雙光子吸收化合物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明的課題在于提供一種雙光子吸收化合物，所述雙光子吸收化合物的水溶性優(yōu)異，且可在近紅外波長(zhǎng)區(qū)域內(nèi)吸收雙光子而被激發(fā)從而發(fā)出紅色熒光。式(1)表示的化合物的水溶性優(yōu)異，且可在近紅外波長(zhǎng)區(qū)域內(nèi)吸收雙光子而被激發(fā)從而發(fā)出紅色熒光。式(1)中，X1及X2表示下述式(2)，且可以相同或不同，Y表示環(huán)數(shù)為2～4的稠合多環(huán)基，式(2)中，R1表示C1～C3的烷基，Z?表示針對(duì)吡啶鎓陽(yáng)離子的反陰離子，波浪線表示針對(duì)Y的共價(jià)鍵。X1?Y?X2 (1)
【專利說(shuō)明】
雙光子吸收化合物
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明設(shè)及新型的雙光子吸收化合物，更詳細(xì)而言，設(shè)及水溶性優(yōu)異、且可在近紅 外波長(zhǎng)區(qū)域內(nèi)吸收雙光子從而發(fā)出紅色巧光的化合物。此外，設(shè)及含有該雙光子吸收化合 物的巧光探針組合物、用于生物成像(bioimaging)的巧光探針組合物。
【背景技術(shù)】
[0002] 所謂雙光子吸收，是指在將光作為光子考慮時(shí)，兩個(gè)光子同時(shí)被吸收，而導(dǎo)致分子 的狀態(tài)被激發(fā)而躍遷到高能級(jí)。雙光子吸收為非線性現(xiàn)象，其發(fā)生概率相對(duì)于光強(qiáng)度的平 方成比例。因此，由于僅在光強(qiáng)度高時(shí)才能觀測(cè)到光的吸收，所W在用透鏡將光進(jìn)行聚光的 情況下，能夠僅在光強(qiáng)度高的焦點(diǎn)附近產(chǎn)生吸收。此外，即使是能量低的光也能夠激發(fā)至高 的躍遷能量，因此，例如可通過(guò)用透鏡將近紅外光進(jìn)行聚光而造成雙光子現(xiàn)象，從而對(duì)不能 被近紅外光激發(fā)的分子通過(guò)照射而使其成為激發(fā)狀態(tài)。
[0003] 僅在焦點(diǎn)附近發(fā)生雙光子吸收的特征例如可應(yīng)用于生物成像(非專利文獻(xiàn)1)。所 謂生物成像，是指在細(xì)胞?組織或個(gè)體水平把握蛋白質(zhì)等的分布?局部存在、并將其動(dòng)態(tài) 作為圖像加 W分析的技術(shù)，是對(duì)處于病態(tài)時(shí)期的病理闡明、診斷等方面有用的手段。在生物 成像中，利用雙光子吸收時(shí)，通過(guò)針對(duì)測(cè)定試樣進(jìn)行焦點(diǎn)位置掃描，能夠獲得=維圖像。
[0004] 對(duì)于想要通過(guò)生物成像獲得試樣深部的圖像而言，近紅外附近的長(zhǎng)波長(zhǎng)區(qū)域的光 被認(rèn)為是優(yōu)選的，運(yùn)是因?yàn)樵诳梢?jiàn)光區(qū)域，試樣內(nèi)光的吸收及散射程度大、光的透過(guò)性差。 因此，利用長(zhǎng)波長(zhǎng)區(qū)域的光進(jìn)行激發(fā)的雙光子吸收適合于對(duì)試樣的深部進(jìn)行成像。
[0005] 對(duì)于利用雙光子吸收的生物成像而言，例如，可舉出通過(guò)W下方式獲得圖像的方 法:對(duì)測(cè)定對(duì)象的試樣給予可吸收雙光子的巧光物質(zhì)，使祀標(biāo)生物分子與巧光物質(zhì)相互作 用，并向其照射將近紅外光通過(guò)透鏡聚光而得的光，檢測(cè)巧光物質(zhì)的發(fā)光。該方法已作為雙 光子巧光生物成像而為人們所知。
[0006] 為了通過(guò)雙光子巧光生物成像獲得試樣深部的圖像，除了利用近紅外光引起雙光 子吸收外，對(duì)于產(chǎn)生的巧光，也期望其為近紅外附近的發(fā)光，W能夠透過(guò)試樣內(nèi)部。因此，期 望開發(fā)出通過(guò)近紅外附近區(qū)域的光而效率良好地發(fā)生雙光子吸收、且在近紅外附近區(qū)域產(chǎn) 生發(fā)光的化合物。
[0007] 為了使得效率良好地發(fā)生雙光子吸收，需要選擇化合物的雙光子吸收截面積(GM) (其表示上述效率的良好程度)大的化合物。由此，認(rèn)為n電子共輛體系擴(kuò)張的化合物等是合 適的，但是化合物的n電子共輛體系越擴(kuò)張，向水、醇等極性溶劑中的溶解性變得越差，在進(jìn) 行生物成像時(shí)，給予至作為測(cè)定對(duì)象的生物試樣并使其分布于生物體內(nèi)變得困難。因此，期 望開發(fā)出兼具W下性質(zhì)的雙光子吸收化合物：效率良好地發(fā)生雙光子吸收的性質(zhì)、發(fā)紅色 光的性質(zhì)、顯示水溶性的性質(zhì)。
[000引現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)
[0009] 非專利文獻(xiàn)
[0010] 非專利文獻(xiàn)l:Biochemist巧 46(2007)9674

【發(fā)明內(nèi)容】

[0011] 發(fā)明要解決的課題
[0012] 本發(fā)明的課題在于提供一種雙光子吸收化合物，所述雙光子吸收化合物的水溶性 優(yōu)異，且可在近紅外波長(zhǎng)區(qū)域內(nèi)吸收雙光子而被激發(fā)從而發(fā)出紅色巧光。
[0013] 用于解決課題的手段
[0014] 本申請(qǐng)的發(fā)明人為解決上述課題而進(jìn)行了深入研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，下述環(huán)數(shù)為2~4 的稠合多環(huán)基化合物是水溶性優(yōu)異、且可在近紅外波長(zhǎng)區(qū)域內(nèi)吸收雙光子而被激發(fā)從而發(fā) 出紅色巧光的雙光子吸收化合物，所述環(huán)數(shù)為2~4的稠合多環(huán)基化合物具有2個(gè)N-烷基化 晚基乙締基作為取代基。
[001引即，本發(fā)明設(shè)及：
[0016] (1)式(1)表示的化合物；
[0017] X^-Y-X^ (1)
[001引[式（1)中，XI及X嗦示下述式（2)，且可W相同或不同，Y表示環(huán)數(shù)為2~4的稠合多
環(huán)基。
[0019] 輝 I
[0020] (式(2)中，r1表示C1~C3的烷基，Z-表示針對(duì)[I比晚鐵陽(yáng)離子(pyridinium cation) 的反陰離子(counter anion),波浪線表示針對(duì)Y的共價(jià)鍵。）]
[0021] (2)如上述(1)所述的化合物，其特征在于，Y為W下化學(xué)式表示的稠合多環(huán)基中的 任一者；
[0022]
[0023] (式中，R2表示供電子基團(tuán)，a為0~6的整數(shù)，b為0~8的整數(shù)，C為0~10的整數(shù)。a、b 或C為2W上的整數(shù)時(shí)，各R2可W相同或不同。波浪線表示針對(duì)Xi及X2的共價(jià)鍵。）
[0024] (3)如上述(2)所述的化合物，其特征在于，Y為W下化學(xué)式表示的稠合多環(huán)基中的 任一者；
[0025]
[00%](式中，R2表示供電子基團(tuán)，a為0~6的整數(shù)，b為0~8的整數(shù)。a或b為上的整數(shù) 時(shí)，各R2可W相同或不同。波浪線表示針對(duì)Xi及X2的共價(jià)鍵。）
[0027] (4)如上述(2)或(3)所述的化合物，其特征在于，供電子基團(tuán)為選自徑基、C1~CIO 烷基、Cl~CIO烷氧基、氨基、具有酸鍵的烷基及具有酸鍵的烷氧基中的1個(gè)或2個(gè)W上；
[0028] (5)如上述（1)~（4)中任一項(xiàng)所述的化合物，其特征在于，反陰離子為面化物離 子、橫酸根（sulfonate);
[0029] (6)如上述（1)~（5)中任一項(xiàng)所述的化合物，其特征在于，在600~1200nm的波長(zhǎng) 區(qū)域內(nèi)具有雙光子吸收；
[0030] (7)如上述（1)~(6)中任一項(xiàng)所述的化合物，其特征在于，發(fā)出600~900皿的波長(zhǎng) 區(qū)域的巧光；
[0031] (8)巧光探針組合物，其特征在于，含有上述（1)~(7)中任一項(xiàng)所述的化合物中的 1種或2種W上；
[0032] (9)用于生物成像的巧光探針組合物，其特征在于，含有上述(1)~(7)中任一項(xiàng)所 述的化合物中的1種或巧巾W上；
[0033] (10)巧光性生物分子，其特征在于，所述巧光性生物分子是含有與上述（1)~（7) 中任一項(xiàng)所述的化合物W化學(xué)方式結(jié)合的生物分子而成的。
[0034] 發(fā)明的效果
[0035] 本發(fā)明的化合物可在近紅外波長(zhǎng)區(qū)域內(nèi)吸收雙光子而被激發(fā)從而發(fā)出紅色巧光， 并且還兼具水溶性，因此可用作巧光探針，并且能夠?qū)?xì)胞、組織、器官及個(gè)體之類的生物 體進(jìn)行生物成像。此外，由于發(fā)出容易穿過(guò)生物體的紅色巧光，因此生物體深部的成像也成 為可能。
【附圖說(shuō)明】
[0036] [圖。糞衍生物（I)的iHNMR圖
[0037] [圖2]蔥衍生物（II)的iHNMR圖 [003引[圖3]巧衍生物（III)的iHNMR圖
[0039] [圖4]糞衍生物(I)的紫外-可見(jiàn)吸收光譜
[0040] [圖引蔥衍生物(II)的紫外-可見(jiàn)吸收光譜
[0041] [圖6]巧衍生物(III)的紫外-可見(jiàn)吸收光譜
[0042] [圖7]苯衍生物(IV)的紫外-可見(jiàn)吸收光譜
[0043] [圖引糞衍生物(I)的巧光光譜
[0044] [圖9]蔥衍生物(II)的巧光光譜
[0045] [圖10]巧衍生物(III)的巧光光譜
[0046] [圖山苯衍生物（IV)的巧光光譜
[0047] [圖12]糞衍生物(I)的雙光子吸收截面積光譜
[0048] [圖13 ]蔥衍生物(II)的雙光子吸收截面積光譜
[0049] [圖14]巧衍生物(III)的雙光子吸收截面積光譜
[0050] [圖1引苯衍生物(IV)的雙光子吸收截面積光譜
[0051] [圖16]雙光子激發(fā)巧光顯微鏡的光學(xué)系統(tǒng)的示意圖
[0052] [圖17]經(jīng)糞衍生物（I)染色的化k293細(xì)胞的雙光子激發(fā)巧光顯微鏡圖像
[0053] [圖1引經(jīng)蔥衍生物（II)染色的化k293細(xì)胞的雙光子激發(fā)巧光顯微鏡圖像 [0化4][圖19]經(jīng)巧衍生物（III)染色的化k293細(xì)胞的雙光子激發(fā)巧光顯微鏡圖像
【具體實(shí)施方式】 [005引（化合物）
[0056] 本發(fā)明的化合物為式(1)表示的W下化合物。
[0057] X^-Y-X^ (1)
[0化引[式（1)中，XI及X嗦示下述式（2)，且可W相同或不同，Y表示環(huán)數(shù)為2~4的稠合多 環(huán)基。
[0化9]
[0060] (式(2)中，Ri表示C1~C3的烷基，Z-表示針對(duì)化晚鐵陽(yáng)離子的反陰離子，波浪線表 示針對(duì)Y的共價(jià)鍵。）]
[0061] 上述C1~C3的烷基是指具有碳原子數(shù)為1~3的直鏈或支鏈的烷基，例如，表示甲 基、乙基、正丙基、異丙基等。
[0062] 上述針對(duì)化晚鐵陽(yáng)離子的反陰離子例如表示:氯離子、漠離子、艦離子等面化物離 子；甲橫酸根、對(duì)甲苯橫酸根、=氣甲橫酸根、=氣乙橫酸根等橫酸根;六氣錬酸根、六氣憐 酸根、四氣棚酸根等;優(yōu)選為面化物離子、橫酸根。
[0063] 上述環(huán)數(shù)為2~4的稠合多環(huán)基表示W(wǎng)下化學(xué)式所示的稠合多環(huán)基中的任一者。
[0064]
12 (式中，R2表示供電子基團(tuán)，a為0~6的整數(shù)，b為0~8的整數(shù)，C為0~10的整數(shù)。a、b 或C為2W上的整數(shù)時(shí)，各R2可W相同或不同。波浪線表示針對(duì)Xi及X2的共價(jià)鍵。） 2 在上述Y的稠合多環(huán)基中，優(yōu)選W下化學(xué)式表示的稠合多環(huán)基。
[0067
[0068] (式中，R2、a、b、波浪線表示與上述相同的含義。）
[0069] 上述供電子基團(tuán)是指具有使稠合多環(huán)基的電子密度增加的效果的基團(tuán)，例如，可 舉出徑基、C1~CIO烷基、C1~CIO烷氧基、氨基、具有酸鍵的烷基及具有酸鍵的烷氧基等。
[0070] 上述C1~CIO烷基是指具有碳原子數(shù)為1~10的直鏈或支鏈的烷基，例如，表示甲 基、乙基、丙基、異丙基、正下基、異下基、叔下基、正戊基、正己基、正庚基、正辛基、壬基、異 壬基、癸基等。
[0071] 上述C1~CIO烷氧基例如表示：甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正下氧基、異 下氧基、仲下氧基、叔下氧基、正戊氧基、正己氧基、正庚氧基、異庚氧基、叔庚氧基、正辛氧 基、異辛氧基、叔辛氧基、2-乙基己氧基等。
[0072] 上述氨基是指由-N出、-NHR3、-NR3R3'表示的官能團(tuán)。此處，R 3及R3'表示甲基、乙基、 丙基、異丙基、正下基、異下基、叔下基、正戊基、正己基、正庚基、正辛基、壬基、異壬基、癸基 等C1~CIO烷基;環(huán)丙基、環(huán)下基、環(huán)戊基、環(huán)己基等C3~C6環(huán)烷基;苯基等。
[0073] 所謂具有酸鍵的烷基及具有酸鍵的烷氧基，是指含有1個(gè)或2個(gè)W上的酸鍵的烷基 及烷氧基，例女日，表示-C此0C曲、-0C此0C曲、-C此0C出C出、-0C此0C此C曲、-(C出）2〇C此細(xì)3、-0 (C出）2〇C出 C出、-(C出）2〇(C此）2C 曲、-0(c出）2〇(C出）2C出、-(C此）3〇(C 此）2C 曲、-0(c出）3〇(C此） 2C 出、-(C 出）2〇(C 出）2〇(C 出）2C 出、-0(C 出）2〇(C 出）2〇(C 出）2C 出等。
[0074] 上述供電子基團(tuán)中，優(yōu)選甲基、乙基、丙基、異丙基、正下基、異下基、叔下基、甲氧 基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正下氧基、異下氧基、仲下氧基、叔下氧基、徑基、-N此、甲 基氨基、二甲基氨基、乙基氨基、二乙基氨基、-C此0C出、-0C此0C出、-(C此）2〇 (C出）2C出、-0 (邸2)2〇(邸2)2邸3。
[0075] 式（1)表示的化合物優(yōu)選為在從可見(jiàn)區(qū)域至紅外區(qū)域內(nèi)通過(guò)雙光子吸收而被激發(fā) 的化合物，該雙光子吸收為在600~1200nm處被吸收的化合物是優(yōu)選的。此外，式(1)表示的 化合物中，通過(guò)雙光子吸收而發(fā)出600~900nm的波長(zhǎng)區(qū)域的巧光的化合物是優(yōu)選的。此外， 式（1)表示的化合物中，雙光子吸收截面積優(yōu)選為200GM(1GM= l〇-5Dcm4smolecule-iphoton -i)W上，更優(yōu)選為500GMW上。
[0076] 關(guān)于式（1)表示的化合物，具體而言，可W例舉表1~表3中示出的化合物。芳香環(huán) 上的數(shù)字表示芳香環(huán)的碳編號(hào)。
[0077] [表1]




[0085]
[0086] (化合物的合成）
[0087] 本發(fā)明的式（1)表示的化合物的合成方法沒(méi)有特別限制，例如，可舉出如W下的方 法1~3所示那樣、介由雙鍵將稠合多環(huán)部分與化晚部分進(jìn)行連接的方法。
[00則方法1
[0089]稠合多環(huán)部分與化晚部分的偶聯(lián)可W通過(guò)化ck反應(yīng)進(jìn)行。即，根據(jù)需要在適當(dāng)?shù)?反應(yīng)溶劑中，使式(3)的面代芳基化合物與4-乙締基化晚在鈕催化劑及堿的存在下反應(yīng)，從 而獲得式(4)的化合物。然后，針對(duì)式(4)的化合物，根據(jù)需要在適當(dāng)?shù)姆磻?yīng)溶劑中，利用N- 烷基化劑(RiZ)將化晚的氮進(jìn)行烷基化，由此可W合成式(1)的化合物。
[0090]
[00川[式中，乂1八2、￥、1?1、2表示與上述相同的含義。化1表示面原子古'、滬表示：
[0092]
[0093] (式中，Ri、波浪線表示與式(1)中的那些相同的含義。）。]
[0094] 上述面代芳基化合物及4-乙締基化晚可W使用市售品。此外，上述面代芳基化合 物與上述4-乙締基化晚化合物的使用量之比沒(méi)有特別限定，可從W4-乙締基化晚相對(duì)于面 代芳基化合物的當(dāng)量比計(jì)為2.0~4.0、優(yōu)選為2.1~3.0的范圍內(nèi)適當(dāng)選擇。
[00M]上述鈕催化劑只要是通常在化ck反應(yīng)中使用的鈕催化劑即可，沒(méi)有特別限定，例 如，可舉出乙酸鈕、氯化鈕、=(二亞芐基丙酬）二鈕、雙（二亞芐基丙酬）鈕、四苯基麟） 鈕、[i，r-雙（二苯基麟基）二茂鐵]二氯化鈕、雙(=(鄰甲苯基)麟）二氯化鈕、雙(=苯基 麟)二氯化鈕、乙酷丙酬鈕、鈕碳、雙（乙臘)二氯化鈕、二(氯基苯)二氯化鈕、（1,3-二異丙基 咪挫-2-亞基）（3-氯化晚基)二氯化鈕、雙(=叔下基麟)鈕、二氯雙(=苯基麟)鈕（II)、二氯 雙(=環(huán)己基麟)鈕等。催化劑的使用量沒(méi)有特別限定，可從W相對(duì)于面代芳基化合物的當(dāng) 量比計(jì)為0.01~0.5、優(yōu)選為0.05~0.3的范圍內(nèi)適當(dāng)選擇。
[0096] 上述堿只要是通常在化ck反應(yīng)中使用的堿即可，沒(méi)有特別限定，可舉出S甲胺、S 乙胺、二異丙基乙基胺、二環(huán)己胺、乙醇胺、二乙醇胺、=乙醇胺、乙二胺、化晚等胺類;碳酸 鋼、碳酸鐘、碳酸飽、氨氧化鋼、氨氧化鐘、氨氧化飽等無(wú)機(jī)堿類。堿的使用量沒(méi)有特別限定， 可從W相對(duì)于面代芳基化合物的當(dāng)量比計(jì)為2~20、優(yōu)選為3~10的范圍內(nèi)適當(dāng)選擇。
[0097] 作為上述面代芳基化合物與上述4-乙締基化晚的偶聯(lián)反應(yīng)中的溶劑，例如，可舉 出苯、甲苯等芳香族控類溶劑，乙臘、N，N-二甲基乙酷胺、N，N-二甲基甲酯胺等酷胺類溶劑， 四氨巧喃、乙酸等酸類溶劑等。運(yùn)些反應(yīng)溶劑可W各自單獨(dú)使用，也可W適當(dāng)組合巧巾W上 而使用。溶劑的使用量沒(méi)有特別限定，可從使得面代芳基化合物的濃度成為0.1~2 (mo 1 / L)、優(yōu)選0.5~1.5(mol/L)的量的范圍內(nèi)適當(dāng)選擇。
[009引上述面代芳基化合物與上述4-乙締基化晚的偶聯(lián)反應(yīng)時(shí)的溫度通常為0~200°C， 優(yōu)選為20~130°C，可根據(jù)使用的溶劑、堿的沸點(diǎn)進(jìn)行適當(dāng)選擇。反應(yīng)可W在空氣氣氛下進(jìn) 行，通常優(yōu)選在非活性氣體氣氛下進(jìn)行。作為非活性氣體，可舉出氣氣、氮?dú)?、氮?dú)獾取?br>[0099]將由上述偶聯(lián)反應(yīng)得到的反應(yīng)溶液根據(jù)需要進(jìn)行濃縮后，可W將殘余物直接用于 接下來(lái)的反應(yīng)中，也可W在進(jìn)行適當(dāng)?shù)暮筇幚砗?，作為?4)表示的化合物使用。作為后處 理的具體方法，可舉出萃取處理及/或結(jié)晶、重結(jié)晶、色譜法等已知的純化方法。
[0100] 對(duì)于上述烷基化劑而言，只要為通常在氮的烷基化中使用的N-烷基化劑即可，沒(méi) 有特別限定，例如，可舉出艦甲燒、艦乙燒、1-艦丙烷、硫酸二甲醋、=氣甲橫酸甲醋等。烷基 化劑的使用量沒(méi)有特別限定，可從W相對(duì)于式(4)表示的化合物的當(dāng)量比計(jì)為1~10、優(yōu)選 為1~5的范圍內(nèi)適當(dāng)選擇。
[0101] 作為上述烷基化中的溶劑，例如，可舉出苯、甲苯等芳香族控類溶劑，乙臘、N，N-二 甲基乙酷胺、N，N-二甲基甲酯胺等酷胺類溶劑，四氨巧喃、乙酸等酸類溶劑，二氯甲燒、二氯 乙燒、氯仿等面素類溶劑等。運(yùn)些反應(yīng)溶劑可W分別單獨(dú)使用，也可W適當(dāng)組合巧巾W上而 使用。溶劑的使用量沒(méi)有特別限定，可從使得式(4)表示的化合物的濃度成為0.01~2(mol/ L)、優(yōu)選0.05~1.0(mol/L)的量的范圍內(nèi)適當(dāng)選擇。
[0102] 上述烷基化反應(yīng)時(shí)的溫度通常為0~200°C，優(yōu)選為20~130°C，可根據(jù)使用的溶 劑、堿的沸點(diǎn)進(jìn)行適當(dāng)選擇。反應(yīng)可W在空氣氣氛下進(jìn)行，通常優(yōu)選在非活性氣體氣氛下進(jìn) 行。作為非活性氣體，可舉出氣氣、氮?dú)狻⒌獨(dú)獾取?br>[0103] 將上述烷基化反應(yīng)結(jié)束后的反應(yīng)溶液根據(jù)需要進(jìn)行濃縮，然后，可W將析出的結(jié) 晶直接、或進(jìn)行適當(dāng)?shù)暮筇幚砗笞鳛槭剑?)表示的化合物使用。作為后處理的具體方法，可 舉出萃取、結(jié)晶、重結(jié)晶、色譜法等已知的純化方法。
[0…4] 方法2
[0105] ^^^：量的堿的存在下，根據(jù)需要在適當(dāng)?shù)姆磻?yīng)溶劑中，使式（5)表示的醒與式 (6)表示的N-烷基-4-甲基化晚-1-鐵化合物進(jìn)行反應(yīng)，由此可W合成式（1)的化合物。
[0106]
1234 (式中，1?1心1^2、￥、2-表示與上述相同的含義。） 2 上述醒可W通過(guò)已知的方法從芳基化合物進(jìn)行衍生。例如，可舉出將市售的面代 芳基化合物進(jìn)行裡化后，通過(guò)甲酯化反應(yīng)進(jìn)行衍生的方法;通過(guò)傅克(Friedel-Crafts)反 應(yīng)將市售的糞、蔥、巧等芳基化合物進(jìn)行衍生的方法;通過(guò)適當(dāng)?shù)难趸磻?yīng)將雙巧圣甲基)芳 基化合物進(jìn)行衍生的方法等，但并不限定于上述方法。上述N-烷基-4-甲基化晚-1-鐵化合 物可^從4-甲基艦代化晚并按照211曰叫，￥.;胖曰叫，1;11^.;化，乂.；^11方.；^11，乂.；211曰〇， N. ;Huang,B.Org.Biomol. Qiem. 2010,8,4582-4588中記載的方法進(jìn)行合成，但并不限定于 此。此外，上述醒與上述N-烷基-4-甲基化晚-1-鐵化合物的使用量之比沒(méi)有特別限定，可從 WN-烷基-4-甲基化晚-1-鐵相對(duì)于醒的當(dāng)量比計(jì)為2.0~4.0、優(yōu)選為2.1~3.0的范圍內(nèi)適 當(dāng)選擇。 3 上述堿沒(méi)有特別限定，可舉出=甲胺、=乙胺、二異丙基乙基胺、二環(huán)己胺、乙醇 胺、二乙醇胺、=乙醇胺、乙二胺、化晚、贓晚等。堿的使用量沒(méi)有特別限定，可從W相對(duì)于上 述醒的當(dāng)量比計(jì)為0.01~1.0的范圍內(nèi)適當(dāng)選擇。 4 作為上述反應(yīng)中的反應(yīng)溶劑，例如，可舉出苯、甲苯等芳香族控類溶劑，乙臘、N，N- 二甲基乙酷胺、N，N-二甲基甲酯胺等酷胺類溶劑，四氨巧喃、乙酸等酸類溶劑，甲醇、乙醇、 異丙醇等醇類溶劑，二氯甲燒、二氯乙燒、氯仿等面素類溶劑等。上述反應(yīng)溶劑可W分別單 獨(dú)使用，也可W適當(dāng)組合巧巾W上而使用。溶劑的使用量沒(méi)有特別限定，可從使得上述醒的 濃度成為0.001~l.〇(mol/L)的量的范圍內(nèi)適當(dāng)選擇。
[0111] 上述反應(yīng)時(shí)的溫度通常為0~200°C，優(yōu)選為20~130°C，可根據(jù)使用的溶劑、堿的 沸點(diǎn)進(jìn)行適當(dāng)選擇。反應(yīng)可W在空氣氣氛下進(jìn)行，通常優(yōu)選在非活性氣體氣氛下進(jìn)行。作為 非活性氣體，可舉出氣氣、氮?dú)?、氮?dú)獾取?br>[0112] 將反應(yīng)結(jié)束后的反應(yīng)溶液根據(jù)需要進(jìn)行濃縮后，可W將析出的結(jié)晶直接、或進(jìn)行 適當(dāng)?shù)暮筇幚砗笞鳛槭剑?)表示的化合物使用。作為后處理的具體方法，可舉出萃取、結(jié)晶、 重結(jié)晶、色譜法等已知的純化方法。
[01。] 方法3
[0114]此外，式（4)表示的化合物可W通過(guò)霍納爾一沃茲沃思一埃蒙斯（Horner- Wadswodh-Emmons)反應(yīng)進(jìn)行衍生。即，根據(jù)需要在適當(dāng)?shù)姆磻?yīng)溶劑中，使憐酸醋化合物(7) 及4-化晚甲醒在堿的存在下反應(yīng)，從而獲得式(4)的化合物。然后，與方法1同樣地，利用N- 烷基化劑將化晚的氮進(jìn)行烷基化，由此可W合成式(1)的化合物。
[0115
[0116](式中，Y、Xi'、X2'表示與上述相同的含義，R4表示乙基或氣乙基。）
[0117] 對(duì)于上述式(7)表示的憐酸醋化合物，可舉出按照Iwase,Y. ;Kamada,K.;化ta,K.; Kondo，K. J.Mater. Chem. 2003,13,1575-1581中記載的方法、使雙（面代甲基）芳基化合物與 亞憐酸=乙醋或亞憐酸酸氣乙基)醋反應(yīng)從而進(jìn)行衍生的方法等，但并不限定 于此。上述4-化晚甲醒可W使用市售品。此外，上述憐酸醋化合物與上述4-化晚甲醒的使用 量之比沒(méi)有特別限定，可從W4-化晚甲醒相對(duì)于憐酸醋化合物的當(dāng)量比計(jì)為2.0~4.0的范 圍內(nèi)適當(dāng)選擇。
[0118] 上述堿沒(méi)有特別限定，可舉出1,8-二氮雜雙環(huán)[5.4.0]-7-十一締、氨化鋼、六甲基 二娃基氨基鋼（Sodium hexamethyldisilazide)、六甲基二娃基氨基鐘、芐基S甲基氨氧化 錠、叔下醇鐘等。堿的使用量沒(méi)有特別限定，可從W相對(duì)于面代芳基化合物的當(dāng)量比計(jì)為 2.0~4.0的范圍內(nèi)適當(dāng)選擇。
[0119] 作為上述反應(yīng)中的反應(yīng)溶劑，例如，可舉出苯、甲苯等芳香族控類溶劑，乙臘、N，N- 二甲基乙酷胺、N，N-二甲基甲酯胺等酷胺類溶劑，四氨巧喃、乙酸等酸類溶劑，甲醇、乙醇、 異丙醇、叔下醇等醇類溶劑，二氯甲燒、二氯乙燒、氯仿等面素類溶劑等。上述反應(yīng)溶劑可W 分別單獨(dú)使用，也可W適當(dāng)組合巧巾W上而使用。溶劑的使用量沒(méi)有特別限定，可從使得醒 的濃度成為0.001~l.〇(mol/L)的量的范圍內(nèi)適當(dāng)選擇。
[0120] 上述反應(yīng)時(shí)的溫度通常為0~200°C，優(yōu)選為20~130°C，可根據(jù)使用的溶劑、堿的 沸點(diǎn)進(jìn)行適當(dāng)選擇。反應(yīng)可W在空氣氣氛下進(jìn)行，通常優(yōu)選在非活性氣體氣氛下進(jìn)行。作為 非活性氣體，可舉出氣氣、氮?dú)?、氮?dú)獾取?br>[0121] 將上述反應(yīng)結(jié)束后的反應(yīng)溶液根據(jù)需要進(jìn)行濃縮后，可W將析出的結(jié)晶直接作為 式（1)表示的化合物使用，或者經(jīng)洗涂、或進(jìn)行適當(dāng)?shù)暮筇幚砗笞鳛槭剑?)表示的化合物使 用。作為后處理的具體方法，可舉出萃取、結(jié)晶、重結(jié)晶、色譜法等已知的純化方法。
[0122] (巧光探針組合物）
[0123] 上述式（1)表示的化合物可W直接作為巧光探針使用，根據(jù)需要，也可W配合通常 用于制備試劑的添加劑而W巧光探針組合物的形式使用。例如，作為為了在生理環(huán)境下使 用試劑而添加的添加劑，可W使用助溶劑、抑調(diào)節(jié)劑、緩沖劑、等滲劑等添加劑，本領(lǐng)域技術(shù) 人員可W適當(dāng)選擇它們的配合量。它們的組合物通常作為粉末形態(tài)的混合物、凍干物、顆粒 劑、片劑、液體制劑等合適形態(tài)的組合物而被提供。
[0124] (生物成像）
[0125] 本發(fā)明的生物成像按照W下的步驟進(jìn)行：
[0126] 步驟1)，將式（1)表示的化合物或含有所述化合物的巧光探針組合物施予至細(xì)胞、 組織、器官或個(gè)體；
[0127] 步驟2)，使上述化合物分布于上述細(xì)胞、組織、器官或個(gè)體中，使其與上述細(xì)胞、組 織、器官或個(gè)體內(nèi)的生物分子接觸；
[01%]步驟3)，將上述細(xì)胞、組織、器官或個(gè)體暴露于上述化合物可吸收的波長(zhǎng)的光；
[0129 ]步驟4 )，檢測(cè)從上述化合物發(fā)出的巧光。
[0130] 在步驟1)中，將上述化合物或巧光探針組合物施予至細(xì)胞、組織、器官或個(gè)體時(shí)， 可W溶解于水、二甲基亞諷之類的溶劑、緩沖液中。例如，施予的對(duì)象為細(xì)胞時(shí)，例如可舉出 在培養(yǎng)有細(xì)胞的培養(yǎng)基中混合上述化合物或巧光探針組合物的方法，但并不限定于此。
[0131] 在步驟2)中，所謂上述生物分子，例如，可舉出在細(xì)胞核、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體、內(nèi)體、 溶酶體、線粒體、葉綠體、過(guò)氧化物酶體、細(xì)胞膜、細(xì)胞壁等中存在的核酸、蛋白質(zhì)、憐脂等。 此外，通過(guò)使上述化合物與上述生物分子接觸，可形成共價(jià)鍵、離子鍵、配位鍵、氨鍵、范德 瓦爾斯鍵等化學(xué)鍵，成為顯示巧光性的生物分子。此外，步驟2)中，可合適地例示出：上述化 合物與存在于線粒體中的生物分子形成化學(xué)鍵。
[0132] 在步驟3)中，所謂上述化合物可吸收的波長(zhǎng)，只要是紫外區(qū)域、可見(jiàn)區(qū)域、紅外區(qū) 域即可，沒(méi)有特別限定，為了獲得細(xì)胞、組織、器官或個(gè)體的深部的圖像，優(yōu)選對(duì)它們的透過(guò) 性良好的600~1200nm的波長(zhǎng)區(qū)域。作為激發(fā)光的光源，使用市售的光源即可。此外，作為暴 露于光的方法，為了利用上述化合物的雙光子吸收而獲得細(xì)胞、組織、器官或個(gè)體的=維圖 像，優(yōu)選用透鏡等將600~1200nm的波長(zhǎng)區(qū)域的激發(fā)光進(jìn)行聚光并掃描焦點(diǎn)的位置。
[0133] 步驟3)及步驟4)可W如本發(fā)明的實(shí)施例5所示那樣利用雙光子激發(fā)巧光顯微鏡進(jìn) 行。
[0。4] 實(shí)施例
[0135] W下，在實(shí)施例中更詳細(xì)地說(shuō)明本發(fā)明，本發(fā)明的技術(shù)范圍并不限定于運(yùn)些。
[01化]實(shí)施例1.糞衍生物(I)的合成
[0137：
[0138] 在氣氣氣氛下的舒?zhèn)惪斯埽⊿chlenk tube)中，加入2,6-二漠糞（0.29g，lmmol)和 二氯雙苯基麟）鈕（II)(Pd(PPh3)2Cl2,0.077g，0.11mmol)。向其中加入4-乙締基化晚 (0.26g, 2.56mmol)、1血苯、1血^乙胺，于100°C加熱攬拌3天。過(guò)濾混合溶液并進(jìn)行濃縮。然 后，用二氯甲燒萃取，用水洗涂有機(jī)層，向有機(jī)層中加入硫酸儀(無(wú)水)進(jìn)行干燥，并進(jìn)行濃 縮。用丙酬對(duì)粗結(jié)晶進(jìn)行重結(jié)晶，獲得金黃色固體形態(tài)的4,4-(2,6-糞二基二-(化)-2,1-乙 締基）雙化晚（4,4-(2,6-]1日9111:11日16]16(1171(1;[-(化）-2,1-61:116]16(1171)1313971'1(1;[]16)。
[0139] 將4,4-(2,6-糞二基二-(1E)-2，1-乙締基)雙化晚(0.33g，lmmol)溶解于 10 血二氯 甲燒中，加入艦甲燒(C出I，lmU并于室溫?cái)埌?4小時(shí)。用二氯甲燒洗涂析出的固體，獲得黃 色固體形態(tài)的糞衍生物(I)。將得到的糞衍生物(I)的iHNMR示于圖1。
[0140] 實(shí)施例2.蔥衍生物(II)的合成
[pi/in
1234 在經(jīng)火焰干燥的雙頸瓶中，加入2,6-二漠蔥（0.34g，lmmol)，用氣氣將容器內(nèi)充 滿。加入無(wú)水四氨巧喃（15mL)，將混合溶液冷卻至-78°C。向其中緩慢滴加正下基裡（11- BuLi，21.4mL，34.2mmo 1)，于-78°C攬拌1小時(shí)。然后，緩慢滴加無(wú)水二甲基甲酯胺(DMF)，攬 拌1小時(shí)。然后，緩慢升溫至室溫，加水進(jìn)行澤滅(quench),并用甲苯萃取，用水洗涂有機(jī)層， 向有機(jī)層中加入硫酸儀(無(wú)水)進(jìn)行干燥，并進(jìn)行濃縮。用柱色譜法(展開溶劑=氯仿9:丙酬 1)進(jìn)行純化。然后，用甲苯/乙醇混合溶劑進(jìn)行重結(jié)晶，獲得黃色固體形態(tài)的2,6-蔥二甲醒。 2 艦化 1,4-二甲基[I比晚鐵（1,4-dimethylpy;ridin-1-ium iodide)按照已報(bào)道的方 '法（Zhan邑，Y. ;Wan邑，J. ;Yu,X. ;Liu,H. ;Liu,X. ;Zhao,N. ;Huan邑， B. Org. Biomol. Chem. 2010，8，4582-4588.)進(jìn)行合成。 3 向燒瓶中加入2,6-蔥二甲醒(0.04g，0.17mmol)和艦化1，4-二甲基化晚鐵(0.07g, 0.3mmol)，溶解于20mL乙醇中。滴加10滴贓晚，于80°C加熱攬拌24小時(shí)。將析出的固體過(guò)濾 并用乙醇洗涂，由此，獲得澄色固體形態(tài)的蔥衍生物（II)。將得到的蔥衍生物（II)的iHNMR 示于圖2。 4 實(shí)施例3.巧衍生物(III)的合成
[0146；
[0147] 對(duì)于1，6-二下基巧，將巧作為起始物質(zhì)，按照已報(bào)道的方法（Minabe，M.; Takeshige,S.；Soeda,Y.；Kimura,T.；Tsubota,M.Bull.Chem.Soc.Jpn.1994,67,172- 179.and Niko,Y.；Kawauchi,S.；0tsu,S.；Tokumaru,K.；Konishi,G.J.Org.Chem.2013,78, 3196-3207.)進(jìn)行合成。
[014引將1，6-二下基巧（0.33g，1.06mmo 1)和二氯甲基甲酸(0.50血，5.3mmo 1)溶解于5mL 的二氯甲燒中，冷卻至0 °C。向其中加入將四氯化鐵(0.6mL 5.3mmo 1)溶解于2mL的二氯甲燒 而得到的溶液。于室溫?cái)埌璺磻?yīng)溶液24小時(shí)。用大量冰水將反應(yīng)澤滅后，用氯仿進(jìn)行萃取。 將得到的有機(jī)層用碳酸氨鋼水溶液和食鹽水洗涂，用無(wú)水硫酸儀(MgS化)進(jìn)行干燥，并進(jìn)行 濃縮。將粗產(chǎn)物用柱色譜法(氯仿：己燒= 3:1)和隨后的基于甲醇的重結(jié)晶進(jìn)行純化，獲得 黃色固體形態(tài)的3，8-二下基巧-1，6-二甲醒(0.16g，收率為41 % )。
[0149] 將3，8-二下基巧-1，6-二甲醒（0 . lOg，0.27mmol)和艦化1，4-二甲基化晚鐵 (0.16g，0.67mmol)溶解于lOmL氯仿與30mL甲醇的混合液中，向其中滴力日5滴催化量的贓晚。 將反應(yīng)液回流12小時(shí)。對(duì)反應(yīng)液進(jìn)行濃縮，將得到的粗產(chǎn)物用熱甲醇和熱氯仿洗涂2次，獲 得紅色固體形態(tài)的巧衍生物(〇.13g，收率為59%)。將得到的巧衍生物（III)的iHNMR示于圖 3。
[0150] 比較例1.苯衍生物(IV)
[0151
[0152]苯衍生物（IV)按照Iwase,Y. ;Kamada,K. ;0hta,K. ;Kondo,K.J.Mate;r.Qiem.2003, 13,1575-1581中記載的方法進(jìn)行合成。
[。巧引實(shí)施例4.紫外-可見(jiàn)吸收光譜、巧光光譜、雙光子吸收截面積的測(cè)定
[0154]按照下述條件測(cè)定由實(shí)施例1~3合成的化合物及比較例1的紫外-可見(jiàn)吸收光譜、 巧光光譜、雙光子吸收截面積。
[01巧]紫外-可見(jiàn)吸收光譜使用670-UV-VIS-NIR分光光度計(jì)（spectrophotometer) (Jasco Co.)進(jìn)行測(cè)定。測(cè)定結(jié)果示于圖4~圖7。
[0156] 巧光光譜使用C9920-03G化amamatsu Photonics.K.K.)進(jìn)行測(cè)定。巧光量子產(chǎn)率 通過(guò)使用積分球的絕對(duì)測(cè)定進(jìn)行確定。使用濃度已調(diào)整為l(T6mol/L的試樣進(jìn)行測(cè)定。測(cè)定 結(jié)果示于圖8~圖11。
[0157] 按W下順序確定雙光子吸收截面積。與單光子吸收行為相同，雙光子吸收行為也 是光譜學(xué)性質(zhì)，因此對(duì)物質(zhì)間的雙光子吸收截面積的比較需要測(cè)定光譜。因此，在數(shù)種波長(zhǎng) 下測(cè)定雙光子吸收截面積，將其值W波長(zhǎng)為橫軸進(jìn)行繪圖，從而得到雙光子吸收光譜。各波 長(zhǎng)下的雙光子吸收截面積的值利用開孔Z掃描法進(jìn)行測(cè)算。作為光源，使用將從再生放大器 (Spectra-Physics , Spitfire)輸出的激光通過(guò)差頻產(chǎn)生裝置（Spectra-Physics ,0PA- 800C)進(jìn)行波長(zhǎng)轉(zhuǎn)換而得的激光。
[015引輸出的激光的重復(fù)頻率為1曲Z,脈沖寬度為150-200fs。用焦點(diǎn)距離為15cm的透鏡 將激光進(jìn)行聚光，沿著其光軸移動(dòng)樣品，根據(jù)此時(shí)觀察到的透過(guò)率變化程度測(cè)算雙光子吸 收截面積。使用的激光的平均功率為0.01~0.4mW，峰值輸出功率為6-240GW/cm2。將雙光子 吸收截面積的光譜示于圖12~15。
[0159] 實(shí)施例5.細(xì)胞的巧光化實(shí)驗(yàn)和觀察
[01側(cè)細(xì)胞的培養(yǎng)
[0161]作為染色的模型細(xì)胞，使用作為人胚胎腎細(xì)胞的化k293細(xì)胞。對(duì)于化k293細(xì)胞，在 包含10% (v/v)的胎牛血清、1 % (v/v)的膜蛋白酶及鏈霉素的Du化ecco改良Eagle培養(yǎng)基 (Du化ecco's Modified Eagle Medium，DMEM)中，在37°C、5%C02的條件下進(jìn)行培養(yǎng)。
[01創(chuàng)細(xì)胞的巧光化
[0163] 作為進(jìn)行顯微鏡觀察的準(zhǔn)備工作，在35mm玻璃制皿（glass base dish)中，將 化k293細(xì)胞W細(xì)胞密度成為IX 105個(gè)細(xì)胞/皿的方式進(jìn)行傳代。進(jìn)行傳代，24小時(shí)后，通過(guò) 顯微鏡觀察確認(rèn)了細(xì)胞附著于皿。從皿中除去培養(yǎng)基，使用憐酸緩沖生理鹽水(PBS)洗涂細(xì) 胞2次。將2mL下述不含酪紅的DMEM培養(yǎng)基裝入皿中，通過(guò)解育12小時(shí)而進(jìn)行染色，所述DMEM 培養(yǎng)基中添加了糞衍生物（I)、蔥衍生物（II)或巧衍生物（III)的1 X l(T3mo 1/dnf3的二甲基 亞諷(DMS0)溶液化L(PY最終濃度為1皿〇1血-3，最終DMS0濃度為0.1 % (v/v))。在馬上要進(jìn) 行顯微鏡觀察之前，將包含色素的培養(yǎng)基從皿中除去，使用PBS洗涂細(xì)胞2次，將2mL不含酪 紅的DMEM培養(yǎng)基加入皿中。
[0164] 雙光子激發(fā)巧光顯微鏡觀察
[01化]雙光子激發(fā)巧光顯微鏡使用光學(xué)模塊（Optical Block)巧amamatsu曲otonics K.K.)制成。其光學(xué)系統(tǒng)示于圖16。光源使用飛秒滲鐵藍(lán)寶石激光器(Mira900，Coherent)。 將用于掃描焦點(diǎn)的流電掃描儀(Galvano scanner)、設(shè)置有截止波長(zhǎng)為750nm的短波通二向 色鏡(FF750-SDi02-25X36，Semrock)和中屯、波長(zhǎng)為 650nm 的帶通濾波器(FF01-650/60-25， Semrock)的鏡單元(mirror unit)插入至光學(xué)系統(tǒng)中。在巧光的檢測(cè)中，使用光電倍增管 (R928，Hamamatsu Photonics K.K.)，在lOOOV的外加電壓下經(jīng)由帶有前置放大器(5MHz)的 插槽（socket)進(jìn)行DC檢測(cè)。作為DAQ，使用USB-6251BNC，作為控制程序的平臺(tái)，使用Lab VIEW2011(化tional Instruments)。作為樣品臺(tái)，使用KZG0620-G，作為物鏡，使用倍率為40 倍、NA=1.15的無(wú)限遠(yuǎn)校正物鏡。將通過(guò)觀察而得到的圖像示于圖17~19。
[0166] 本發(fā)明的糞衍生物（I)、蔥衍生物(II)及巧衍生物(III)分別能夠溶解于二甲基亞 諷(DMS0)，并且能夠?qū)⒒痥293細(xì)胞巧光化。此外，利用雙光子激發(fā)巧光顯微鏡觀察到了上述 細(xì)胞發(fā)出紅色巧光。
[0167] 產(chǎn)業(yè)上的可利用性
[0168] 本發(fā)明的化合物可在近紅外波長(zhǎng)區(qū)域內(nèi)吸收雙光子而被激發(fā)從而發(fā)出紅色巧光， 并且還兼具水溶性，因此可用作巧光探針。將本發(fā)明的化合物施予至細(xì)胞、組織、器官及個(gè) 體后，可進(jìn)行它們的生物成像。此外，由于發(fā)出容易穿過(guò)生物體的紅色巧光，因此生物體深 部的成像也成為可能。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 式（1)表不的化合物， χ?γ-χ2 (1) 式（1)中，X1及X2表示下述式(2)，且可以相同或不同，Υ表示環(huán)數(shù)為2~4的稠合多環(huán)基，式(2)中，R1表示C1~C3的烷基，表示針對(duì)吡啶鑰陽(yáng)離子的反陰離子，波浪線表示針對(duì) Υ的共價(jià)鍵。2. 如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，Υ為以下化學(xué)式表示的稠合多環(huán)基中的任 一者，式中，R2表示供電子基團(tuán)，a為0~6的整數(shù)，b為0~8的整數(shù)，c為0~10的整數(shù);a、b或c為2 以上的整數(shù)時(shí)，各R2可以相同或不同；波浪線表示針對(duì)X1及X2的共價(jià)鍵。3. 如權(quán)利要求2所述的化合物，其特征在于，Y為以下化學(xué)式表示的稠合多環(huán)基中的任 一者，式中，R2表示供電子基團(tuán)，a為0~6的整數(shù)，b為0~8的整數(shù);a或b為2以上的整數(shù)時(shí)，各R2 可以相同或不同；波浪線表示針對(duì)X1及X2的共價(jià)鍵。4. 如權(quán)利要求2或3所述的化合物，其特征在于，供電子基團(tuán)為選自羥基、C1~C10烷基、 C1~C10烷氧基、氨基、具有醚鍵的烷基及具有醚鍵的烷氧基中的1個(gè)或2個(gè)以上。5. 如權(quán)利要求1~4中任一項(xiàng)所述的化合物，其特征在于，反陰離子為鹵化物離子、磺酸 根。6. 如權(quán)利要求1~5中任一項(xiàng)所述的化合物，其特征在于，在600~1200nm的波長(zhǎng)區(qū)域內(nèi) 具有雙光子吸收。7. 如權(quán)利要求1~6中任一項(xiàng)所述的化合物，其特征在于，發(fā)出600~900nm的波長(zhǎng)區(qū)域 的焚光。8. 熒光探針組合物，其特征在于，含有權(quán)利要求1~7中任一項(xiàng)所述的化合物中的1種或 2種以上。9. 用于生物成像的熒光探針組合物，其特征在于，含有權(quán)利要求1~7中任一項(xiàng)所述的 化合物中的1種或2種以上。10. 熒光性生物分子，其特征在于，所述熒光性生物分子是含有與權(quán)利要求1~7中任一 項(xiàng)所述的化合物以化學(xué)方式結(jié)合的生物分子而成的。
【文檔編號(hào)】G01N33/58GK106061945SQ201480076845
【公開日】2016年10月26日
【申請(qǐng)日】2014年9月26日
【發(fā)明人】鈴木康孝, 川俁純, 守友博紀(jì), 富永亮, 小西玄, 小西玄一, 仁子陽(yáng)輔
【申請(qǐng)人】大塚電子株式會(huì)社