專(zhuān)利名稱(chēng)：一種基于疏水作用和銀離子π絡(luò)合作用的混合模式色譜固定相及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種色譜固相材料及其制備方法，具體的說(shuō)是一種基于疏水作用和銀離子H絡(luò)合作用的混合模式色譜固定相的制備方法。
背景技術(shù)：
甘油三酯(triacylglycerols, TAGs)是植物油的主要成分(占95%以上)，它是由一個(gè)甘油分子與三個(gè)脂肪酸分子縮合而成，甘油三酯分子的?；溈偺紨?shù)(CNs)、脂肪酸的碳鏈長(zhǎng)度及脂肪酸在甘油骨架上的位置(從上至下分別為sn-l、sn-2和sn_3位)、脂肪酸的雙鍵數(shù)(DBs)等對(duì)植物油的性質(zhì)有著重要影響。由于天然油脂均具有獨(dú)特的甘油三酯組成，因此通過(guò)對(duì)食用植物油中甘油三酯的高效、高靈敏的定性和定量分析，有望高效、準(zhǔn)確的鑒定各種食用植物油及摻偽植物油。目前在國(guó)際上，甘油三酯結(jié)構(gòu)組成已成為識(shí)別和定量可可油中代可可脂的主要方法之一，也是國(guó)際橄欖油理事會(huì)(IOOC)鑒別橄欖油的官方方法所用的主要參數(shù)之一。然而，對(duì)甘油三酯的分析是一項(xiàng)非常有挑戰(zhàn)性的工作，因?yàn)楦视凸羌苌峡梢越Y(jié)合的脂肪酸的種類(lèi)很多，導(dǎo)致甘油三酯種類(lèi)十分龐大。一般動(dòng)植物油脂都含有5-10種主要脂肪酸，若在甘油三個(gè)羥基位置以隨機(jī)法則排布，一般油脂中可能存在高達(dá)125-1000種甘三酯；且一般天然油脂中的甘油三酯不僅在物理化學(xué)性質(zhì)上非常接近(脂肪酸之間碳鏈長(zhǎng)度相差2-6個(gè)，雙鍵僅差1-3個(gè))，且還存在有大量同分異構(gòu)體和位置異構(gòu)體。目前，用于油脂分離的方法主要有氣相色譜法(GC)和高效液相色譜法(HPLC)。GC只能分析揮發(fā)性的有機(jī)化合物，對(duì)于非揮發(fā)性的脂質(zhì)在分析前需要經(jīng)過(guò)甲酯化衍生反應(yīng)以提高它們的揮發(fā)性，對(duì)于甘油三酯類(lèi)化合物的分析是先用sn-l，3位專(zhuān)一性的胰脂酶水解油脂，再用薄層色譜(TLC)分離出其中的sn-2單甘酯，甲酯化后用氣相色譜(GC)測(cè)定脂肪酸組成。該方法分析過(guò)程復(fù)雜，操作時(shí)間長(zhǎng)，在實(shí)際操作時(shí)脂肪酶的質(zhì)量和酶解條件等因素會(huì)對(duì)測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確性有很大的影響，而且只能從整體上測(cè)定sn-2位置上的脂肪酸分布和含量組成，無(wú)法實(shí)現(xiàn)油脂中甘油三酯的輪廓譜分析。HPLC法不受熱穩(wěn)定性和揮發(fā)性的限制，已廣泛用于油脂分析中。迄今為止，非水反相液相色譜和正相銀離子液相色譜是分離油脂中甘油三酯組成的兩種主要方法。甘油三酯在非水反相液相色譜(商品化的C18柱)中的保留取決于當(dāng)量碳數(shù)(equivalent carbonnumber, ECN)，即甘油三酯中?；溈偺紨?shù)(CNs)減去兩倍的雙鍵數(shù)(DBs)。但非水反相液相色譜很難分離具有相同ECN值的甘油三酯；對(duì)甘油三酯位置異構(gòu)體的分離選擇性也較差。銀離子正相液相色譜利用銀離子(Ag+)與甘油三酯分子中不飽和脂肪酸雙鍵的π絡(luò)合吸附作用來(lái)提高對(duì)甘油三酯化合物的分離選擇性。甘油三酯在銀離子色譜中的保留取決于甘油三酯的雙鍵數(shù)目、雙鍵位置等因素。但即使將多根銀離子色譜柱串聯(lián)使用，也很難滿足甘油三酯類(lèi)復(fù)雜化合物的分離分析要求。與一維液相色譜相比，二維液相色譜的分辨率和峰容量都有了極大的提高，將非水反相液相色譜和銀離子色譜兩種不同保留機(jī)理的分離模式離線或在線聯(lián)用，構(gòu)建二維液相分離系統(tǒng)是實(shí)現(xiàn)甘油三酯高選擇性分離的有效途徑。但離線模式需先收集第一維餾分，進(jìn)行濃縮等處理后再進(jìn)行第二維分離，操作繁瑣，費(fèi)時(shí)，不僅不利于高通量分析，還易導(dǎo)致高成本和對(duì)環(huán)境造成污染。在線模式雖具有自動(dòng)化程度高等優(yōu)點(diǎn)，但系統(tǒng)的復(fù)雜性增加，轉(zhuǎn)化閥、環(huán)線等造成的死體積增加了峰展寬的風(fēng)險(xiǎn)性；且對(duì)于兩種不同保留機(jī)理的分離模式，還必須考慮兩維溶劑的兼容性，非常不利于實(shí)現(xiàn)高效快速分析。如果我們采用一種特殊的液相色譜柱，其色譜固定相同時(shí)具備反相液相色譜的疏水相互作用和銀離子色譜的η絡(luò)合吸附作用，就有可能用一根色譜柱就能達(dá)到甚至超越常規(guī)二維液相色譜對(duì)油脂中甘油三酯的分離效果，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)甘油三酯的高效、快速分離。近年來(lái)，混合模式的色譜固定相越來(lái)越受到人們的關(guān)注。相對(duì)于單一模式的色譜固定相只有一種色譜保留機(jī)理，混合模式的色譜固定相具有兩種或兩種以上的色譜保留機(jī)理，這有利于提高色譜分離的選擇性。馮鈺锜，彭西甜的發(fā)明專(zhuān)利“一種混合模式硅膠固定相及其制備方法和應(yīng)用”中，發(fā)明了一種疏水/強(qiáng)陽(yáng)離子交換混合模式的硅膠固定相的制備方法，通過(guò)將含辛基和含巰基的硅烷偶聯(lián)劑鍵合到表面帶有羥基的活化硅膠上，再用雙氧 水將巰基氧化為磺酸基團(tuán)獲得。該固定相除了提供通常的疏水作用可以作為反相液相色譜固定相外，固定相表面的磺酸基團(tuán)還能提供較強(qiáng)的陽(yáng)離子交換作用，進(jìn)而可通過(guò)陽(yáng)離子交換作用將銀離子固載于固定相表面，從而制備疏水/n-η作用混合保留機(jī)理的色譜固定相。使其在甘油三酯類(lèi)復(fù)雜化合物的分離上極具應(yīng)用潛力，尤其適合用于發(fā)展基于單柱二維色譜柱的甘油三酯的高效分離新方法。為我們進(jìn)一步研制對(duì)甘油三酯類(lèi)化合物具有特殊識(shí)別作用的單柱二維液相色譜固定相提供了依據(jù)和指導(dǎo)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種基于疏水作用和銀離子π絡(luò)合作用的混合模式色譜固定相及其制備方法，其制備簡(jiǎn)單；該混合模式色譜固定相可應(yīng)用于油脂中甘油三酯的分離。為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是一種基于疏水作用和銀離子η
絡(luò)合作用的混合模式色譜固定相，其特征在于它的結(jié)構(gòu)式為
權(quán)利要求
1.一種基于疏水作用和銀離子H絡(luò)合作用的混合模式色譜固定相，其特征在于它的結(jié)構(gòu)式為
2.一種基于疏水作用和銀離子η絡(luò)合作用的混合模式色譜固定相的制備方法，其特征在于它包括如下步驟1)首先制備一種疏水/強(qiáng)陽(yáng)離子交換混合模式的硅膠固定相，再制成柱狀的疏水/強(qiáng)陽(yáng)離子交換混合模式的硅膠固定相；2)然后通過(guò)離子交換作用，將銀離子固載到表面帶有磺酸基的上述硅膠固定相上，得到基于疏水作用和銀離子η絡(luò)合作用的混合模式色譜固定相。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種基于疏水作用和銀離子π絡(luò)合作用的混合模式色譜固定相的制備方法，其特征在于步驟I)包括如下步驟 ①以120-250mL無(wú)水甲苯為有機(jī)溶劑，加入3g的硅膠以及l(fā)_3g的硅烷偶聯(lián)劑，機(jī)械攪拌，滴入O. 6-1. 5mL三乙胺作為催化劑，在N2保護(hù)下加熱回流反應(yīng)20-30小時(shí)后，冷卻，抽濾，依次用甲苯、甲醇、丙酮洗滌；真空干燥，得到辛基-巰基鍵合硅膠； ②向步驟①制得的辛基-巰基鍵合硅膠中加入甲醇和濃度為25wt%-35wt%的雙氧水溶液，甲醇與雙氧水溶液的體積比為I : 2-4，辛基-巰基鍵合硅膠與甲醇的配比為2-5g 10-20mL，機(jī)械攪拌，滴入濃硫酸使pH呈弱酸性，在28-32° C下反應(yīng)10-20小時(shí)后，過(guò)濾，依次用蒸餾水、甲醇洗滌；真空干燥，得到疏水/強(qiáng)陽(yáng)離子交換混合模式的硅膠固定相； ③將步驟②制得的疏水/強(qiáng)陽(yáng)離子交換混合模式的硅膠固定相采用勻漿法裝柱，以異丙醇為勻漿劑，漩渦勻漿5-10min，并以甲醇為頂替劑裝入250X4. 6mm i. d.的不銹鋼柱中，疏水/強(qiáng)陽(yáng)離子交換混合模式的硅膠固定相與異丙醇的質(zhì)量比為5-8g :50-200mL，疏水/強(qiáng)陽(yáng)離子交換混合模式的硅膠固定相與甲醇的質(zhì)量比為5-8g :50-200mL，得到柱狀的疏水/強(qiáng)陽(yáng)離子交換混合模式的硅膠固定相。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種基于疏水作用和銀離子π絡(luò)合作用的混合模式色譜固定相的制備方法，其特征在于所述硅膠是色譜用硅膠微球或者是無(wú)定型硅膠。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種基于疏水作用和銀離子π絡(luò)合作用的混合模式色譜固定相的制備方法，其特征在于所述步驟2)具體為 ①將上述制得的柱狀的疏水/強(qiáng)陽(yáng)離子交換混合模式的硅膠固定相用濃度為.O.5wt% _5wt%的醋酸銨水溶液沖洗，流速控制在O. 5-2mL/min,時(shí)間控制在20_120min，得到色譜柱； ②將步驟①處理后的色譜柱用水沖洗，流速控制在O.5-2mL/min,時(shí)間控制在20-120min ； ③用IOwt% -40wt%的硝酸銀水溶液通過(guò)液相色譜儀自動(dòng)進(jìn)樣器注入步驟②處理后的色譜柱，每次進(jìn)樣量10-100 μ 1，進(jìn)樣次數(shù)10-100次；步驟②處理后的色譜填料的量為5-10g ； ④將步驟③處理后的色譜柱用甲醇沖洗，流速控制在0. 5-2mL/min，時(shí)間控制在20-120min，得到一種基于疏水作用和銀離子π絡(luò)合作用的混合模式色譜固定相。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種基于疏水作用和銀離子π絡(luò)合作用的混合模式色譜固定相的制備方法，其特征在于硅烷偶聯(lián)劑為下述二種按任意配比的混合， ①3-疏基丙基二乙氧基娃燒或3-疏基丙基二甲氧基娃燒或3-疏基丙基二氯娃燒， ②辛基三乙氧基硅烷或辛基三甲氧基硅烷或辛基三氯硅烷。
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種基于疏水作用和銀離子π絡(luò)合作用的混合模式色譜固定相的制備方法，其特征在于真空干燥為真空度為20-50KPa，干燥溫度為50-80° C，干燥時(shí)間為3-8小時(shí)。
8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種基于疏水作用和銀離子π絡(luò)合作用的混合模式色譜固定相的制備方法，其特征在于使PH呈弱酸性，弱酸性的pH為2-5。
9.一種基于疏水作用和銀離子η絡(luò)合作用的混合模式色譜固定相，其特征在于它應(yīng)用于色譜分離中。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種色譜固相材料及其制備方法和應(yīng)用。一種基于疏水作用和銀離子π絡(luò)合作用的混合模式色譜固定相，其特征在于它的結(jié)構(gòu)式為其中，R為甲氧基、乙氧基或Cl。其制備簡(jiǎn)單，分離效果好；將該混合模式色譜固定相應(yīng)用于油脂中甘油三酯的分離，分離效果好，具有良好的應(yīng)用前景。
文檔編號(hào)B01J20/30GK102895961SQ20121038962
公開(kāi)日2013年1月30日 申請(qǐng)日期2012年10月15日 優(yōu)先權(quán)日2012年10月15日
發(fā)明者魏芳, 馮鈺锜, 籍淑賢, 董緒燕, 陳洪, 胡娜, 呂昕 申請(qǐng)人:中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院油料作物研究所