白楊素衍生物及其制備方法和應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種白楊素衍生物及其制備方法和應(yīng)用。白楊素衍生物的結(jié)構(gòu)如式(Ⅰ)所示，式(Ⅰ)中，X為NR、O或CH2，其中R選自被苯或鹵代苯取代的C1?C6烷基，未被取代的或被選自下組的取代基取代的苯基：鹵素、硝基、C1?C6烷氧基、鹵素取代的C1?C6烷基、C1?C6烷基，或吡啶基。本發(fā)明公開的這類白楊素衍生物具有一定的生物活性、低的毒性。本發(fā)明還提供了白楊素衍生物的制備方法及白楊素在抗菌藥物中的應(yīng)用。
【專利說明】
白楊素衍生物及其制備方法和應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及藥物化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一類白楊素衍生物及其制備方法及在抗 菌藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 世界衛(wèi)生組織(WHO) -項(xiàng)最新調(diào)查結(jié)果顯示，有61 %的中國受訪者認(rèn)為抗生素可 治療流感。人們?yōu)E用抗生素類藥物等原因?qū)е录?xì)菌，真菌，病毒和寄生蟲的耐藥性出現(xiàn)，從 而過去開發(fā)的許多強(qiáng)效抗菌藥逐漸失去功效，所以新型的抗菌藥物研究迫在眉睫。
[0003] 白楊素是一類具有廣泛藥理活性的黃酮類天然產(chǎn)物。近年來，研究發(fā)現(xiàn)白楊素類 藥物具有抗腫瘤，抗炎，抗氧化和防治心腦血管疾病等藥理活性，然而白楊素的水溶性較 差，腸道難吸收，這極大得影響了白楊素的生物利用度。臨床試用的劑型只有乳劑，穩(wěn)定性 差，靜脈注射給藥有明顯的血管刺激性，難以達(dá)到作用部位，限制了它的臨床應(yīng)用。
[0004] 因此，有必要對其結(jié)構(gòu)進(jìn)行修飾改進(jìn)，以期望在水溶性、生物活性、毒性等方面得 到改進(jìn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 發(fā)明目的：針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，本發(fā)明提供了一種水溶性好、活性高、低 毒的白楊素衍生物。
[0006] 技術(shù)方案:一種白楊素衍生物，它的結(jié)構(gòu)如式(I)所示：
[0007]
[0008] 式（I)中，X為NR、0或CH2，其中R選自被苯或鹵代苯取代的&-C6烷基，未被取代的或 被選自下組的取代基取代的苯基：鹵素、硝基、&-C6烷氧基、鹵素取代的G-C6烷基、&-C6烷 基，或吡啶基。
[0009] 進(jìn)一步的，R選自被苯或鹵代苯取代的&-C3烷基，未被取代的或被選自下組的取代 基取代的苯基:鹵素、硝基、&-C3烷氧基、鹵素取代的&-C3烷基、&-C3烷基，或吡啶基。
[0010] 進(jìn)一步的，R選自苯甲基，二苯甲基，鹵代苯甲基々代二苯甲基，苯基，被選自下組 的取代基取代的苯基滷素、硝基、甲氧基、??素取代的甲基、甲基，或吡啶基。
[0011] 所述的鹵素為F、ci或Br，鹵代苯為被F、C1或Br取代的苯。
[0012]更進(jìn)一步的，R選自
[0013]
[0014] 本發(fā)明還提供了所述的白楊素衍生物的制備方法，包括：
[0015] (1)式(II)化合物與式(III)化合物反應(yīng)，獲得式(IV)化合物;其中，式(II)化合物 ~式(IV)化合物的結(jié)構(gòu)依次分別為：
[0016]
[0017]式（II)~式（IV)中為，辦為鹵素，X如權(quán)利要求1~5任一項(xiàng)所定義；
[0018] (2)式(IV)化合物與白楊素反應(yīng)，得所述的白楊素衍生物。
[0019]本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解，關(guān)于"X如權(quán)利要求1~5任一項(xiàng)所定義"：由于X基團(tuán)進(jìn) 入到最終產(chǎn)物中，所以根據(jù)目標(biāo)化合物(IV)的結(jié)構(gòu)，化合物(m)中X為相應(yīng)的結(jié)構(gòu)基團(tuán)。
[0020] 步驟（1)反應(yīng)在有機(jī)溶劑如二氯甲烷、四氟氫喃等中進(jìn)行，反應(yīng)溫度為0~50°C，反 應(yīng)時(shí)間為2~24h。實(shí)驗(yàn)證明，在該溫度及時(shí)間條件下均可得到目標(biāo)產(chǎn)物。
[0021] 步驟(2)反應(yīng)在有機(jī)溶劑如二氯甲烷、甲醇、乙醇、DMF，THF及丙酮等中進(jìn)行，反應(yīng) 溫度為〇~80°C，反應(yīng)時(shí)間為2~24h。實(shí)驗(yàn)證明，在該溫度及時(shí)間條件下均可得到目標(biāo)產(chǎn)物。
[0022] 本發(fā)明還提供了所述的白楊素衍生物在制備抗菌藥物中的應(yīng)用。
[0023] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果包括：
[0024] 本發(fā)明制備方法實(shí)驗(yàn)可重復(fù)性強(qiáng)，穩(wěn)定性好，實(shí)驗(yàn)反應(yīng)所需條件較簡單，且實(shí)驗(yàn)環(huán) 境溫和，產(chǎn)率較好，可在較小投入情況下進(jìn)行大量生產(chǎn)。
[0025] 本發(fā)明整合了哌嗪雜環(huán)，白楊素和嗎啡啉等基團(tuán)，設(shè)計(jì)了一系列的白楊素衍生物， 本發(fā)明白楊素衍生物對大腸桿菌(E.coli)有明顯的抑制作用，其作用效果與陽性對照藥 Penici 11 in G大致相當(dāng)，部分該含哌嗪雜環(huán)的二白楊素衍生物表現(xiàn)優(yōu)于陽性對照藥。因此， 本發(fā)明公開的這類白楊素衍生物具有更好的生物活性、更高的選擇性和更低的毒性。
[0026]本發(fā)明的這類衍生物水溶性好、低毒、生物活性好。
【具體實(shí)施方式】
[0027]下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡明本發(fā)明。
[0028] 本發(fā)明【具體實(shí)施方式】中，白楊素衍生物合成反應(yīng)式為：
[0029]
[0030] (a)CH2CI2，HOBt，EDC，50Γ，10_12h; (b)丙酮，K2CO3，白楊素，60Γ，10h
[0031] 一個詳細(xì)實(shí)施方式如下：
[0032]步驟a:在室溫?cái)嚢枳饔孟?，將結(jié)構(gòu)如式n(2mmol)所示的化合物溶于CH2Cl2(30ml) 中，并加入HOBt (1.2mmo 1)，EDC(3mmo 1)，活化后加入化合物ΙΠ (2mmo 1)轉(zhuǎn)移至油浴鍋中回流 攪拌11 ± lh，反應(yīng)結(jié)束后將混合液倒入250ml冰水中，然后用100ml CH2C12萃取，分別用 NaHC03、鹽水洗有機(jī)層，然后用無水硫酸鈉干燥，真空下蒸干得到的固體通過硅膠柱提純制 得結(jié)構(gòu)如式IV所示的化合物；
[0033] 步驟b :將結(jié)構(gòu)如式IV所示的化合物（1 mmο 1)、無水碳酸鉀（2mmο 1)和白楊素 (lmmol)溶于30ml丙酮中，然后將反應(yīng)置于60°C攪拌作用下9±lh，反應(yīng)結(jié)束后將反應(yīng)混合 液冷卻至室溫，得到固體沉淀，用蒸餾水洗三次后真空干燥的得到粗產(chǎn)物，在乙醇：乙酸乙 酯（1:1)的溶液中重結(jié)晶并用蒸餾水(25ml)洗三次制得結(jié)構(gòu)如式V所示的化合物。
[0034]實(shí)施例1化合物1的制備
[0035] 化合物1:7-(2-(4-(2-氟苯基）哌嗪)-2-羰基-1-乙氧基)-5-羥基黃酮，分子式為 C27H23FN2O5，結(jié)構(gòu)為：
[0036]
[0037]在室溫?cái)嚢枳饔孟拢瑢逡宜幔?mmol)所示的化合物溶于CH2Cl2(30ml)中，并加入 H0Bt(l-羥基苯并三唑，1.2_〇1)400(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺，3_〇1)，活 化后加入4-(2-氟苯基)哌嗪(CAS號為1011-15-0,2mmol)轉(zhuǎn)移至油浴鍋中回流攪拌反應(yīng)11 ±lh，反應(yīng)結(jié)束后將混合液倒入250ml冰水中，然后用100ml CH2C12萃取，分別用飽和 NaHC03、飽和鹽水洗有機(jī)層，然后用無水硫酸鈉干燥，真空下蒸干得到的固體通過硅膠柱提 純(柱子長45cm，柱子直徑2.5cm，洗脫劑用V Ac:VPE = 4:l-l:4，其中，PE為石油醚，AC為乙酸 乙酯收集的產(chǎn)物是1: 2比例）制得中間產(chǎn)物;將中間產(chǎn)物（lmmo 1)、無水碳酸鉀(2mmol)和白 楊素（lmmol)溶于30ml丙酮中，60°C攪拌作用下反應(yīng)9±lh，反應(yīng)結(jié)束后將反應(yīng)混合液冷卻 至室溫，得到固體沉淀，用蒸餾水洗三次后真空干燥的得到粗產(chǎn)物，在乙醇：乙酸乙酯（1:1) 的溶液中重結(jié)晶并用蒸餾水(25ml)洗三次制得化合物1。
[0038]檢測參數(shù)為:黃色固體，產(chǎn)率:47 · 3%，m·p · 182-186Γ · 4 NMR(DMS〇-d6，400MHz)δ: 12.82(s,lH,0H),8.09(d,J=6.9Hz,2H,ArH),7.58-7.67(m,3H,ArH),7.01-7.17(m,5H, ArH) ,6.84(d ,J = 2Hz,lH,ArH) ,6.46(d ,J= 1.6Hz , ΙΗ,ΑγΗ) , 5.08(s, 2H,CH2), 3.64(s ,4H, CH2NCH2), 3.09 (s, 2H, CH2), 3.01 (s, 2H, CH2). C27H23FN2O5
[0039] 實(shí)施例2化合物2的制備
[0040] 化合物2:7-(2-(4-(4-氟苯基)哌嗪)-2-羰基-1-乙氧基)-5-羥基黃酮，分子式為 C27H23FN2O5，結(jié)構(gòu)為：
[0041]
[0042]制備方法參考實(shí)施例1，原料式（Π )化合物具體為溴乙酸，式(ΙΠ)化合物為：
[0043]
[0044] 檢測參數(shù)為:黃色固體，產(chǎn)率:52 · 8%，m· p · 220-222°C · 4 NMR(DMS〇-d6，400MHz)δ: 12.83(s,lH,0H),8.10(d,J=6.9Hz,2H,ArH),7.58-7.62(m,3H,ArH),7.00-7.09(m,5H, ArH) ,6.85(d,J = 4.0Hz, ΙΗ,ΑγΗ) ,6.45(d, J = 2.4Hz ΙΗ,ΑγΗ) , 5.09(s , 2H,CH2), 3.62(s , 4H, CH2NCH2), 3.17 (s, 2H, CH2), 3.08 (s, 2H, CH2). C27H23FN2O5
[0045] 實(shí)施例3化合物3的制備
[0046] 化合物3:7-(2-(4-(3-三氟甲苯基）哌嗪)-2-羰基-1-乙氧基)-5-羥基黃酮，分子 式為C28H23F3N2O，結(jié)構(gòu)為：
[0047]
[0048]制備方法參考實(shí)施例1，原料式（Π )化合物具體為溴乙酸，式(ΙΠ)化合物為：
[0049]
[0050] 檢測參數(shù)為:黃色固體，產(chǎn)率:45 · 2%，πκp · 192-194°C · 4 NMR(DMS〇-d6，400MHz)δ: 12.83(s,lH,0H) ,8.09(d,J = 7.0Hz,2H,ArH) ,7.58-7.64(m,3H,ArH),7.45(t,J = 8.0Hz, lH,ArH),7.25(t ,J = 8.4Hz,2H,ArH),7.13(t ,J = 7.7Hz,2H,ArH),6.85(d ,J = 2.1Hz,lH, ArH) ,6.46(d,J = 2. ΙΗζ,ΙΗ,ΑγΗ) ,5.10(s,2H,CH2) ,3.63(s,4H,CH2N CH2), 3.35 (s , 2H, CH2)，3 · 28 (s，2H，CH2) · C28H23F3N2O
[00511實(shí)施例4化合物4的制備
[0052] 化合物4:7-(2-(4-二(4-氟苯基）甲基-哌嗪)-2-羰基-1-乙氧基)-5-羥基黃酮，分 子式為C34H28F2N20，結(jié)構(gòu)為：
[0053]
[0054] 制備萬法參考買施例1，原料式（Π )化合物具體為溟乙酸，式（ΙΠ)化合物為：
[0055]
[0056] 檢測參數(shù)為:黃色固體，產(chǎn)率:73 · 4%，m· p · 228-230°C · 4 NMR(DMS〇-d6，400MHz)δ: 12.82(s,lH,0H),8.09(d,J=7.4Hz,2H,ArH),7.58-7.62(m,3H,ArH),7.44-7.46(m,4H, ArH),7.05-7.15(m,5H,ArH),6.79(d,J = 4.0Hz,lH,ArH),6.40(d,J = 4.0Hz,lH,ArH) ,4.99 (s,2H,CH2) ,4.46(s,1H,CH),3.49(s,4H,CH2NCH2),2.34(s,2H,CH2),2.28(s,2H,CH 2) .C34H28F2N2〇
[0057] 實(shí)施例5化合物5的制備
[0058] 化合物5:7-( 2-(4-二(3，4-二氯苯基）哌嗪)-2-羰基-1 -乙氧基)-5-羥基黃酮，分 子式為C27H22CI2N2O5，結(jié)構(gòu)為：
[0059]
[0060]制備方法參考實(shí)施例1，原料式（Π )化合物具體為溴乙酸，式（ΙΠ)化合物為：
[0061]
[0062] 檢測參數(shù)為：貢色固體，產(chǎn)率：75 · 6%，m·p · 187-190Γ · 4 NMR(DMS〇-d6，400MHz)δ: 12.82(s,lH,0H) ,8.09(d,J = 8.4Hz,2H,ArH) ,7.57-7.65(m,3H,ArH),7.43(d,J = 9.0Hz, ΙΗ,ΑγΗ) ,7.19(d ,J = 2.8Hz,lH,ArH) ,7.06(s,lH,ArH) ,6.97(d ,J = 2.8Hz , 1H, ArH) ,6.83 (d,J = 4.0Hz,lH,ArH) ,6.45(d,J = 3.2Hz,lH,ArH) ,5.09(s,2H,CH2) ,3.61(t,J = 4.5Hz, 4H, CH2NCH2), 3.31 (s, 2H, CH2), 3.22 (s, 2H, CH2). C27H22CI2N2O5
[0063] 實(shí)施例6化合物6的制備
[0064] 化合物6:7-(2-(4-(2,3-二氯苯基)哌嗪)-2-羰基-1-乙氧基)-5-羥基黃酮，分子 式為C27H22CI2N2O5，結(jié)構(gòu)為：
[0065]
[0066]制備方法參考實(shí)施例1，原料式（Π )化合物具體為溴乙酸，式(ΙΠ)化合物為：
[0067]
[0068] 檢測參數(shù)為:淡黃色固體，產(chǎn)率:68 · 7%，m·p · 198-200Γ · 4 NMR(DMS〇-d6，400MHz) δ: 12.84(s，1H，0H)，8.11(d，J = 6.9Hz，2H，ArH) ,7.59-7.63(m，3H，ArH)，7.35(t，J = 4.0Hz， 2H,ArH),7.17-7.18(m,lH,ArH),7.07(s,lH,ArH),6.85(d ,J = 2.0Hz,lH,ArH),6.46(d ,J = 2.0Hz,lH,ArH),5.09(s,2H,CH2) ,3.64(s,4H,CH2NCH2),3.07(s,2H,CH2) ,2.99(s,2H,CH2) .C27H22CI2N2O5
[0069] 實(shí)施例7化合物7的制備
[0070] 化合物7:7-(2-(4-(2-氯苯基)哌嗪)-2-羰基-1-乙氧基)-5-羥基黃酮，分子式為 C27H23CIN2O5，結(jié)構(gòu)為：
[0071]
[0072]制備方法參考實(shí)施例1，原料式（Π )化合物具體為溴乙酸，式(ΙΠ)化合物為：
[0073]
[0074] 檢測參數(shù)為:淡黃色固體，產(chǎn)率:75 · 6%，m·p · 179-181°C · 4 NMR(DMS〇-d6，400MHz) δ :12.84(s，lH，0H)，8.11(d，J = 6.8Hz，2H，ArH),7.34-7.64(m，5H，ArH),7.10-7.18(m，3H， ArH) ,6.86(d ,J = 2.2Hz,lH,ArH) ,6.47(d, J = 2.2Hz ΙΗ,ΑγΗ) , 5.10(s , 2H,CH2), 3.65(s , 4H, CH2NCH2), 3.06 (s, 2H, CH2), 2.98 (s, 2H, CH2). C27H23CIN2O5
[0075] 實(shí)施例8化合物8的制備
[0076] 化合物8:7-(2-(4-(3-氯苯基)哌嗪)-2-羰基-1-乙氧基)-5-羥基黃酮，分子式為 C27H23CIN2O5，結(jié)構(gòu)為：
[0077]
[0078] 制備方法參考實(shí)施例1，原料式（Π )化合物具體為溴乙酸，式(ΙΠ)化合物為：
[0079]
[0080] 檢測參數(shù)為:淡黃色固體，產(chǎn)率:71 · 4%，m·p · 187-190Γ · 4 NMR(DMS〇-d6，400MHz) 5：12.83(s,lH,0H),8.10(d ,J = 7.3Hz,2H,ArH) ,7.58-7.64(m,3H,ArH) ,7.23(t ,J = 8.1Hz, lH,ArH),6.82-7.06(m,5H,ArH) ,6.46(d ,J = 2.2Hz ΙΗ,ΑγΗ) ,5.09(s,2H,CH2) ,3.60(t ,J = 4.4Hz, 4H, CH2NCH2), 3.30 (s, 2H, CH2), 3.20 (s, 2H, CH2). C27H23CIN2O5
[0081] 實(shí)施例9化合物9的制備
[0082] 化合物9:7-(2-(4-(4-氯苯基)苯甲基-哌嗪)-2-羰基-1-乙氧基)-5-羥基黃酮，分 子式為C34H29CIN2O5，結(jié)構(gòu)為：
[0083]
[0084]制備方法參考實(shí)施例1，原料式（Π )化合物具體為溴乙酸，式(ΙΠ)化合物為：
[0085]
[0086] 檢測參數(shù)為：淡黃色固體，產(chǎn)率:67 · 8%，m·p · 202-204Γ · 4 NMR(DMS〇-d6，400MHz) δ:12·82(s，1H，0H)，8.09(d，J=6.9Hz，2H，ArH),7.58-7.65(m，3H，ArH),7.31-7.47(m，8H， ArH),7.22(t ,J= 12.5Hz, ΙΗ,ΑγΗ), 7.06(s, ΙΗ,ΑγΗ), 6.79(d,J = 2.1Hz, ΙΗ,ΑγΗ), 6.40(d,J = 2.12Hz,lH,ArH) ,4.99(s,2H,CH2) ,4.42(s,lH,CH) ,3.49(s,4H,CH2NCH2),2.34(s,2H, CH2)，2 · 29 (s，2H，CH2) · C34H29CIN2O5
[0087] 實(shí)施例10化合物10的制備
[0088] 化合物10:7-(2-(4-(4-硝基苯基)哌嗪)-2-羰基-1-乙氧基)-5-羥基黃酮，分子式 為C27H23N3O7，結(jié)構(gòu)為：
[0089]
[0090] 制備方法參考實(shí)施例1，原料式（Π )化合物具體為溴乙酸，式(m)化合物為：
[0091]
[0092] 檢測參數(shù)為：晶體，產(chǎn)率72.9% ,1114.211-2131:.? NMR(DMS0-d6,400MHz)S: 12.83 (s,lH,0H),8.08-8.10(m,4H,ArH),7.57-7.65(m,3H,ArH),7.04(d,J=9.16Hz 3H,ArH), 6.85(d,J = 2.24Hz,lH,ArH) ,6.46(d,J = 2.2Hz,lH,ArH) ,5.10(s,2H,CH2) ,3.65(s,6H, CH2CH2NH2),3.54(d,J = 4.0Hz,2H,CH2).C27H23N3O7
[0093] 實(shí)施例11化合物11的制備
[0094] 化合物11:7-(2-(4-(2-吡啶）哌嗪）-2-羰基-1-乙氧基）-5-羥基黃酮，分子式為 C26H23N3O5，結(jié)構(gòu)為：
[0095]
[0096]制備方法參考實(shí)施例1，原料式（Π )化合物具體為溴乙酸，式(ΙΠ)化合物為：
[0097]
〇
[0098] 檢測參數(shù)為：淡黃色固體，產(chǎn)率：57 · 3%，m·p · 166-168Γ · 4 NMR(DMS〇-d6，400MHz) 5：12.83(s,lH,0H),8.08-8.14(m,3H,ArH),7.55-7.64(m,4H,ArH),7.04(s,lH,ArH),6.83-6.88(dd ,Ji = 8.6 j2 = 2.2Hz,2H,ArH),6.68(q ,J = 5.2Hz,lH,ArH),6.45(d ,J = 2.2Hz,lH, ArH)，5 · 09 (s，2H，CH2)，3 · 56 (d，J = 2 · 3Hz，8H，NCH2CH2NCH2CH2) · C26H23N3O5
[0099] 實(shí)施例12化合物12的制備
[0100] 化合物12 :7-(2-(4-苯基哌嗪）-2-羰基-1-乙氧基）-5-羥基黃酮，分子式為 C27H24N2O5，結(jié)構(gòu)為：
[0101]
[0102]制備方法參考實(shí)施例1，原料式（Π )化合物具體為溴乙酸，式(ΙΠ)化合物為：
[0103]
[0104] 檢測參數(shù)為:淡黃色固體，產(chǎn)率:71 · 9%，m·p · 206-209°C · 4 NMR(DMS〇-d6，400MHz) 5：12.83(s,lH,0H),8.09(d ,J = 7.0Hz,2H,ArH) ,7.56-7.64(m,3H,ArH) ,7.25(t ,J = 8.4Hz, 2H,ArH),7.06(s,lH,ArH),6.99(d ,J = 8.0Hz,2H,ArH) ,6.83-6.85(m,2H,ArH) ,6.45(d ,J = 2.2Hz,lH,ArH) ,5.09(s,2H,CH2) ,3.62(s,4H,CH2NCH2),3.23(s,2H,CH2) ,3.14(s,2H,CH2) .C27H24N2〇5
[0105] 實(shí)施例13化合物13的制備
[0106] 化合物13:7-(2-(4-二苯甲基哌嗪)-2-羰基-1-乙氧基)-5-羥基黃酮，分子式為 C34H3QN2O5，結(jié)構(gòu)為：
[0107]
[0108] 制備方法參考實(shí)施例1，原料式（Π )化合物具體為溴乙酸，式(ΙΠ)化合物為：
[0109]
a
[0110] 檢測參數(shù)為:淡黃色固體，產(chǎn)率:74· 1 %，m·p · 235-238°C · 4 NMR(DMS〇-d6，400MHz) 5：12.82(s,lH,0H),8.10(d ,J = 6.7Hz,2H,ArH) ,7.61 (d ,J = 7.0Hz , 3H,ArH), 7.21-7.44(m, 10H,ArH),7.06(s,lH,ArH),6.80(s,lH,ArH),6.40(s,lH,ArH),4.99(s,2H,CH2) ,4.36(s, 1H，CH), 3 · 49(s, 4H, CH2NCH2)，2 · 33(d, J = 2 · 0Hz, 4H, CH2NCH2) · C34H30N2O5
[0111] 實(shí)施例14
[0112] 化合物14: 7-(2-(4-苯甲基哌嗪）-2-羰基-1-乙氧基）-5-羥基黃酮，分子式為 C28H26N2O5，結(jié)構(gòu)為：
[0113]
[0114]制備方法參考實(shí)施例1，原料式（Π )化合物具體為溴乙酸，式(ΙΠ)化合物為：
[0115]
ο
[0116] 檢測參數(shù)為:淡黃色固體，產(chǎn)率:66 · 8%，m·ρ · 131-132°c · 4 NMR(DMS〇-d6，400MHz) 5：12.82(s,lH,0H),8.10(d ,J = 7.4Hz,2H,ArH) ,7.59-7.61(m,3H,ArH) ,7.33(d ,J = 6.4Hz, 4H,ArH) ,7.06(s,lH,ArH) ,6.81(d ,J=1.9Hz,lH,ArH) ,6.41 (d ,J = 2.0Hz , 1H, ArH), 5.01 (s, 2H, CH2), 3.52(s, 2H,CH2), 3.47(s,4H,CH2CH2),2.34-2.43(m,4H,CH2CH2). C28H26N2O5
[0117] 實(shí)施例15化合物15的制備
[0118] 化合物15:7-(2-(4-(2-甲氧基苯基)哌嗪)-2-羰基-1-乙氧基)-5-羥基黃酮，分子 式為C28H26N2O6，結(jié)構(gòu)為：
[0119]
[0120] 制備方法參考實(shí)施例1，原料式（Π )化合物具體為溴乙酸，式(ΙΠ)化合物為：
[0121]
[0122] 檢測參數(shù)為:淡黃色固體，產(chǎn)率:72 · 6%，m·p · 185-188°c · 4 NMR(DMS〇-d6，400MHz) 5：12.83(s,lH,0H),8.09(d,J=7.0Hz,2H,ArH),7.58-7.65(m,3H,ArH),7.06(s,lH,ArH), 6.84-6.98(m,5H,ArH) ,6.45(d ,J = 2.2Hz , 1H, ArH), 5.08(s , 2H, CH2), 3.80(s , 3H,0CH3), 3.61(s,4H，CH2NCH2)，3.03(s，2H，CH2)，2.95(s，2H，CH2).C28H26N2〇6
[0123] 實(shí)施例16化合物16的制備
[0124] 化合物16:7-(2-(4-(3-甲氧基苯基)哌嗪)-2-羰基-1-乙氧基)-5-羥基黃酮，分子 式為C28H26N2O6，結(jié)構(gòu)為：
[0125]
[0126] 制備方法參考實(shí)施例1，原料式（Π )化合物具體為溴乙酸，式(ΙΠ)化合物為：
[0127]
[0128] 檢測參數(shù)為：淡黃色固體，產(chǎn)率：55 · 2%，m·p · 175-177°C · 4 NMR(DMS〇-d6，400MHz) 5：12.82(s,lH,0H),8.08(d ,J = 6.9Hz,2H,ArH) ,7.58-7.63(m,3H,ArH) ,7.14(t ,J = 8.2Hz, lH,ArH),7.06(s,lH,ArH),6.84(d,J=2.2Hz,lH,ArH),6.40-6.56(m,4H,ArH),5.09(s,2H, CH2)，3.73(s，3H，OCH3)，3.61(s，4H，CH2NCH2)，3.23(s，2H，CH2)，3.14(s，2H，CH2).C28H26N2〇6
[0129] 實(shí)施例17化合物17的制備
[0130] 化合物17:7-(2-(4-(4-甲氧基苯基)哌嗪)-2-羰基-1-乙氧基)-5-羥基黃酮，分子 式為C28H26N2O6，結(jié)構(gòu)為：
[0131]
[0132] 制備方法參考實(shí)施例1，原料式（Π )化合物具體為溴乙酸，式(ΙΠ)化合物為：
[0133]
[0134] 檢測參數(shù)為：淡黃色固體，產(chǎn)率:73 · 6%，m·ρ · 175-177°C · 4 NMR(DMS〇-d6，400MHz) 5：12.83(s,lH,0H),8.08(d,J=6.9Hz,2H,ArH),7.58-7.64(m,3H,ArH),7.06(s,lH,ArH), 6.94(d,J = 9.1Hz,2H,ArH) ,6.83-6.85(m,3H,ArH),6.45(d,J = 2.2Hz,lH,ArH) ,5.08(s, 2H,CH2) ,3.69(s,3H,0CH3),3.61(s,4H,CH2NCH2) ,3.09(s,2H,CH2),2.99(s,2H,CH2) .C28H26N2〇6
[0135] 實(shí)施例18化合物18的制備
[0136] 化合物18:7-(2-(4-(2,4-二甲基苯基)哌嗪)-2-羰基-1-乙氧基)-5-羥基黃酮，分 子式為C29H28N2O5，結(jié)構(gòu)為：
[0137]
[0138] 制備方法參考實(shí)施例1，原料式（Π )化合物具體為溴乙酸，式(ΙΠ)化合物為：
[0139]
[0140] 檢測參數(shù)為：淡黃色固體，產(chǎn)率:70.3% ,1114.195-1971:.? NMR(DMS0-d6,400MHz) 5：12.84(s,lH,0H),8.11(d ,J = 6.1Hz,2H,ArH) ,7.61 (d ,J = 6.9Hz , 3H,ArH) ,6.89-6.99(m, 5H,ArH) ,6.46(s,lH,ArH) ,5.09(s,2H,CH2) ,3.61(s,4H,CH2NCH2) ,2.82(d,J = 3.2Hz 4H, CH2NCH2)，2 · 23 (d, J = 12 · 4Hz , 6H, CH3ArCH3) · C29H28N2O5
[0141] 實(shí)施例19化合物19的制備
[0142] 化合物19:7-(2-嗎啡啉-2-羰基-1-乙氧基)-5-羥基黃酮，分子式為C21H 21N06,結(jié)構(gòu) 為：
[0143]
[0144] 制備方法參考實(shí)施例1，原料式（Π )化合物具體為溴乙酸，式(ΙΠ)化合物為：
[0145]
[0146] 檢測參數(shù)為:淡黃色固體，產(chǎn)率:71 · 7%，m·p · 194-197°C · 4 NMR(DMS〇-d6，400MHz) 5：12.82(s,lH,0H),8.09(d,J=8.5Hz,2H,ArH),7.58-7.63(m,3H,ArH),7.05(s,lH,ArH), 6.81(d ,J = 2.2Hz,lH,ArH),6.43(d ,J = 4.0Hz,lH,ArH) ,5.04(s , 2H,CH2) ,6.58-6.4(m,4H, CH2CH2), 3.47 (d ,J = 4.2Hz , 4H, CH2NCH2). C21H21NO6
[0147] 實(shí)施例20化合物20的制備
[0148] 化合物20 :7-(2-哌啶-2-羰基-1-乙氧基)-5-羥基黃酮，分子式為C22H23N〇4,結(jié)構(gòu) 為：
[0149]
[0150] 制備方法參考實(shí)施例1，原料式（Π )化合物具體為溴乙酸，式(ΙΠ)化合物為：
[0151]
[0152] 檢測參數(shù)為:淡黃色固體，產(chǎn)率:69%，m.p.171-173°C.4 NMR(DMS〇-d6，400MHz)δ: 12.82(s,lH,0H),8.10(d,J=6.8Hz,2H,ArH),7.59-7.63(m,3H,ArH),7.06(s,lH,ArH), 6.81(d ,J = 2.2Hz,lH,ArH) ,6.41 (d ,J = 4.0Hz , 1H, ArH), 5.00(s , 2H,CH2), 3.40-3.46(m, 4H，CH2CH2)，1 · 60 (d，J = 9 · 4Hz，4H，CH2CH2)，1 · 45 (s，2H，CH2) · C22H23NO4
[0153] 實(shí)施例21
[0154] 1.抗菌活性實(shí)驗(yàn)步驟
[0155] (1)培養(yǎng)液的配制
[0156] RPMI1640培養(yǎng)液：RPMI1640 10g，NaHC03 2.0g，M0PS 34.5g(0.165M)，加三蒸水 900mL溶解，IN NaOH調(diào)pH至7.0(25°C)，定容至1000mL，濾過消毒，4°C保存。
[0157] YEH)培養(yǎng)液:酵母浸膏10g，蛋白胨20g，葡萄糖20g，加三蒸水900mL溶解，加入2mg/ mL氯霉素水溶液50mL，定容至1000mL，高壓滅菌后4°C保存。
[0158] (2)菌液制備
[0159] 實(shí)驗(yàn)前，用接種圈從4°C保存的SDA培養(yǎng)基上挑取金黃色葡萄球菌、枯草桿菌、大腸 桿菌和熒光假單胞菌少量，接種至lmL YEH)培養(yǎng)液，于35°C，250rpm振蕩培養(yǎng)，活化16h。取 該菌液至lmL YEPD培養(yǎng)液中，用上述方法再次活化，16h后，用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，以 RPMI1640培養(yǎng)液調(diào)整菌液濃度至1 X 103-5 X 103cfu/mL。
[0160] (3)藥液配制
[0161] 受試藥物分別用DMS0配成lmg/mL溶液，-20°C保存，實(shí)驗(yàn)前，將藥液取出置35°C溫 箱融化備用。測試時(shí)按二倍稀釋法配成濃度梯度。配成最終測試濃度為2〇 yg/mL，10yg/mL，5 yg/mL，2·5yg/mL，1·25yg/mL，0·625yg/mL，0·312yg/mL 〇
[0162] (4)藥敏板的制備
[0163] 細(xì)菌懸浮在RPMI1640培養(yǎng)基中，分散濃度大約為1 X 103-5 X 103cfu/mL，將培養(yǎng)基 加入到96孔板的第一排，每孔100yL，作為空白對照（陰性對照）。第二排加菌液，每孔100yL， 不加被測試樣品，作為試劑空白。將被測樣品配好的梯度溶液，以每孔IlyL的量加入到96孔 板的第3-12排，使最終濃度為 20yg/mL，10yg/mL，5yg/mL，2yg/mL，5yg/mL，1 · 25yg/mL，0 · 625 以8/11^，0.312以8/11^。每個濃度梯度做三個平行實(shí)驗(yàn)。將96孔板放入37°(：的培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 24h，然后加入每孔25yL含4mg MTT/mL的D-hanks溶液中，再在同樣條件下培養(yǎng)4h，加入每孔 100yL SDS裂解液(90mL三蒸水+10g SDS+5mL異丙醇+2mL濃鹽酸）后培養(yǎng)12h。
[0164] (5)MIC 值判定
[0165] 用酶標(biāo)儀于570nm下測定0D值，按如下公式計(jì)算抑制率：
[0166] 抑制率=[1 -(測試樣品0D值-空白0D值)/(陰性對照0D值-空白0D值)]X 100
[0167] 以抑制率不低于50%的最低濃度作為被測樣品的MIC5Q(最低抑制濃度）。當(dāng)藥物的 MIC值超過測定濃度范圍時(shí)，按以下方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì):MIC值高于最高濃度50yg/mL時(shí)，計(jì)為"〉 50yg/mL" ；MIC值為最低濃度或在最低濃度以下時(shí)，不作區(qū)別，均計(jì)為.56yg/mL"。上述 實(shí)驗(yàn)均平行操作3次，取平均值作為該化合物的最終MIC。
[0168] 表1目標(biāo)化合物的抗菌活性
[0169]
[0171] 實(shí)施例22
[0172] 本發(fā)明測試了新合成化合物對人腎上皮細(xì)胞(293T)的細(xì)胞毒性，每個化合物的毒 性用抑制293T細(xì)胞存活率到50 %時(shí)的濃度(CC5Q)來表示。
[0173] 實(shí)驗(yàn)方法：
[0174] (1)藥物存儲液配制：取m= 2mg的已合成化合物溶于200yL的2%DMS0中，放在-20 °C保存?zhèn)溆谩?br>[0175] (2)培養(yǎng)基準(zhǔn)備:DMEM基礎(chǔ)培養(yǎng)基（89%)+小牛血清（10%)+抗生素（1%)混合均 勻，備用。
[0176] (3)用上述培養(yǎng)基培養(yǎng)人腎上皮細(xì)胞(293T)直至達(dá)到其對數(shù)生長期末細(xì)胞趨于融 合，用細(xì)胞消化液消化分散細(xì)胞，用細(xì)胞培養(yǎng)液配制成1 X 1〇4個/mL的細(xì)胞懸液。取96孔培 養(yǎng)板，每孔中加入l〇〇yL的細(xì)胞懸液。輕輕水平轉(zhuǎn)動培養(yǎng)板使細(xì)胞均勻地分散在皿孔的表 面。置于含5 % C〇2細(xì)胞培養(yǎng)箱中，在37 ± 0.5 °C溫度下培養(yǎng)12h。
[0177] (4)藥物濃度配制:通過公式(V=^；)計(jì)算，吸取相對應(yīng)體積的存儲液到500yL的 培養(yǎng)基中，配制藥物濃度為200yg/mL。然后用培養(yǎng)基稀釋濃度到100yg/mL、50yg/mL、25yg/ mL、10yg/mL、5yg/mL、lyg/mL、0. lyg/mL等濃度梯度，各吸取100yL( X3)到各自的孔中。培養(yǎng) 板放置在37 ±0.5°C，5%C02的培養(yǎng)箱下進(jìn)行培養(yǎng)48h。
[0178] (5)每個培養(yǎng)間期后，每孔加入MTT溶液20yL，置于含5 % C02培養(yǎng)箱中，在37 ± 0.5 °C溫度下培養(yǎng)4h。
[0179] (6)棄去孔內(nèi)液體，每孔分別加入200yL DMS0，將培養(yǎng)板放置lOmin，水平搖晃使孔 內(nèi)溶液顏色均勻。
[0180] (7)用酶標(biāo)儀測定吸光度，波長采用570nm〇
[0181] 測得的LC50和CC50見表1所示。
[0182] 表1選擇化合物的細(xì)胞毒性
[0183]
[0184] 3溶解濃度30 %
[0185] 4丨起顯微鏡下檢測到正常細(xì)胞形態(tài)變化需要的最小細(xì)胞毒性濃度
[0186] 以上詳細(xì)描述了本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，但是，本發(fā)明并不限于上述實(shí)施方式中 的具體細(xì)節(jié)，在本發(fā)明的技術(shù)構(gòu)思范圍內(nèi)，可以對本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行多種等同變換，這 些等同變換均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。另外需要說明的是，在上述【具體實(shí)施方式】中所描述 的各個具體技術(shù)特征，在不矛盾的情況下，可以通過任何合適的方式進(jìn)行組合。為了避免不 必要的重復(fù)，本發(fā)明對各種可能的組合方式不再另行說明。此外，本發(fā)明的各種不同的實(shí)施 方式之間也可以進(jìn)行任意組合，只要其不違背本發(fā)明的思想，其同樣應(yīng)當(dāng)視為本發(fā)明所公 開的內(nèi)容。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種白楊素衍生物，其特征在于，它的結(jié)構(gòu)如式(I)所示：式（I)中，X為NR、0或C出，其中R選自被苯或面代苯取代的Ci-Cs烷基，未被取代的或被選 自下組的取代基取代的苯基：面素、硝基、Ci-Cs烷氧基、面素取代的Ci-Cs烷基、Ci-Cs烷基，或 化晚基。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的白楊素衍生物，其特征在于，R選自被苯或面代苯取代的C1-C3 烷基，未被取代的或被選自下組的取代基取代的苯基:面素、硝基、C1-C3烷氧基、面素取代的 C1-C3烷基、C1-C3烷基，或化晚基。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的白楊素衍生物，其特征在于，R選自苯甲基，二苯甲基，面代苯 甲基，面代二苯甲基，苯基，被選自下組的取代基取代的苯基：面素、硝基、甲氧基、面素取代 的甲基、甲基，或化晚基。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的白楊素衍生物，其特征在于，所述的面素為F、C1或化，面代苯 為被F、C1或化取代的苯。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的白楊素衍生物，其特征在于，R選自6. 根據(jù)權(quán)利要求1~5任一項(xiàng)所述的白楊素衍生物的制備方法，其特征在于，包括： (1)式（II)化合物與式(III)化合物反應(yīng)，獲得式（IV)化合物;其中，式（II)化合物~式 (IV)化合物的結(jié)構(gòu)依次分別為：式(II)~式(IV)中為，Ri為面素，X如權(quán)利要求1~5任一項(xiàng)所定義； (2)式(IV)化合物與白楊素反應(yīng)，得所述的白楊素衍生物。7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的白楊素衍生物的制備方法，其特征在于，步驟（1)反應(yīng)在有機(jī) 溶劑中進(jìn)行，反應(yīng)溫度為O~50°C，反應(yīng)時(shí)間為2~24。8. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的白楊素衍生物的制備方法，其特征在于，步驟(2)反應(yīng)在有機(jī) 溶劑中進(jìn)行，反應(yīng)溫度為O~80°C，反應(yīng)時(shí)間為2~24。9. 根據(jù)權(quán)利要求1~5任一項(xiàng)所述的白楊素衍生物在制備抗菌藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號】A61P31/04GK105906598SQ201610335347
【公開日】2016年8月31日
【申請日】2016年5月19日
【發(fā)明人】王忠長, 朱海亮, 沈發(fā)千, 楊永安, 李紅俠, 鐘慧
【申請人】江蘇耐雀生物工程技術(shù)有限公司