專利名稱：一株耐重金屬的多環(huán)芳烴降解菌及其在復(fù)合污染土壤修復(fù)中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于環(huán)境工程和微生物工程技術(shù)領(lǐng)域。尤其涉及一株降解多環(huán)芳烴的陰溝腸桿菌cloacae) tzyx2及其在復(fù)合污染土壤修復(fù)中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
多環(huán)芳烴(PAHs)是一類持久性有機(jī)污染物(POPs)。PAHs污染源主要來(lái)自于廢舊機(jī)器油、電器產(chǎn)品的潤(rùn)滑油和來(lái)自廢舊金屬拆解中的木材、有機(jī)高分子化合物、紙張等含碳?xì)浠衔锏奈镔|(zhì)經(jīng)不完全燃燒或在還原性氣氛中經(jīng)熱分解而生成的。由于多環(huán)芳烴及其衍生物具有致癌性、致突變性和致畸性，以及急性毒性和亞致死作用，目前已引起人們的極大關(guān)注。多環(huán)芳烴(PAHs)污染土壤修復(fù)是當(dāng)前環(huán)境修復(fù)中研究的熱點(diǎn)。生物降解是對(duì)PAHs污染土壤進(jìn)行修復(fù)的重要途徑之一。對(duì)于多環(huán)芳烴污染，國(guó)內(nèi)外進(jìn)行了大量多環(huán)芳烴降解微生物的篩選工作。到目前為止，已分離出多個(gè)具有多環(huán)芳烴降解能力的菌株，如假單胞菌屬、分枝桿菌屬、芽孢桿菌屬等。調(diào)查研究表明，許多污染土壤都呈現(xiàn)出重金屬和多環(huán)芳烴復(fù)合污染的趨勢(shì)。這兩類不同性質(zhì)的污染物共存時(shí)會(huì)產(chǎn)生一系列復(fù)雜的化學(xué)、生化及物理化學(xué)過(guò)程三方面的交互作用，致使復(fù)合條件下的污染物的環(huán)境行為與非復(fù)合污染環(huán)境中的相比更加復(fù)雜，而重金屬離子對(duì)微生物菌群的生物毒性影響也不容忽視，當(dāng)土壤中的重金屬離子含量較高時(shí)，會(huì)破壞微生物的生理結(jié)構(gòu)，使其徹底喪失分解有機(jī)物、修復(fù)土壤的功能。 因此，現(xiàn)有技術(shù)中缺少一種能夠耐受各種重金屬環(huán)境的多環(huán)芳烴降解菌。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中多環(huán)芳烴降解菌不耐重金屬的不足之處，提供一種降解多環(huán)芳烴菌株、該菌株在治理多環(huán)芳烴和重金屬污染土壤中可以應(yīng)用。為達(dá)到上述目的，本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)的
一株耐重金屬的多環(huán)芳烴降解菌，其特征在于，該菌株為陰溝腸桿菌(Mnterobacterc7oacae)tzyx2，在中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心的保藏號(hào)為CCTCC Ν0:Μ 2012240，具備降解多環(huán)芳烴的能力。所述菌株具有以多環(huán)芳烴為唯一碳源和能源進(jìn)行生長(zhǎng)的能力。所述菌株的16SrDNA序列如SEQ NO. I所示。所述耐重金屬的多環(huán)芳烴降解菌，其特征在于重金屬選自Cu2+、Zn2+、Cd2+、Ni3+、Pb3+中的一種或其混合物。所述耐重金屬的多環(huán)芳烴降解菌在多環(huán)芳烴污染的土壤的生物修復(fù)中的應(yīng)用。所述耐重金屬的多環(huán)芳烴降解菌在重金屬和多環(huán)芳烴復(fù)合污染土壤的生物修復(fù)中的應(yīng)用。
利用所述耐重金屬的多環(huán)芳烴降解菌進(jìn)行復(fù)合污染土壤生物修復(fù)的方法，其特征在于該方法由以下步驟組成選取重金屬和多環(huán)芳烴污染的土壤100g，陰溝腸桿菌(Mnterobacter c7oacae)tzyx2按質(zhì)量百分比2. 0%與土壤混合均勻,加水使土壤含水率保持在15%,放入恒溫振蕩器中，控制培養(yǎng)溫度在25°C的恒溫條件下,振蕩培養(yǎng)修復(fù)120小時(shí)。本發(fā)明提供的陰溝腸桿菌(Mnterobacter命名為tzyx2,于2012年6月24日保藏于“中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心”，其保藏號(hào)CCTCC NO: M 2012240。tzyx2是從浙江省臺(tái)州市固體廢棄物拆解場(chǎng)某污染土壤中分離并篩選得到。菌株可在15 35°C，pH值6. O 8. 5培養(yǎng)條件下較好生長(zhǎng)；菌株形態(tài)特征為革蘭氏陰性，桿狀，周生鞭毛，無(wú)芽孢；菌株在LB固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)24h形成黏液狀菌落，表面濕潤(rùn)，邊緣不整齊。作為優(yōu)選，本發(fā)明所述菌株能以多環(huán)芳烴為唯一碳源和能源生長(zhǎng)。 上述耐重金屬多環(huán)芳烴降解菌的篩選方法，可按如下步驟依次實(shí)施
(1)從固廢拆解場(chǎng)采集距地表下5 20cm處表層土壤樣品，作為菌源進(jìn)行自然富集培養(yǎng)；所述富集培養(yǎng)基含有葡萄糖、牛肉膏、蛋白胨、MgSO4 ；
(2)取(I)中所述富集培養(yǎng)液接種于無(wú)機(jī)鹽選擇培養(yǎng)基中進(jìn)行選擇培養(yǎng)，所無(wú)機(jī)鹽選擇培養(yǎng)基含有檸檬酸鈉、(NH4) 2S04,MgSO4, K2HPO4, KH2PO4 ;添加多環(huán)芳烴和重金屬(多環(huán)芳烴萘、菲、突蒽、花、苯并蒽、苯并花的濃度均為150mg/L 250mg/L ;重金屬Cu2+、Zn2+、Cd2+、Ni3+、Pb3+ 濃度均為 150mg/L 250mg/L)；
(3)取(2)中所述選擇培養(yǎng)物稀釋涂布于固體無(wú)機(jī)鹽選擇培養(yǎng)基上，進(jìn)行分離進(jìn)行分離即得到多環(huán)芳烴降解菌Tzyx2。上述多環(huán)芳烴降解菌tzyx2可用于多環(huán)芳烴和重金屬污染土壤的生物修復(fù)。本發(fā)明tzyx2可在15 35 °C，pH值6. O 8. 5培養(yǎng)條件下較好生長(zhǎng)；菌株形態(tài)特征為革蘭氏陰性，桿狀，周生鞭毛，無(wú)芽孢；菌株在LB固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)24h形成黏液狀菌落，表面濕潤(rùn)，邊緣不整齊。tzyx2在LB固體培養(yǎng)基(胰蛋白胨I. 0%，酵母提取物O. 5%，氯化鈉I. 0%)培養(yǎng)24小時(shí)形成黏液狀菌落，表面濕潤(rùn)，邊緣不整齊。tzyx2的生理生化特征,見(jiàn)表I。表I tzyx2的生理生化特征
權(quán)利要求
1.一株耐重金屬的多環(huán)芳烴降解菌,其特征在于,該菌株為陰溝腸桿菌(MnterobacterHoacae)tzyx2，在中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心的保藏號(hào)為CCTCC NO M 2012240，具備降解多環(huán)芳烴的能力。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述耐重金屬的多環(huán)芳烴降解菌，其特征在于所述菌株具有以多環(huán)芳烴為唯一碳源和能源進(jìn)行生長(zhǎng)的能力。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述耐重金屬的多環(huán)芳烴降解菌，其特征在于所述菌株的16SrDNA序列如SEQ NO. I所示。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述耐重金屬的多環(huán)芳烴降解菌，其特征在于重金屬選自Cu2+、Zn2+、Cd2+、Ni3+、Pb3+中的一種或其混合物。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述耐重金屬的多環(huán)芳烴降解菌在多環(huán)芳烴污染的土壤的生物修復(fù)中的應(yīng)用。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述耐重金屬的多環(huán)芳烴降解菌在重金屬和多環(huán)芳烴復(fù)合污染土壤的生物修復(fù)中的應(yīng)用。
7.利用權(quán)利要求I所述耐重金屬的多環(huán)芳烴降解菌進(jìn)行復(fù)合污染土壤生物修復(fù)的方法，其特征在于該方法由以下步驟組成選取重金屬和多環(huán)芳烴污染的土壤100g，陰溝腸桿菌iEnterobacter c7oacae)tzyx2按質(zhì)量百分比2. 0%與土壤混合均勻,加水使土壤含水率保持在15%,放入恒溫振蕩器中，控制培養(yǎng)溫度在25°C的恒溫條件下,振蕩培養(yǎng)修復(fù)120小時(shí)。
全文摘要
本發(fā)明屬于環(huán)境工程和微生物工程技術(shù)領(lǐng)域。尤其涉及一株降解多環(huán)芳烴的陰溝腸桿菌(Enterobacter cloacae)tzyx2及其在復(fù)合污染土壤修復(fù)中的應(yīng)用。該菌株為陰溝腸桿菌(Enterobacter cloacae)tzyx2，在中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心的保藏號(hào)為CCTCC NO:M 2012240，具備降解多環(huán)芳烴的能力。提供一種降解多環(huán)芳烴菌株、該菌株在治理多環(huán)芳烴和重金屬污染土壤中可以應(yīng)用。
文檔編號(hào)B09C1/10GK102864112SQ201210385520
公開日2013年1月9日 申請(qǐng)日期2012年10月12日 優(yōu)先權(quán)日2012年10月12日
發(fā)明者于紅艷, 張昕欣, 奚立民 申請(qǐng)人:臺(tái)州職業(yè)技術(shù)學(xué)院