加甲醇50mL回流提取3小時，回收甲醇至干，自殘渣加5％氫氧化鈉溶液起……同供試品制法，制成對照藥材溶液。取黃芪對照藥材2g，加甲醇15mL，加熱回流1.5小時，濾過，濾液蒸干，自殘渣加5％氫氧化鈉溶液起……同供試品制法，制成對照藥材溶液。另取人參皂苷Rg1對照品及黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每1mL各含2mg的混合溶液，作為對照品溶液。照中國藥典薄層色譜法實驗，吸取供試品溶液6μL；對照藥材及對照品溶液各3μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿∶乙酸乙酯∶甲醇∶水＝25∶2∶6∶4于5～10℃放置15小時的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘5～10分鐘，置300nm紫外光燈下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材及對照品相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。
(2)取口服液15mL，調pH至1～2，用等體積的乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯層用水萃取2次，每次20mL，取乙酸乙酯層蒸干，殘渣加甲醇1.5mL溶解，作為供試品溶液。另取野黃芩苷對照品，加甲醇制成每1mL含2mg的溶液，作為對照品溶液。吸取供試品溶液3μL和對照品溶液1μL，照中國藥典薄層色譜法試驗，分別點于同一聚酰胺薄膜上，以乙酸∶乙醇＝5∶5為展開劑，上行展開4cm，取出，晾干，噴以10％三氯化鐵乙醇液。供試品色譜中，在與對照品相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
(3)取口服液50mL，調pH至1～2，用水飽和正丁醇萃取3次，每次30mL，合并正丁醇液，用正丁醇飽和的水洗滌正丁醇液2次，每次20mL，取正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇1.5mL，用少量甲醇轉移至磨口瓶中蒸干甲醇，加7mL濃HCl，60ml氯仿回流1.5小時，放冷用水洗滌3次，每次40mL，棄水層，取氯仿層蒸干，殘渣用無水乙醇溶解至0.6mL，作為供試品溶液。另取甘草次酸對照品，加無水乙醇制成每1mL含2mg的溶液，作為對照品溶液。吸取供試品溶液6μL和對照品溶液3μL，照中國藥典薄層色譜法試驗，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠GF254，以30-60℃石油謎∶苯∶乙酸乙酯∶甲酸＝20∶30∶6∶0.4為展開劑，展開，取出，晾干，置280nm紫外燈下檢視。供試品色譜中，在與對照品相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
(4)取口服液50mL，用水飽和正丁醇萃取3次，每次15mL，分取正丁醇液，蒸干，殘渣加甲醇2mL溶解，作為供試品溶液。另取紫丁香苷對照品，加甲醇制成每1mL含1.5mg的溶液，作為對照品溶液。吸取供試品溶液8μL和對照品溶液5μL，照中國藥典薄層色譜法試驗，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠6F254，以氯仿∶甲醇∶水＝8∶4∶3為展開劑，展開，取出，晾干，置280nm紫外燈下檢視。供試品色譜中，在與對照品相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
檢查pH值應在4～6之間，相對密度不低于1.02，其余項應符合中國藥典合劑項下有關的各項規(guī)定。
含量測定斑蝥素照氣相色譜法測定規(guī)格為30m×0.25mm×0.25μm的聚苯基甲基硅氧烷(5％苯基)毛細管柱；柱溫160℃；升溫程序為160℃-2℃/min-180℃-10℃/min-200℃(30min)；氣化室溫度210℃；FID檢測器，檢測器溫度210℃；N2為載氣，流速30mL/min；分流比10∶1；理論板數(shù)以斑蝥素峰計算不得低于10000。取斑蝥素對照品適量，精密稱定，加氯仿制成每1mL含0.3mg的溶液，即得對照品溶液；精密量取口服液25mL，以濃鹽酸調pH至2，加氯仿提取3次，每次30mL，收集提取液，室溫揮干，殘渣加氯仿溶解并轉移至5mL量瓶，加氯仿至刻度，搖勻，即得供試品溶液。分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各3μL，注入氣相色譜儀測定含量。本口服液中含斑蝥素(C10H12O4)不得少于4mg/L。
本發(fā)明的實施例5復方斑蝥制劑的質量控制方法可以包括性狀對于片劑，產品為薄膜衣片，除去薄膜衣后顯黃綠色至棕褐色，味微苦回甜；對于膠囊劑，內容物為黃綠色至棕褐色的粉末，味微苦回甜；對于顆粒劑，產品為棕黃色至深褐色的顆粒；味甜；對于口服液，產品為棕色液體；味甜。
鑒別(1)取片劑、膠囊劑、顆粒劑各15g，研細，或口服液50ml，水浴揮干，加5％氫氧化鈉溶液5mL使溶解，轉至分液漏斗中，再用水1mL洗滌容器，轉移至分液漏斗中，用水飽和正丁醇提取2次，每次5mL，合并正丁醇液，蒸干，殘渣用0.2mL水分2次溶解，轉移至氧化鋁柱上(中性氧化鋁100～200目，2g，干法裝柱，直徑1cm，長25cm)，先用20mL氯仿洗脫，棄去氯仿洗脫液，再用70％甲醇10mL洗脫，洗脫液于水浴上蒸干，殘渣加甲醇0.5mL使溶解，作為供試品溶液。另取人參對照藥材0.5g，加氯仿30mL，加熱回流0.5小時，棄去氯仿液，藥渣揮干溶劑，加甲醇30mL回流提取2小時，回收甲醇至干，自殘渣加5％氫氧化鈉溶液起……同供試品制法，制成對照藥材溶液。取黃芪對照藥材1g，加甲醇10mL，加熱回流0.5小時，濾過，濾液蒸干，自殘渣加5％氫氧化鈉溶液起……同供試品制法，制成對照藥材溶液。另取人參皂苷Rg1對照品及黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每1mL各含0.5mg的混合溶液，作為對照品溶液。照中國藥典薄層色譜法實驗，吸取供試品溶液5μL、對照藥材及對照品溶液各2μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿∶乙酸乙酯∶甲醇∶水＝20∶3∶6∶2于5～10℃放置8小時的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘5～10分鐘，置紫外光燈280nm下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材及對照品相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。
(2)取片劑、膠囊劑、顆粒劑各1g，研細，加水溶解，或口服液10ml，調pH至1，用等體積的乙酸乙酯萃取2次，合并乙酸乙酯層用10mL水萃取，取乙酸乙酯層蒸干，殘渣加甲醇0.5mL溶解，作為供試品溶液。另取野黃芩苷對照品，加甲醇制成每1mL含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。吸取供試品溶液2μL和對照品溶液0.5μL，照中國藥典薄層色譜法試驗，分別點于同一聚酰胺薄膜上，以乙酸∶乙醇＝7∶3為展開劑，上行展開4cm，取出，晾干，噴以10％三氯化鐵乙醇液。供試品色譜中，在與對照品相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
檢查口服液pH值應在3～7之間，相對密度不低于0.08，其余項應符合中國藥典關于片劑、膠囊劑、顆粒劑或口服液項下的有關規(guī)定。
本發(fā)明的實施例6復方斑蝥口服制劑的質量控制方法可以包括性狀對于片劑，產品為薄膜衣片，除去薄膜衣后顯黃綠色至棕褐色，味微苦回甜；對于膠囊劑，內容物為黃綠色至棕褐色的粉末，味微苦回甜；對于顆粒劑，產品為棕黃色至深褐色的顆粒；味甜；對于口服液，產品為棕色液體；味甜。
鑒別(1)取片劑、膠囊劑、顆粒劑各5g，研細，加水溶解，或口服液30ml，調pH至1，用水飽和正丁醇萃取2次，每次10mL，合并正丁醇液，用正丁醇飽和的水10mL洗滌正丁醇液，取正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇0.5mL，用少量甲醇轉移至磨口瓶中蒸干甲醇，加1mL濃HCl，30ml氯仿回流0.5小時，放冷用水洗滌2次，每次20mL，棄水層，取氯仿層蒸干，殘渣用無水乙醇溶解至0.1mL，作為供試品溶液。另取甘草次酸對照品，加無水乙醇制成每1mL含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。吸取供試品溶液2μL和對照品溶液1μL，照中國藥典薄層色譜法試驗，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠GF254，以30-60℃石油謎∶苯∶乙酸乙酯∶甲酸＝15∶35∶8∶0.6為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈200nm下檢視。供試品色譜中，在與對照品相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
(2)取片劑、膠囊劑、顆粒劑各1g，研細，加水溶解，或口服液30ml，用水飽和正丁醇萃取2次，每次10mL，分取正丁醇液，蒸干，殘渣加甲醇0.5mL溶解，作為供試品溶液。另取紫丁香苷對照品，加甲醇制成每1mL含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。吸取供試品溶液4μL和對照品溶液2μL，照中國藥典薄層色譜法試驗，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠GF254，以氯仿∶甲醇∶水＝5∶5∶3為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈200nm下檢視。供試品色譜中，在與對照品相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
含量測定斑蝥素照氣相色譜法測定聚苯基甲基硅氧烷(5％苯基)毛細管柱(30m×0.25mm×0.25μm)；柱溫150℃；升溫程序為160℃-180℃時速度為2℃/min，180℃-200℃時速度為10℃/min，在30min內完成；氣化室溫度200℃；FID檢測器，檢測器溫度200℃；N2為載氣，流速30mL/min；分流比10∶1；理論板數(shù)以斑蝥素峰計算不得低于10000。取斑蝥素對照品適量，精密稱定，加氯仿制成每1mL含0.05mg的溶液，即得對照品溶液；取裝量差異項下的片劑、膠囊劑、顆粒劑1g，加水溶解，或口服液10mL，以濃鹽酸調pH至1，加氯仿提取2次，每次10mL，收集提取液，室溫揮干，殘渣加氯仿溶解并轉移至5mL量瓶，加氯仿至刻度，搖勻，即得供試品溶液。分別精密量取對照品溶液與供試品溶液各0.5μl，注入氣相色譜儀測定含量。本口服制劑中，片劑中含斑蝥素(C10H12O4)不得少于0.05mg/g；膠囊劑中含斑蝥素(C10H12O4)不得少于0.025mg/g；顆粒劑中含斑蝥素(C10H12O4)不得少于0.01mg/g；口服液中含斑蝥素(C10H12O4)不得少于4mg/L。
本發(fā)明的實施例7復方斑蝥口服制劑的質量控制方法可以包括性狀對于片劑，產品為薄膜衣片，除去薄膜衣后顯黃綠色至棕褐色，味微苦回甜；對于膠囊劑，內容物為黃綠色至棕褐色的粉末，味微苦回甜；對于顆粒劑，產品為棕黃色至深褐色的顆粒；味甜；對于口服液，產品為棕色液體；味甜。
鑒別取片劑、膠囊劑、顆粒劑各30g，研細，或口服液100ml，水浴揮干，加5％氫氧化鈉溶液20mL使溶解，轉至分液漏斗中，再用水10mL分3次洗滌容器，轉移至分液漏斗中，用水飽和正丁醇提取4次，每次15mL，合并正丁醇液，蒸干，殘渣用1.2mL水分3次溶解，轉移至氧化鋁柱上(中性氧化鋁100～200目，2g，干法裝柱，直徑1cm，長25cm)，先用50mL氯仿洗脫，棄去氯仿洗脫液，再用70％甲醇40mL洗脫，洗脫液于水浴上蒸干，殘渣加甲醇2mL使溶解，作為供試品溶液。另取人參對照藥材2g，加氯仿60mL，加熱回流2小時，棄去氯仿液，藥渣揮干溶劑，加甲醇60mL回流提取4小時，回收甲醇至干，自殘渣加5％氫氧化鈉溶液起……同供試品制法，制成對照藥材溶液。取黃芪對照藥材5g，加甲醇30mL，加熱回流2小時，濾過，濾液蒸干，自殘渣加5％氫氧化鈉溶液起……同供試品制法，制成對照藥材溶液。另取人參皂苷Rg1對照品及黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每1mL各含3mg的混合溶液，作為對照品溶液。照中國藥典薄層色譜法實驗，吸取供試品溶液10μL、對照藥材及對照品溶液各8μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿∶乙酸乙酯∶甲醇∶水＝30∶3∶5∶5于5～10℃放置18小時的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘5～10分鐘，置紫外光燈420nm下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材及對照品相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。
檢查口服液pH值應在3～7之間，相對密度不低于0.08，其余項應符合中國藥典關于片劑、膠囊劑、顆粒劑或口服液項下的有關規(guī)定。
含量測定斑蝥素照氣相色譜法測定聚苯基甲基硅氧烷(5％苯基)毛細管柱(30m×0.25mm×0.25μm)；柱溫160℃；升溫程序為160℃180℃時速度為2℃/min，180℃-200℃時速度為10℃/min，在30min內完成；氣化室溫度220℃；FID檢測器，檢測器溫度220℃；N2為載氣，流速30mL/min；分流比10∶1；理論板數(shù)以斑蝥素峰計算不得低于10000。取斑蝥素對照品適量，精密稱定，加氯仿制成每1mL含0.5mg的溶液，即得對照品溶液；取裝量差異項下的片劑、膠囊劑、顆粒劑10g，加水溶解，或口服液40mL，以濃鹽酸調pH至2，加氯仿提取4次，每次40mL，收集提取液，室溫揮干，殘渣加氯仿溶解并轉移至5mL量瓶，加氯仿至刻度，搖勻，即得供試品溶液。分別精密量取對照品溶液與供試品溶液各5μl，注入氣相色譜儀測定含量。本口服制劑中，片劑中含斑蝥素(C10H12O4)不得少于0.05mg/g；膠囊劑中含斑蝥素(C10H12O4)不得少于0.025mg/g；顆粒劑中含斑蝥素(C10H12O4)不得少于0.01mg/g；口服液中含斑蝥素(C10H12O4)不得少于4mg/L。
本發(fā)明的實施例8復方斑蝥口服制劑的質量控制方法可以包括性狀對于片劑，產品為薄膜衣片，除去薄膜衣后顯黃綠色至棕褐色，味微苦回甜；對于膠囊劑，內容物為黃綠色至棕褐色的粉末，味微苦回甜；對于顆粒劑，產品為棕黃色至深褐色的顆粒；味甜；對于口服液，產品為棕色液體；味甜。
鑒別(1)取片劑、膠囊劑、顆粒劑各6g，研細，加水溶解，或口服液30ml，調pH至2，用等體積的乙酸乙酯萃取4次，合并乙酸乙酯層用水萃取3次，每次30mL，取乙酸乙酯層蒸干，殘渣加甲醇2mL溶解，作為供試品溶液。另取野黃芩苷對照品，加甲醇制成每1mL含3mg的溶液，作為對照品溶液。吸取供試品溶液5μL和對照品溶液3μL，照中國藥典薄層色譜法試驗，分別點于同一聚酰胺薄膜上，以乙酸∶乙醇＝2∶8為展開劑，上行展開4cm，取出，晾干，噴以10％三氯化鐵乙醇液。供試品色譜中，在與對照品相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
(2)取片劑、膠囊劑、顆粒劑各20g，研細，加水溶解，或口服液80ml，調pH至2，用水飽和正丁醇萃取4次，每次40mL，合并正丁醇液，用正丁醇飽和的水洗滌正丁醇液5次，每次30mL，取正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇2mL，用少量甲醇轉移至磨口瓶中蒸干甲醇，加10mL濃HCl，80ml氯仿回流2小時，放冷用水洗滌4次，每次50mL，棄水層，取氯仿層蒸干，殘渣用無水乙醇溶解至1mL，作為供試品溶液。另取甘草次酸對照品，加無水乙醇制成每1mL含3mg的溶液，作為對照品溶液。吸取供試品溶液10μL和對照品溶液6μL，照中國藥典薄層色譜法試驗，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠GF254，以30-60℃石油謎∶苯∶乙酸乙酯∶甲酸＝30∶30∶5∶0.5為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈320nm下檢視。供試品色譜中，在與對照品相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
(3)取片劑、膠囊劑、顆粒劑各10g，研細，加水溶解，或口服液80ml，用水飽和正丁醇萃取4次，每次30mL，分取正丁醇液，蒸干，殘渣加甲醇3mL溶解，作為供試品溶液。另取紫丁香苷對照品，加甲醇制成每1mL含2mg的溶液，作為對照品溶液。吸取供試品溶液10μL和對照品溶液8μL，照中國藥典薄層色譜法試驗，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠GF254，以氯仿∶甲醇∶水＝3∶7∶2為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈320nm下檢視。供試品色譜中，在與對照品相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
檢查口服液pH值應在3～7之間，相對密度不低于0.08，其余項應符合中國藥典關于片劑、膠囊劑、顆粒劑或口服液項下的有關規(guī)定。
權利要求
1.一種復方斑蝥口服制劑的質量控制方法，所述口服制劑是由斑蝥0.6-6份、人參1.5-15份、黃芪7.5-100份、刺五加7.5-100份、三棱2.4-24份、半枝蓮9-100份、莪術2.4-24份、山茱萸3-30份、女貞子3-30份、熊膽粉0.05-1.0份和甘草1.5-15份制備成的膠囊劑、片劑、顆粒劑或口服液，所述質量控制方法主要包括性狀、鑒別、檢查以及含量測定項目中的部分或全部；其特征在于其中鑒別包括對制劑中人參、黃芪、半枝蓮、甘草和刺五加的薄層色譜鑒別；含量測定是對制劑中斑蝥所含斑蝥素的含量測定；人參的鑒別方法是以人參對照藥材及人參皂苷Rg1對照品為對照，以氯仿∶乙酸乙酯∶甲醇∶水＝5-50∶0.5-5∶1-9∶1-9放置后的下層溶液為展開劑的薄層色譜法；黃芪的鑒別方法是以黃芪對照藥材及黃芪甲苷對照品為對照，以氯仿∶乙酸乙酯∶甲醇∶水＝550∶0.55∶1-9∶1-9放置后的下層溶液為展開劑的薄層色譜法；半枝蓮的鑒別方法是以野黃芩苷對照品為對照，以乙酸∶乙醇＝9-1∶1-9為展開劑的薄層色譜法；甘草的鑒別方法是以甘草次酸對照品為對照，以30-60℃石油醚∶苯∶乙酸乙酯∶甲酸＝5-50∶5-50∶1-9∶0.1-0.9為展開劑的薄層色譜法；刺五加的鑒別方法是以紫丁香苷對照品為對照，以氯仿∶甲醇∶水＝9-1∶1-9∶0.5-5為展開劑的薄層色譜法；斑蝥中所含斑蝥素的含量測定方法是以斑蝥素對照品為對照的氣相色譜法。
2.按照權利要求1所述復方斑蝥口服制劑的質量控制方法，其特征在于制劑中半枝蓮的鑒別方法為取片劑、膠囊劑、顆粒劑研細，加水溶解，或口服液，調pH，用等體積的乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯層再用水萃取，取乙酸乙酯層蒸干，殘渣加甲醇溶解，作為供試品溶液；另取野黃芩苷對照品，加甲醇溶解，作為對照品溶液；吸取供試品溶液和對照品溶液，照中國藥典薄層色譜法試驗，分別點于同一聚酰胺薄膜上，以乙酸∶乙醇＝9-1∶1-9為展開劑，上行展開，取出，晾干，噴以10％三氯化鐵乙醇液；供試品色譜中，在與對照品相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
3.按照權利要求1所述復方斑蝥口服制劑的質量控制方法，其特征在于制劑中甘草的鑒別方法為取片劑、膠囊劑、顆粒劑研細，加水溶解，或口服液，調pH，用水飽和正丁醇萃取，正丁醇液用正丁醇飽和的水洗滌，取正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇1mL，用少量甲醇轉移至磨口瓶中蒸干甲醇，加濃HCl，氯仿回流，放冷用水洗滌，棄水層，取氯仿層蒸干，殘渣用無水乙醇溶解，作為供試品溶液；另取甘草次酸對照品，加無水乙醇溶解，作為對照品溶液；吸取供試品溶液和對照品溶液，照中國藥典薄層色譜法試驗，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以30-60℃石油醚∶苯∶乙酸乙酯∶甲酸＝5-50∶5-50∶1-9∶0.1-0.9為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈200-320nm下檢視；供試品色譜中，在與對照品相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
4.按照權利要求1所述復方斑蝥口服制劑的質量控制方法，其特征在于制劑中刺五加的鑒別方法為取片劑、膠囊劑、顆粒劑研細，加水溶解，或口服液，用水飽和正丁醇萃取，分取正丁醇液，蒸干，殘渣加甲醇溶解，作為供試品溶液；另取紫丁香苷對照品，加甲醇溶解，作為對照品溶液；吸取供試品溶液和對照品溶液，照中國藥典薄層色譜法試驗，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以氯仿∶甲醇∶水＝9-1∶1-9∶0.5-5為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈200-320nm下檢視；供試品色譜中，在與對照品相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
5.按照權利要求1所述復方斑蝥口服制劑的質量控制方法，其特征在于所述鑒別方法包括以下項目的部分或全部(1)取片劑、膠囊劑、顆粒劑研細，或口服液，加5％氫氧化鈉溶液使溶解，轉至分液漏斗中，再用水洗滌容器，轉移至分液漏斗中，用水飽和正丁醇提取，正丁醇液蒸干，殘渣用水溶解，轉移至氧化鋁柱上，先用氯仿洗脫，棄去氯仿洗脫液，再用70％甲醇洗脫，洗脫液于水浴上蒸干，殘渣加甲醇使溶解，作為供試品溶液；另取人參對照藥材，加氯仿，加熱回流，棄去氯仿液，藥渣揮干溶劑，加甲醇回流提取，回收甲醇至干，殘渣加5％氫氧化鈉溶液使溶解，同供試品溶液制備方法制得對照藥材溶液；取黃芪對照藥材，加甲醇，加熱回流，濾過，濾液蒸干，殘渣加5％氫氧化鈉溶液使溶解，同供試品溶液制備方法制得對照藥材溶液；另取人參皂苷Rg1對照品及黃芪甲苷對照品，加甲醇溶解，作為對照品溶液；照中國藥典薄層色譜法實驗，吸取供試品溶液、對照藥材及對照品溶液，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿∶乙酸乙酯∶甲醇∶水＝5-50∶0.5-5∶1-9∶1-9于5～10℃放置8-18小時的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘5～10分鐘，置紫外光燈280-420nm下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材及對照品相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；(2)取片劑、膠囊劑、顆粒劑研細，加水溶解，或口服液，調pH，用等體積的乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯層再用水萃取，取乙酸乙酯層蒸干，殘渣加甲醇溶解，作為供試品溶液；另取野黃芩苷對照品，加甲醇溶解，作為對照品溶液；吸取供試品溶液和對照品溶液，照中國藥典薄層色譜法試驗，分別點于同一聚酰胺薄膜上，以乙酸∶乙醇＝9-1∶1-9為展開劑，上行展開，取出，晾干，噴以10％三氯化鐵乙醇液；供試品色譜中，在與對照品相應的位置上，顯相同顏色的斑點；(3)取片劑、膠囊劑、顆粒劑研細，加水溶解，或口服液，調pH，用水飽和正丁醇萃取，正丁醇液用正丁醇飽和的水洗滌，取正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇1mL，用少量甲醇轉移至磨口瓶中蒸干甲醇，加濃HCl，氯仿回流，放冷用水洗滌，棄水層，取氯仿層蒸干，殘渣用無水乙醇溶解，作為供試品溶液；另取甘草次酸對照品，加無水乙醇溶解，作為對照品溶液；吸取供試品溶液和對照品溶液，照中國藥典薄層色譜法試驗，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以30-60℃石油醚∶苯∶乙酸乙酯∶甲酸＝5-50∶5-50∶1-9∶0.1-0.9為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈200-320nm下檢視；供試品色譜中，在與對照品相應的位置上，顯相同顏色的斑點；(4)取片劑、膠囊劑、顆粒劑研細，加水溶解，或口服液，用水飽和正丁醇萃取，分取正丁醇液，蒸干，殘渣加甲醇溶解，作為供試品溶液；另取紫丁香苷對照品，加甲醇溶解，作為對照品溶液；吸取供試品溶液和對照品溶液，照中國藥典薄層色譜法試驗，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以氯仿∶甲醇∶水＝9-1∶1-9∶0.5-5為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈200-320nm下檢視；供試品色譜中，在與對照品相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
6.按照權利要求5所述復方斑蝥口服制劑的質量控制方法，其特征在于更具體的鑒別方法包括以下項目的部分或全部(1)取片劑、膠囊劑、顆粒劑各15-30g，研細，或口服液50-100ml，水浴揮干，加5％氫氧化鈉溶液5-20mL使溶解，轉至分液漏斗中，再用水1-10mL分1-3次洗滌容器，轉移至分液漏斗中，用水飽和正丁醇提取2-4次，每次5-15mL，合并正丁醇液，蒸干，殘渣用0.2-1.2mL水分2-3次溶解，轉移至100～200目、2g、干法裝柱、直徑1cm、長25cm的中性氧化鋁柱上，先用20-50mL氯仿洗脫，棄去氯仿洗脫液，再用70％甲醇10-40mL洗脫，洗脫液于水浴上蒸干，殘渣加甲醇0.5-2mL使溶解，作為供試品溶液；另取人參對照藥材0.5-2g，加氯仿30-60mL，加熱回流0.5-2小時，棄去氯仿液，藥渣揮干溶劑，加甲醇30-60mL回流提取2-4小時，回收甲醇至干，殘渣加5％氫氧化鈉溶液520mL使溶解，同供試品溶液制備方法制得對照藥材溶液；取黃芪對照藥材1-5g，加甲醇10-30mL，加熱回流0.5-2小時，濾過，濾液蒸干，殘渣加5％氫氧化鈉溶液5-20mL使溶解，同供試品溶液制備方法制得對照藥材溶液；另取人參皂苷Rg1對照品及黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每1mL各含0.5-3mg的混合溶液，作為對照品溶液；照中國藥典薄層色譜法實驗，吸取供試品溶液、對照藥材及對照品溶液各2-10μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿∶乙酸乙酯∶甲醇∶水＝5-50∶0.5-5∶1-9∶1-9于5～10℃放置8-18小時的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘5～10分鐘，置紫外光燈280-420nm下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材及對照品相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；(2)取片劑、膠囊劑、顆粒劑各1-6g，研細，加水溶解，或口服液10-30ml，調pH至1～2，用等體積的乙酸乙酯萃取2-4次，合并乙酸乙酯層用水萃取1-3次，每次10-30mL，取乙酸乙酯層蒸干，殘渣加甲醇0.5-2mL溶解，作為供試品溶液；另取野黃芩苷對照品，加甲醇制成每1mL含0.5-3mg的溶液，作為對照品溶液；吸取供試品溶液和對照品溶液各0.5-5μL，照中國藥典薄層色譜法試驗，分別點于同一聚酰胺薄膜上，以乙酸∶乙醇＝9-1∶1-9為展開劑，上行展開4cm，取出，晾干，噴以10％三氯化鐵乙醇液；供試品色譜中，在與對照品相應的位置上，顯相同顏色的斑點；(3)取片劑、膠囊劑、顆粒劑各5-20g，研細，加水溶解，或口服液30-80ml，調pH至1～2，用水飽和正丁醇萃取2-4次，每次10-40mL，合并正丁醇液，用正丁醇飽和的水洗滌正丁醇液1-5次，每次10-30mL，取正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇0.5-2mL，用少量甲醇轉移至磨口瓶中蒸干甲醇，加1-10mL濃HCl，30-80ml氯仿回流0.5-2小時，放冷用水洗滌2-4次，每次20-50mL，棄水層，取氯仿層蒸干，殘渣用無水乙醇溶解至0.1-1mL，作為供試品溶液；另取甘草次酸對照品，加無水乙醇制成每1mL含0.5-3mg的溶液，作為對照品溶液；吸取供試品溶液和對照品溶液各1-10μL，照中國藥典薄層色譜法試驗，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠GF254，以30-60℃石油謎∶苯∶乙酸乙酯∶甲酸＝5-50∶5-50∶1-9∶0.1-0.9為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈200-320nm下檢視；供試品色譜中，在與對照品相應的位置上，顯相同顏色的斑點；(4)取片劑、膠囊劑、顆粒劑各1-10g，研細，加水溶解，或口服液30-80ml，用水飽和正丁醇萃取2-4次，每次10-30mL，分取正丁醇液，蒸干，殘渣加甲醇0.5-3mL溶解，作為供試品溶液；另取紫丁香苷對照品，加甲醇制成每lmL含0.5-2mg的溶液，作為對照品溶液；吸取供試品溶液和對照品溶液各2-10μL，照中國藥典薄層色譜法試驗，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠GF254，以氯仿∶甲醇∶水＝9-1∶1-9∶0.5-5為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈200-320nm下檢視；供試品色譜中，在與對照品相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
7.按照權利要求1所述復方斑蝥口服制劑的質量控制方法，其特征在于斑蝥素的含量測定方法為照氣相色譜法測定規(guī)格為30m×0.25mm×0.25μm的聚苯基甲基硅氧烷毛細管柱；柱溫150-160℃；升溫程序為160℃-180℃時速度為2℃/min，180℃-200℃時速度為10℃/min，在30min內完成；氣化室溫度200-220℃；FID檢測器，檢測器溫度200-220℃；N2為載氣，流速30mL/min；分流比10∶1；理論板數(shù)以斑蝥素峰計算不得低于10000；取斑蝥素對照品，精密稱定，加氯仿溶解，搖勻，即得對照品溶液；取裝量差異項下的片劑、膠囊劑、顆粒劑精密稱定，加水溶解，或口服液，以濃鹽酸調pH，加氯仿提取，收集提取液，室溫揮干，殘渣加氯仿溶解并轉移至量瓶，加氯仿至刻度，搖勻，即得供試品溶液；分別精密量取對照品溶液與供試品溶液各0.5-5μl，注入氣相色譜儀測定含量；本口服制劑中，片劑中含斑蝥素C10H12O4不得少于0.05mg/g；膠囊劑中含斑蝥素C10H12O4不得少于0.025mg/g；顆粒劑中含斑蝥素C10H12O4不得少于0.01mg/g；口服液中含斑蝥素C10H12O4不得少于4mg/L。
8.按照權利要求7所述復方斑蝥口服制劑的質量控制方法，其特征在于更具體的斑蝥素含量測定方法為照氣相色譜法測定規(guī)格為30m×0.25mm×0.25μm、含5％苯基的聚苯基甲基硅氧烷毛細管柱；柱溫150-160℃；升溫程序為160℃-180℃時速度為2℃/min，180℃-200℃時速度為10℃/min，在30min內完成；氣化室溫度200-220℃；FID檢測器，檢測器溫度200-220℃；N2為載氣，流速30mL/min；分流比10∶1；理論板數(shù)以斑蝥素峰計算不得低于10000；取斑蝥素對照品適量，精密稱定，加氯仿制成每1mL含0.05-0.5mg的溶液，即得對照品溶液；取裝量差異項下的片劑、膠囊劑、顆粒劑1-10g，加水溶解，或口服液10-40mL，以濃鹽酸調pH至1-2，加氯仿提取2-4次，每次10-40mL，收集提取液，室溫揮干，殘渣加氯仿溶解并轉移至5mL量瓶，加氯仿至刻度，搖勻，即得供試品溶液；分別精密量取對照品溶液與供試品溶液各0.5-5μl，注入氣相色譜儀測定含量；本口服制劑中，片劑中含斑蝥素C10H12O4不得少于0.05mg/g；膠囊劑中含斑蝥素C10H12O4不得少于0.025mg/g；顆粒劑中含斑蝥素C10H12O4不得少于0.01mg/g；口服液中含斑蝥素C10H12O4不得少于4mg/L。
9.按照權利要求1所述復方斑蝥口服制劑的質量控制方法，其特征在于所述質量控制方法包括性狀對于片劑，產品為薄膜衣片，除去薄膜衣后顯黃綠色至棕褐色，味微苦回甜；對于膠囊劑，內容物為黃綠色至棕褐色的粉末，味微苦回甜；對于顆粒劑，產品為棕黃色至深褐色的顆粒；味甜；對于口服液，產品為棕色液體；味甜；鑒別(1)取片劑、膠囊劑、顆粒劑研細，或口服液，加5％氫氧化鈉溶液使溶解，轉至分液漏斗中，再用水洗滌容器，轉移至分液漏斗中，用水飽和正丁醇提取，正丁醇液蒸干，殘渣用水溶解，轉移至氧化鋁柱上，先用氯仿洗脫，棄去氯仿洗脫液，再用70％甲醇洗脫，洗脫液于水浴上蒸干，殘渣加甲醇使溶解，作為供試品溶液；另取人參對照藥材，加氯仿，加熱回流，棄去氯仿液，藥渣揮干溶劑，加甲醇回流提取，回收甲醇至干，殘渣加5％氫氧化鈉溶液使溶解，同供試品溶液制備方法制得對照藥材溶液；取黃芪對照藥材，加甲醇，加熱回流，濾過，濾液蒸干，殘渣加5％氫氧化鈉溶液使溶解，同供試品溶液制備方法制得對照藥材溶液；另取人參皂苷Rg1對照品及黃芪甲苷對照品，加甲醇溶解，作為對照品溶液；照中國藥典薄層色譜法實驗，吸取供試品溶液、對照藥材及對照品溶液，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿∶乙酸乙酯∶甲醇∶水＝5-50∶0.5-5∶1-9∶1-9于5～10℃放置8-18小時的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘5～10分鐘，置紫外光燈280-420nm下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材及對照品相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；(2)取片劑、膠囊劑、顆粒劑研細，加水溶解，或口服液，調pH，用等體積的乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯層再用水萃取，取乙酸乙酯層蒸干，殘渣加甲醇溶解，作為供試品溶液；另取野黃芩苷對照品，加甲醇溶解，作為對照品溶液；吸取供試品溶液和對照品溶液，照中國藥典薄層色譜法試驗，分別點于同一聚酰胺薄膜上，以乙酸∶乙醇＝9-1∶1-9為展開劑，上行展開，取出，晾干，噴以10％三氯化鐵乙醇液；供試品色譜中，在與對照品相應的位置上，顯相同顏色的斑點；(3)取片劑、膠囊劑、顆粒劑研細，加水溶解，或口服液，調pH，用水飽和正丁醇萃取，正丁醇液用正丁醇飽和的水洗滌，取正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇1mL，用少量甲醇轉移至磨口瓶中蒸干甲醇，加濃HCl，氯仿回流，放冷用水洗滌，棄水層，取氯仿層蒸干，殘渣用無水乙醇溶解，作為供試品溶液；另取甘草次酸對照品，加無水乙醇溶解，作為對照品溶液；吸取供試品溶液和對照品溶液，照中國藥典薄層色譜法試驗，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以30-60℃石油醚∶苯∶乙酸乙酯∶甲酸＝5-50∶5-50∶1-9∶0.1-0.9為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈200-320nm下檢視；供試品色譜中，在與對照品相應的位置上，顯相同顏色的斑點；(4)取片劑、膠囊劑、顆粒劑研細，加水溶解，或口服液，用水飽和正丁醇萃取，分取正丁醇液，蒸干，殘渣加甲醇溶解，作為供試品溶液；另取紫丁香苷對照品，加甲醇溶解，作為對照品溶液；吸取供試品溶液和對照品溶液，照中國藥典薄層色譜法試驗，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以氯仿∶甲醇∶水＝9-1∶1-9∶0.5-5為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈200-320nm下檢視；供試品色譜中，在與對照品相應的位置上，顯相同顏色的斑點；檢查口服液pH值應在3～7之間，相對密度不低于0.08，其余項應符合中國藥典關于片劑、膠囊劑、顆粒劑或項下的有關規(guī)定；含量測定斑蝥素照氣相色譜法測定規(guī)格為30m×0.25mm×0.25μm的聚苯基甲基硅氧烷毛細管柱；柱溫150-160℃；升溫程序為160℃-180℃時速度為2℃/min，180℃-200℃時速度為10℃/min，在30min內完成；氣化室溫度200-220℃；FID檢測器，檢測器溫度200-220℃；N2為載氣，流速30mL/min；分流比10∶1；理論板數(shù)以斑蝥素峰計算不得低于10000；取斑蝥素對照品，精密稱定，加氯仿溶解，搖勻，即得對照品溶液；取裝量差異項下的片劑、膠囊劑、顆粒劑精密稱定，加水溶解，或口服液，以濃鹽酸調pH，加氯仿提取，收集提取液，室溫揮干，殘渣加氯仿溶解并轉移至量瓶，加氯仿至刻度，搖勻，即得供試品溶液；分別精密量取對照品溶液與供試品溶液各0.5-5μl，注入氣相色譜儀測定含量；本口服制劑中，片劑中含斑蝥素C10H12O4不得少于0.05mg/g；膠囊劑中含斑蝥素C10H12O4不得少于0.025mg/g；顆粒劑中含斑蝥素C10H12O4不得少于0.01mg/g；口服液中含斑蝥素C10H12O4不得少于4mg/L。
10.按照權利要求1或9所述復方斑蝥口服制劑的質量控制方法，其特征在于所述質量控制方法包括性狀對于片劑，產品為薄膜衣片，除去薄膜衣后顯黃綠色至棕褐色，味微苦回甜；對于膠囊劑，內容物為黃綠色至棕褐色的粉末，味微苦回甜；對于顆粒劑，產品為棕黃色至深褐色的顆粒；味甜；對于口服液，產品為棕色液體；味甜；鑒別(1)取片劑、膠囊劑、顆粒劑各15-30g，研細，或口服液50-100ml，水浴揮干，加5％氫氧化鈉溶液5-20mL使溶解，轉至分液漏斗中，再用水1-10mL分1-3次洗滌容器，轉移至分液漏斗中，用水飽和正丁醇提取2-4次，每次5-15mL，合并正丁醇液，蒸干，殘渣用0.2-1.2mL水分2-3次溶解，轉移至100～200目、2g、干法裝柱、直徑1cm、長25cm的中性氧化鋁柱上，先用20-50mL氯仿洗脫，棄去氯仿洗脫液，再用70％甲醇10-40mL洗脫，洗脫液于水浴上蒸干，殘渣加甲醇0.5-2mL使溶解，作為供試品溶液；另取人參對照藥材0.5-2g，加氯仿30-60mL，加熱回流0.5-2小時，棄去氯仿液，藥渣揮干溶劑，加甲醇30-60mL回流提取2-4小時，回收甲醇至干，殘渣加5％氫氧化鈉溶液5-20mL使溶解，同供試品溶液制備方法制得對照藥材溶液；取黃芪對照藥材1-5g，加甲醇10-30mL，加熱回流0.5-2小時，濾過，濾液蒸干，殘渣加5％氫氧化鈉溶液5-20mL使溶解，同供試品溶液制備方法制得對照藥材溶液；另取人參皂苷Rg1對照品及黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每1mL各含0.5-3mg的混合溶液，作為對照品溶液；照中國藥典薄層色譜法實驗，吸取供試品溶液、對照藥材及對照品溶液各2-10μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿∶乙酸乙酯∶甲醇∶水＝5-50∶0.5-5∶1-9∶1-9于5～10℃放置8-18小時的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘5～10分鐘，置紫外光燈280-420nm下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材及對照品相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；(2)取片劑、膠囊劑、顆粒劑各1-6g，研細，加水溶解，或口服液10-30ml，調pH至1～2，用等體積的乙酸乙酯萃取2-4次，合并乙酸乙酯層用水萃取1-3次，每次10-30mL，取乙酸乙酯層蒸干，殘渣加甲醇0.5-2mL溶解，作為供試品溶液；另取野黃芩苷對照品，加甲醇制成每1mL含0.5-3mg的溶液，作為對照品溶液；吸取供試品溶液和對照品溶液各0.5-5μL，照中國藥典薄層色譜法試驗，分別點于同一聚酰胺薄膜上，以乙酸∶乙醇＝9-1∶1-9為展開劑，上行展開4cm，取出，晾干，噴以10％三氯化鐵乙醇液；供試品色譜中，在與對照品相應的位置上，顯相同顏色的斑點；(3)取片劑、膠囊劑、顆粒劑各5-20g，研細，加水溶解，或口服液30-80ml，調pH至1～2，用水飽和正丁醇萃取2-4次，每次10-40mL，合并正丁醇液，用正丁醇飽和的水洗滌正丁醇液1-5次，每次10-30mL，取正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇0.5-2mL，用少量甲醇轉移至磨口瓶中蒸干甲醇，加1-10mL濃HCl，30-80ml氯仿回流0.5-2小時，放冷用水洗滌2-4次，每次20-50mL，棄水層，取氯仿層蒸干，殘渣用無水乙醇溶解至0.1-1mL，作為供試品溶液；另取甘草次酸對照品，加無水乙醇制成每1mL含0.5-3mg的溶液，作為對照品溶液；吸取供試品溶液和對照品溶液各1-10μL，照中國藥典薄層色譜法試驗，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠GF254，以30-60℃石油謎∶苯∶乙酸乙酯∶甲酸＝5-50∶5-50∶1-9∶0.1-0.9為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈200-320nm下檢視；供試品色譜中，在與對照品相應的位置上，顯相同顏色的斑點；(4)取片劑、膠囊劑、顆粒劑各1-10g，研細，加水溶解，或口服液30-80m1，用水飽和正丁醇萃取2-4次，每次10-30mL，分取正丁醇液，蒸干，殘渣加甲醇0.5-3mL溶解，作為供試品溶液；另取紫丁香苷對照品，加甲醇制成每1mL含0.5-2mg的溶液，作為對照品溶液；吸取供試品溶液和對照品溶液各2-10μL，照中國藥典薄層色譜法試驗，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠GF254，以氯仿∶甲醇∶水＝9-1∶1-9∶0.5-5為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈200-320nm下檢視；供試品色譜中，在與對照品相應的位置上，顯相同顏色的斑點；檢查口服液pH值應在3～7之間，相對密度不低于0.08，其余項應符合中國藥典關于片劑、膠囊劑、顆粒劑或口服液項下的有關規(guī)定；含量測定斑蝥素照氣相色譜法測定規(guī)格為30m×0.25mm×0.25μm、含5％苯基的聚苯基甲基硅氧烷毛細管柱；柱溫150-160℃；升溫程序為160℃-180℃時速度為2℃/min，180℃-200℃時速度為10℃/min，在30min內完成；氣化室溫度200-220℃；FID檢測器，檢測器溫度200-220℃；N2為載氣，流速30mL/min；分流比10∶1；理論板數(shù)以斑蝥素峰計算不得低于10000；取斑蝥素對照品適量，精密稱定，加氯仿制成每1mL含0.05-0.5mg的溶液，即得對照品溶液；取裝量差異項下的片劑、膠囊劑、顆粒劑1-10g，加水溶解，或口服液10-40mL，以濃鹽酸調pH至1-2，加氯仿提取2-4次，每次10-40mL，收集提取液，室溫揮干，殘渣加氯仿溶解并轉移至5mL量瓶，加氯仿至刻度，搖勻，即得供試品溶液；分別精密量取對照品溶液與供試品溶液各0.5-5μl，注入氣相色譜儀測定含量；本口服制劑中，片劑中含斑蝥素C10H12O4不得少于0.05mg/g；膠囊劑中含斑蝥素C10H12O4不得少于0.025mg/g；顆粒劑中含斑蝥素C10H12O4不得少于0.01mg/g；口服液中含斑蝥素C10H12O4不得少于4mg/L。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種復方斑蝥口服制劑的質量控制方法，所述質量控制方法主要包括性狀、鑒別、檢查以及含量測定項目中的部分或全部；其中鑒別包括對制劑中人參、黃芪、半枝蓮、甘草和刺五加的薄層色譜鑒別；含量測定是對制劑中斑蝥所含斑蝥素的含量測定。與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明針對改進工藝后的復方斑蝥口服制劑建立了斑蝥素的含量測定項目以及人參、黃芪、半枝蓮、甘草、刺五加的薄層鑒別項目，所述質量控制方法精密度高，重現(xiàn)性好，穩(wěn)定性好，回收率高，測量結果準確，可有效控制這種復方斑蝥口服制劑的質量，從而確保該制劑的臨床療效。
文檔編號G01N30/90GK101066437SQ200710200659
公開日2007年11月7日 申請日期2007年5月21日 優(yōu)先權日2007年5月21日
發(fā)明者葉湘武, 陳孜孜, 朱亭潘, 安崇惠 申請人:貴州益佰制藥股份有限公司