本發(fā)明是涉及一種親水相互作用色譜固定相及其制備方法，屬于色譜分析技術(shù)領域。

背景技術(shù)：

親水相互作用色譜(hydrophilicinteractionchromatography,hilic)作為一種高效液相色譜技術(shù)，在強極性和離子型化合物如氨基酸、碳水化合物和多肽等的分離分析中發(fā)揮著重要作用。近年來，隨著蛋白組學、糖組學、代謝組學等生命科學領域?qū)O性化合物分離需求的增加，親水相互作用色譜得到了快速發(fā)展。

作為色譜技術(shù)的核心，固定相材料的發(fā)展直接影響著色譜分離的選擇性和分離效率，制約著親水相互作用色譜的應用和推廣。hilic固定相種類繁多，早期hilic的固定相主要是nplc(normalphaseliquidchromatography，正相色譜)的固定相，如純硅膠、氨基鍵合相、氰基鍵合相、二醇基鍵合相。但是，這些固定相均存在一定的缺陷，例如：純硅膠柱在中性或堿性條件下，由于沒有任何鍵合相的保護，硅膠顆粒容易溶解，穩(wěn)定性較差，親水性不強，對極性化合物的保留較弱，且分離選擇性相對不足；氨基鍵合相與酸性化合物結(jié)合能力強，對一些強酸性化合物容易產(chǎn)生死吸附，在分離一些還原糖時，氨基容易與醛基形成席夫堿，改變鍵合相和分析物的性質(zhì)，并且氨基柱穩(wěn)定性較差，鍵合相容易流失；氰基鍵合相極性弱，對親水性化合物的保留差，二醇基鍵合相為非離子型鍵合相，具有一定的氫鍵作用，其表面極性大于氰基鍵合相，然而相比于硅膠柱其親水性較差，因此，氰基和二醇基鍵合相的應用領域較少。

隨著研究的深入，目前通常采用的hilic固定相主要以硅膠基質(zhì)為基礎，采用降低表面硅羥基密度或共價連接極性配基的方式合成，例如：將含酰胺基、羥基、兩性離子等強極性基團的分子鍵合到基質(zhì)表面。采用的基質(zhì)通常為硅膠基質(zhì)，少部分為聚合物基質(zhì)。這些固定相較以往的固定相而言，其分離效率和分離選擇性有所提高，但是仍然存在一定的缺陷，例如：流動相中需要添加緩沖鹽，操作較為繁瑣，成本較高；分離過程液相的流速范圍為毫升至微升，導致進樣量多，樣品濃度高，靈敏度低，從而導致分析效果較差等。

n-乙烯基吡咯烷酮(nvp)是水溶性非離子型高分子化合物聚乙烯基吡咯烷酮(pvp)的前體。聚乙烯基吡咯烷酮(pvp)是一種具有溶解性、低毒性、生物相容性、成膜性、化學穩(wěn)定性、生理惰性等優(yōu)異性能的均聚物，廣泛應用于醫(yī)療衛(wèi)生、日用化工、食品、飲 料、釀造、紡織印染、新材料等領域，但目前還沒有關于聚乙烯基吡咯烷酮(pvp)用于制備親水相互作用色譜固定相的相關報道。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

針對現(xiàn)有技術(shù)存在的上述問題，本發(fā)明的目的是提供一種親水相互作用色譜固定相及其制備方法。

本發(fā)明所述的親水相互作用色譜固定相，是指在多孔硅膠表面鍵合有聚乙烯基吡咯烷酮的硅膠整體柱或在毛細管內(nèi)壁直接鍵合有聚乙烯基吡咯烷酮的毛細管整體柱。

作為優(yōu)選方案，所述硅膠整體柱的制備包括如下步驟：

a)無機硅膠整體柱的制作：先將聚乙二醇、尿素用醋酸溶解，使形成均相透明溶液，然后加入四甲氧基硅烷，攪拌使四甲氧基硅烷完全水解得到聚合液，再在氮氣保護下將聚合液灌入毛細管柱中，兩端封口后在35～45℃陳化反應15～25小時，得到無機硅膠整體柱；

b)無機硅膠整體柱的中孔制備：對步驟a)制得的無機硅膠整體柱采用程序升溫方式升溫至120℃進行熱處理以制備中孔，得到具有雙孔結(jié)構(gòu)的無機硅膠整體柱；

c)無機硅膠整體柱的老化：分別用水和甲醇依次沖洗步驟b)制得的具有雙孔結(jié)構(gòu)的無機硅膠整體柱，接著室溫干燥直至甲醇全部揮發(fā)，再采用程序升溫方式升溫至320℃進行老化處理；

d)無機硅膠整體柱的活化：先采用4～8m的濃鹽酸活化5～7小時，隨后用水沖洗至中性，接著用甲醇沖洗、氮氣干燥，再在175～185℃加熱0.5～1.5小時；

e)硅烷化修飾：先將γ-甲基丙烯酸氧丙基三甲氧基硅烷(簡稱γ-maps)的甲醇溶液灌入經(jīng)步驟d)活化處理后的無機硅膠整體柱中，再在55～65℃反應10～14小時，接著用甲醇沖洗、氮氣干燥，得到硅烷化修飾的硅膠整體柱；

f)n-乙烯基吡咯烷酮修飾：先將n-乙烯基吡咯烷酮和偶氮二異丁腈用甲醇和二甲苯的混合溶劑超聲溶解，然后將混合溶液灌入到硅烷化修飾的硅膠整體柱中，再在75～85℃反應10～14小時，接著用甲醇溶劑沖洗，用流動相平衡后備用。

作為進一步優(yōu)選方案，步驟a)中的聚合液是由600～1200mg聚乙二醇、700～1100mg尿素溶解于0.005～0.03mol/l的醋酸溶液中，然后加入3～5ml的四甲氧基硅烷進行水解得到。

作為進一步優(yōu)選方案，步驟b)中的程序升溫方式為：用25分鐘由25℃程序升溫至40℃，用3小時由40℃程序升溫至120℃，在120℃保溫3小時。

作為進一步優(yōu)選方案，步驟c)中的程序升溫方式為：用25分鐘由25℃程序升溫至45℃，用2.5小時由45℃程序升溫至120℃，用3小時由120℃程序升溫至320℃，在320℃保溫24小時。

作為進一步優(yōu)選方案，步驟e)中的γ-甲基丙烯酸氧丙基三甲氧基硅烷的甲醇溶液的質(zhì)量濃度為50wt％。

作為進一步優(yōu)選方案，步驟f)中的混合溶劑是由甲醇與二甲苯按體積比3:7形成，所述混合溶液中的n-乙烯基吡咯烷酮的濃度為15～60mg/ml，偶氮二異丁腈與n-乙烯基吡咯烷酮的質(zhì)量比為5％～15％。

作為優(yōu)選方案，所述毛細管整體柱是由10～25wt％n-乙烯基吡咯烷酮、4～15wt％交聯(lián)劑、60～85wt％致孔劑和0.1～0.4wt％引發(fā)劑在預處理后的毛細管中進行原位聚合反應制得，上述各組成的比例之和為100％。

作為進一步優(yōu)選方案，所述交聯(lián)劑為季戊四醇。

作為進一步優(yōu)選方案，所述致孔劑為甲醇與水組成的二元致孔體系。

作為更進一步優(yōu)選方案，所述二元致孔體系中水的質(zhì)量占比為15～20％，甲醇的質(zhì)量占比為80～85％。

作為進一步優(yōu)選方案，所述引發(fā)劑為偶氮二異丁腈(簡稱aibn)。

所述的毛細管整體柱包括毛細管液相色譜整體柱和毛細管電色譜整體柱。

作為優(yōu)選方案，所述毛細管液相色譜整體柱的制備包括如下步驟：

a)毛細管預處理：先依次用0.5～1.5mol/l的naoh溶液、水、甲醇沖洗毛細管，然后氮氣吹干，再將甲醇與3-(甲基丙烯酰氧)丙基三甲氧基硅烷的混合溶液加入吹干后的毛細管中，在55～65℃下反應10～24小時，接著用甲醇沖洗，氮氣吹干備用；

b)先將10～25wt％n-乙烯基吡咯烷酮、4～15wt％交聯(lián)劑、60～85wt％致孔劑和0.1～0.4wt％引發(fā)劑超聲混合10～15分鐘，然后用氮氣脫除其中的空氣后導入經(jīng)步驟a)預處理后的毛細管中，再將毛細管兩端密封，在55～65℃下反應8～24小時；待反應完成后，用甲醇沖洗毛細管以除去殘留的試劑，即得到所述的毛細管液相色譜整體柱。

作為優(yōu)選方案，所述毛細管電色譜整體柱的制備包括如下步驟：

①毛細管預處理：先依次用0.5～1.5mol/l的naoh溶液、水、甲醇沖洗毛細管，然后氮氣吹干，再將甲醇與3-(甲基丙烯酰氧)丙基三甲氧基硅烷的混合溶液加入吹干后的毛細管中，在55～65℃下反應10～24小時，接著用甲醇沖洗，氮氣吹干備用；

②先將10～25wt％n-乙烯基吡咯烷酮、4～15wt％交聯(lián)劑、60～85wt％致孔劑和0.1～ 0.4wt％引發(fā)劑超聲混合10～15分鐘，然后用氮氣脫除其中的空氣后導入經(jīng)步驟①預處理后的毛細管中，使毛細管剩余10～12cm不填充，再將毛細管兩端密封，并使填充部分朝下、未填充部分朝上，在55～65℃下反應8～24小時；待反應完成后，用甲醇沖洗毛細管以除去殘留的試劑，再制作檢測窗口，即得到所述的毛細管電色譜整體柱。

作為進一步優(yōu)選方案，上述甲醇與3-(甲基丙烯酰氧)丙基三甲氧基硅烷的體積比為1∶(0.5～2)。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下顯著性有益效果：

實驗證明：本發(fā)明提供的親水相互作用色譜固定相具有典型的親水相互作用色譜的保留機理，不僅可實現(xiàn)一系列極性化合物的有效分離，而且無需采用緩沖鹽流動相，即可實現(xiàn)極性化合物的高效分離，并且重現(xiàn)性好，電色譜柱效可高達200000plates/m；另外，所述親水相互作用色譜固定相的制備條件易控制，原料價廉易得，制備工藝簡單，易于實現(xiàn)工業(yè)化。

附圖說明

圖1a為本發(fā)明實施例1制備的毛細管液相色譜整體柱的掃描電鏡圖；

圖1b為本發(fā)明實施例1制備的毛細管液相色譜整體柱的孔徑分布圖；

圖2為本發(fā)明實施例2的hilic色譜圖；

圖3為本發(fā)明實施例3的hilic色譜圖；

圖4為本發(fā)明實施例4的hilic色譜圖；

圖5為本發(fā)明實施例5的hilic色譜圖；

圖6為本發(fā)明實施例6制備的毛細管電色譜整體柱中緩沖鹽濃度與電滲流關系圖；

圖7為本發(fā)明實施例7的hi-cec色譜圖；

圖8為本發(fā)明實施例8的hi-cec色譜圖；

圖9為本發(fā)明實施例9的hi-cec色譜圖；

圖10為本發(fā)明實施例10的hi-cec色譜圖；

圖11為本發(fā)明實施例11制備的硅膠整體柱的掃描電鏡圖；

圖12為本發(fā)明實施例12的hilic色譜圖。

具體實施方式

下面結(jié)合具體實施例進一步闡述本發(fā)明。應理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不 用于限制本發(fā)明的范圍。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規(guī)條件或按照制造廠商所建議的條件。

實施例1：毛細管液相色譜整體柱的制備

a)毛細管預處理：用1.0mol/l的naoh溶液沖洗毛細管4h，然后用去離子水沖洗至中性，接著用甲醇沖洗15min，氮氣吹干備用；將甲醇與3-(甲基丙烯酰氧)丙基三甲氧基硅烷按體積比為1:1的混合溶液充滿吹干后的毛細管中，置于60℃烘箱中反應12h，接著用無水甲醇沖洗毛細管15min，氮氣吹干備用；

b)制備毛細管液相色譜整體柱：稱取150mgn-乙烯基吡咯烷酮、60mg季戊四醇、820mg甲醇水溶液(其中甲醇680mg，去離子水140mg)、1.5mg偶氮二異丁腈，將各組分混合得到色譜原料，然后將該色譜原料超聲混合10min后，用氮氣脫除其中的空氣后導入經(jīng)步驟a)預處理后的毛細管中，將毛細管兩端密封，置于60℃烘箱中反應10h，通過熱引發(fā)使色譜原料在毛細管中原位聚合；待反應完成后，將毛細管柱接在液相色譜上用甲醇沖洗除去管內(nèi)殘留的試劑，即得到所述毛細管液相色譜整體柱。

切除上述毛細管液相色譜整體柱端口部分，調(diào)整柱長至250mm，即可作為固定相用于親水相互作用液相色譜分析。

圖1a為本實施例制備的毛細管液相色譜整體柱的截面掃描電鏡圖；圖1b為本實施例制備的毛細管液相色譜整體柱的整體材料的孔徑分布圖。

從圖1a中可以清晰的看出該固定相整體材料的骨架，這些球型顆粒凝聚形成較大的“簇”，“簇”與“簇”之間由大孔包圍，而這些“簇”最終堆積成一個完整的聚合物柱，由此可見，采用本實施例的制備方法制備出的固定相完整性好，具有很好的形貌結(jié)構(gòu)；

從圖1b中可以看出，固定相整體材料中多數(shù)大孔孔徑直徑在670nm左右，孔徑分布均勻。

實施例2

使用實施例1制備的毛細管液相色譜整體柱作為固定相對甲苯、丙烯酰胺、硫脲的混合物進行hilic分析，分析條件為：

流動相a為h2o，流動相b為乙腈，液相方法：97.5％b；流速：800nl/min；檢測波長：214nm；得到的hilic色譜圖如圖2所示；

由圖2所示的hilic色譜圖可見：甲苯、丙烯酰胺、硫脲依次從譜圖中出現(xiàn)，這說明采用本發(fā)明的毛細管液相色譜整體柱作為固定相可以實現(xiàn)甲苯、丙烯酰胺、硫脲的高效分離。

實施例3

使用實施例1制備的毛細管液相色譜整體柱作為固定相對苯酚類化合物進行hilic分析，分析條件為：

流動相a為h2o，流動相b為乙腈，液相方法：92.5％b；流速：800nl/min；檢測波長：214nm；得到的hilic色譜圖如圖3所示；

由圖3所示的hilic色譜圖可見：甲苯、苯酚、鄰苯二酚、間苯二酚、對苯二酚、連苯三酚等苯酚類化合物依次從譜圖中出現(xiàn)，這說明采用本發(fā)明的毛細管液相色譜整體柱作為固定相可以實現(xiàn)苯酚類化合物的高效分離。

實施例4

使用實施例1制備的毛細管液相色譜整體柱作為固定相對苯甲酸類化合物進行hilic分析，分析條件為：

流動相a為h2o，流動相b為乙腈，液相方法：85％b；流速：800nl/min；檢測波長：214nm；得到的hilic色譜圖如圖4所示；

由圖4所示的hilic色譜圖可見：苯甲酸、2-羥基苯甲酸、4-羥基苯甲酸、2,4-二羥基苯甲酸、3,4-二羥基苯甲酸、3,5-二羥基苯甲酸、3,4,5-三羥基苯甲酸等苯甲酸類化合物依次從譜圖中出現(xiàn)，這說明采用本發(fā)明的毛細管液相色譜整體柱作為固定相可以實現(xiàn)苯甲酸類化合物的高效分離。

實施例5

使用實施例1制備的毛細管液相色譜整體柱作為固定相對堿性核苷類化合物進行hilic分析，分析條件為：

流動相a為h2o，流動相b為乙腈，液相方法：0min，93％b；5min，93％b；12min，88％b；15min，85％b；流速：800nl/min；檢測波長：254nm；得到的hilic色譜圖如圖5所示；

由圖5所示的hilic色譜圖可見：尿嘧啶、胸苷、尿苷、腺苷、胞苷、鳥苷等堿性核苷類化合物依次從譜圖中出現(xiàn)，這說明采用本發(fā)明的毛細管液相色譜整體柱作為固定相可以實現(xiàn)堿性核苷類化合物的高效分離。

實施例6：毛細管電色譜整體柱的制備

a)毛細管預處理：用1.0mol/l的naoh溶液沖洗毛細管4h，然后用去離子水沖洗至中性，接著用甲醇沖洗15min，氮氣吹干備用；將甲醇與3-(甲基丙烯酰氧)丙基三甲氧基硅烷按體積比為1:1的混合溶液充滿吹干后的毛細管中，置于60℃烘箱中反應12h，接著用 無水甲醇沖洗毛細管15min，氮氣吹干備用；

b)制備毛細管電色譜整體柱：稱取100mgn-乙烯基吡咯烷酮、50mg季戊四醇、850mg甲醇水溶液(其中甲醇660mg，去離子水190mg)、1.5mg偶氮二異丁腈，將各組分混合得到色譜原料，然后將該色譜原料超聲混合10min后，用氮氣脫除其中的空氣后填充到經(jīng)步驟a)預處理后的毛細管中，使毛細管剩余10～12cm不填充，將毛細管兩端密封，并使填充部分朝下、未填充部分朝上垂直固定于60℃烘箱內(nèi)反應10h，通過熱引發(fā)使色譜原料在毛細管中原位聚合；待反應完成后，用甲醇沖洗毛細管以除去管內(nèi)殘留的試劑，然后將距離填料一端10cm的毛細管外表面的聚酰亞胺涂層去掉3mm作為檢測窗口，即得到所述的毛細管電色譜整體柱。

切除上述毛細管電色譜整體柱端口部分，調(diào)整柱長至250mm，即可作為固定相用于親水相互作用電色譜分析。

關于本實施例制備的毛細管電色譜整體柱，我們考察了緩沖鹽濃度對表觀電滲流(eof)的影響情況，分析條件為：

流動相acn/h2o(95/5,v/v)包含不同濃度(0，1mm，2.5mm，5.0mm，7.5mm)的甲酸銨緩沖液(ph＝3.0)；電壓：-15kv；兩端加壓0.2mpa；t0標志物：甲苯；檢測波長：214nm；實驗結(jié)果如圖6所示；

由圖6所示的緩沖鹽濃度與eof值關系圖可見：隨著緩沖鹽濃度的增加，eof值反而有所下降，而eof值的降低不利于色譜分離，由此可見，以本發(fā)明的毛細管電色譜整體柱為固定相用于親水相互作用電色譜分離時，無需加入緩沖鹽，從而使分析操作更為簡單，成本低廉。

實施例7

使用實施例6制備的毛細管電色譜整體柱作為固定相對甲苯、丙烯酰胺、硫脲在cec模式下進行hilic分析，cec模式下分析條件為：

流動相acn/h2o(95/5,v/v),ph2.5；電壓：-15kv；兩端加壓0.2mpa；檢測波長：214nm；得到的hi-cec色譜圖如圖7所示；

由圖7所示的hi-cec色譜圖可見：甲苯、丙烯酰胺、硫脲依次從譜圖中出現(xiàn)，這說明采用本發(fā)明的毛細管電色譜整體柱作為固定相可以實現(xiàn)甲苯、丙烯酰胺、硫脲的高效分離。

實施例8

使用實施例6制備的毛細管電色譜整體柱作為固定相對苯酚類化合物在cec模式下進 行hilic分析，cec模式下分析條件為：

流動相acn/h2o(90/10,v/v)，ph2.5；電壓：-15kv；進樣端加壓0.4mpa；檢測波長：214nm；得到的hi-cec色譜圖如圖8所示；

由圖8所示的hi-cec色譜圖可見：苯酚，2-氨基苯酚，鄰苯二酚，對苯二酚，間苯二酚，連苯三酚依次從譜圖中出現(xiàn)，這說明采用本發(fā)明的毛細管電色譜整體柱作為固定相可以實現(xiàn)苯酚類化合物的高效分離。

實施例9

使用實施例6制備的毛細管電色譜整體柱作為固定相對核苷類化合物在cec模式下進行hilic分析，cec模式下分析條件為：

流動相acn/h2o(90/10,v/v)，ph2.5；電壓：-15kv；進樣端加壓0.4mpa；檢測波長：254nm；得到的hi-cec色譜圖如圖9所示；

由圖9所示的hi-cec色譜圖可見：尿嘧啶，胞苷，尿苷，腺苷，肌苷依次從譜圖中出現(xiàn)，這說明采用本發(fā)明的毛細管電色譜整體柱作為固定相可以實現(xiàn)核苷類化合物的高效分離。

實施例10

使用實施例6制備的毛細管電色譜整體柱作為固定相對苯甲酸類化合物在cec模式下進行hilic分析，cec模式下分析條件為：

流動相acn/h2o(90/10,v/v)，ph3.0；電壓：-15kv；兩端加壓0.2mpa；檢測波長：214nm；得到的hi-cec色譜圖如圖10所示；

由圖10所示的hi-cec色譜圖可見：苯甲酸，2-羥基苯甲酸，4-羥基苯甲酸依次從譜圖中出現(xiàn)，這說明采用本發(fā)明的毛細管電色譜整體柱作為固定相可以實現(xiàn)苯甲酸類化合物的高效分離。

實施例11：硅膠整體柱的制備

1)無機硅膠整體柱的制作：分別稱取900mg聚乙二醇(peg10000)、900mg尿素，加入0.01m的醋酸10ml室溫攪拌溶解30min，待形成均相透明的溶液后，加入4mltmos冰浴攪拌45min使四甲氧基硅烷完全水解反應得到聚合液，然后在氮氣保護下將聚合液灌入75μm毛細管柱中，兩端封口后在40℃陳化反應20h，得到無機硅膠整體柱；

2)無機硅膠整體柱的中孔制備：對步驟1)的無機硅膠整體柱采用程序升溫方式升溫至120℃進行熱處理以制備中孔，升溫程序為：用25分鐘由25℃程序升溫至40℃，用3小時由40℃程序升溫至120℃，在120℃保溫3小時，得到具有雙孔結(jié)構(gòu)的無機硅膠整體柱；

3)無機硅膠整體柱的老化：用水和甲醇分別沖洗步驟2)制得的無機硅膠整體柱1h，接著室溫干燥直至甲醇全部揮發(fā)，采用程序升溫方式升溫至320℃進行老化處理，升溫程序為：用25分鐘由25℃程序升溫至45℃，用2.5小時由45℃程序升溫至120℃，用3小時由120℃程序升溫至320℃，在320℃保溫24小時；

4)無機硅膠整體柱的活化：采用6m的濃鹽酸活化6h，隨后用水沖洗至中性，接著用甲醇沖洗1h后氮氣干燥，然后180℃加熱1h；

5)硅烷化修飾：將50wt％γ-甲基丙烯酸氧丙基三甲氧基硅烷(簡稱γ-maps)的甲醇溶液灌入步驟4)中的無機硅膠整體柱中，于60℃反應12h，接著用甲醇沖洗1h后氮氣干燥，得到硅烷化修飾的硅膠整體柱；

6)n-乙烯基吡咯烷酮修飾：將n-乙烯基吡咯烷酮和偶氮二異丁腈用體積比為3:7的甲醇與二甲苯形成的混合溶劑超聲溶解，溶解后的n-乙烯基吡咯烷酮的濃度為30mg/ml，偶氮二異丁腈的加入量為n-乙烯基吡咯烷酮質(zhì)量的10％，將溶解后的溶液灌入到硅烷化修飾的硅膠整體柱中，然后在80℃反應12h，接著用甲醇溶劑沖洗1h，用流動相平衡后備用。

切除上述整體柱端口部分，調(diào)整柱長至250mm，即可作為固定相用于親水相互作用液相色譜分析。

圖11為本實施例制備的硅膠整體柱的截面掃描電鏡圖；

從圖11中可以看出該硅膠整體柱的骨架結(jié)構(gòu)均一，具有明顯的雙孔分布特征，連續(xù)貫穿的通透孔道可以大大減小傳質(zhì)阻力，通透性好，表面介孔可提供較大的表面積。

實施例12

使用實施例11制備的硅膠整體柱作為固定相對甲苯，硫脲進行hilic分析，分析條件為：

流動相a為h2o，流動相b為乙腈，液相方法：95％b；流速：800nl/min；檢測波長：214nm；得到的hilic色譜圖如圖12所示；

由圖12所示的hilic色譜圖可見：甲苯，硫脲依次從譜圖中出現(xiàn)，這說明采用本發(fā)明的硅膠整體柱作為固定相可以實現(xiàn)甲苯，硫脲的高效分離。

綜上所述：本發(fā)明以n-乙烯基吡咯烷酮為原料制備出的整體柱固定相，整體形貌結(jié)構(gòu)好，用于hilic液相分離應用時，流動相無需額外加入緩沖鹽、操作簡單，并且液相的流速范圍從以往的毫升、微升級降低至納升，進樣量大大減少，靈敏度大大提高，從而使得分離效率提高，不僅可以實現(xiàn)極性相差較大的化合物的分離(例如：甲苯、丙烯酰胺和硫脲)，更可以實現(xiàn)極性非常接近的同系列化合物的分離(例如：鄰苯二酚、間苯二酚、對苯二酚 等苯酚類化合物；2-羥基苯甲酸、4-羥基苯甲酸、2,4-二羥基苯甲酸、3,4-二羥基苯甲酸、3,5-二羥基苯甲酸等苯甲酸類化合物；胸苷、尿苷、腺苷、胞苷等堿性核苷類化合物)，分離的化合物從中性、酸性到堿性都可以；尤其是，本發(fā)明的整體柱固定相還可以用于特殊的親水作用毛細管電色譜hi-cec的分離，并且分離時除了無需加入緩沖鹽以外，還無需加入電滲流改性劑，并且分離柱效高達200000plates/m，從而可以滿足中性及帶電荷的極性化合物的分離需求；由此可見，本發(fā)明將n-乙烯基吡咯烷酮應用于制備親水相互作用色譜的固定相，大大的擴大了n-乙烯基吡咯烷酮的應用范圍和親水相互作用色譜固定相的種類，相對于現(xiàn)有技術(shù)，取得了顯著性進步和出乎意料的效果。

最后需要在此指出的是：以上僅是本發(fā)明的部分優(yōu)選實施例，不能理解為對本發(fā)明保護范圍的限制，本領域的技術(shù)人員根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容作出的一些非本質(zhì)的改進和調(diào)整均屬于本發(fā)明的保護范圍。