一種羧基麥芽糖鐵注射液及其應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種羧基麥芽糖鐵注射液及其應(yīng)用，本發(fā)明提供的羧基麥芽糖鐵注射液中含有羧基麥芽糖鐵和一種結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物化合物(Ⅰ)，羧基麥芽糖鐵、化合物(Ⅰ)單獨(dú)作用時(shí)，對腦動(dòng)脈硬化癥慢性腦缺血損傷具有治療作用；羧基麥芽糖鐵和化合物(Ⅰ)聯(lián)合作用時(shí)，對腦動(dòng)脈硬化癥慢性腦缺血損傷的治療效果進(jìn)一步提高，可以開發(fā)成治療腦動(dòng)脈硬化癥慢性腦缺血損傷的注射液，與現(xiàn)有技術(shù)相比具有突出的實(shí)質(zhì)性特點(diǎn)和顯著的進(jìn)步。
【專利說明】
一種羧基麥芽糖鐵注射液及其應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種羧基麥芽糖鐵注射液及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 羧基麥芽糖鐵是一種新型的鐵絡(luò)合物，用麥芽糊精將鐵離子穩(wěn)定地絡(luò)合在其中， 控制鐵的釋出，鐵離子能與鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白和鐵蛋白結(jié)合以發(fā)揮作用，并防止釋放大量的游離 鐵，減少有毒氧化物形成。羧基麥芽糖鐵能有效提高輕到中度缺鐵性貧血患者Hb和血清鐵 蛋白濃度。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的目的在于提供一種羧基麥芽糖鐵注射液及其應(yīng)用。
[0004] 本發(fā)明的上述目的是通過下面的技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)的：
[0005] -種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物（I)，
[0006]
. :Q.
[0007] -種羧基麥芽糖鐵注射液，包括羧基麥芽糖鐵、如權(quán)利要求1所述的化合物（I)和 藥學(xué)上可以接受的載體。
[0008] 上述化合物（I)的制備方法，包含以下操作步驟：（a)將地膚子粉碎，用70~90%乙 醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和的正丁醇萃 取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟(a)中正丁醇取物用 大孔樹脂除雜，先用20 %乙醇洗脫12個(gè)柱體積，再用80 %乙醇洗脫15個(gè)柱體積，收集80 %洗 脫液，減壓濃縮得80%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中80%乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分 離，依次用體積比為80 :1、40:1、20:1和10:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得至1」4個(gè)組分；（(1)步 驟(c)中組分3用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為25:1、20:1和15:1的二氯甲烷-甲醇 梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積 百分濃度為65%的甲醇水溶液等度洗脫，收集13~17個(gè)柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得 到化合物(I)。
[0009] 進(jìn)一步地，化合物（I)的制備方法中，步驟(a)用80%乙醇熱回流提取，合并提取 液。
[0010] 進(jìn)一步地，化合物（I)的制備方法中，所述大孔樹脂為D101型大孔吸附樹脂。
[0011] 進(jìn)一步地，化合物（I)的制備方法中，步驟(a)中用二氯甲烷代替乙酸乙酯進(jìn)行萃 取，得到二氯甲烷萃取物。
[0012] 上述化合物(I)在制備治療腦動(dòng)脈硬化癥慢性腦缺血損傷的藥物中的應(yīng)用。
[0013] 上述羧基麥芽糖鐵注射液在制備治療腦動(dòng)脈硬化癥慢性腦缺血損傷的藥物中的 應(yīng)用。
[0014] 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)：
[0015] 本發(fā)明提供的羧基麥芽糖鐵注射液中含有羧基麥芽糖鐵和一種結(jié)構(gòu)新穎的天然 產(chǎn)物，羧基麥芽糖鐵、化合物（I)單獨(dú)作用時(shí)，對腦動(dòng)脈硬化癥慢性腦缺血損傷具有治療作 用;羧基麥芽糖鐵和化合物（I)聯(lián)合作用時(shí)，對腦動(dòng)脈硬化癥慢性腦缺血損傷的治療效果進(jìn) 一步提高，可以開發(fā)成治療腦動(dòng)脈硬化癥慢性腦缺血損傷的注射液。
【具體實(shí)施方式】
[0016] 下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明保護(hù)范 圍。盡管參照較佳實(shí)施例對本發(fā)明作了詳細(xì)說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對 本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和范圍。
[0017] 實(shí)施例1:化合物(I)分離制備及結(jié)構(gòu)確證
[0018]分離方法：（a)將地膚子(2kg)粉碎，用80%乙醇熱回流提?。?5LX3次），合并提取 液，濃縮至無醇味（3L)，依次用石油醚（3L X 3次）、乙酸乙酯（3L X 3次）和水飽和的正丁醇 (3LX3次）萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟(a)中 乙酸乙酯萃取物用D101型大孔樹脂除雜，先用20 %乙醇洗脫12個(gè)柱體積，再用80 %乙醇洗 脫15個(gè)柱體積，收集80%洗脫液，減壓濃縮得80%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中80%乙醇 洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為80:1 (10個(gè)柱體積）、40:1 (8個(gè)柱體積）、20:1 (8個(gè)柱體積)和10:1(9個(gè)柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個(gè)組分；（d)步驟(c)中組 分3用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為25:1(7個(gè)柱體積）、20:1(8個(gè)柱體積)和15:1(7 個(gè)柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵 合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為65 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集13~17個(gè)柱體積 洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到化合物（I) (HPLC歸一化純度大于98% )。
[0019] 結(jié)構(gòu)確證:冊431-1^顯示[1+!1]+為111/2 378.1311，結(jié)合核磁特征可得分子式為 C21H2Q〇5,不飽和度為 12。核磁共振氫譜數(shù)據(jù) SH(ppm，CD3C0CD3,500MHz):H-3(7.12，s)，H-4 (7.22，s)，H-7(6.84，s)，H-2'（7.01，d，J=1.8Hz)，H-4'（6.41，t，J = 2.1Hz)，H-6'（7.01，d， J = 1 ·8Ηζ)，H-4"a(3.65，dd，J=15.6,8.4Hz)，H-4"b(3.42，dd，J=15.6,9.0Hz)，H-7" (1.35,8)，!1-8"（1.39, 8)，0〇13-3'（3.84,8)，0〇13-5'（3.84,8) ;核磁共振碳譜數(shù)據(jù)6。(卯111， CD3COCD3，125MHz):155·8(C，2-C)，103·4(CH，3-C)，121.9(C，3a-C)，116.8(CH，4-C)，124.1 (C，5-C)，160.8(C，6-C)，95.8(CH，7-C)，154.8(C，7a-C)，132.3(C，l'-C)，104.6(CH，2'-C)， 162.5(C，3'-C)，104.7(CH，4'-C)，162.5(C，5'-C)，104.6(CH，6'-C)，34.4(CH 2,4"-C)， 221.7(C，5"-C)，75.1(C，6"-C)，26.8(CH3,7"-C)，26.1(CH3,8"-C)，56.4(CH 3,3'-0CH3)， 56.4(CH3,5'-0CH3)。該化合物的氫譜中顯示兩個(gè)單峰甲基信號（δΗ1.35和1.39)，兩個(gè)甲氧 基信號[Sh3.84(3H，s)和3.84(3H，s)]以及六個(gè)烯質(zhì)子或者苯環(huán)質(zhì)子信號[δ Η7.12(1Η，8)， 7.22(lH，s)，6.84( lH，s)，7.01( lH，d，J=l ·8Ηζ)，6.41( lH，t，J = 2.1Hz)和7.01 (d，J = 1.8Hz)]。該化合物的碳譜顯示該化合物具有21個(gè)碳譜信號，包括四個(gè)甲基(兩個(gè)甲氧基）， 一個(gè)亞甲基，六個(gè)次甲基以及十個(gè)季碳。通過和文獻(xiàn)中的核磁數(shù)據(jù)比較發(fā)現(xiàn)，該新化合物可 能是一個(gè)苯并咲喃型化合物。進(jìn)一步的文獻(xiàn)查閱發(fā)現(xiàn)，該化合物和已知化合物moracin Q具 有相似的結(jié)構(gòu)。比較兩者的核磁數(shù)據(jù)可以發(fā)現(xiàn)，該化合物和moracin Q的區(qū)別在于多出了一 個(gè)酮羰基碳信號。進(jìn)一步的HMBC譜解析發(fā)現(xiàn)，H2-4"/C-5"，H3-7"/C-5"，H 3-8"/C-5"之間的相 關(guān)信號說明該化合物的酮羰基是位于C-5"位。綜合氫譜、碳譜、HMBC譜和N0ESY譜，以及文獻(xiàn) 關(guān)于相關(guān)類型核磁數(shù)據(jù)，可基本確定該化合物如下所示，立體構(gòu)型進(jìn)一步通過ECD試驗(yàn)確 定，理論值與實(shí)驗(yàn)值基本一致。
[0020] 該化合物化學(xué)式及碳原子編號如下：
[0021]
[0022] 實(shí)施例2:藥理作用 [0023] 1、材料與方法
[0024] 1.1動(dòng)物
[0025] 9~12周齡清潔級Wistar大鼠，體質(zhì)量（250±20)g，由甘肅中醫(yī)學(xué)院動(dòng)物中心提 供。
[0026] 1.2試劑與樣品
[0027] 羧基麥芽糖鐵購自中國藥品生物制品檢定所?；衔铮↖)自制，制備方法見實(shí)施例 1。生理鹽水(甘肅扶正藥業(yè)科技股份有限公司；無水乙醇(成都市金山化工試劑廠）；10%水 合氯醛(蘭大二院藥劑科）；硫酸慶大霉素注射液(甘肅蘭藥藥業(yè)集團(tuán)有限責(zé)任公司生產(chǎn)）； S0D試劑盒、MDA試劑盒、GSH-PX試劑盒（均購自南京建成生物技術(shù)有限公司）；VEGF試劑盒、 PDGF試劑盒(均購自武漢博士得生物技術(shù)有限公司）；高脂乳劑:配成含7%膽固醇、15%豬 油、2%膽酸鈉和1%丙基硫氧嘧啶的脂肪乳劑，4°C冰箱保存?zhèn)溆谩?br>[0028] 1.3儀器
[0029] FT-630G微機(jī)多探頭r計(jì)數(shù)器(北京核儀器廠）；低速冷凍離心機(jī)(科大創(chuàng)新股份有 限公司中佳分公司，KDC-2044);全自動(dòng)生化分析儀（日本日立公司，7010);紫外分光光度計(jì) (日本島津有限公司，SHMADZU UV-2401PC);石蠟切片機(jī)(德國Leica公司）；自動(dòng)組織脫水 機(jī)、全自動(dòng)細(xì)胞包埋機(jī)（日本SAKURA公司）
[0030] 1.4大鼠分組及模型制備
[0031]大鼠，禁食12小時(shí)(不禁水），以10%水合氯醛腹腔注射麻醉后，行雙側(cè)腎主動(dòng)脈狹 窄手術(shù)，使其狹窄3/4,造成大鼠實(shí)驗(yàn)性高血壓模型。手術(shù)1周后，大鼠靜脈注射給予高脂乳 劑10mL/kg，1次/d，共14周，制成高血壓合并高血脂的腦動(dòng)脈硬化模型，挑選造模成功的60 只，按照隨機(jī)數(shù)字表分組分為正常對照組、模型對照組、羧基麥芽糖鐵組(80mg · kg^1)、化合 物（I)組（80mg · kg<)、羧基麥芽糖鐵與化合物（I)組合物組【40mg · kg<羧基麥芽糖鐵+ 40mg · kg^1化合物（I)】。自造模成功后，模型組靜脈注射生理鹽水，其余各組按相應(yīng)劑量靜 脈注射給藥，每日一次，連續(xù)14周。
[0032] 1.5取材方法及觀察指標(biāo)
[0033] 1.5.1取材方法
[0034] 靜脈注射14周后，當(dāng)天禁食，股動(dòng)脈采血3~4mL于10mL試管中，3000r/min低溫離 心，取血清，低溫（<20°C)保存，進(jìn)行血脂、血清相關(guān)指標(biāo)檢測。股動(dòng)脈采血后，以10%水合 氯醛腹腔注射麻醉，開胸暴露大鼠心臟和主動(dòng)脈弓，分別使用生理鹽水、4%多聚甲醛行灌 注，直至動(dòng)物呈僵硬狀態(tài)，然后斷頭取腦，將腦海馬組織取出后放入4%多聚甲醛溶液中固 定，置于4°C冰箱內(nèi)保存待測。
[0035] 1.5.2觀察指標(biāo)
[0036] 1.5.2.1血脂相關(guān)指標(biāo)的測定
[0037] 采用OLYMPUS AU2700型全自動(dòng)生化分析儀測定總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高 密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)水平。單位:mmol/L。
[0038] 1.5.2.2血清相關(guān)指標(biāo)的測定
[0039] 根據(jù)試劑盒操作步驟采用比色法行血清超氧化物歧化酶（S0D)、血清丙二醛 (MDA)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)水平含量的檢測。
[0040] 1.5.2.3腦組織血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)含量的測定
[0041] 采用免疫組織化學(xué)法檢測腦海馬組織的VEGF免疫反應(yīng)細(xì)胞的表達(dá)，免疫組化過程 均按說明書操作。
[0042] 1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
[0043]實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差(X土s)表示，應(yīng)用SPSS 18.0版統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方 差分析和t檢驗(yàn)，以P<〇. 05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
[0044] 2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0045] 2.1各組大鼠血脂含量變化
[0046] 治療第14周末，與模型組比，羧基麥芽糖鐵組、化合物（I)組的TC、TG均有降低(P< 0.05)，HDL-C升高(P<0.05);與模型組組比，羧基麥芽糖鐵與化合物（I)組合物組的TC、TG 兩項(xiàng)血脂指標(biāo)顯著降低(P<〇.〇l)，HDL-C顯著升高(P<0.01)。結(jié)果見表1。
[0047] 2.2各組大鼠血清學(xué)相關(guān)指標(biāo)
[0048]第14周末，與模型組比，羧基麥芽糖鐵組、化合物（I)組血清S0D含量、GSH-PX活性 升高(P<0.05)，MDA含量降低(P<0.05);與模型組比，羧基麥芽糖鐵與化合物（I)組合物組 S0D含量、GSH-PX活性明顯升高，MDA含量明顯降低(P<0.01)。見表2。
[0049] 表1治療后各組大鼠血脂水平比較 [0050]

[0051 ]表2治療后各組大鼠血清學(xué)相關(guān)指標(biāo)比較
[0052]
[0053] 動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成的途徑之一是各種原因引起的內(nèi)皮細(xì)胞損傷，血流動(dòng)力學(xué) 異常必將啟動(dòng)血管重構(gòu)機(jī)制，導(dǎo)致血管重構(gòu)和功能異常，出現(xiàn)血流速度滯緩、外周阻力增大 和順應(yīng)性變差等，從而促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化的進(jìn)程。亦有研究資料表明，大量的脂質(zhì)過氧化物 及分解產(chǎn)物如MDA可損傷動(dòng)脈壁而導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化。機(jī)體內(nèi)的S0D可清除氧自由基，對細(xì) 胞生物膜起保護(hù)作用，從而抑制動(dòng)脈粥樣硬化的形成。GSH-PX作為主要的自由基清除劑之 一，可通過清除細(xì)胞內(nèi)的過氧化物代謝產(chǎn)物，阻斷脂質(zhì)過氧化物連鎖反應(yīng)，對減輕腦損傷、 阻斷興奮性毒性、防止損傷級聯(lián)反應(yīng)。
[0054]結(jié)果表明，羧基麥芽糖鐵、化合物（I)單獨(dú)作用時(shí)，對腦動(dòng)脈硬化癥慢性腦缺血損 傷有治療作用;羧基麥芽糖鐵和化合物（I)聯(lián)合作用時(shí)，對腦動(dòng)脈硬化癥慢性腦缺血損傷的 治療效果進(jìn)一步提高，可以開發(fā)成治療腦動(dòng)脈硬化癥慢性腦缺血損傷的注射液損傷的注射 液。
[0055]上述實(shí)施例的作用在于說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明的保護(hù) 范圍。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換， 而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物（I)，a2. -種羧基麥芽糖鐵注射液，其特征在于:包括羧基麥芽糖鐵、如權(quán)利要求1所述的化 合物(I)和藥學(xué)上可以接受的載體。3. 權(quán)利要求1所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于，包含以下操作步驟：（a)將地 膚子粉碎，用70~90%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙 酯和水飽和的正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b) 步驟(a)中正丁醇取物用大孔樹脂除雜，先用20%乙醇洗脫12個(gè)柱體積，再用80%乙醇洗脫 15個(gè)柱體積，收集80%洗脫液，減壓濃縮得80%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中80%乙醇洗 脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為80:1、40:1、20:1和10:1的二氯甲烷-甲醇梯度 洗脫得到4個(gè)組分；（d)步驟(c)中組分3用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為25:1、20:1 和15:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合 的反相硅膠分離，用體積百分濃度為65%的甲醇水溶液等度洗脫，收集13~17個(gè)柱體積洗 脫液，洗脫液減壓濃縮得到化合物(I)。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:步驟(a)用80%乙醇熱回 流提取，合并提取液。5. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:所述大孔樹脂為DlOl型 大孔吸附樹脂。6. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:步驟(a)中用二氯甲烷代 替乙酸乙酯進(jìn)行萃取，得到二氯甲烷萃取物。7. 權(quán)利要求1所述的化合物（I)在制備治療腦動(dòng)脈硬化癥慢性腦缺血損傷的藥物中的 應(yīng)用。8. 權(quán)利要求2所述的羧基麥芽糖鐵注射液在制備治療腦動(dòng)脈硬化癥慢性腦缺血損傷的 藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號】A61K9/08GK106008539SQ201610331470
【公開日】2016年10月12日
【申請日】2016年5月18日
【發(fā)明人】秦勇, 周自桂, 于學(xué)珍, 王玉梅, 李 瑞, 施嘉玲, 徐成, 王 琦, 陳建芳
【申請人】江蘇神龍藥業(yè)有限公司