專利名稱:制備型等電點電泳分離方法及設備的制作方法
本發(fā)明涉及一種用于分離兩性生物物質(zhì)(如蛋白質(zhì)、多肽)的制備型等電點電泳分離方法，屬于生物化工技術領域：
。
在已有技術中，有一種多腔室的等電聚焦裝置，名稱為“多腔室電泳裝置中的等電聚焦”，出自一篇由瑪茨·喬納森(Mats.Jonsson)和哈里·黎泊(Harry.Rilbe)所寫的名為“Large-scale fracitionationof proteins by isoelectric focusing in a multi-compartment electrolysisapparatus”的論文，發(fā)表于《電泳》雜志1980年第一期第3頁到第14頁(Electrophoresis，1，P3-14(1980))。該技術利用載體兩性電解質(zhì)溶液形成的連續(xù)的pH梯度場為背景，蛋白質(zhì)根據(jù)各自等電點的不同在相應的pH背景下聚焦而得以分離，并提出了相應的分離設備。其核心部分為一個長圓柱形電泳槽，由相隔一定間距的隔膜將其分隔為數(shù)十個腔室，如
附圖一所示分離前，將載體兩性電解質(zhì)溶液與待分蛋白質(zhì)樣品均勻混合后注入各腔室中；分離時，在電泳槽的兩端加直流電壓，載體兩性電解質(zhì)在電場作用下發(fā)生電遷移，形成由正極到負極pH值逐漸升高的梯度，蛋白質(zhì)在相異于其等電點的pH環(huán)境中不能保持電中性，因而在電場作用下發(fā)生電泳遷移，穿過隔膜，在相當于其等電點的pH值的腔室中聚焦，電泳產(chǎn)生的熱量通過一套復雜的內(nèi)循環(huán)冷卻系統(tǒng)帶走，這樣經(jīng)過相當長的時間(2-3天)后，聚焦結束，具有不同等電點的蛋白相互分開在不同的腔室中；最后打開各腔室的樣品出口，分別收集樣品液，在某一個或與之相鄰的幾個腔室中就得到純化了的目標蛋白質(zhì)組分。
該技術的缺點是(1)需要大量價格昂貴的載體兩性電解質(zhì)，另外在后續(xù)處理中還需通過透析等方法除去目標組分樣品中混雜的載體兩性電解質(zhì)，使分離的成本很高；(2)由于蛋白質(zhì)的遷移距離很長，電極間距大，而提高場強又受到裝置的換熱能力的限制，造成該法分離時間過長，處理量較低。
在已有技術中，還有一種多腔室的循環(huán)流動等電聚焦裝置，名稱為“使用非載體兩性電解質(zhì)緩沖劑的等電聚焦”，出自一篇由皮埃爾·溫格爾(Pierre.Wenger)和菲里蒲·杰夫特(Philippe.Javet)所寫的名為“Isoelectric focusing using non-amphoteric buffers in freesolutionII.Apparatus and measures of pH stability”的論文，發(fā)表于《生物化學和生物物理方法》雜志1986年第13期第275頁到第287頁(Journal of Biochemical and Biophysical Methods，13，P275-287(1986))。該技術采用多腔室的循環(huán)流動的形式，利用簡單緩沖液(不含載體兩性電解質(zhì))在電場作用下形成的pH梯度作為等電聚焦的背景，用以分離氨基酸和蛋白質(zhì)，并提出了相應的分離設備。如附圖二所示1 為一個多腔室的電泳槽，2 為織物支撐的瓊脂糖凝膠膜，3為離子交換膜，4 為換熱器，5 為電極液貯槽，6 為緩沖液貯槽。凝膠膜和離子交換膜將電泳槽分隔成相互平行的若干腔室和二個電極室，在電極室中通入電極液，中間的各腔室中通入醋酸—醋酸鈉緩沖液，電極液和緩沖液都在相互獨立的通路中循環(huán)，在電泳槽的兩側(cè)加載直流電壓，在電場作用下，緩沖液中的一部分離子發(fā)生電泳遷移，通過凝膠膜和離子交換膜進入鄰近的腔室，經(jīng)過一段時間后，各腔室的pH值發(fā)生變化，形成從陰極到陽極逐漸升高的pH梯度，并使用此pH梯度作為等電聚焦的背景。
該技術的缺點是(1)形成的pH梯度不夠穩(wěn)定，各腔室的pH值容易發(fā)生漂移，很難用簡便的方法校正每一個腔室的pH值；(2)其分離精度的提高受腔室數(shù)目的制約，過多的腔室數(shù)目將給操作帶來極大的不便，所以只能用于粗分，難以分離等電點接近的樣品。
本發(fā)明的目的是提出一種新型電泳分離方法，應用等電聚焦的原理，使用簡單緩沖液來形成一個穩(wěn)定的單一pH值，而不是一個穩(wěn)定的pH梯度作為分離的背景，其目的是分離一個目標產(chǎn)品而不是一系列產(chǎn)品。
本發(fā)明的目的是這樣實現(xiàn)的在垂直放置的二個相互平行的窄長電極之間，沿電極的長度方向平行設置二張到四張凝膠膜，它們將電極之間的空間分隔成三到五個相互平行的腔室，中間的腔室為分離室，分離室的兩側(cè)為沖洗室，分離進行時，分離室內(nèi)通入pH值調(diào)至目標蛋白質(zhì)的等電點(pI值)的待分離的樣品液，兩側(cè)沖洗室中通入pH值等于目標蛋白質(zhì)等電點且電導小的緩沖液，兩電極之間加載恒定的直流電壓。
下面結合附圖，詳細介紹本發(fā)明的內(nèi)容。
附圖三是制備型等電點電泳分離方法原理圖。
圖中7為電極，8為凝膠膜，9為通入的樣品液，9a為分離室，10為通入的緩沖液，10a為沖洗室，11為目標蛋白質(zhì)，12為等電點(pI值)大于目標蛋白質(zhì)的等電點的雜蛋白，13為等電點(pI值)小于目標蛋白質(zhì)的等電點的雜蛋白。
其分離過程是分離室9a通入pH值調(diào)至目標蛋白質(zhì)的等電點(pI值)的待分離的樣品液，沖洗室10a通入pH值等于目標蛋白質(zhì)等電點的緩沖液，兩電極7之間加載恒定的直流電壓。在這樣的pH值條件下目標蛋白質(zhì)分子11(附圖三中以小園圈表示)總體上呈電中性，因此在電場作用下不發(fā)生電泳遷移；而其它等電點與目標蛋白有差別的雜蛋白在此條件下則帶正電荷或負電荷，等電點(pI值)大的蛋白12帶正電(附圖三中以三角形表示)，等電點小的蛋白13帶負電(附圖三中以小黑方塊表示)，在電場作用下，必然發(fā)生電泳遷移，它們分別穿過分離室兩側(cè)的凝膠膜進入兩側(cè)沖洗室，從而實現(xiàn)了與目標蛋白質(zhì)的相互分離。
本發(fā)明的目的也可以這樣實現(xiàn)在垂直放置的二個相互平行的窄長電極之間，沿電極的長度方向平行設置二張凝膠膜，在凝膠膜的外側(cè)設置二張離子交換膜，從而將電極之間的空間分隔成五個相互平行的腔室，中間腔室為分離室，與分離室相鄰的兩個腔室為沖洗室，靠近電極的兩個腔室為電極室，分離進行時，分離室內(nèi)通入pH值調(diào)至目標蛋白質(zhì)的等電點的待分離的樣品液，兩側(cè)沖洗室中通入pH值等于目標蛋白質(zhì)等電點且電導小的緩沖液，電極室內(nèi)通入電極液，兩電極之間加載恒定的直流電壓。
本發(fā)明使用普通緩沖液，如三羥甲基氨基甲烷—廿氨酸、三羥甲基氨基甲烷—醋酸、醋酸—醋酸鈉等，濃度為0.005-0.1摩爾/升；分離室的流速為100-1000毫升/小時，沖洗室的流速為200-2000毫升/小時；所用的凝膠膜的厚度為0.2-2毫米；電極之間的電壓為20-500伏，電流強度不高于100毫安，在此范圍內(nèi)，可以適當調(diào)整電極電壓。
在本發(fā)明原理的基礎上，設計了制備型等電點電泳的設備，其核心部分都為電泳槽。
附圖四是制備型等電點電泳的三腔室電泳槽的裝配示意圖。
上圖為平視圖，下圖為頂視圖，圖中14為分離室，15為沖洗室，16為分離室腔室框，17為沖洗室腔室體，18為凝膠膜，19為導管，20為用有機玻璃粘制而成的夾緊裝置，21為電源插座，22為用來固定腔室體的六角螺栓。
四個螺栓用來固定腔室體17、腔室框16和凝膠膜18以圍成三個四周封閉的腔室，中間為分離室14，兩側(cè)為沖洗室15，分離室和沖洗室上下都有供樣品液和緩沖液出入的導管，鉑絲電極放在沖洗室內(nèi)，并與電源插座連接，電泳槽易于拆卸和組裝，以便于更換凝膠膜和加裝組件。
附圖五是電泳槽的腔室體和腔室框示意圖。
23為分離室腔室框，24、25為兩側(cè)沖洗室腔室體(二者左右對稱)，26為用來加裝電源插座的通孔，27為鉑絲電極，28為聚四氟乙稀導管，腔室體用有機玻璃等絕緣材料制成。
附圖六是制備型等電點電泳的五腔室電泳槽的結構示意圖圖中29為凝膠膜，30為離子交換膜，31為電極，32為分離室，33為沖洗室，34為陽極室，35為陰極室，36為樣品液，37為緩沖液，38為陽極電極液，39為陰極電極液。
如附圖六左圖所示，操作時，分離室32內(nèi)通入pH值等于目標組分等電點的樣品液，沖洗室33內(nèi)通入pH值等于目標組分等電點的緩沖液，陽極室34內(nèi)通入陽極電極液，陰極室35內(nèi)通入陰極電極液。
由于使用離子交換膜和電極液比較復雜，為方便起見也可以采用附圖六右圖中所示的結構，四張膜都采用凝膠膜，兩側(cè)電極室中通入與沖洗室相同的緩沖液，也能起到較好的穩(wěn)定pH值的效果。
附圖七是制備型等電點電泳的五腔室電泳槽的裝配示意圖(只畫出了平視圖)用螺栓固定腔室體、腔室框、凝膠膜和離子交換膜圍成五個四周封閉的腔室，中間為分離室，分離室的兩側(cè)為沖洗室，最外的兩側(cè)電極室(陽極室和陰極室)。每個腔室的上下都有供液體出入的導管，鉑絲電極放在電極室內(nèi)，并與電源插座連接。
在以上介紹的電泳槽的基礎上，設計了一系列的制備型電泳分離設備。下面逐一介紹附圖八是制備型等電點電泳三腔室的工作情況的流程示意圖。
40為電泳槽，41為換熱器，42為活性炭吸附柱，43為夾套冷卻緩沖液貯槽，44為夾套冷卻樣品液貯槽，45為多組恒流泵(圖中以一個示意)，46為磁力攪拌器，47為直流恒壓電源，48為帶制冷的恒溫循環(huán)器。進行電泳分離時，兩個沖洗室內(nèi)的鉑絲電極上通上恒定的直流電壓；樣品液通過恒流泵45的驅(qū)動從樣品液貯槽44進入電泳槽的分離室40a，在電泳槽中，雜蛋白在電場作用下通過凝膠膜遷移到兩側(cè)的沖洗室40b中，從兩個沖洗室流出的緩沖液相互混合，經(jīng)過換熱器41換熱后進入活性炭吸附柱42吸盡雜蛋白，返回緩沖液貯槽43，再由恒流泵送入沖洗室重復使用；經(jīng)過分離的樣品液從電泳槽的分離室40a流出，經(jīng)過換熱器41進入樣品液貯槽44，再經(jīng)恒流泵的驅(qū)動進入電泳槽的分離室，如此循環(huán)反復直獲得合格的目標蛋白質(zhì)產(chǎn)品；由恒溫循環(huán)器48產(chǎn)生的低溫循環(huán)水(0-10℃可調(diào))，在換熱器和各貯槽中給緩沖液和樣品液以充分的冷卻，保證了生物物質(zhì)的活性；多組恒流泵45驅(qū)動緩沖液和樣品液分別以設定的流量循環(huán)流動；另外還有pH電極(圖中略去)檢測樣品液貯槽和緩沖液貯槽中的pH值的變化情況，在經(jīng)過長時間后，樣品液貯槽和緩沖液貯槽的pH值會略有變化，此時可以滴加pH緩沖液調(diào)整。
當所使用三張凝膠膜和四張凝膠膜(分別構成四腔室和五腔室)的電泳槽時，所使用的工作流程與上面所述的三腔室電泳槽的流程基本相同。
附圖九是制備型等電點電泳五腔室的工作情況的流程示意圖49為五腔室電泳槽，50為陽極電極液貯槽，51為陰極電極液貯槽，52為換熱器，53為活性炭吸附柱，54為夾套冷卻緩沖液貯槽，55為夾套冷卻樣品液貯槽，56為多組恒流泵(圖中以一個示意)，57為磁力攪拌器，58為直流恒壓電源，59為帶制冷的恒溫循環(huán)器。樣品液在樣品液貯槽55和電泳槽分離室49a之間循環(huán)，緩沖液在緩沖液貯槽54和電泳槽沖洗室49b之間循環(huán)，電極液在電極室49c和電極液貯槽50、51之間循環(huán)。
需要說明的是，附圖八、九是等電點電泳裝置三腔室和五腔室典型的工作情況，適合于目標產(chǎn)物比較穩(wěn)定，在樣品液中含量不是很稀的情況。在實際應用中，有時會遇到非常易失活的產(chǎn)品以及大量的稀濃度樣品，可以采用單程的操作方式，如附圖十所示，為簡便起見只畫出由三腔室電泳槽構成的工作流程。
附圖十是適合于易失活樣品和大量稀濃度樣品情況的等電點電泳工作流程。
60是電泳槽(為簡便起見只畫出了三腔室的情況)，61是夾套冷卻樣品液貯槽，62為夾套冷卻緩沖液貯槽，63是夾套冷卻樣品液收集槽，64為換熱器，65為活性炭吸附柱，66為多組恒流泵(圖中以一個示意)，67為磁力攪拌器，68為直流恒壓電源，69為帶制冷的恒溫循環(huán)器。
當電泳進行時，樣品液在經(jīng)過電泳槽60后不返回樣品液貯槽61，而是進入樣品液收集槽63，當樣品液貯槽61的樣品液全部通過電泳槽60后，就完成了一個單程的操作。此時，將樣品液收集槽63中的樣品液轉(zhuǎn)移回樣品液貯槽61，便可進入下一個單程分離過程，經(jīng)過幾次單程后(一般為2-4次)，就可以完成分離。這種操作方式總的分離時間可以大大縮短，更利于保證生物樣品的活性，但操作要比循環(huán)操作要略微復雜。
當采用三張凝膠膜、四張凝膠膜的電泳槽時，其流程與上面二張凝膠膜的工作流程相同。當采用使用離子交換膜的電泳槽時，其流程基本相同，所不同點在于增加兩個電極液貯槽，電極液在電泳槽的電極室和電極液貯槽之間循環(huán)。
由于等電點電泳進行過程中，仍有少量的目標產(chǎn)品通過擴散等作用通過凝膠膜進入沖洗室，所以對于分離價值很昂貴的樣品，為最大限度的提高收率，設計了可回收目標產(chǎn)品的操作流程。
附圖十一是等電點電泳的可回收操作流程圖70為電泳槽，71是夾套冷卻緩沖液貯槽，72是緩沖液收集槽，73為換熱器，74為夾套冷卻樣品液貯槽，75為多組恒流泵(圖中以一個示意)，76為磁力攪拌器，77為直流恒壓電源，78為帶制冷的恒溫循環(huán)器，79是恒流泵，80是離子交換層析柱，81是梯度混合器，82是自動部分收集器。
在這種操作流程中，沖洗室的出口的緩沖液不返回原來的緩沖液貯槽71，另外用一個緩沖液收集槽72收集。然后對這部分緩沖液進行離子交換柱層析，少量通過擴散作用進入沖洗室的目標產(chǎn)品可以被離子交換柱80吸附，當離子交換柱吸附接近飽和時，進行梯度洗脫，收集洗脫液中包含目標產(chǎn)品的洗脫組分，調(diào)整pH值和電導后(可用透析法)，再次進行等電點電泳。
當采用三張凝膠膜、四張凝膠膜的電泳槽時，其流程與上面二張凝膠膜的工作流程相同的。當采用使用離子交換膜的電泳槽時，其流程基本相同，所不同點在于增加兩個電極液貯槽，電極液在電泳槽的電極室和電極液貯槽之間循環(huán)。
本發(fā)明的效果是由于分離過程中利用簡單緩沖液形成一個穩(wěn)定的pH點(而不是一個過續(xù)的區(qū)帶)來作為等電聚焦所必需的pH背景，既降低了成本又避免了對產(chǎn)品引入新的污染。與傳統(tǒng)的多腔室等電聚焦相比，其分離精度的提高不是靠增加腔室的數(shù)目來實現(xiàn)，而是采用少數(shù)的幾個腔室(一般為三到五個)，就可以完成較高精度的分離；分離過程中電場方向與沖洗載流的方向相互垂直，可以通過縮短電極之間的距離，在低電壓條件下產(chǎn)生高的電場強度，加快了組分遷移速度，縮短了電遷移的路徑，減小了電泳熱效應，總體上提高了分離的效率；而且結構簡單，易于進行規(guī)模放大。
通過對牛血紅—牛血清模式蛋白混合物和尿激酶、白細胞介素-6等實際體系的分離實驗，證明了制備型等電點電泳可以快速、高精度的分離目的樣品。
下面介紹本發(fā)明的幾個實施例。
實施例1用等電點電泳的典型流程分離模式蛋白混合物1 沖洗室緩沖液醋酸—醋酸鈉(0.01摩爾/升)2 分離室樣品液含牛血紅蛋白1毫克/毫升、牛血清蛋白1毫克/毫升，用0.01摩爾/升醋酸—醋酸鈉配制3 凝膠膜厚度1毫米4 操作 附圖八所示流程電極電壓100伏 電流強度小于100mA流量分離室200毫升/小時，沖洗室200毫升/小時5 結果緩沖液pH值為4.83(牛血清等電點)時，獲得純度為98％的牛血清蛋白，收率92％；緩沖液pH值為6.90(牛血紅等電點)時，獲得純度為95％的牛血紅蛋白，收率大于90％。
處理量100毫克蛋白/小時實施例2用等電點電泳的典型流程分離模式蛋白混合物1 沖洗室緩沖液醋酸—醋酸鈉(0.1摩爾/升)2 分離室樣品液含牛血紅蛋白1毫克/毫升，含牛血清蛋白1毫克/毫升，用0.1摩爾/升醋酸—醋酸鈉配制3 凝膠膜厚度0.2毫米4 操作 附圖八所示流程電極電壓20伏 電流強度小于100mA
流量分離室100毫升/小時，沖洗室5000毫升/小時5結果緩沖液pH值為4.83(牛血清等電點)時，獲得純度為88％的牛血清蛋白，收率71％；緩沖液pH值為6.90(牛血紅等電點)時，獲得純度為79％的牛血紅蛋白，收率60％。處理量20毫克蛋白/小時實施例3用等電點電泳的五腔室流程分離模式蛋白混合物1沖洗室緩沖液醋酸—醋酸鈉(0.01摩爾/升)2分離室樣品液含牛血紅蛋白0.5毫克/毫升，含牛血清蛋白0.5毫克/毫升，用0.01摩爾/升醋酸—醋酸鈉配制3凝膠膜厚度2毫米4陰、陽離子交換膜0.5毫米5操作 附圖九所示流程電極電壓350伏 電流強度小于100mA流量分離室500毫升/小時，沖洗室1000毫升/小時；陽極室0.05摩爾/升的硫酸溶液，300毫升/小時；陰極室0.1摩爾/升的氫氧化鈉溶液，300毫升/小時6結果緩沖液pH值為6.90(牛血紅等電點)時，獲得純度為95％的牛血紅蛋白，收率大于95％。處理量50毫克蛋白/小時實施例4用可回收流程分離白細胞介素-61電極電壓155伏2沖洗室緩沖液三羥甲基氨基甲烷—檸檬酸(pH＝5.65，0.01摩爾/升)3分離室樣品液經(jīng)過粗分的白細胞介素-6包函體破碎液，其中白細胞介素-6含量約0.22毫克/毫升，用三羥甲基氨基甲烷—檸檬酸(pH＝5.65，0.01摩爾/升)透析平衡4凝膠膜厚度1.5毫米5操作 附圖十一回收操作流程電極電壓155伏 電流強度小于100mA流量分離室300毫升/小時，沖洗室500毫升/小時6回收離子交換柱DEAE-Sephadex A-50陰離子交換劑回收樣品電泳電極電壓140伏，分離室流量400毫升/小時，沖洗室流量2000毫升/小時7結果將第一次的樣品和回收樣品混合后，取樣進行SDS-聚丙烯酰胺電泳分析，與標準品對照，沒有雜質(zhì)譜帶檢出?？偟鞍资章蚀笥?0％實施例5單程操作分離尿激酶1沖洗室緩沖液三羥甲基氨基甲烷—甘氨酸(pH＝8.60，0.02摩爾/升)2分離室樣品液尿激酶半精品(比活為4000活力單位/毫克蛋白)，用三羥甲基氨基甲烷—甘氨酸(pH＝8.60，0.02摩爾/升)透析平衡3凝膠膜厚度1.5毫米4操作 附圖十單程操作流程電極電壓180伏 電流強度小于100mA
流量分離室200毫升/小時，沖洗室500毫升/小時四次單程操作5結果獲得比活大于40000活力單位/毫克蛋白的尿激酶精品，活性收率為32％實施例6單程操作分離尿激酶1沖洗室緩沖液三羥甲基氨基甲烷—甘氨酸(pH＝8.60，0.005摩爾/升)2分離室樣品液尿激酶半精品(比活為4000活力單位/毫克蛋白)，用三羥甲基氨基甲烷—甘氨酸(pH＝8.60，0.005摩爾/升)透析平衡3凝膠膜厚度1.5毫米4操作 附圖十單程操作流程電極電壓500伏 電流強度小于100mA流量分離室1000毫升/小時，沖洗室1000毫升/小時三次單程操作5結果獲得比活大于20000活力單位/毫克蛋白的尿激酶產(chǎn)品，活性收率為40％
權利要求
1.一種用于制備型的等電點電泳分離的電泳槽，其特征是在電泳槽的腔室體內(nèi)，垂直設置兩個窄長的電極；在所述的兩個電極之間，沿電極長度方向平行設置凝膠膜；所述的凝膠膜將所述電極之間的空間分隔成幾個相互平行的腔室，中間的腔室為分離室，在分離室內(nèi)，通入pH值調(diào)至目標蛋白質(zhì)的等電點的待分離樣品液；在分離室的兩側(cè)為沖洗室，在沖洗室內(nèi)，通入pH值等于目標蛋白質(zhì)等電點且電導小的緩沖液；在所述的兩電極之間，加載恒定的直流電壓，電極所在的腔室，為陰(陽)極室。
2.按權利要求
1的電泳槽，其特征是在凝膠膜的外側(cè)，設置離子交換膜，從而將電極之間的空間分隔成相互平行的腔室，中間腔室為分離室，與分離室相鄰的兩個腔室為沖洗室，靠近電極的兩個腔室為電極室(陰或陽極室)。
3.按權利要求
1或2的電泳槽，其特征是所述的凝膠膜為2～4張，其每張的厚度為0.2～2毫米。
4.按權利要求
2的電泳槽，其特征是等離子交換膜為陰離子交換膜和/或陽離子交換膜。
5.按權利要求
1或2的電泳槽，其特征是腔室為3～5個。
6.一種制備型的等電點電泳分離方法，其特征是利用權利要求
1～4之一的電泳槽，該方法包括如下步驟(1)將pH值調(diào)至目標蛋白質(zhì)的等電點的待分離樣品液通入分離室；(2)將pH值等于目標樣品蛋白質(zhì)等電點且電導小的緩沖液通入沖洗室；(3)將電極液通入電極室內(nèi)；(4)兩電極之間加載恒定的直流電壓。
7.按權利要求
6的電泳分離方法，其特征是緩沖液選自三羥甲基氨基甲烷—甘氨酸、三羥甲基氨基甲烷—醋酸、醋酸—醋酸鈉溶液的一種。
8.按權利要求
6的電泳分離方法，其特征是通入分離室的待分離樣品液的流速為100～1000ml/分。
9.按權利要求
6的電泳分離方法，其特征是通入沖洗室的緩沖液的流速為200～2000ml/分。
10.按權利要求
6的電泳分離方法，其特征是緩沖液的濃度為0.005～0.1摩爾/升。
11.按權利要求
6的電泳分離方法，其特征是施加于電極間的電壓為20～500伏，電流強度為小于100毫安。
12.按權利要求
6的分離方法，其特征是樣品液為含牛血紅蛋白、牛血清蛋白的液體。
13.按權利要求
6的電泳分離方法，其特征是樣品液是經(jīng)過粗分的白細胞介素-6包函體破碎液，其中白細胞介素-6含量為約0.22克/毫升。
14.按權利要求
6的電泳分離方法，其特征是樣品液為尿激酶半精品，其比活為4000活力單位/毫克蛋白。
專利摘要
本發(fā)明涉及一種用于分離蛋白質(zhì)不同組分的制備型等電點電泳分離方法和分離設備，屬生物化工技術領域：
。本方法是在二個平行的窄長電極之間，沿長度方向設置凝膠膜，將電極間的空間分成中間的分離室和兩側(cè)的沖洗室。分離室中通入pH調(diào)至目標產(chǎn)品等電點(pI值)的待分離樣品液，沖洗室中通入pH為目標產(chǎn)品等電點普通緩沖液，在電場作用下等電點與目標產(chǎn)品相異的雜蛋白遷移入兩側(cè)的沖洗室而被洗出，從而實現(xiàn)了分離。
文檔編號B01D57/02GKCN1051245SQ95101184
公開日2000年4月12日 申請日期1995年1月20日
發(fā)明者朱德權, 丁富新, 袁乃駒, 劉錚, 黃正, 張春潔 申請人:清華大學導出引文BiBTeX, EndNote, RefMan專利引用 (2),